3. Calibrador - - Almacenar entre 2-8 ºC.
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- Andrea Miranda Cordero
- hace 7 años
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1 Hierro érico Finalidad. istema bi-reactivo para la determinación del hierro en muestras de suero por reacción de punto final. Uso profesional. [olamente para uso diagnóstico in vitro.] Principio. l hierro es disociado de la transferrina por la acción de un tampón de ph ácido. l ácido ascórbico presente en el Reactivo 2 reduce los iones férrico a iones ferroso que, a continuación, forman un complejo magenta brillante con el Ferrozine, cuya absorbancia medida entre 540 y 580 nm es proporcional a la cantidad de hierro en la muestra. Características del sistema. l sistema reactivo Fe Liquiform - Labtest permite un procedimiento simple y rápido para la determinación de hierro sérico en muestras de suero. l Reactivo 1 tiene ph ácido y contiene un agente caotrópico, que promueve la separación del hierro de la transferrina. l Reactivo 2 contiene ácido ascórbico, que promueve la reducción del hierro, y Ferrozine, que forma un complejo estable con el hierro reducido, permitiendo una medición colorimétrica adecuada entre 540 y 580 nm. Las características del sistema Fe Liquiform confieren elevada precisión en las determinaciones de hierro sérico. l método no sufre interferencias por heparina, fibrinógeno y cobre, confiriendo excelente exactitud a los resultados. l sistema Fe Liquiform garantiza trazabilidad al método de referencia 7 propuesto por el CLI (antiguo NCCL) y permite que sean ensayadas muestras con concentraciones de hierro de hasta 1000 g/dl, minimizando la necesidad de dilución de las muestras con concentración elevada. l desarrollo del método fue orientado hacia la automatización, siendo fácilmente aplicable a analizadores automáticos capaces de medir con exactitud una reacción de punto final entre 540 y 580 nm. l sistema Fe Liquiform también puede ser utilizado con éxito en aplicaciones manuales utilizando fotómetros o instrumentos semi-automáticos. Metodología. Labtest Ferrozine Reactivos: 1. Reactivo Almacenar entre 2-8ºC. Contiene tampón 400 mmol/l ph 4,5; tiourea 30 mmol/l y tensioactivos. 2. Reactivo Almacenar entre 2-8ºC. Contiene tampón 50 mmol/l ph 4,0; Ferrozine 10 mmol/l; ácido ascórbico 32,6 mmol/l Almacenar entre 2-8 ºC. Concentración en el rótulo del frasco. Preparado de suero bovino liofilizado con concentración de hierro rastreable al método de referencia 7 propuesto por el CLI. Los reactivos no abiertos, almacenados en las condiciones indicadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo. urante su manipulación, los reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden provocar reducción en su estabilidad. Precauciones y cuidados especiales Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la manipulación de los reactivos, los cuales no deben ser pipeteados con la boca. e debe tener cuidado para evitar su ingestión y en caso de contacto con los ojos, se deben lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar auxilio médico. Material necesario y no provisto 1. Baño-maría mantenido a temperatura constante (37ºC). 2. Fotómetro capaz de medir con exactitud absorbancias entre 540 y 580 nm. 3. Pipetas para medir muestras y reactivos. 4. Cronómetro. e debe crear un Procedimiento Operativo stándar (PO) que establezca procedimientos adecuados para la toma, preparación y almacenamiento de la muestra. estacamos que los errores debidos a la muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el procedimiento analítico. Usar suero obtenido de una muestra recogida en ayunas. l analito es estable por 4 días entre 15-25ºC y por 6 días entre 2-8ºC. Como ningún ensayo conocido puede asegurar que las muestras de sangre no transmitan infecciones, todas ellas deben ser consideradas como potencialmente infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas, se deben seguir las normas establecidas para bioseguridad. Para descartar los reactivos y el material biológico, sugerimos aplicar las normas locales, estatales o federales de protección ambiental. Influencias pre-analíticas. Factores pre-analíticos son hoy la causa más importante de determinaciones incorrectas del hierro sérico. La contaminación puede ocurrir en la toma, en el transporte y en el procesamiento de la muestra. 01 spañol - Ref.: 91
2 l uso de detergente iónico para la limpieza del material es otra fuente de contaminación con hierro. Los estudios indican que el 60% de los errores ocurridos en el ensayo se deben a errores analíticos. La muestra debe ser tomada por la mañana para evitar los efectos de las variaciones diurnas del hierro, que pueden producir reducciones de hasta el 30% en los resultados de hierro sérico. La edad, el sexo, el período de gestación, el uso de anticonceptivos orales y de estrógenos alteran las concentraciones de hierro. La variación biológica es un evento independiente del error analítico e indica que las concentraciones del hierro sérico pueden variar hasta el 26,5% en torno al punto homeostático de cada individuo. Interferencias Concentraciones de bilirrubina conjugada y no conjugada de hasta mg/dl y triglicéridos de hasta 1000 mg/dl no producen interferencias significativas. La presencia de hemoglobina produce resultados significativamente elevados. n caso de no ser posible obtener muestras sin hemólisis, esta interferencia puede ser minimizada conforme al siguiente procedimiento. 1. Medir la concentración de hierro (Fe) en la muestra hemolizada; 2. valuar la concentración aproximada de la hemoglobina (Hb) en la muestra hemolizada; 3. Multiplicar el valor obtenido para la concentración de hemoglobina por 0,26 y substraer el valor encontrado, de la concentración de hierro sérico (Fe). l resultado obtenido corresponde a la concentración aproximada de hierro en la muestra. Hierro sérico corregido ( g/dl) = Fe - (0,26 x Hb) jemplo Concentración de hierro en la muestra hemolizada (Fe) = 74,0 g/dl Concentración de hemoglobina en la muestra (Hb) = 52 mg/dl Hierro sérico corregido = 74 - (52 x 0,26) = 60,5 g/dl Para evaluar la concentración aproximada de la hemoglobina en una muestra hemolizada se puede proceder del siguiente modo: diluir 0,05 ml de la muestra en 2,0 ml de NaCl 150 mmol/l (0,85%) y medir la absorbancia a 405 ó 415 nm ajustando el cero con agua desionizada o destilada. Hemoglobina (mg/dl) Absorbancia x Hemoglobina (mg/dl) Absorbancia415 x 467 Preparación de los reactivos. Reactivo 1 y Reactivo 2 listos para usar. Utilizando una pipeta volumétrica, adicionar 3,0 ml de agua desionizada o destilada al contenido del frasco del calibrador. ejar en reposo durante 30 minutos. Mezclar por inversión suave evitando la formación de espuma. stable 5 días entre 2-8ºC y 30 días a temperatura igual o menor a 8ºC negativos (congelador de heladera duplex o freezer) en un recipiente herméticamente cerrado. Para evitar congelamientos y descongelamientos repetidos, sugerimos separar el calibrador en alícuotas de 0,5 a 1,0 ml y almacenar en un recipiente herméticamente cerrado y apropriado para el congelamiento. Procedimiento ste procedimiento no es aplicable a analizadores semi-automáticos que utilizan únicamente cubeta de flujo. stán disponibles aplicaciones para sistemas automáticos. Ver Observaciones 1, 2 y 3. l material usado en el procedimiento debe estar libre de contaminación con hierro para evitar la obtención de resultados incorrectos. l agua desionizada debe tener resistividad 1 megaohm o condutividad 1 microsiemens y concentración de silicatos <0,1 mg/l. Tomar 3 cubetas de fotómetro y proceder como sigue: Reactivo 1 uero Agua desionizada Homogeneizar y determinar las absorbancias de la muestra y del calibrador a 560 nm (540 a 580 nm), ajustando el cero con agua desionizada. e obtiene la absorbancia A. 1 Reactivo 2 Homogeneizar e incubar a baño-maría a 37ºC durante 5 minutos. l nivel del agua en el baño debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de ensayo. eterminar las absorbancias de la muestra y calibrador a 560 nm (540 a 580), ajustando el cero con el blanco. e obtiene la absorbancia A. 2 l procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros cuyo volumen mínimo de solución para la lectura es igual o menor a 0,9 ml. e debe efectuar una verificación de la necesidad de ajuste del volumen en el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente sin perjuicio en el desempeño del ensayo y el procedimiento de cálculo se mantiene inalterado. n caso de reducción de los volúmenes es fundamental que se observe el volumen mínimo necesario para la lectura fotométrica. Cálculos. Ver Linealidad. Blanco 0,8 ml 0,1 ml Blanco 0,2 ml 0,8 ml 0,1 ml 0,2 ml 0,8 ml 0,1 ml 0,2 ml La lectura A de la y del debe ser corregida al volumen 1 final de la reacción obteniéndose A. 1cor 02 spañol - Ref.: 91
3 A = A x 0,82 1cor 1 A = A x 0,82 1cor 1 Hierro ( g/dl) = (A - A ) 2 1cor (A - A ) 2 1cor CCal: concentración del calibrador jemplo x CCal A = 0,035 A = 0,035 x 0,82 = 0, cor A 2 = 0,079 A = 0,016 A = 0,016 x 0,82 = 0, cor A = 0,111 2 Concentración del : 245 g/dl 0,079-0,029 Hierro ( g/dl) = x 245 = 125 0,111-0,013 ebido a la gran reproducibilidad que puede ser obtenida con la metodología, se puede utilizar el método del factor. Ccal FACTOR = (A - A ) 2 1cor Hierro ( g/dl) = (A2 - A 1cor) x Factor jemplo 245 Factor = = ,111-0,013 Hierro ( g/dl) = (0,079-0,029) x 2500 = 125 Calibración Trazabilidad del istema La concentración de hierro en el calibrador es rastreable al método de 7 referencia propuesto por el CLI. Calibraciones manuales Calcular el factor de calibración al usar un nuevo lote de reactivos o cuando el control interno de calidad lo indique. istemas automáticos Blanco de reactivos: agua desionizada; standares: usar calibrador Ref.: Intervalo de calibraciones Calibración del blanco al usar un nuevo frasco de reactivo; Calibración de 2 puntos (blanco y calibrador) al usar un nuevo lote de reactivos o cuando el control interno de calidad lo indique. Linealidad l resultado de la medición es lineal hasta 1000 g/dl. Para valores más altos, diluir la muestra con NaCl 150 mmol/l (0,85%), realizar una nueva medición y multiplicar el valor obtenido por el factor de dilución. Control interno de la calidad. l laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que defina con claridad los reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. e sugiere que las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error total sean basados en los componentes de la variación biológica 5,9,10 (VB). Intervalo de referencia 11,12 stos valores deben ser usados sólo como orientativos. e recomienda que cada laboratorio establezca, en la población atendida, su propio rango de valores de referencia. Hierro érico ( g/dl) Neonatos Lactentes Pre escolar y escolar Hombre Adulto Mujer Conversión. Unidades Convencionales ( g/dl) x 0,179 = Unidades I ( mol/l) Características de desempeño xactitud. La exactitud del método fue demostrada en un estudio de recuperación utilizando muestras con concentraciones de hierro iguales a 50; 213 y 409 g/dl, obteniéndose recuperaciones de entre el 99 y el 103%. l error sistemático proporcional medio fue igual al 1,29; 2,71 y 1,38%, en concentraciones del 50; 2 y 400 g/dl, respectivamente. specificidad. l método propuesto fue comparado con un método similar utilizando 40 muestras con valores situados entre 26 y 330 g/dl. La comparación dio como resultado la ecuación de regresión: y = 1,041x - 1,079 y un coeficiente de correlación (r) igual a 0,994. l error sistemático total (constante y proporcional) fue igual al 1,91; 3,58 y 3,80% en concentraciones iguales a 50; 2 y 400 g/dl, respectivamente, mostrando una correlación positiva entre los dos métodos. Repetitividad - imprecisión intra-ensayo N Media Reproducibilidad - imprecisión total N Media ,71 1,28 1,63 1,10 3,38 4,36 CV (%) 3,25 0,80 0,47 CV (%) 4,05 1,74 1,21 03 spañol - Ref.: 91
4 ensibilidad metodológica. Una muestra proteica sin contenido de hierro fue utilizada para calcular el límite de detección del ensayo habiéndose encontrado un valor igual a 1,25 g/dl, equivalente a la media de ensayos más dos desvíos estándares. Utilizando la absorbancia del patrón como parámetro, se verificó que el límite de detección fotométrico (cubeta con 1,0 cm de camino óptico) es de 2,18 g/dl, correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001. fectos de la dilución de la matriz. os muestras con valores iguales a 1214 y 1058 g/dl fueron utilizadas para evaluar la respuesta del sistema a las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/l (0,85%). Usando factores de dilución que varían de 2 a 16 se encontró una recuperación media del 99,5%. ignificado clínico. l hierro es esencial para la mayoría de los organismos vivos, pues participa de numerosos procesos vitales, dede los procesos oxidativos celulares hasta el transporte de oxígeno hacia los tejidos. La hemostasia del hierro está regulada principalmente por la absorción y no por la excreción. l hierro es transportado en la sangre por una proteína, la transferrina, y almacenado en los tejidos unido a otra proteína llamada ferritina. La deficiencia de hierro es consecuencia del aporte insuficiente, aumento de demanda, pérdida sanguíneao la combinación de estos fatores. l suplemento inadecuado es característico de los niños alimentados exclusivamente con leche. Finalmente, el aumento de la demanda es característico del embarazo y de los niños en los primeros 5 años de vida. Menstruación abundante, hemorragias gastro-intestinales, hemorroides, carcinoma de colon y parasitosis son causas comunes de la deficiencia de hierro por pérdida sanguínea en el adulto. Transfusiones repetidas, idiopática hemocromatosis, cirrosis, talasemia y anemia sideroblástica son las causas más comunes de aumento de hierro La tabla a continuación muestra el comportamiento del hierro sérico, la capacidad total de fijación de hierro (CTFH), índice de saturación de la transferrina (IT) y la Reserva de hierro medular (RH), evaluada por la coloración específica del frotis de la médula ósea, en diversas situaciones relacionadas con la alteración del metabolismo del hierro. eficiencia de Hierro Infecciones Crónicas nfermedades malignas Atransferrinemia Período menstrual mbarazo (3º trimestre) Hemosiderosis pulmonar Nefrosis Kwashiokor Anticonceptivos orales Intoxicación por hierro Anemia hemolítica Hemocromatosis eficiencia de Piridoxina Anemia sideroblástica Talasemia Mayor Hierro érico / Alteraciones CTFH IT RH / / / A A = disminuido = elevado = sin alteración A = ausente Observaciones 1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos. 2. l laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa potencial de errores analíticos. l agua desionizada o destilada utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad 1 megaohm.cm o conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/l. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer un programa de control de la calidad del agua. 3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas de interferencia en los resultados y en la metodología, se sugiere consultar: Referencias 1. Goodwin J, Murphy B, Guillemette M. Clin Chem 1966; 12: Henry RJ, Cannon C, Winkelman JW. Clinical Chemistry, Principles and Technics, 2nd ed. New York, Harper & Row, tookey L. Anal Chem 1970;42: Tonks B. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott Laboratories, iagnostic Reagents ivision, carborough, Canada, Westgard J O, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27: Williams HL, Johnson J, Haut MJ. Clin. Chem 1977;23: NCCL, etermination of erum Iron, Total Iron-Binding Capacity and Percent Transferrin aturation; Approved tandard, NCCL document H17-A, Labtest: atos de Archivo. 9. ociedad spañola de Bioquímica Clínica y Patología Molecular, Base de atos de Variación Biológica. isponível em:< (acceso em 04/06). 10. Basques JC. specificações da Qualidade Analítica. Labtest iagnóstica spañol - Ref.: 91
5 11. Ferraz MHC, elgado RB. Valores de Referência para xames Laboratoriais. In: Leão, Corrêa J, Viana MB, Mota JAC (d). Pediatria Ambulatorial. 3.ed. Belo Horizonte: Coopmed, P Burtis CA, Ashwood R. Textbook of Clinical Chemistry, 2ª edição, Philadelphia: W.B. aunders, 1986: Presentación Producto Referencia Contenido 1 2 x 40 ml Fe Liquiform 91-2/50c 2 2 x 10 ml 1 x 3 ml Fe Liquiform Labmax 560/ / x 26 ml 4 x 9 ml 1 x 3 ml Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantía] Labtest iagnóstica garantiza el desempeño de este producto, dentro de las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en los rótulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente. Labtest iagnóstica.a. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CP Lagoa anta. Minas Gerais Brasil - Customer ervice customerservice@labtest.com.br stán disponibles aplicaciones para sistemas automáticos. l número de ensayos en aplicaciones automáticas depende de los parámetros de programación. Revisión: Julio, 14 Ref.: Copyright by Labtest iagnóstica.a. Reproducción bajo previa autorización 05 spañol - Ref.: 91
6 06 spañol - Ref.: 91
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