Todas las cosas vivientes. contienen ADN y todo el. Jobblin y Gill

Transcripción

1 NUEVOS SISTEMAS GENETICOS UTILIZADOS EN GENETIC CA FORENSE Bióloga Maria E. Bermejo Valladolid Laboratorio de Biología Molecular y Genética del Ministerio Público

2 Todas las cosas vivientes contienen ADN y todo el ADN exhibe variabilidad d entre y dentro de las especies, cualquier material biológico asociado con un caso legal porta información acerca de su fuente Jobblin y Gill

3 La Genética forense consiste en el análisis del polimorfismo o variabilidad genética humana aplicada a los problemas judiciales. Estos pueden ser: Investigación de la paternidad: Impugnación por parte del supuesto p adre o reclamación por parte de la madre y/o del hijo. Criminalística: Ases inato y delitos sexuales (violación). análisis de restos orgánicos como pelos, semen, saliva, san ngre, etc. Que han quedado en la escena de un crimen o de un delito sexual. Identificación: Identificación de personas desaparecidas a partir del cadáver.

4 QUÉ ADN SE ANALIZA? ADN cromosómico (genómico): ADN repetido en tandem o VNTR (acrónimo inglés por Variable Number of Tandem Repeats), que puede ser: Minisatélite o MVR (minisatellite variant repeats): secuencia de unas 30 pb (pares de bases). Microsatélite o STR (short tandem repeats): secuencia de 2 a 6 pb, normalmente 4. Por ejemplo, la secuencia ACTTACTTACTTT... ACTT puede aparecer repetida 8 veces en un locus y 12 veces en otro locus. Así, un individuo puede ser homocigoto 8-8, heterocigoto 8-12 u homocigoto ADN mitocondrial (ADN mt): Presenta herencia materna y es más estable que el ADN cromosómico. Se suelen analizar dos regiones hipervariables HVI y HVII. Polimorfismo del cromosoma X/Y: Se analizan microsatélites (STRs) y el polimorfismo de nucleótidos simples (SNPs).

5 Tipificación de los grupos sanguíneos ABO, lo cual era útil en los casos de exclusión. Métodos serológicos y electroforesis de proteínas para análisis de grupos sanguíneos y de polim morfismos de proteínas, con la desventaja de que éstos últimos se degradaba an rápidamente y eran blanco de enzimas bacterianas, además de exhibir relativamente poca variabilidad.

6 Variable Number of Tandem Repeats (VNTRs).

7 HLA DQA1 POLIMARKER

8 Microsatélites STRs (Short Tandem Repeats)

9 La tipificación de marcadores autosómicos tipo STRs detectados a través de sistemas automáticos basados en la fluorescencia de los primers son casi universalmente usados en los laboratorios del mundo entero

10 STRs de Cromosoma Y

11 STRs del Cr omosoma X La tipificación de los ma arcadores STR del cromosoma X (CHRX STRs) son de gran importancia en las prueb bas de parentesco, especialmente en casos deficientes, donde no hay muestra de ADN disponibles en uno o ambos padres. STRs CHRX también tienen cada vez mayor aplicación en los casos forenses, incluso en aquellos donde sólo se pueden obtener fragmentos muy cortos de ADN.

12 ADN mito ocondrial Cuando el ADN presente en la muestra está muy degradado o en cantidad muy limitada. El mtdna es útil en casos de filiación de restos humanos, cuando las muestras de referencia con las que se cuenta son familiares a distantes tes por linaje materno, casos de maternidad y cotejo directo entre elementos materia de prueba y muestras de implicados o víctimas.

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18 Si la tipificación estándar de STRs autosómicos, no da suficiente información, la tipificación de sistemas adicionales como ADNmt, STRs de cromosoma Y o SNPs debe ser empleada ISFG (International Society for Forensic Genetics)

19 AmpFlSTR Identifiler Plus El Kit de amplificación de PCR AMPF l STR Identifiler Plus es optimizado para el estudio de casos forenses recuperando resultados más interpretables a partir de una gran gama de muestras de ADN. El nuevo kit incluye los mismos cebadores y la escalera alélica como el Identifiler Kit y la misma tecnología de amplificación de PCR proporcionando una mayor sensibilidad, una línea de base limpia, mejor rendimiento en las mezclas y la capacidad de superar los altos niveles de inhibición de la PCR.

20 Reduce El flujo de trabaj jo por el menor tiempo en la amplificación. Mantiene el rango de am mplificación Identifiler Kit (<360 bp) para la recuperación de la información a partir de muestras degra adadas, trabajando en conjunto con el Kit MiniFiler para ayudar a maximizar la recuperació ón de perfiles a partir de muestras muy degradadas. Mantiene los primers de secuencias para la genotipificación en concordancia con Identifiler, Identifiler Direct, Profiler Plus, COfiler y Kits SGM Plus. Utiliza un mejor proceso de fabricación que ayuda a reducir significativamen ifi nte los artefactos. t

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25 AmpFlSTR Identifiler Direct El Kit de amplificación de PCR AmpFlSTR Identifiler Direct se desarrollo específicamente para ayudar a resolver el embotellamiento durante la extracción y purificación de ADN. El Identifiler Kit Direct es capaz de amplif ficar los 16 loci incluidos en el Kit Identifiler de muestras de fuente única en tarjetas FTA, sin la nec cesidad de realizar la extracción o purificación de ADN. Muestras de sangre o bucal en tarjetas FTA pueden ser perforados en placas de PCR o de tubos, y se lleva directamente a la amplificación de PCR, sin afectar en la calidad de resultado os.

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27 Permite la amplificación directa de muestras como sangre y bucal en tarjeta FTA sin necesidad de extracción o purificación. Facilita un alto rendimiento y procesamiento automático de muestras. Minimiza el riesgo de contaminación y los errores de procedimiento al reducir el número de pasos de procesamiento o. Acelera el tiempo de obtención de resultados sin reducir la calidad de los smismos mismos. Elimina costos en la extracción / purificación y reduce el costo de la ma ano de obra e insumos.

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29 Amplifica los mismos loci que el Identifiler Kit con un mejor rendimiento y calidad en los resultados. Ayuda a mejorar significativamente los perfiles en muestras muy inhib idas mediante el uso de un sistema de amortiguación de alto rendimiento y optimización en los pa arámetros de los ciclos térmicos del PCR. Alto rendimiento en la altura de los picos de las muestras de bajo nivel, contribuyendo a la fácil interpretación en casos de mezclas. Permite la flexibilidad de análisis adicionales plenamente validados utilizando ciclos de protocolos 28 y 29.

30 AmpFlSTR MiniFiler El Kit de amplificación de PCR AmpFlSTR MiniFiler, aumenta la capacidad de obtener resultados de ADN en muestras en las que anteriormente se ha dado poca o ninguna información genética. Esto significa que hay una mejor oportunidad de conseguir mejor interpretación de los resultados.

31 Proporciona mejor inform ación sobre los ocho más grandes y más difíciles loci de amplificar en el AmpFl STR Identifiler y SGM Plus. Con amplificados de tamaños de menos de 270 pb, MiniFiler se ha optimizado su uso en muestras difíciles, incluso en muestras degradadas y que contienen inhibidores. Capacidad d para superar los efectos inhibitorios i de sustancias tales como el hierro hemo y ácidos húmicos, que son comúnm mente encontrados en las muestras forenses. Se puede utilizar como un complemento a otros kits de amplificación disponibles en el mercado. Utiliza 5-dye que permite e la compatibilidad de los flujos de trabajo con Identifiler.

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33 AmpFlSTR R Yfiler El Kit de amplificación de PCR AmpFlSTR Yfiler permite el análisiss de perfiles masculinos en mezclas con ADN fem menino que a menudo producen resultados ambiguos o poco concluyentes con los STR Rs autosómicos

34 Analiza trazas de ADN masculino que pueda estar presente en una gama de ADN femenino. Especificidad Combinada inherente al haplotipo masculino Y-STRs con sólido rendimiento del AmpFlSTR kit. Amplifica los 17 loci Y-STR en una sola reacción de PCR que produce mayor capacidad de discriminación que cualquier kit Y-STR disponibles en el mercado. Utilizar esta poderosa herramienta para el análisis de casos que contienen a un sospechoso (s)

35 NGM M El Kit NGM es un kit de STR multiplex muy robusto que utiliza un protocolo único para amplificar los 10 loci SGM Plus (D2S1338, D3S1358, D8S1179, D16S539, D18S51, D19S433, D21S11 1, FGA, TH01, VWA, amelogenina) junto con loci adicionales aprobados por el Consejo de la Unión Europe ea para la ampliación del Conjunto de Normas Europeas (D10S1248, D22S1045, D2S441, D1S1656 y D12S391). El kit combina los últimos avances en la optimización de amortiguación, la síntesis de imprimación y la optimización de ciclos térmicos para ofrecer una alta sensibilidad d y mejorar el rendimiento de trabajo STR de casos forenses y muestras de base de datos en un flujo de trabajo sencillo.

36 Proporciona una gran discriminación de gran alcance y facilitar la cooperación transfronteriza de intercambio de datos. Aumento de la capacidad de recuperar información a partir de muestras degradadas a través de una alta concentración discriminatoria i i i de los loci en la región de bajo peso molecular. Una mayor sensibilidad d para la amplificación ió de las muestras de bajo nivel y una mejor detección muestras de mezcla.

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40 AmpFlSTR R Profiler Applied Biosystems ha combinado las ventajas de las pruebas basadas en PCR y detección fluorescente en un equip po altamente exigente diseñado para aplicaciones de identificación humana. El Kit de amplif ficación de PCR AmpFlSTR Profiler amplifica loci de nueve repeticiones en tándem cortas (STR) y la amelogenina en una sola amplificación por PCR. Los loci STR amplificados son CSF1PO, D3S1358, D5S818, D7S820, D13S317, FGA, TH01, TP0X, y SVA.

41 PowerPlex 16 System El PowerPlex 16 System es un sistema STR multiplex para su uso en el análisis de ADN, como pruebas de paternidad, análisis forenses de ADN, pruebas de identidad humana y la identificación de cepas en cultivo de te ejidos. El sistema permite la co-amplificación y detección de tres colores de dieciséis loci (quince loci STR y amelogenina): Penta E, D18S51, D21S11, TH01, D3S1358, FGA, TPOX, D8S1179, VWA, amelogenina, Penta D, CSF1PO, D16S539, D7S820, D13S317 y D5S818.

42 El GenePrint PowerPlex 16 también contiene dos nuevos marcadores de bajo sttuter, el loci pentanucleótido polimórfico altamente repetitivo, Penta E y Penta D. Estos loci adicionales aumen ntan considerablemente el poder de discriminación del sistema, por lo que la GenePrint Pow werplex 16 es un sistema de amplificación con poder de exclusión suficiente pa ara resolver casos de paternidad de forma definitiva. Además, se observa sttuters muy bajos con Penta E y Penta D, que los convierte en loci ideales para la evaluación de las mezclas de ADN que a menudo se encuentran n en casos forenses.

43 Investigator ESSplex Kit El Kit investigator ESSplex fue desarrollado para la amplificación rápida y fiable de los 15 loci STR que componen el nuevo set Standard de la norma europea (ESS), además de la amelogenina, según lo recomendado por la Red Europea de Institutos de Ciencias Forenses (ENFSI) y aprobado por el Consejo de la Unión Europea. El analizador genético se calibra con BT5 Matrix, una tecnología optimizada de colores.

44 Investigator ESSplex Kit Amplificación simultánea de 16 loci. Resistente a la alta sensibilidad y un inhibidor. Generación de perfile es de ADN fiables. No hay rangos de superposición de alelos dentro de un panel

45 Investigator Argus Y-12 QS Kit El Kit investigator Argus Y-12 QS t fue desarrollado específicamente para la generación rápida y fiable de los per rfiles genéticos de ADN masculino a partir de mezclas de ADN masculino y femenino, y compleme enta con el Kit investigator Argus X-12 para pruebas de paternidad. El analizador genético se calibra con BT5 Matrix, una tecnología optimizada de colores.

46 Muy adecuado para las pruebas de paternidad y de parentesco. No requiere el aislamiento de los espermatozoides. Incluye un control interno para la eficiencia de la PCR. Resistente a la alta sensibilidad e inhibidores. No hay rangos de supe erposición de alelos dentro de un panel

47 Investigator Argus X-12 Kit El Kit investigator Argus X-12 es una herramienta única para el análisis de marcadores del cromosoma X, que son muy informativos para las pruebas de parentesco y de paternidad, así como el análisis STR gonosom mal de manchas forenses. El analizador genético se calibra con BT5 Matrix, tecnología optimizada de colores.

48 Único Kit para el análisis de marcadores del cromosoma X. Suplemento informativo del Kit Investigator Argus Y-12 QS Mayor poder discriminatorio para los casos deficientes. Resistente a la alta sen nsibilidad e inhibidores. No hay rangos de superposición de alelos dentro de un panel

49 Investigator DIPplex Kit El Kit Investigator DIPplex permite la amplificación de 30 polimorfismos de deleción / inserción (también conocido como indels), además de amelogenina, como una nueva alternativa para la iden tificación humana. El kit está diseñado para analizar el ADN altamente degradado y por lo tant to, el tamaño de amplificación máxima es de 150 pb. El analizador genético se calibra con BT5 Matrix, una tecnología optimizada de colores.

50 El ensayo DIPplex es altamente sensible y pueden obtenerse perfiles completos de forma robusta con sólo 63pg de ADN. En muestras de ADN degradadas. Los resultados muestran que el ensayo con DIPplex pe damás inform mación genética en muestras como huesos antiguos en comparación con un ensayo de STR común.

51 Kit único para la amplificación de polimorfismos de deleción / inserción (DIP). Muy adecuado para las muestras de ADN degradado. Fácil interpretación con DIPSorter gratuito dedicado. Rangos alélicos muy sensible y no se superponen p en un pane el. No se generan Sttuters en el análisis

52 Download dthe DIPSorter Freeware from the QIAGEN Web site at www1.qiagen.com/products/investigatordipplexkit.aspx. Alternatively, insert the software CD-ROM into your computer.

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54 Todas las cosas vivientes contienen ADN y todo el ADN exhibee variabilidad entre y dentro de las especies, cualquier material biológico asociado con un caso legal porta información acerca de su fuente Jobblin y Gill