19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 Número de publicación: 2 240 647 51 Int. Cl. 7 : A61K 39/10 // A61K 39/05 A61K 39/08 12 TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA T3 86 Número de solicitud europea: 02075821.5 86 Fecha de presentación : 04.11.1997 87 Número de publicación de la solicitud: 1240905 87 Fecha de publicación de la solicitud: 18.09.2002 54 Título: Vacuna de pertussis acelular con toxoides de difteria y tétanos. 30 Prioridad: 07.11.1996 GB 9623233 73 Titular/es: GlaxoSmithKline Biologicals S.A. rue de l Institut, 89 1330 Rixensart, BE 45 Fecha de publicación de la mención BOPI: 16.10.2005 72 Inventor/es: Florent, Patrick; Stephenne, Jean y VanDeCasserie, Christian 45 Fecha de la publicación del folleto de la patente: 16.10.2005 74 Agente: Carpintero López, Francisco ES 2 240 647 T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 28036 Madrid
DESCRIPCIÓN Vacuna de pertussis acelular con toxoides de difteria y tétanos. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 La presente invención se refiere a nuevas formulaciones de vacuna que comprenden una dosis baja de la proteína de membrana exterior de 69 kda de la Bordetella pertussis (de ahora en adelante denominada 69K o antígeno 69K o pertactina, descrita en la patente europea 0 162 639). N F Fairweather y col. han descrito la 69K (P69) recombinante, Symposium On Pertussis (Bethesda), 26 a 28 de Septiembre de 1990). La invención se refiere de forma particular a una vacuna que comprende más de un antígeno, en especial una vacuna multivalente, que es: una vacuna para la mejora o tratamiento de más de un estado de enfermedad, en la cual está presente una dosis baja de la 69K. La presente invención también se refiere a la producción y uso de la mencionada vacuna en medicina. Se sabe que la 69K es un componente importante de las vacunas de pertussis acelular (vacunas Pa) para la prevención eficaz de pertussis. Se publicó un estudio sobre la respuesta a la dosis de cinco vacunas de pertussis acelular en adultos sanos por los Institutos Nacionales de Salud de los Estados Unidos (NIH) en Mayo de 1996 por Keitel W. y col. Se han descrito vacunas que contienen la 69K que incluyen vacunas trivalentes que comprenden antígenos contra la difteria (D), el tétano (T) y la pertussis (Pa) en ensayos clínicos llevados a cabo en Italia y Suecia y están comercializadas [por ejemplo bajo el nombre comercial de INFANRIX -DTPa (SmithKline Beecham Biologicals)]. De forma típica el componente de pertussis de las mencionadas vacunas comprende la toxina de pertussis (PT), hemaglutinina filamentosa (FHA) y la 69K. En el INFANRIX -DTPa (nombre comercial) las cantidades de D:T:PT:FHA:69K son típicamente de 25 Lf:10 Lf:25 µg:25 µg:8 µg por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto. También se conocen otras vacunas multivalentes que comprenden la 69K, por ejemplo se describieron vacunas que comprenden un antígeno contra la hepatitis B y antígenos contra la difteria, tétanos y pertussis (Hep B, DTPa) en el documento WO 93/24148. En las mencionadas formulaciones la cantidad de D:T:PT:FHA:69K fue de 25 Lf:10 Lf:25 µg:25 µg:8 µg por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto. Se describe una comparación de 13 vacunas de difteria-tétanos-pertussis acelular en Pediatrics, 96 (3), parte 2 de 2, suplemento, 548 a 557. Se ha encontrado ahora que la vacuna de difteria, tétanos y pertussis que contiene una dosis baja de cada uno del toxoide de difteria (D), toxoide de tétanos (T), PT, FHA y 69K (en el presente documento tal formulación en dosis baja se abrevia a vacuna dtpa) conserva una capacidad para prevenir la pertussis (y es muy eficaz a este respecto) a la vez que presenta la ventaja de mostrar una reactogenicidad excepcionalmente baja. Dentro de los límites descritos en el presente documento las mencionadas vacunas son seguras cuando se administran a sujetos humanos e inducen una protección rápida contra la infección. Se ha encontrado que no hay interferencia alguna en las vacunas de combinación que comprenden dtpa y otros antígenos, es decir, las mencionadas vacunas no muestran pérdida de inmunogenicidad y son eficaces cuando se administran a humanos. De forma particular las vacunas de la presente invención son adecuadas para la administración a niños como un recuerdo tras la administración previa de una o más (típicamente hasta aproximadamente 3) dosis de una vacuna que comprende una dosis más elevada de antígenos de D, T y Pa tal como la vacuna INFANRIX -DTPa descrita anteriormente (D:T:PT:FHA:69K fue de 25 Lf:10 Lf:25 µg:25 µg:8 µg por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto). Las vacunas de la presente invención son también de gran valor para la administración a adultos y adolescentes. De acuerdo con lo anterior, la presente invención proporciona una composición de vacuna que comprende una dosis baja de cada uno de los antígenos D, T, PT, FHA y 69K (es decir, una composición de vacuna dpta). Se entenderá que la composición de vacuna de la presente invención se formula con un vehículo o excipiente adecuado. Por vacuna dpta o composición de vacuna dpta se entiende una dosis en la que la concentración de D por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto no exceda de 5 Lf, y es preferiblemente de 1 a 4 Lf, más preferiblemente de aproximadamente 2 Lf; la concentración de T por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto no excede de 10 Lf y es preferiblemente de 2,5 a 7,5 Lf, más preferiblemente de 5 Lf; la concentración de PT por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto no excede de 10 µg y es preferiblemente de 2 a 10 µg, más preferiblemente de aproximadamente 8 µg; la concentración de FHA por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto no excede de 10 µg y es preferiblemente es de 2 a 10 µg, más preferiblemente de aproximadamente 8 µg; y la concentración de 69K no excede de 4 microgramos por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto y está en el intervalo de 0,5 µg a 3 µg por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto. Más preferiblemente la concentración de 69K en la vacuna está en el intervalo de 2 µg a 3 µg, más preferiblemente aproximadamente es de 2,5 µg de pertactina por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto. En un aspecto las composiciones de vacuna de la presente invención pueden, por ejemplo, comprender (aproximadamente) PT (2,5 µg), FHA (2,5 µg), 69K (0,8 µg) por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto. 2
En un aspecto preferido las composiciones de vacuna de la presente invención comprenden (aproximadamente) PT (8 µg), FHA (8 µg), 69K (2,5 µg) por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto. 5 10 15 20 25 En un aspecto especialmente preferido las composiciones de vacuna de la presente invención comprenden PT (8 µg), FHA (8 µg), 69K (2,5 µg), D (2 Lf) y T (5 Lf) por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto. Esto se empleó en el estudio dtpa 005 descrito más adelante. En otro aspecto preferido la composición de vacuna de la presente invención tiene la cantidad del componente D aumentada hasta 2,5 Lf. Se empleó una vacuna según la presente invención en el estudio en adolescentes conocido como el dpta 003, cuyos resultados se dan a continuación. De forma opcional el componente PT puede ser recombinante (por ejemplo tal como se describe en las solicitudes de patente europea EP 0 306 318, EP 0 322 533, EP 0 396 964, EP 0 322 115 y EP 0 275 689) o el componente PT puede ser toxoidado, por ejemplo tal como se describe en el documento EP 0 515 415. Véanse también los documentos EP 0 427 462 y WO 91/12020 para la preparación de antígenos de pertussis. En un aspecto más de la presente invención se proporciona una composición de vacuna que comprende dtpa (tal como se define anteriormente en el presente documento) en combinación con uno o más antígenos adicionales, de forma particular un antígeno contra la hepatitis B (Hep B) (es decir, una vacuna Hep B-dtpa). Las mencionadas vacunas multivalentes se describen por lo general en el documento WO 93/24148 con la excepción de que se emplea en la formulación una dosis baja de cada uno de D, T, PT, FHA y 96K tal como se definió anteriormente en el presente documento. Tal como se describe en el documento WO 93/24148 el antígeno de hepatitis B es preferiblemente el antígeno de superficie de la hepatitis B. La dosis de antígeno de superficie de la hepatitis B estará normalmente en el intervalo de 5 a 20 µg por 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto. 30 35 40 45 50 La preparación del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg) está bien documentada. Véase por ejemplo, Harford y col. en Develop. Biol. Standard 54, página 125 (1983), Gregg y col. en Biotechnology, 5, página 479 (1987), documentos EP-A-0 226 846 y EP-A-0 299 108. Tal como se usa en el presente documento la expresión antígeno de superficie de la hepatitis B o HBsAg incluye cualquier antígeno HBsAg o fragmento del mismo que desarrolle la antigenicidad del antígeno de superficie de HBV. Se entenderá que además de la secuencia del aminoácido 226 del antígeno HBsAg S (véase Tiollais y col, Nature, 317, 489 (1985) y referencias contenidas en ese documento) el HBsAg tal como se describe en el presente documento puede, si se desea, contener toda o parte de una secuencia pre-s tal como se describe en las anteriores referencias y en el documento EP-A-0 278 940. El HBsAg, tal como se describe en el presente documento, puede hacer referencia también a variantes, por ejemplo al mutante de escape descrito en el documento WO 91/14703. En un aspecto adicional el HBsAg puede comprender una proteína descrita como L* en la solicitud de patente europea número 0 414 374, esto se refiere a una proteína, cuya secuencia de aminoácidos consiste en partes de la secuencia de aminoácidos de la proteína (L) grande del virus de la hepatitis B (subtipo ad o ay), caracterizada porque la secuencia de aminoácidos de la proteína está constituida bien por: a) residuos 12 a 52, seguidos de los residuos 133 a 145, seguidos de los residuos 175 a 400 de la mencionada proteína L; o b) residuo 12, seguido de los residuos 14 a 52, seguido de los residuos 133 a 145, seguido de los residuos 175 a 400 de la mencionada proteína L. El HBsAg también se puede referir a los polipéptidos descritos en los documentos EP 0 198 474 o EP 0 304 578. 55 60 65 Normalmente el HBsAg estará en forma de partícula. Puede comprender proteína S sola o puede estar como partículas compuestas, por ejemplo (L*, S) en la que L* es como se definió anteriormente y S denota la proteína S del antígeno de superficie de la hepatitis B. Preferiblemente el HBsAg se absorberá sobre el fosfato de aluminio tal como se describe en el documento WO 93/24148. Se pueden absorber otros antígenos sobre el fosfato de aluminio o el hidróxido de aluminio pero en algunos casos se obtendrán resultados satisfactorios solo si el otro antígeno es absorbido sobre el fosfato de aluminio. Se pueden incluir otros antígenos en las vacunas de la presente invención para proporcionar vacunas multivalentes para uso pediátrico, en adolescentes o en adultos. Los otros antígenos adecuados mencionados pueden comprender, por ejemplo, aquellos conocidos en la técnica para proporcionar protección contra la Haemophilus influenzae b (Hib) y/o la polio (IPV) y/o la heptatitis A, tal como se describe en el documento WO 93/24148. Los componentes adecuados para su uso en las mencionadas vacunas ya están comercialmente disponibles y se pueden obtener detalles en la Organización Mundial de la Salud. Por ejemplo el componente IPV puede ser la vacuna 3
5 10 15 20 25 de la polio inactivada Salk. El componente que da la protección contra la hepatitis A es preferiblemente el producto conocido como Havrix (SmithKline Beecham Biologicals) que es una vacuna atenuada asesinada que se deriva de la cepa HM-175 del HAV [véase Inactivated Candidate Vaccines for Hepatitis A de F. E. Andre, A. Hepburn y E. D. Hondt, Prog Med Virol. vol 37, páginas 72 a 95 (1990) y el producto monográfico Havrix publicado por SmithKline Beecham Biologicals (1991)]. De forma conveniente el componente de la hepatitis B puede comprende el antígeno S como ya está presente en la vacuna comercial Engerix-B (SmithKline Beecham Biologicals). La cantidad de antígeno en cada dosis de vacuna se selecciona como una cantidad que induce una respuesta inmunoprotectora sin efectos secundarios adversos significativos en vacunas típicas. La mencionada cantidad variará dependiendo de que se empleen los inmunogenes específicos. Por lo general se espera que cada dosis comprenda de 15 a 50 µg de inmunogen total. Se pueden dar inyecciones de recuerdo. Las inyecciones de recuerdo de vacunas de acuerdo con la presente invención en sujetos inmunizados con una vacuna que comprende pertussis de células completas (Pw) son tan eficaces como en sujetos inmunizados con una vacuna que comprende pertussis acelular (Pa). En general se pueden preparar formulaciones de vacuna de cualquier aspecto de la presente invención como sigue. Los componentes requeridos se absorben sobre un coadyuvante adecuado, muy especialmente hidróxido de aluminio o fosfato de aluminio. Una vez alcanzado el tiempo para la adsorción completa y estable de los respectivos componentes, se pueden combinar los diferentes componentes en condiciones adecuadas. En un aspecto preferido de preparación de una composición de vacuna que contenga hepatitis B combinada de acuerdo con la invención se proporciona un procedimiento que incluye mezclar el HBsAg adsorbido sobre el fosfato de aluminio con uno o más antígenos absorbidos sobre el hidróxidos de aluminio o fosfato de aluminio. Los siguientes ejemplos ilustran la invención: Ejemplo 1 Preparación de una formulación de vacuna dtpa y estudio en adultos 30 35 40 Se prepara la vacuna de dtpa de acuerdo con la invención mediante la metodología estándar de acuerdo con el procedimiento para la formulación de una vacuna de DTPa de dosis elevada descrita en el documento WO 93/24148. Los resultados obtenidos con la vacuna en un estudio clínico en adultos codificado como dpta 005 se muestran en las figuras adjuntas, en las cuales se emplea dtpa para expresar una vacuna de acuerdo con la invención y PRN es una abreviatura para la pertactina (69K). La abreviatura dt se emplea para expresar la vacuna de difteria-tétanos convencional que se puede obtener a partir de Behringwerke que comprende una dosis baja de toxoide de difteria y una dosis superior de toxoide del tétanos. Se lleva a cabo un estudio abierto en dosis única aleatorio en adultos de 18 a 45 años de edad en Bélgica empleando la dtpa formulada tal como se describe anteriormente en 60 sujetos comparando con dt (Behring) en 60 sujetos. Para el grupo dpta se estudiaron 28 mujeres (edad media de 33 años) y 32 varones (edad media de 33 años). Para el grupo dt se estudian 32 mujeres (edad media de 34 años) y 28 varones (edad media de 35 años). 45 50 55 60 65 Se excluyeron aquellos que habían recibido vacunación de difteria, tétanos o pertussis en los últimos 10 años o sufrido la enfermedad pertussis en los últimos 5 años. Se obtiene suero antes y un mes después de la vacunación con un seguimiento solicitado después de 15 días y un seguimiento no solicitado después de 30 días. En las figuras adjuntas se muestran datos de reactogenicidad, respuestas a anticuerpos, resultados anti-pt, resultados anti-fha y resultados anti-prn (pertactina). En las figuras adjuntas, se muestran también los resultados para la vacuna pa monovalente empleada en los estudios NIH (AAPT) descritos por Keitel y col. Las referencias a formulaciones altas, medias (SM-Med) y bajas de SmithKline Beecham s (SB s) comprenden respectivamente, PT: (25 µg), FHA (25 µg) y 69K (8 µg) (alta); PT (8 µg), FHA (8 µg) y 69K (2,5 µg) (medio); y PT: (2,5 µg), FHA (2,5 µg) y 69K (0,8 µg) (bajo). La abreviatura µg se refiere a microgramos. Se puede ver que una vacuna dtpa de acuerdo con la invención es segura e inmunogénica en adultos. Además las respuestas inmunes a vacunas candidatas de la invención en adultos mostraron ser al menos varias veces superiores a la observada para vacunas de DTPa en dosis mayores conocidas administradas previamente a niños de EEUU, Alemania e Italia. 4
Ejemplo 2 Estudio en adolescentes ( dpta 003 ) 5 10 15 20 Se lleva a cabo un estudio abierto aleatorio en dosis única en adolescentes de 10 a 12 años de edad en Finlandia empleando dtpa formulada tal como se describió anteriormente en 120 sujetos comparando con dt (Finlandia) en 120 sujetos. Se emplea el mismo lote de vacunas dtpa de la invención en ambos estudios el dtpa 005 y el dtpa 003. La dt (Finlandia) comercialmente disponible contenía: toxoide de difteria > = 4 IU toxoide de tétanos > = 40 IU. Para el grupo dtpa se estudian 70 mujeres (edad media de 10,9 años) y 49 varones (de edad media de 10,8 años). Para el grupo dt se estudiaron 62 mujeres (edad media de 10,9 años) y 56 varones (edad media de 11,0 años). Los sujetos incluidos en el ensayo recibieron hasta 4 dosis de DTPw en los dos primeros años de vida. Los sujetos excluidos del estudio fueron aquellos que habían recibido vacunación D, T o P tras el segundo año de vida o un historial de enfermedad de difteria, tétanos o pertussis. Se obtuvo suero antes y un mes después de la vacunación con un seguimiento solicitado después de 15 días y un seguimiento no solicitado después de 30 días. Los datos de reactogenicidad, respuestas a anticuerpos, resultados anti-pt, resultados anti-fha y anti-prn (pertactina) se muestran en las figuras adjuntas. 25 30 35 40 45 Se puede ver a partir de los resultados que una vacuna de dpta es segura e inmunogénica de acuerdo con la presente invención en adolescentes. Nota: en las figuras, los resultados que se refieren a respuestas a anticuerpos para el estudio en adultos (dtpa 005) y para el estudio en adolescentes (dtpa 003) mostraron la distribución de los títulos de anticuerpos anti-difteria y antitétanos antes y después de la vacunación individual de sujetos incluidos en el análisis global de inmunogenicidad (> = 0,1 IU/ml estando el corte determinado para la protección). También se da la media geométrica de los títulos antidifteria y anti-tétanos en IU/ml. Las figuras para los estudios dtpa 005 y dtpa 003 que ilustran los títulos anti-pt, anti-fha y anti-prn muestran la velocidad de respuesta a la vacuna (en % del número total de sujetos -n-) y la media geométrica de títulos de anticuerpos (GMT, en EU/ml) para los componentes de vacuna PT, FHA y PRN de sujetos incluidos en el análisis de inmunogenicidad. Ejemplo 3 Preparación de una vacuna Hep B-dtpa Se preparó la formulación exactamente igual que en el ejemplo 5 del documento WO 93/24148 con la excepción de que se emplearon dosis bajas de D, T, PT, FHA y 69K tal como se definió previamente en el presente documento para preparar dosis de 0,5 ml de vacuna en bruto. En una composición preferida las cantidades de dtpa fueron aproximadamente las siguientes: PT: (8 µg), FHA (8 µg) y 69K (2,5 µg), D (2 Lf) y T (5 Lf) por dosis de 0,5 ml de dosis de vacuna en bruto. 50 En otra composición la cantidad de D se aumentó a 2,5 Lf. La cantidad de antígeno de superficie de hepatitis B en la composición de vacuna puede variar de 5 a 20 µg y es típicamente de 10 µg por dosis de 0,5 ml de la vacuna en bruto. 55 60 65 5
REIVINDICACIONES 5 10 15 20 25 30 35 1. Una composición de vacuna que comprende antígenos de difteria (D), tétanos (T) y pertussis acelular (Pa) y un coadyuvante, en la que la concentración de D por dosis de 0,5 ml de la vacuna en bruto no excede de 5 Lf; la concentración de T por dosis de 0,5 ml de vacuna en bruto no excede de 10 Lf y el componente Pa comprende PT (toxoide de pertussis), FHA (hemaglutinina filamentosa) y pertactina (69K) en el que la concentración de PT por dosis de 0,5 ml de vacuna en bruto no excede de 10 µg; la concentración de FHA por dosis de 0,5 ml de vacuna en bruto no excede de 10 µg; y la concentración de 69K no excede de 4 µg por dosis de 0,5 ml de vacuna en bruto. 2. Una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2 en la que la cantidad de D es de 2,5 Lf. 3. Una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 1 que presenta la composición: PT: (8 µg), FHA (8 µg), 69K (2,5 µg), D (2,5 Lf) y T (5 Lf) por dosis de 0,5 ml de vacuna en bruto. 4. Una composición de vacuna de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que comprende de forma adicional uno o más antígenos adicionales. 5. Una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 4 en la que un antígeno adicional es el antígeno de superficie de la hepatitis B, opcionalmente adsorbido sobre fosfato de aluminio. 6. Una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 5 en la que el antígeno de superficie de la hepatitis B es el antígeno S de HBsAg. 7. Una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 4 o la reivindicación 5 en la que está presente un antígeno adicional que proporciona inmunicidad contra una o más infecciones por Hib, polio o hepatitis A. 8. Una composición de vacuna de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones previas en la que el coadyuvante empleado en la formulación comprende hidróxido de aluminio. 9. Una composición de vacuna de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones previas en la que el coadyuvante empleado en la formulación comprende fosfato de aluminio. 10. Uso de la composición de vacuna de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en la fabricación de un medicamento para su uso como un potenciador que sigue a la administración previa de una vacuna que comprende una dosis alta de antígenos D, T, y Pa. 40 45 50 55 60 65 6
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