DETERMINACION DE HIERRO EN HARINA DE
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- Adrián Bustos Chávez
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1 Basado en método AOAC Modificado Página 1 de 7 1. OBJETIVO La cuantificación de hierro en harina mediante digestión vía seca y lectura por con llama. 2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE Aplicable a harinas en general a través de digestión por vía seca para posterior lectura en de Llama (FAAS) 3. FUNDAMENTO Las porciones de estudio son secadas mediante mufla con termostato con rampa de temperatura o plancha calefactora, luego llevadas a cenizas a 550 C bajo incrementos graduales de temperatura (<50 C/h). Luego se agrega HCl y la solución es evaporada a sequedad. El residuo es disuelto en HNO 3 y cuantificado por FAAS. 4. DOCUMENTOS DE REFERENCIAS 4.1 AOAC Official Methods Lead, Cadmium, Copper, Iron and Zinc in foods- Atomic Absorption Spectrophotometric after dry ashing, Chapter 9 pag. 19; AOAC 19 th edition TERMINOLOGÍA 5.1 Vía seca: Tratamiento de muestras a altas temperaturas hasta calcinación para destrucción de materia orgánica. 5.2 FAAS: en Llama. 6. REACTIVOS, INSUMOS Y EQUIPOS 6.1 REACTIVOS Patrón de referencia para hierro. (*) Ácido clorhídrico 37 % p.a Ácido nítrico 65% p.a o Suprapure. (*) Agua desionizada. DUEÑO DE PROCESO: Encargado de Laboratorio de Nutrientes, Aditivos y Contaminantes ESTE DOCUMENTO FUERA DE LA INTRANET O IMPRESO SIN TIMBRE DE DOCUMENTO CONTROLADO SE CONSIDERA COPIA NO CONTROLADA APROBADO: Jefe Subdepartamento
2 Página 2 de INSUMOS Cápsulas de porcelana, cuarzo o platino resistentes a altas temperaturas Matraces aforados de 50 ml Vidrios de reloj Espátula, toalla absorbente, plumón permanente Micropipeta de 100 μl y de 1000 μl Piseta Elementos de seguridad (guantes y antiparras). 6.3 EQUIPOS Espectrofotómetro de Absorción Atómica con mechero para uso con mezcla aire/acetileno u óxido nitroso/acetileno con corrección de fondo apropiada. (*) Lámparas: lámparas de cátodo hueco de Hierro. (*) Mufla programable con termostato Plancha calefactora con control de temperatura (aprox. 300 C) Balanzas Analítica (*) (*) Reactivos, insumos y equipos críticos 7. DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES Antes de comenzar a trabajar con las muestras, asegurarse de la limpieza de su lugar de trabajo y que todo lo mencionado en punto materiales, insumos y reactivos esté disponible. A continuación se describe el método analítico, es crucial si no se dispone de práctica con el método, leer completo este procedimiento antes de comenzar a trabajar. 7.1 Muestreo/Muestra El ingreso de la muestra para su análisis debe cumplir con el Instructivo de Aceptación o Rechazo de muestras IT Preparación de Reactivos Estándares Estándar de hierro 100 mg/l: Tomar 10 ml de solución concentrada de 1000 mg/l y llevar a 100 ml con HNO 3 0,1 M.
3 Página 3 de 7 Soluciones Ácido clorhídrico 6M (1+1): Diluir 500 ml HCl (37 % w/w) a 1 litro con agua desionizada. Ácido nítrico 0.1M: Diluir 7 ml de HNO 3 a un litro con agua desionizada. 7.3 Preparación de curva de calibración. Realizar curva de calibración que contenga el estándar a 5 niveles; 1, 2, 3, 4 y 5 mg/l. Preparar la curva según la tabla y llevar a volumen con HNO 3 0,1 M. Concentración mg/l Alícuota ml Volumen final ml Concentración inicial mg/l 7.4 Preparación de controles. Los controles son preparados de igual manera como se hace con una muestra, es decir el control (Quality Control), corresponde a una harina que deberá someterse a análisis de igual forma como si fuera una muestra. 7.5 Preparación de la Muestra o etapas previas a realizar la medición. Homogeneizar la muestra y pesar entre 3 a 4 g de la muestra en cápsula o crisol. Tapar la cápsula con vidrio reloj. Colocar en mufla con termostato programable e incrementar la temperatura a una velocidad de 50 C/h hasta 550 C. Dejar por al menos 8 horas. Humedecer las cenizas con 5 ml de HCl 6M (1+1) y evaporar (a sequedad) en placa calefactora a 100 C ± 5 C Colocar nuevamente en mufla por 2 horas a 550 C hasta obtener cenizas blancas. Si es necesario repetir el procedimiento hasta que las cenizas se formen completamente (deben estar blancas/gris o ligeramente coloreadas. El número de repeticiones necesarias varía dependiendo del tipo de producto).
4 Página 4 de 7 Agregar 5 ml de HCl 6M (1+1) asegurándose que las cenizas estén en contacto con el ácido y calentar aprox. 5 minutos en placa calefactora a 100 C ± 5 C Disolver el residuo con HNO 3 0,1M tratando de que el ácido entre contacto con la ceniza. Dejar reposar por 1-2 horas. Trasvasijar a matraz de 50 ml y aforar con HNO M. 7.6 Análisis de la muestra o realización de la medición. Condiciones instrumentales. Condiciones espectrofotométricas Tipo de llama: Mezcla aire/acetileno Longitud de onda: 248,3 nm Ancho de slite: 0,2 nm T de ignición: 800 C T de atomización: 2300 C Corrector de background con Deuterio Leer la curva de calibración solicitada por el equipo y que contiene los parámetros de concentración en mg/l, calcular el coeficiente de correlación lineal e intercepto e interpolar la muestra para cuantificar el resultado de la absorbancia v/s concentración. El método está seteado para hacer tres lecturas de la misma muestra y mostrar el promedio de las mismas. Ingresar los resultados según año en la carpeta compartida de la sección planilla cálculos harinas (Año) (Ruta: Química Alimentos en "isp-adm.isp.cl"y:\lnac \Análisis\(Carpeta por año)) 7.7 Cálculo de Resultados: como se obtienen los resultados y criterios de aceptación de los mismos. c x v Hierro mg /kg = a Donde: c = concentración en ug/ml obtenidos por la interpolación en la curva de calibración de la muestra. v = volumen de la muestra final a = masa de la muestra en gramos 7.8 Aseguramiento de la calidad del ensayo.
5 Página 5 de 7 Se efectuarán controles sistemáticos y periódicos para comprobar la validez de los ensayos realizados con el método analítico recogido en este procedimiento, según disponibilidad. a) Nivel I: Ensayos de intercomparación ó utilización de materiales de referencia certificados ó patrones de referencia certificados, según disponibilidad. b) Nivel II. Durante el desarrollo de la serie de trabajo se incluye: - Ajuste del cero del equipo - Control de blanco al inicio de las lecturas - Control de estándar de concentración conocida - Lectura del estándar como control por cada diez muestras leídas. - El material control debe cumplir con la recuperación de la carta control indicada en RG Expresión de los Resultados. Los resultados se expresarán como mg/kg donde la cantidad, corresponde a los miligramos de analito (Fe) que se encuentran en un kilogramo de muestra 7.10 Los desechos alimentarios en buen estado son eliminados por basura normal, considerando el volumen de alimentos y criterio de la Jefatura correspondiente. Los desechos expuestos a alguna contaminación biológica o química y desechos producto del proceso, serán eliminados de acuerdo al procedimiento de Gestión de Residuos (PR ) e instructivo Manejo de Residuos peligrosos, especiales y otros (IT ). 8. CONTROL DE REGISTROS ALMACENAMIENTO IDENTIFICACION RESPONSABLE TIEMPO Registro electrónico resultados muestras de hierro RG 001-ME Encargado de laboratorio de Nutrientes, Aditivos y Contaminantes MEDIO SOPORTE 5 años Electrónico LUGAR RESPONSABLE/ RECUPERACION Carpeta compartida sección Química de Alimentos y Nutrición DISPOSICION Eliminación de archivo
6 Página 6 de 7 9. CONTROL DE CAMBIOS VERSION FECHA PRINCIPALES PUNTOS MODIFICADOS RESUMEN DE MODIFICACIONES 5 26/05/ Se actualiza código de IT 5 26/05/ Se agrega limpieza del área de trabajo. 5 26/05/ Se cambia formato de redacción de curva de calibración. 5 26/05/ Se aclara temperatura de mufla. 5 26/05/ Se incluye eliminación de muestras 5 26/05/ Se elimina documentos transversales y se incorpora registro digital. 10. CUADRO DE RESPONSABILIDADES Ejecuta el método Técnico de Laboratorio Encargado de Laboratorio Elabora el informe de resultados Profesional encargado del Laboratorio Aprueba el informe de resultados Jefatura de Sub departamento Alimentos y Nutrición 11. ANEXOS
7 Página 7 de 7 ANEXO N 1 ME PROGRAMAS MUFLA Naber N II 550 C Programa 1: ME (Rampla 1) Fe en harinas 100 C 4:30 hr 8 hr 1 hr T ambiente 1 hr 2 hr 50 C
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