REUMALATEX. 01 Español - Ref.: 114. Ref.:114. Instrucciones de Uso. Factor Reumatoide. Finalidad. Material auxiliar. Principio.

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1 REUMALATEX Instrucciones de Uso Ref.:114 Factor Reumatoide Finalidad. Sistema para la determinación cualitativa y semicuantitativa, en placa, del Factor Reumatoide (FR). [Solamente para uso diagnóstico in vitro.] Principio. Partículas de látex estabilizadas y sensibilizadas con gammaglobulina humana purificada son aglutinadas macroscópicamente cuando el factor reumatoide está presente en la muestra en concentraciones mayoresa30ui/ml. Características del sistema. El sistema Reumalátex - Labtest tiene sensibilidad para detectar concentraciones de FR de como mínimo 30 UI/mL utilizando partículas de poliestireno, sensibilizadas con gammaglobulina humana y estabilizadas en tampón de ph 8, La sensibilidad de 30 UI/mL fue establecida con el Preparado Internacional de Referencia de la Organización Mundial de la Salud. El test es simple y rápido, sin dilución previa de la muestra y presenta reacciones adecuadas que no son sensibles al efecto prozona hasta valores iguales a 800 UI/mL. Metodología. Reactivos 1 - P. CONTROL + - N. CONTROL - Aglutinación de las partículas de látex. Látex FR - Conservar el frasco bien cerrado en posición vertical entre 2-8 ºC. No congelar. Contiene Tampón 100 mmol/l, partículas de poliestireno sensibilizadas con gammaglobulina humana y azida sódica 14,6 mmol/l. Mezclar bien el látex para garantizar la homogeneidad de la suspensión. Vaciar el cuentagotas antes de usarlo. Homogeneizar la suspensión de látex efectuando varias aspiraciones con el cuentagotas. Control Positivo - Conservar entre 2-8 ºC. Contiene factor reumatoide 30 UI/mL, cloruro de sodio 150 mmol/l, albúmina bovina 0,5% y azida sódica 14,6 mmol/l. Después de su uso, se sugiere armacenarlo bien cerrado para evitar la evaporación. Control Negativo - Conservar entre 2-8 ºC. Contiene factor reumatóide <1 Ul/mL, cloruro sódio 150 mmol/l, albumina bovina 0,5% y azida sódica 14,6 mmol/l. Después de su uso, se sugiere armacenarlo bien cerrado para evitar la evaporación. Los reactivos no abiertos, cuando almacenados en las condiciones indicadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo. Durante el uso, los reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden provocar una reducción del tiempo de estabilidad. Material auxiliar Placa y palillos mezcladores. Los controles positivo y negativo y los materiales auxiliares forman parte solamente del formato del producto Reumalátex Ref El producto Ref. 114K-60 contiene solamente el reactivo Látex FR. Precauciones y cuidados especiales Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados durante la manipulación de los reactivos y de las muestras de pacientes. Se sugiere utilizar técnicas adecuadas de laboratorio en la manipulación de los reactivos para evitar la contaminación microbiana. La utilización de puntas (tips) contaminadas puede comprometer el desempeño del test y la estabilidad del Látex FR. El Látex FR y los Controles Positivo y Negativo contiene derivados de sangre humana y fueron ensayados para detectar la presencia de HBsAg y anticuerpos HCV y HIV utilizando tests aprobados, obteniéndose resultados negativos. Como ningún test conocido puede asegurar que productos derivados de sangre humana no transmitan enfermedades infecciosas, se recomienda manipularlos como si fueran potencialmente infectivos, siguiendo las normas de bioseguridad. Todos los reactivos contiene azida sódica como conservante. No obstante, deben tomarse todos los cuidados para evitar la contaminación microbiana. Se recomienda utilizar solamente los cuentagotas de los frascos. La azida sódica es tóxica. Se debe tener cuidado para evitar la ingestión, y en caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y buscar auxilio médico. La azida puede formar compuestos altamente explosivos con las cañerías de plomo o cobre. Utilizar grandes volúmenes de agua para descartar los reactivos. Lavar exhaustivamente la placa (lámina) de ensayo con agua desionizada y secarla a temperatura ambiente. El uso de material contaminado con trazas de detergente provoca resultados incorrectos y deteriora los reactivos. El sistema está estandarizado para obtener la sensibilidad propuesta y el desempeño adecuado en función de los volúmenes indicados en la metodología. Las modificaciones en los volúmenes recomendados y la introducción de puntas (tips) contaminadas pueden comprometer el desempeño del test y la estabilidad del Látex FR. 01 Español - Ref.: 114

2 Para descartar los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar las normas locales, estatales o federales de protección ambiental. Material necesario y no provisto 3. Pipetas para medir las muestras y realizar diluciones. NaCl 150 mmol/l (0,85%). Cronómetro. Se debe crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que establezca métodos adecuados para la obtención, preparación y almacenamiento de la muestra. Destacamos que los errores debidos a la muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el procedimiento analítico. No usar plasma para realizar el ensayo. Las muestras de suero pueden ser almacenadas hasta 7 días entre 2 y 8 ºC. Las muestras se pueden congelar a temperaturas inferiores a 20 ºC negativos durante un mes siempre que el congelamiento sea realizado hasta 24 horas después de su obtención. Las muestras deben ser congeladas y descongeladas solamente una vez. Repetir ese procedimiento puede fornecer resultados inconsistentes. Como ningún test conocido puede asegurar que las muestras de sangre no transmiten infecciones, todas ellas deben ser consideradas como potencialmente infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas, se deben seguir las normas establecidas para bioseguridad. Concentraciones de hemoglobina hasta 1000 mg/dl, bilirrubina hasta 20 mg/dl y lipemia hasta 1000 mg/dl no producen interferencias significativas. Muestras de suero fuertemente lipémicas pueden producir resultados falsamente positivos por aglutinación inespecífica. Sueros turbios puede clarificarse por centrifugación a g durante 30 minutos y descarte posterior de la capa superior de lípidos. La contaminación del reactivo Látex FR y de la placa con detergentes modifica la estructura coloidal del reactivo, conduciendo al deterioro irreversible y a resultados inconsistentes. Ver Observaciones. Reactivos y muestras deben alcanzar la temperatura ambiente para usarlos. En un área de la placa colocar 0,05 ml de la muestra de suero. Colocar una gota de cada control en otras áreas. 3. Muestra Interferencias Método cualitativo Colocar 1 gota (0,05 ml) del Látex FR, previamente homogeneizado, al lado de la muestra y de los controles. Mezclar en forma de círculo con el auxilio del palillo. 4. Inclinar la placa hacia delante y hacia atrás haciendo movimentos oscilatorios en varios planos durante 2 minutos e, inmediatamente, verificar la presencia o no de aglutinación macroscópica, comparando el resultado de la muestra con los patrones obtenidos con los controles. Lecturas después del tempo recomendado pueden fornecer resultados falso positivos. Interpretación No reactivo. Suspensión homogénea semejante al patrón obtenido con el control negativo, indicando niveles de factor reumatóide menores a 30 UI/mL. Reactivo. Aglutinación macroscópica que varía desde la formación de grumos finos hasta grumos gruesos, indicando una concentración de factor reumátoide mayor o igual a 30 UI/mL. La intensidad de la aglutinación no es un indicativo de la concentración del factor reumatoide. Para estimar la concentración de la muestra se debe utilizar el método semicuantitativo. La sensibilidad analítica es igual a 30 UI/mL. No obstante, debido a el fuerte efecto de la matriz de la muestra en la aglutinación del Látex FR, la sensibilidad es igual a 8 UI/mL cuando la muestra se diluye con solución salina. Cuando concentraciones superiores a 800 UI/mL son esperadas, la muestra a ser testada deberá ser diluida. Ver Observaciones. Tomar 4 tubos de 12 x 75 y adiconarles 0,2 ml de NaCI 150 mmol/l (0,85%) a cada uno. Transferir al 1º tubo 0,2 ml de la muestra que presentó resultado cualitativo positivo. Mezclar, transferir 0,2 ml del 1º al 2º tubo, mezclar, transferir 0,2 ml del 2º al 3º tubo y así sucesivamente hasta el 4º tubo. Se obtienen diluciones 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, respectivamente. En cada área de la placa colocar 0,05 ml de las diluciones y al lado de las mismas, 1 gota (0,05 ml) del Látex FR (previamente homogeneizado). Mezclar en forma de círculo con la ayuda del palillo. 3. Inclinar la placa hacia delante y hacia atrás haciendo movimentos oscilatorios en varios planos durante 2 minutos e, inmediatamente, verificar la presencia o no de aglutinación macroscópica, comparando el resultado de la muestra con los patrones obtenidos con los controles. 4. Método semicualitativo Será considerado como título la mayor dilución de la muestra que presente aglutinación macroscópica. Si la aglutinación estuvieara presente hasta 1/16, continuar las diluciones a partir del 4º tubo y proseguir con el ensayo. Sensibilidad. 30 UI/mL. En el sistema Reumalátex la sensibilidad es de Al comparar métodos para la determinación del FR, tener en cuenta la sensibilidad de los mismos. Resultados obtenidos con productos que presentan sensibilidades diferentes solamente son comparables si están expresados en UI/mL. 02 Español - Ref.: 114

3 Resultados Muestra no reactivo. Expresar el resultado como menor a 30 UI/mL. Muestra reactivo. Expresar el resultado en UI/mL. UI/mL = sensibilidad x inversa del título encontrado en el método semicuantitativo. Ejemplo. Título encontrado 1/4. UI/mL = 8 x 4 = 32 UI/mL. Valor de referencia. Se recomienda que cada laboratorio establezca, en la población atendida, su propio rango de valores de referencia. Control interno de calidad. El laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que defina claramente los objetivos, procedimientos, normas, criterios para límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. Al mismo tiempo se debe monitorear la variabilidad analítica que ocurre en todo sistema de medición. Por lo tanto, la utilización de los controles negativo y positivo en todas las corridas analíticas es fundamental para la verificación del desempeño del test. Se debe, también, registrar los resultados obtenidos en sistemas de registro permanentes y de fácil localización. 7 Características de desempeño. La calibración del reactivo y el límite de detección de 8 UI/mL fueron verificados usando un calibrador aforado con el Preparado Internacional de Referencia de la Organización Mundial de la Salud. Eficiencia diagnóstica. Ciento veintitrés (123) muestras de suero con valores menores y mayores a 8 UI/mL fueron ensayadas utilizando Reumalátex y un producto que utiliza el principio de la turbidimetría como método comparativo. Diluición 1/2 1/4 1/8 1/16 1/64 1/128 1/256 Los resultados obtenidos son lo suficientemente representativos para demostrar que las diluciones de la muestra producen recuperaciones adecuadas a los resultados esperados. Repetitividad - imprecisión intra-ensayo. La imprecisión intra-ensayo fue verificada evaluando 20 réplicas de cuatro muestras con las concentraciones iguales a 4, 8 y 20 UI/mL, usando también los controles negativo y positivo desarrollados para el producto. Los resultados negativos y positivos encontrados muestran una perfecta concordancia con los resultados esperados. Reproducibilidad - imprecisión total. La imprecisión interensayo fue verificada en 20 evaluaciones independientes usando cinco muestras con concentraciones iguales a 4, 8 y 20 UI/mL, empleando también los controles negativo y positivo desarrollados para el producto. Los resultados negativos y positivos encontrados mostraron una perfecta concordancia con los resultados esperados. Efecto prozona. Calibrador (UI/mL) ,5 6,25 3,125 Resultado Reactivo Reactivo Negativo Una muestra de suero con concentración igual a 800 UI/mL fue ensayada con Reumalátex encontrándose resultados repetidamente positivos, confirmando que hasta la concentración evaluada no hay efecto prozona. Cuando se esperan concentraciones por encima de 800 UI/mL, la muestra a ensayar deberá ser diluida con solución de NaCl 150 mmol/l (0,85%). Método Comparativo Positivos Negativos Reumalatex Positivos Negativos Observaciones La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores fundamentales para la obtención de resultados correctos. La contaminación del Látex FR con detergentes modifica la estructura coloidal del reactivo provocando su deterioro irreversible. El análisis estadístico mostró los seguientes resultados: Sensibilidad. 100% Especificidad. 98,9% Eficiencia. 99,4% Valor Predictivo del Test Positivo. 97,2% Valor Predictivo del Test Negativo. 100% Estudios de dilución. Los estudios fueron realizados por dilución de un calibrador proteico conteniendo 800 UI/mL. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa potencial de errores analíticos. El agua desionizada o destilada utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad 1 megaohm.cm o conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/l. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer un programa de control de la calidad del agua. 03 Español - Ref.: 114

4 3. Al comparar métodos para la determinación del FR, tener en cuenta la sensibilidad de los mismos. Resultados obtenidos con productos que presentan sensibilidades diferentes solamente son comparables si están expresados en UI/mL. 4. El sistema está estandarizado para obtener la sensibilidad propuesta y el desempeño adecuado en función de los volúmenes indicados en la metodología. Modificaciones en los volúmenes recomendados y la introducción de puntas (tips) contaminadas pueden comprometer el desempeño del ensayo y la estabilidad del Látex FR. Referencias Anderson SG, Bentzon MW, Houba V, Krag P: Bull Wld Hlt Org, 1970; 42:31 Jones WL, Wiggins GL: Am J Clin Path, 1973; 60: Singer JM: Bull Rheum Dis, 1973;24:6. Algunas presentaciones pueden estar disponibles solamente mediante consulta. Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantía] Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de las especificaciones hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Servicio de Apoyo al Consumidor sac@labtest.com.br 4. Singer JM, Plotz CM: Am J Med, 1956;21: Singer JM, Plotz CM: JAMA, 1958;168: Guder WC, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. Samples:From the Patient to the Laboratory, Git Verlag GMBH ed, Darmstadt, Labtest: Datos de archivo. Revisión: Agosto, 2009 Ref.: Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reproducción bajo previa autorización Presentación Producto Reumalatex Referencia Contenido 1 CONTROL + CONTROL Placa de ensayo Palillos mezcladores 1 X 2,5 ml 1 X 0,5 ml 1 X 0,5 ml 1 un 60 un 114K X 2,5 ml 04 Español - Ref.: 114

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