Validación n intralaboratorio de métodos m microbiológicos ISO 16140:1999. Dr. Francisco Duarte M. CNRB-INCIENSA
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- Josefina Miranda González
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1 Validación n intralaboratorio de métodos m microbiológicos ISO 16140:1999 Dr. Francisco Duarte M. CNRB-INCIENSA
2 Recomendaciones Grupo Técnico T de Microbiología a de la Red Interamericana de Laboratorios de Análisis de Alimentos (RILAA) Los métodos analíticos deben ser confiables, reproducibles y factibles, por lo que se ha recomendado la adopción de métodos normalizados o métodos descritos por organizaciones con credibilidad internacional, como: International Organization for Standardization (ISO) Association of Official Analytical Chemists International (AOAC) U.S Food and Drug Administration (FDA-BAM) Food Safety and Inspection Service-USDA (FSIS) American Public Health Association (APHA) International Commission on Microbiological Specifications for Food (ICMSF) Tomado de: Documento Posicionamiento del Grupo Técnico de Microbiología de la RILAA frente a la adopción de métodos normalizados y con la necesidad de buscar la acreditación de los laboratorios de análisis de alimentos Agosto 2006
3 Recomendaciones Grupo Técnico T de Microbiología a de la Red Interamericana de Laboratorios de Análisis de Alimentos (RILAA) Los métodos de laboratorio deben ser utilizados tal como son descritos, sin realizar ningún cambio. El laboratorio sólo debe realizar una verificación del desempeño del método en sus instalaciones. Si alguno de los laboratorios desea utilizar un método nuevo o modificado, se recomienda que éste sea adoptado después de hacer una validación completa para demostrar que el método nuevo presenta equivalencia al método normalizado. Tomado de: Documento Posicionamiento del Grupo Técnico de Microbiología de la RILAA frente a la adopción de métodos normalizados y con la necesidad de buscar la acreditación de los laboratorios de análisis de alimentos Agosto 2006
4 Norma: ISO 16140:2003 Microbiology of food and animal feeding struffs (Protocol for validation of alternative methods) 1era etapa: Estudio comparativo en que las caracter Estudio comparativo en que las características de desempeño o del método alternativo son confrontadas con las del método m normalizado 2da etapa: Ensayo colaborativo en que participan 8 a 10 laboratorios acredi Ensayo colaborativo en que participan 8 a 10 laboratorios acreditados y coordinados por el laboratorio coordinador Límite de detección n y / o cuantificación Precisión n relativa Sensibilidad Especificidad Inclusividad Exclusividad Repetibilidad Reproducibilidad
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6 Estudio de comparación: Consiste en comparar los resultados obtenidos por el método alternativo y por el método de referencia
7 Tabla 1- Resultados pareados del método de referencia y el método alternativo Resultado Positivo por el Método de Referencia Negativo por el Método de Referencia Positivo por el Método Alternativo / (PA) /- (PD) Negativo por el Método Alternativo -/ (ND) -/- (NA)
8 Indicadores de aptitud Exactitud relativa AC=(PANA)/N x 100 Especificidad relativa SP=NA/N- x 100 Sensibilidad relativa SE=PA/N x 100 Siendo: N el # total de muestras (NAPAPDND) N- el # total de resultados (-) obtenidos con el método de referencia (NAPD) N el # total de resultados () obtenidos con el método de referencia (PAND)
9 Determinación n de Antígenos Somáticos O Control de antígeno: Una gota SS 2% Cultivo Agitación Una gota antisuero (poly o monovalente) Cultivo Agitación
10 Determinación n de Antígenos Flagelares utilizando Spicer Edwards y Complex BHI Guardar 0.5 ml cultivo C.F. 37 C 18-24h 4.5 ml de SF 1% 1) 500 ul antisuero 2) 500 ul Ag formalinizado. 1 h T.A. 1) 100 ul antisuero 2) 100 ul Ag formalinizado. Determinación Spicer Edwards y Complex: Dilución n 1/250 (según n fabricante) 50 C 1 hora 50 C 1 hora
11 Determinación n de Antígenos Flagelares utilizando Spicer Edwards y Complex 1) 500 ul antisuero 2) 500 ul Ag formalinizado. Miniaturización 1) 100 ul antisuero 2) 100 ul Ag formalinizado 50 C 1 hora 50 C 1 hora Lectura Probable especificidad antigénica
12 1) 100 ul antisuero 2) 500 ul Ag formalinizado. Confirmación 1) 20 ul antisuero 2) 100 ul Ag formalinizado. C (-) Resultado Definitivo Kauffmann - White 50 C 1 hora 50 C 1 hora
13 Confirmado el Ag. flagelar Inversion de fase 50 ul antisuero Inducción Medio Gard Caldo Flagelar 35 C h 35 C Más de 4 h Montar Spicer Edwards y/o Complex o determinación específica de un Antígeno
14 Determinación n de Antígenos Flagelares utilizando Spicer Edwards y Complex C.F. 37oC 18-24h 4.5 ml de SF 1% 1) 500 ul antisuero 2) 500 ul Ag formalinizado. 1 h T.A. 1) 100 ul antisuero 2) 100 ul Ag formalinizado. Determinación Spicer Edwards y Complex: Dilución n 1/250 (según n fabricante) 50 C 1 hora 50 C 1 hora Resultado preliminar Confirmacion Resultado definitivo K.W. Serovariedad
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