TSH. 01 Español - Ref.: 903. Ref.:903. Instrucciones de Uso. Finalidad. Sistema para la determinación cuantitativa de la hormona

Transcripción

1 TSH Instrucciones de Uso Finalidad. Sistema para la determinación cuantitativa de la hormona tirotrópica ( Thyroid Stimulating Hormone - TSH) en suero. [Sólo para uso diagnóstico in vitro.] Principio. La TSH presente en la muestra se une específicamente a anticuerpos monoclonales anti-tsh inmovilizados en la superficie de inmunotubos (IT). Después del lavado, se adicionan anticuerpo monoclonal marcado con biotina y conjugado de estreptavidinaperoxidasa que forman un complejo cuaternario. Después de la eliminación de los reactivos en exceso, la reacción quimioluminiscente se desencadena mediante la adición de peróxido y luminol. La cantidad de luz emitida, medida en unidades relativas de luz (RLU), es proporcional a la concentración de TSH en la muestra. Características del sistema. La TSH - Labtest es un sistema semiautomático desarrollado con un enfoque innovador que permite el uso de los sustratos quimioluminiscentes luminol y peróxido en cinética rápida, con obtención de resultados en unos pocos segundos de reacción. Los niveles de sensibilidad son equivalentes a los de otros sustratos quimioluminiscentes que emplean fosfatasa alcalina como enzima. Los estudios realizados demuestran que el ensayo no sufre interferencia significativa causada por altas concentraciones de hemoglobina, bilirrubina y de triglicéridos y de las hormonas LH, FSH y hcg, además no presenta el efecto "hook". La alta estabilidad de los reactivos reduce la frecuencia de las calibraciones, lo que permite la adaptación a pequeñas rutinas, con realización de pruebas individuales sin aumentar los costos. Metodología. Quimioluminiscencia en tubos. Reactivos 1. - Diluyente 2. - Biotinilado - Almacenar entre 2-8 ºC. de Muestra - Almacenar entre 2-8 ºC. Contiene tapón 100 mmol/l ph 7,4; conservante, tensoactivo y estabilizantes. Listo para su uso Conjugado Contiene anticuerpo monoclonal anti-tsh biotinilado en tapón 100 mmol/l ph 7,4; conservante, tensoactivo y estabilizantes. Listo para su uso. Concentrado 50X - Almacenar entre 2-8 ºC. Contiene estreptavidina-peroxidasa, conservante, tensoactivo y estabilizantes. Consultar apartado Procedimiento - Preparación de los reactivos. Ref.: Diluyente del Conjugado - Almacenar entre 2-8 ºC. Contiene tapón 100 mmol/l ph 7,4; conservante, tensoactivo y estabilizantes. Consultar apartado Procedimiento - Preparación de los reactivos Calibrador Low (Bajo) - Almacenar entre 2-8 ºC. Preparación liofilizada de la hormona tirotrópica (TSH) que contiene tapón 100 mmol/l ph 8,1, conservante y estabilizantes. Consultar en la etiqueta del frasco el valor señalado para la concentración de TSH. Consultar apartado Procedimiento - Preparación de los reactivos - Reconstitución de los calibradores.. La concentración de ese calibrador, que figura en el rótulo del producto, deberá ser inserida en el protocolo del test. 6 - Calibrador High (Alto) - Almacenar entre 2-8 ºC. Preparación liofilizada de la hormona tirotrópica (TSH) que contiene tapón 100 mmol/l ph 8,1, conservante y estabilizantes. Consultar en la etiqueta del frasco el valor señalado para la concentración de TSH. Consultar apartado Procedimiento - Preparación de los reactivos - Reconstitución de los calibradores.. La concentración de ese calibrador, que figura en el rótulo del producto, deberá ser inserida en el protocolo del test. 7 - Inmunotubos - Almacenar entre 2-8 ºC. Tubos de poliestireno sensibilizados con anticuerpos monoclonales anti-tsh. Listo para su uso. Los envases de plástico que contienen los tubos deben abrirse sólo cuando están en temperatura ambiente ( Temperatura inferior a 30 ºC), para evitar la condensación de vapor de agua en los tubos. El incumplimiento de esta orientación resultará en la disminución de la estabilidad del reactivo. Después de abrir los envases, los tubos son estables durante 6 meses cuando se almacenan entre 2 y 8 ºC y con el desecante en el envase de plástico bien cerrado. Los reactivos sin abrir, cuando se almacenan bajo las condiciones establecidas, son estables hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta. Después de abiertos, los reactivos deben ser manejados de acuerdo con las buenas prácticas de laboratorio para evitar contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden causar reducción de la estabilidad. Precauciones y cuidados especiales El calibrador está preparado a partir de derivados de sangre humana y fue ensayado para determinar la presencia de HBsAg, anticuerpos anti-hcv y anti-hiv presentando resultados negativos. A pesar de haber sido utilizados tests validados y aprobados, ninguno de ellos puede asegurar que productos derivados de la sangre humana estén libres de agentes infectivos. Por lo tanto, los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la manipulación del produto, que no debe ser pipeteado con la boca. Se recomienda manipularlo como siendo potencialmente infectivo. 01 Español - Ref.: 903

2 No mezclar reactivos de lotes distintos y no utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad. No permitir la contaminación cruzada entre los componentes. Utilizar solamente puntas desechables para pipetear cada muestra y cada reactivo. La limpieza y el secado adecuados del material utilizado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos. Residuos de jabón, detergentes o agentes oxidantes en los recipientes utilizados para la preparación del Conjugado de uso pueden interferir en la reacción. Utilizar preferiblemente material de plástico desechable. Los envases de plástico que contienen los inmunotubos (IT) deben abrirse sólo cuando están en temperatura ambiente (Temperatura inferior a 30 ºC), para evitar la condensación de vapor de agua en los tubos. El incumplimiento de esta orientación resultará en la disminución de la estabilidad del reactivo. Después de abrir los envases, los tubos son estables durante 6 meses cuando se almacenan con el desecante en el envase de plástico bien cerrado. Los inmunotubos (IT) deben ser desechados después de su uso. No reutilizar para otros fines. Para la eliminación de los reactivos y del material biológico, se aconseja aplicar las normas locales, provinciales o federales de protección ambiental. Material necesario (no está incluído) 1. Micropipetas y puntas desechables. 2. Baño María (37 1 º C). 3. Recipiente para preparar las diluciones. 4. Cronómetro. 5. Solución de Lavado Concentrada. (Ref. 908). 6. Soluciones Reveladoras (Ref. 909). 7. Estantería para tubos 12x75 mm con sistema de fijación. 8. Microordenador. 9. Luminómetro Lumiquest o instrumento similar equipado con dos inyectores y capacidad para acomodar tubos 12 x 75 mm. 10. Solución Desinfectante (Ref. 604). Muestra 4 Utilizar sólo suero. El analito es estable durante 5 días entre 2 y 8 ºC y hasta 1 mes en temperatura inferior a 20 ºC negativos cuando se almacena en un recipiente apropiado para la congelación. Asegurarse de que las muestras estén descongeladas y homogeneizadas antes de su uso. Se deben eliminar las partículas en suspensión por centrifugación. No usar las muestras con signos de contaminación o muestras congeladas y descongeladas más de una vez. Debe crearse un Procedimiento Operativo Estándar (POE) para la recolección, preparación y almacenamiento de la muestra. Enfatizamos que los errores debidos a la muestra pueden ser mucho más grandes que los errores que se ocurrieron en el procedimiento analítico. Como ninguna prueba conocida puede garantizar que muestras de sangre no transmiten infecciones, todos ellas deben considerarse como potencialmente infecciosas. Por lo tanto, para su manejo, se deben seguir las normas de bioseguridad. Interferencias Concentraciones de hemoglobina hasta 750 mg/dl, bilirrubina hasta 20 mg/dl y triglicérido hasta 1000 mg/dl, hcg hasta mui/ml, LH hasta mui/ml y FSH hasta mui/ml no producen interferencias significativas. Limitaciones del sistema. El sistema TSH Labtest tiene inhibidores de anticuerpos antirratón (HAMA). Sin embargo, las muestras que contienen altas cantidades de HAMA pueden producir resultados falsamente disminuidos. Como ocurre en los inmunoensayos en general, interferencias no descritas de medicamentos u otras sustancias endógenas pueden afectar a los resultados. Procedimiento Cuidados especiales. Los empaques que contienen los inmunotubos deben abrirse sólo en temperatura ambiente (Temperatura inferior a 30 ºC) para evitar la condensación de vapor de agua en los tubos. El incumplimiento de esta orientación resultará en la disminución de la estabilidad del reactivo. Los reactivos líquidos deben homogeneizarse suavemente antes de su uso. Preparación de los reactivos Conjugado de uso. Para preparar el Conjugado de Uso pipetee todo el contenido del frasco del Conjugado Concentrado y transferir para el frasco que contiene el Diluyente del Conjugado y homogeneizar. Si es necesario, centrifugar el material para asegurar que todo el contenido del frasco Conjugado Concentrado estea en la parte inferior del tubo. Después de transferir la totalidad del volumen, enjuagar el frasco de Conjugado Concentradocon parte de la mezcla del Conjugado Concentrado y Diluyente del Conjugado. Homogeneizar suavemente por inversión. Una vez preparado, el Conjugado de Uso es estable durante 4 meses cuando se almacena entre 2 y 8 ºC. Identificar el frasco y anotar la fecha de caducidad. de Uso y transferir 1 (un) volumen del Conjugado Concentrado Si necesario, se puede preparar volúmenes más pequeños del Conjugado y 50 volúmenes del Diluyente del Conjugado para un frasco limpio y seco. Identificar el frasco y anotar la fecha de caducidad. Para mantener su desempeño, el Conjugado de Uso debe permanecer fuera de la nevera sólo durante el tiempo necesario para su uso. Reconstitución de los calibradores Consultar el apartado 1 - Observaciones. Quitar el precinto de aluminio y retirar con cuidado la tapa de goma. 02 Español - Ref.: 903

3 Sumar al frasco del calibrador el volumen de agua desionizada con una pipeta volumétrica tal como se indica en la etiqueta. Vuelva a colocar la tapa de goma, dejar reposar durante 10 minutos y homogeneizar suavemente por inversión. Antes de su uso, homogeneizar suavemente y retirar la cantidad necesaria para su uso. Tapar inmediatamente y almacenar entre 2 y 8 ºC. Después de la reconstitución, los calibradores permanecen estables durante 21 días si se almacena entre 2 y 8 ºC, bien cerrado y protegido de la luz. Para preservar el desempeño, mantener el calibrador fuera de la temperatura de almacenamiento sólo el tiempo mínimo necesario para obtenerse el volumen que se va a utilizar. Para almacenamiento por un período superior a 21 días sugerimos, después de la reconstitución, separar el calibrador en alícuotas y almacenar a - 15 ºC negativos por hasta 90 días en recipiente herméticamente cerrado, protegido de la luz. Para evitar la evaporación del material durante el período de almacenamiento es esencial utilizar frascos adecuados para congelación (criotubos). Las alícuotas del calibrador deben descongelarse sólo una vez. Los calibradores deben ser manejados de acuerdo con las buenas prácticas de laboratorio para evitar contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden causar reducción de la estabilidad. Calibración. La calibración del sistema se realiza mediante el uso de una Master Curve de 6 puntos (concentración de los calibradores y sus respectivas RLUs) y a justada, cuando sea necesário, utilizando los dos calibradores de a juste (Calibrador Low - ( Bajo) Ref e Calibrador High - ( Alto) Ref ). La Master Curve es suministrada en un documento adjunto juntamente con el producto TSH y es específica para cada lote de reactivos. Al inserir los datos de la Master Curve durante la creación del protocolo del test, inserir también las concentraciones de los calibradores de ajuste que figuran en el rótulo de los productos (Calibrador Low - ( Bajo) Ref e Calibrador High - ( Alto) Ref ). Cuando se utiliza un lote de producto por primera vez, deben insertarse los datos de la Master Curve en el programa del luminómetro y luego debe hacer un ajuste en la curva de calibración, ensayando en duplicado los dos calibradores proporcionados en el kit (Calibrador Low - ( Baj o) Ref e Calibrador High - ( Alto) Ref ). Para configurar la programación del equipo e introducir correctamente los datos de la Master Curve, consultar el manual del equipo. Cuando los reactivos se mantienen en las condiciones indicadas, la calibración permanece estable durante 90 días. La calibración del sistema debe ajustarse en las condiciones a continuación: 1. Cuando se utiliza un lote de producto por primera vez; 2. A cada nueva preparación del Conjugado de Uso, si es el caso; 3. Cuando el control de calidad indicar. Procedimiento de Prueba Importante 1. Los parámetros de lectura de las pruebas, así como los datos de la Master curve deben insertarse en el luminómetro antes de hacer las pruebas. Consultar apartado "Calibración" y el manual del equipo para obtener más información. 2. No utilice en el ensayo una cantidad mayor que 20 inmunotubos a la vez. 1. Separar el número de inmunotubos (IT) necesarios a las pruebas, identificarlos y posicionarlos en la estantería para inmunotubos. 2. Sumar 0,15 ml de Diluyente de Muestra en la parte inferior de cada tubo. 3. Sumar 0,10 ml de la muestra (suero, controles o calibradores) directamente al contenido de cada inmunotubo. Homogeneizar. 4. Incubar 30 minutos en baño María a 37 ºC. 5. Retirar los inmunotubos del baño María. 6. Sumar 1,0 ml de Solución de Lavado Concentrada (Ref. 908) lista para uso. 7. Descartar el contenido de los tubos por inversión y con la estantería invertida, retirar el exceso de líquido, apoyando el borde superior de los tubos sobre una superficie absorbente (2-3 capas de toallas de papel). 8. Sumar 0,15 ml de Biotinilado en la parte inferior de cada tubo. 9. Sumar 0,10 ml de Conjugado de Uso directamente al contenido de cada tubo. Homogeneizar. 10. Incubar 30 minutos en baño María a 37 ºC. 11. Retirar los tubos del baño María. 12. Repetir por seis veces consecutivas los pasos 6 y Para obtener los resultados, proceder de la siguiente manera: 1. Realizar el prime del equipo utilizando Soluciones Reveladoras (consultar las instrucciones de uso del producto Soluciones Reveladoras - Ref. 909 y el manual de operación del equipo); 2. Seleccionar el protocolo de la prueba que tiene los datos de la Master Curve; 3. Realizar la medición de los calibradores de ajuste (si es necesario), muestras y controles. 03 Español - Ref.: 903

4 Intervalo operativo. El intervalo operativo de la prueba es de 0,05 UI/mL hasta cerca de 25 UI/mL. El límite superior del intervalo se define de acuerdo a la concentración del último calibrador de la curva de calibración. La concentración de ese calibrador puede presentar pequeñas variaciones de un lote para el otro. Las muestras con resultados más bajos que el límite de sensibilidad analítica deben reportarse como <0,05 UI/mL. Las muestras con concentraciones superiores al valor del ultimo calibrador se pueden diluir com solución salina 0,85%. Después de la dilución, multiplicar el valor obtenido por el fator de dilución utilizado. Número de muestras Intervalo de concentraciones ( UI/mL) Media de las estimaciones ( UI/mL) Ecuación de regresión Coeficiente de correlación Método Comparativo 48 0,59-19,81 5,25 Método Labtest 48 0,59-19,53 5,38 Método Labtest = 1,000 x Método Comparativo + 0,123 0,994 Control interno de calidad. El laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que define claramente los reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, normas, criterios para especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. El uso de los controles en todos los conjuntos de pruebas es esencial para controlar la imprecisión de la medición y desviación de la calibración. Se sugiere que las especificaciones para el coeficiente de variación y el 1,2,3 error total se basen en los componentes de la variación biológica (VB). Se sugiere utilizar las preparaciones de la Línea Qualitrol Q Labtest para control interno de la calidad en ensayos de quimioluminiscencia. 4 Intervalo de referencia. Se debe utilizar el intervalo solo para orientarse. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio intervalo de referencia en la población atendida. Edad Recién nacido hasta 4 días TSH ( Ul/mL) 1, a 20 semanas 1,7-9,1 21 semanas hasta 20 años 0,7-6,4 21 a 54 años 0,4-4,2 55 a 87 años 0,5-8,9 Embarazo 1º. Trimestre 0,3-4,5 2º. Trimestre 3º. Trimestre Características del desempeño 5 0,5-4,6 0,8-5,2 Efectos de la dilución de la matriz. Se utilizaron dos muestras con valores iguales a 13,9 y 20,7 UI/mL para evaluar la respuesta del sistema en diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/l (0,85%). Utilizando factores de dilución que van de 2 a 8 se encontraron recuperaciones entre 98,6 e 99,4%. Comparación de métodos. El método que se propone fue comparado con producto disponible en el mercado, que utiliza metodología similar y se obtuvo los resultados a continuación: Usando la ecuación de regresión, el error sistemático (sesgo) estimado fue igual a 2,74% para un nivel de decisión igual a 4,49 UI/mL y 0,58% para un nivel de decisión igual a 19,81 UI/mL. Estos errores son más pequeños que el error sistemático analítico de la especificación que se basa en la variación biológica que es 7,8 2%. Estudios de precisión. Los estudios de precisión se realizaron utilizándose muestras nativas con concentraciones iguales a 4,49 UI/mL y 21,23 UI/mL. Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo Muestra 1 Muestra 2 N Media ( UI/mL) 4,49 21,23 Reproducibilidad - Imprecisión total Muestra 1 Muestra 2 N Media ( UI/mL) 4,49 21,23 La imprecisión encontrada cumple con la especificación para la imprecisión total que se basa en los componentes de la VB que es 9, 65%. El error total (error aleatorio + error sistemático) estimado es igual a 12,3% para el nivel de decisión 4,49 UI/L y 12,4% para el nivel de decisión 21,23 UI/L. Los resultados indican que el método cumple con la especificación para el error total ( 23,7 4%) que se basa en los componentes de la VB. Sensibilidad metodológica o analítica. Límite de detección 0,05 UI/mL. La sensibilidad analítica corresponde al límite de detección inferior. Representa la concentración más baja de TSH que se puede distinguir de cero. Se calcula como la concentración de TSH situada dos desviaciones estándar por encima del calibrador cero. DE 0,21 0,87 DE 0,26 1,53 CV (%) 4,58 4,10 CV (%) 5,79 7,19 04 Español - Ref.: 903

5 4 Significado clínico. O TSH es una glicoproteína con peso molecular igual a 30 KDa y se compone de dos subunidades polipeptídicas, ambas esenciales para su acción metabólica. La subunidad β es específica para la TSH y la subunidad α es compartida con otras hormonas tales como la LH, FSH y hcg. Actuando a través del mecanismo de AMP cíclico, la TSH actúa estimulando la producción de hormonas T3 (Triyodotironina) y T4 (tiroxina) por la glándula tiroides. La integración bioquímica de la hipófisis anterior, productora de TSH y la tiroides, glándula de destino, se hace a través de la hormona liberadora de tirotropina, la TRH (Thyrotropin Releasing Hormone), que actúa directamente sobre la hipófisis y estimula la producción de TSH. Así, altos niveles de T4 inhiben la producción hipotalámica de TRH, reduciendo de esta manera el estímulo para la producción de TSH hipofisaria. Por otro lado, la reducción de los niveles plasmáticos de T4 resulta en una elevación de la producción de TSH a través de la disminución del control del hipotálamo. La comprensión de los mecanismos básicos mencionados anteriormente lleva directamente a las interpretaciones clínicas de los hallazgos de laboratorio encontradas en las diversas patologías. Por lo tanto, en el hipotiroidismo primario, resultante de acometimiento de la glándula tiroides, los niveles de T3 y T4 se encuentran reducidos, lo que conduce a un aumento de la TSH. Incluso, en el hipotiroidismo discreto o en su fase inicial, cuando las hormonas tiroideas pueden todavía estar en el intervalo de referencia, los niveles de TSH ya están altos. En el hipotiroidismo secundario, el defecto metabólico está en el nivel central y ocurre debido a un disturbio en el eje hipotalámico-hipofisario, resultante de lesiones en el hipotálamo, en la hipófisis o en ambos. En este caso, los niveles de T3 y T4 se reducen, pero los niveles de TSH están reducidos o en el intervalo de referencia, es decir, los niveles de TSH están por debajo de lo esperado para los niveles de T4. En el hipertiroidismo primario, como lo que ocurre en la Enfermedad de Graves-Basedow, nódulos tiroideos o adenoma tiroideo, los niveles de TSH casi siempre disminuyen o incluso son indetectables, a excepción de algunas situaciones metabólicas raras. En la mayoría de los casos la T4 (principalmente la T4 libre) estará alto. Observaciones 1. El laboratorio clínico tiene como objetivo proveer resultados exactos y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa potencial de errores analíticos. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar reactivos, usar en las mediciones y para su uso en enjuague final de la vidrería, el agua debe tener resistividad 1 megaohm.cm o conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/l. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada, ocurre liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran capacidad de oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer un programa de control de la calidad del agua. Referencias 1. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular. Disponible en: < 7C_Bases_de_datos_y_documentos_del_Comite_de_Garantia_de_l a_cali...>(acceso en 04/2014). 2. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest Diagnóstica Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27: Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE: Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4.ed. St. Louis: Sauders/Elsevier, p Labtest: Datos de Archivo. Presentación Producto Referencia Contenido X 7,5 ml 1 X 7,5 ml 1 X 0,1 ml TSH X 5 ml 1 X 1 ml 1 X 1 ml 2 X 25 un Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantía] Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto, dentro de las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en los rótulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Servicio de Apoyo al Consumidor Edición: Mayo, 2012 Ref.: sac@labtest.com.br Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reproducción bajo previa autorización 2. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas de interferencia en los resultados y en la metodología, se sugiere consultar Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 3 ª edi ción, Washington: AACC Press, Español - Ref.: 903

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