RepublicofEcuador EDICTOFGOVERNMENT±

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1 RepublicofEcuador EDICTOFGOVERNMENT± Inordertopromotepubliceducationandpublicsafety,equaljusticeforal, abeterinformedcitizenry,theruleoflaw,worldtradeandworldpeace, thislegaldocumentisherebymadeavailableonanoncommercialbasis,asit istherightofalhumanstoknowandspeakthelawsthatgovernthem. NTE INEN 2326 (2002) (Spanish): Bebidas alcohólicas. Cerveza. Determinación de hierro

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3 INSTITUTO ECUATORIANO DE NORMALIZACIÓN Quito - Ecuador NORMA TÉCNICA ECUATORIANA NTE INEN 2 326:2002 BEBIDAS ALCOHÓLICAS. CERVEZA. DETERMINACIÓN DE HIERRO. Primera Edición ALCOHOLIC BEVERAGES. BEER. DETERMINATION OF IRON. First Edition DESCRIPTORES: Bebidas espirituosas, alcoholes, fermentación, bebida alcohólica, bebida, cerveza, método, ensayo, hierro. AL CDU: :658 CIIU: 3131 ICS:

4 CDU: :658 CIIU: 3131 ICS: Error! Marcador AL Norma Técnica Ecuatoriana Voluntaria BEBIDAS ALCOHÓLICAS. CERVEZA. DETERMINACIÓN DE HIERRO. NTE INEN 2 326: OBJETO 1.1 Esta norma establece los métodos de ensayo para determinar el contenido de hierro en la cerveza. 2. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA 2.1 Eliminar el CO 2, para lo cual, la muestra se transfiere a un erlenmeyer cuyo volumen debe ser mayor al de la muestra y llevar a una temperatura de 15 C a 20 C. 2.2 Eliminar el gas, agitar el recipiente, al principio suavemente y después vigorosamente, hasta que no se observe desprendimiento de gas de la cerveza. 2.3 Si la muestra contiene materiales en suspensión, filtrar el líquido libre de CO 2 a través de papel de filtro, cubriendo el embudo con un vidrio de reloj para reducir la evaporación. 3. DISPOSICIONES ESPECÍFICAS 3.1 La determinación del contenido de hierro se puede efectuar por cualquiera de los métodos establecidos. El método de Espectrofotometría de Absorción Atómica debe ser usado como dirimente en caso de divergencia. 4.1 Método colorimétrico Resumen 4. MÉTODOS DE ENSAYO El método se basa en la reacción de la 2,2' Bipiridina o de la Ortofenantrolina con el ion ferroso, formando un complejo coloreado, el cual se cuantifica espectrofotométricamente a una longitud de onda de 520 nm para la Bipiridina o a una longitud de onda de 505 nm para la Ortofenantrolina. Longitudes de onda en las cuales el complejo formado presenta su mayor absorbancia Equipos Espectrofotómetro o colorímetro. Al usar colorímetro se requiere de filtros en la región azulverde de 500 nm a 540 nm Baño de agua a 60 C Pipetas volumétricas de 1,0 cm 3 ; 2,0 cm 3 ; 5,0 cm 3 ; 10,0 cm 3 ; 20,0 cm 3 ; 25,0 cm 3 ; 30,0 cm 3 y 50,0 cm Balón aforado de 100 cm 3 y 500 cm 3. (Continúa) DESCRIPTORES: Bebidas espirituosas, alcoholes, fermentación, bebida alcohólica, bebida, cerveza, método, ensayo, hierro. -1-

5 NTE INEN Reactivos Reactivo de color. Bipiridina u Ortofenantrolina. a) Bipiridina. Disolver 1,0 gramo de 2,2' Bipiridina (, -dipiridil) en 20 cm 3 de ácido acético (1+ 2) y diluir a 500 cm 3 con agua destilada. b) Ortofenantrolina. Disolver 1,5 gramos de ortofenantrolina en 500 cm 3 de agua calentada a 70 C Solución estándar de hierro. (Esta solución contiene 1 mg de hierro por cm 3 ). a) Pesar 3,512 g de sulfato de hierro y amonio hexahidratado [Fe (NH 4 ) 2.(SO 4 ) 2.6H 2 O] y transferir a un balón aforado de 500 cm 3. Disolver la sal de hierro en agua destilada, agregar 0,1 cm 3 de HCl concentrado y completar el volumen con agua destilada, mezclar la solución vigorosamente. b) También se puede preparar la solución a partir de alambre de hierro puro libre de óxido así: Disolver 0,500 g de hierro grado reactivo en 5 cm 3 de HCl (1+4) y 1 cm 3 de HNO 3. Tapar con vidrio de reloj, calentar hasta la solución completa y luego evaporar la solución de hierro hasta sequedad. Disolver el residuo en poca agua y evaporar nuevamente hasta sequedad. c) Disolver el residuo en 3 cm 3 a 5 cm 3 de HCl, enfriar y transferir cuantitativamente la solución a un balón volumétrico de 500 cm 3. Agregar 2 gotas de agua de bromo saturada y completar a volumen con agua destilada Ácido ascórbico. Reactivo grado analítico, en polvo y libre de hierro Calibración Desgasificar la cerveza preferiblemente sin filtrar. En caso de que se requiera filtrar debe usarse papel filtro libre de hierro, el cual no debe dar color al agregarle reactivo de color en presencia de ácido ascórbico Diluir 1 cm 3 de la solución estándar de hierro (reactivo ) a 100 cm 3 con agua destilada para obtener una solución que contiene 0,01 mg de hierro por cm 3 de solución Diluir alícuotas de 0,0 cm 3 ; 2,0 cm 3 ; 5,0 cm 3 ; 10,0 cm 3 ; 20,0 cm 3 y 30,0 cm 3 de esta solución y aforar hasta 100 cm 3 con agua destilada para obtener soluciones que contienen 0,0; 0,20; 0,50; 1,00; 2,00 y 3,00 mg de hierro por litro Agregar 25 mg de ácido ascórbico y 2 cm 3 de reactivo de color a una alícuota de 25 cm 3 o 50 cm 3 de estas soluciones Mezclar vigorosamente y calentar a 60 C por 15 minutos. Enfriar a la temperatura ambiente Medir la absorbancia a 505 nm para el caso de la Ortofenantrolina o a 520 nm para el caso de la Bipiridina Graficar la absorbancia contra mg/l de hierro para obtener una línea recta. Calcular el factor de calibración F para convertir absorbancia a mg de hierro por litro Preparación de la muestra Desgasificar la cerveza preferiblemente sin filtrar. En caso de que se requiera filtrar debe usarse papel filtro libre de hierro, el cual no debe dar color al agregarle reactivo de color en presencia de ácido ascórbico. (Continúa) -2-

6 NTE INEN Procedimiento La determinación debe efectuarse por duplicado sobre la misma muestra preparada Preparar un blanco que contenga 25 cm 3 de la muestra, añadir 2 cm 3 de agua destilada y 25 mg de ácido ascórbico Preparar la muestra que contenga 25 cm 3 de cerveza, añadir 2 cm 3 de reactivo de color (Bipiridina) y 25 mg de ácido ascórbico Agitar a las dos muestras, calentarlas a 60 C por 15 minutos Enfriar a la temperatura ambiente y medir la absorbancia de la muestra contra el blanco a 505 nm para el caso de usar Ortofenantrolina o 520 nm para el caso de usar Bipiridina. (ver Nota 1) Cálculos: El contenido de hierro en la cerveza se calcula mediante la ecuación siguiente: a) Fotómetro o Colorímetro: Fe = F p x (R s - R b ) En donde: Fe = Contenido de hierro, en mg/l F p = Factor de calibración. R s = Lectura de la muestra en el fotómetro o colorímetro. R b = Lectura del blanco en el fotómetro o colorímetro. a.1) Ejemplo: Factor de Calibración = 0,0485 R s = 8,5 R b = 0,5 Fe = 0,0485 x ( 8,5-0,5 ) Fe = 0,39 b) Espectrofotómetro: Fe = F s x A En donde: Fe = Contenido de hierro, en mg/l NOTA 1. Si no se dispone de equipo de calentamiento, se puede desarrollar calor a temperatura ambiente durante 30 minutos. Este método da resultados que son comparables con el método de calentamiento. Las muestras que presentan alta oxidación se debe a que poseen un alto contenido de hierro, en este caso los resultados son ligeramente bajos. Una mejor recuperación se obtiene a veces en tales casos añadiendo 25 mg de ácido ascórbico a la muestra y al blanco antes de desarrollar el color. Si se usa Colorímetro o Fotómetro, se deben realizar lecturas del blanco y de la muestra. (Continúa) -3-

7 NTE INEN F s = Factor de calibración A = Absorbancia a 505 nm o 520 nm. 4.2 Método por espectrofotometría de absorción atómica Resumen Para la determinación de hierro en cerveza se usa la Espectrofotometría de Absorción Atómica, la cual es restringida para aquellos instrumentos suficientemente sensibles en detectar niveles de 0,05 mg/l hierro por aspiración directa. Se debe usar una curva progresiva estándar de cerveza Equipos Espectrofotómetro de Absorción Atómica. Equipado con una lámpara de cátodo hueco para hierro, provisto de un quemador de tres ranuras (este reduce los riesgos de formación de depósitos) Balón volumétrico, de 100 cm Pipetas, de 1 cm 3 graduada en 0,1 cm Pipetas volumétricas, de 10 cm Reactivos Solución estándar de Hierro, mg/l. Disolver 1,000 g de alambre de hierro en 50 cm 3 de ácido nítrico (1+1). Diluir a 1 litro con agua desionizada. Alternativamente se puede usar soluciones estándares de muy alta pureza preparadas comercialmente para espectrofotometría de absorción atómica Agua desionizada Calibración Desgasificar la cerveza preferiblemente sin filtrar. En caso de que se requiera filtrar debe usarse papel filtro libre de hierro La solución estándar de hierro (reactivo ) contiene mg de Fe/l. Por tanto, al añadir 0,1 cm 3 de la solución estándar de hierro de referencia a un balón volumétrico de 100 cm 3 y completar el volumen con cerveza desgasificada, resulta un incremento de 1 mg/l al nivel de hierro presente en la cerveza Preparar estándares de cerveza en forma progresiva que contengan 0,0 mg/l; 0,1 mg/l; 0,2 mg/l; 0,4 mg/l y 0,6 mg/l adicionando hierro midiendo alícuotas de 0,0 cm 3 ; 0,1 cm 3 ; 0,2 cm 3 ; 0,4 cm 3 y 0,6 cm 3 de la solución estándar de hierro de referencia en un grupo de 5 balones volumétricos de 100 cm 3 y aforando con la cerveza que va a ser analizada Preparar luego soluciones de 10 a 1, de los estándares del grupo indicado en el numeral transfiriendo 10 cm 3 de cada balón volumétrico a otro balón volumétrico de 100 cm 3 y nuevamente aforar con la cerveza que va a ser analizada. Esto da como resultado una serie de muestras de cerveza que contiene niveles de hierro añadidos como estándares internos Si las muestras de cerveza a ser analizadas son suficientemente similares, una sola curva de adición del estándar puede ser suficiente para todas. (Continúa) -4-

8 NTE INEN Procedimiento La determinación debe efectuarse por duplicado sobre la misma muestra preparada Aspirar directamente las soluciones en el Espectrofotómetro de Absorción Atómica utilizando condiciones apropiadas para el uso de este equipo Utilizar agua destilada para encerar el instrumento y luego medir las absorbancias de las muestras de cervezas y de los correspondientes estándares Utilizar los valores de absorbancia obtenidos de los cuatro estándares para trazar la curva estándar. Extrapolar la cantidad de hierro presente en la cerveza en la correspondiente curva estándar No interrumpir la acción de aspiración en ninguno de los análisis de las series dadas. Esto incrementará la precisión en el trabajo Reportar el contenido de hierro en mg/l en la cerveza con aproximación a dos cifras decimales Cálculo El procedimiento del cálculo del contenido de hierro en cerveza se demuestra con un ejemplo donde la curva ascendente de los estándares es obtenida trazando el hierro añadido versus la absorbancia Una réplica de cómo se lo hace en el laboratorio está dada en la figura Por extrapolación, se intercepta la abscisa que indica que la cerveza contiene 0,06 mg/l de hierro. Elemento: Longitud de onda: Quemador: Llama: Fe 248,3 nm 3 ranuras Oxidante (azul) Aire/Acetileno Concentración Absorbancia Cerveza + 0,0 mg/l hierro añadido 0,030 Cerveza + 0,1 mg/l hierro añadido 0,080 Cerveza + 0,2 mg/l hierro añadido 0,130 Cerveza + 0,4 mg/l hierro añadido 0,220 Cerveza + 0,6 mg/l hierro añadido 0,330 (Continúa) -5-

9 NTE INEN ,7 0,6 0,5 ABSORBANCIA 0,4 0,3 0,2 0,1-0,1 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 CONCENTRACIÓN, mg/l La cerveza contiene 0,06 mg de hierro por litro en Cerveza es 0,06 mg/1fe Zn/l FIGURA 1. Ejemplo del cálculo del contenido de hierro en la cerveza con los datos obtenidos por Espectrofotometría de Absorción Atómica. 5.1 En el informe de resultados debe indicarse: 5. INFORME DE RESULTADOS La media aritmética de los resultados de la determinación, con dos cifras significativas Nombre del producto Identificación del lote Tipo y número de la muestra NTE INEN de referencia Fecha de muestreo y ensayo. 5.2 Debe mencionarse además cualquier condición no especificada en esta norma o considerada como opcional, así como cualquier circunstancia que pueda haber influido sobre el resultado. 5.3 Deben incluirse todos los detalles para la completa identificación de la muestra. (Continúa) -6-

10 NTE INEN APENDICE Z Z.1 DOCUMENTOS NORMATIVOS A CONSULTAR Esta norma no requiere de otras para su aplicación. Z.2 BASES DE ESTUDIO ASBC. Beer 18. Methods of analysis. Eight Edition. American Society of Brewing Chemists. St. Paul, Minnesota,

11 INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA Documento: TITULO: BEBIDAS ALCOHÓLICAS. CERVEZA. Código: NTE INEN DETERMINACIÓN DE HIERRO. AL ORIGINAL: REVISIÓN: Fecha de iniciación del estudio: Fecha de aprobación anterior por Consejo Directivo Oficialización con el Carácter de por Acuerdo No. de publicado en el Registro Oficial No. de Fecha de iniciación del estudio: Fechas de consulta pública: de a Subcomité Técnico: CERVEZAS Fecha de iniciación: Fecha de aprobación: Integrantes del Subcomité Técnico: NOMBRES: Ing. Jesús David Rueda (Presidente) Dr. José Sánchez Ing. Guillermo Plúa Ing. Julio Baquerizo Dra. Susy Calva Ing. Gustavo Chicaiza Dra. Meyra Manzo Dra. Rosa Rivadeneira Dra. Magda Saltos Ing. Monserrat Cuesta Dra. Mónica Gualotuña Dra. Blanca Viera Ing. César Jara (Secretario Técnico) INSTITUCIÓN REPRESENTADA: CERVECERIA ANDINA S.A. COMPAÑÍA DE CERVEZAS NACIONALES CERVEZAS REGIONALES S.A. CERVECERÍA SURAMERICANA S.A. CERVECERÍA SURAMERICANA S.A. ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA UNIVERSIDAD CENTRAL INSTITUTO NACIONAL DE HIGIENE LEOPOLDO IZQUIETA PÉREZ GUAYAQUIL INSTITUTO NACIONAL DE HIGIENE LEOPOLDO IZQUIETA PÉREZ QUITO MINISTERIO DE SALUD PÚBLICA ESCUELA POLITÉCNICA NACIONAL INEN INEN INEN Otros trámites: El Consejo Directivo del INEN aprobó este proyecto de norma en sesión del Oficializada como: Voluntaria Por Acuerdo Ministerial No del Registro Oficial No. 731 del

12 Instituto Ecuatoriano de Normalización, IN EN - Baquerizo Moreno E8-29 y Av. 6 de Diciembre C asilla Telfs: (593 2) al Fax: (593 2) Dirección G eneral: inen.gov.e c Área Té cnic a de Normalización: inen.gov.e c Área Té cnic a de C ertific a ción: c ertific a inen.gov.e c Área Té cnic a de Verific a ción: verific a inen.gov.e c Área Té cnic a de Servicios Te cnológicos: inenc inen.gov.e c Regional Guayas: inen.gov.e c Regional Azuay: inencuenc inen.gov.e c Regional Chimborazo: inen.gov.e c URL: c