VAYA MÁS ALLÁ DE LA IDENTIFICACIÓN Y DE LA. PROCESO Y EL AMBIENTE CON EL SISTEMA DuPont AYUDA A LOS PELIGROSAS

Transcripción

1 SISTEMA DuPont PODEROSO MONITOREO MICROBIANO NÓMBRELO. RASTRÉELO. CONTRÓLELO.

2 VAYA MÁS ALLÁ DE LA IDENTIFICACIÓN Y DE LA DOCUMENTACIÓN DE UN PROBLEMA - CONTROLE EL PROCESO Y EL AMBIENTE CON EL SISTEMA DuPont. Solo el Sistema RiboPrinter de DuPont Nutrición & Salud combina la automatización con el poder del ADN para identificar con precisión los contaminantes y para realizar un seguimiento de su fuente a nivel de cepa, lo que lo ayuda a controlar cualquier ambiente microbiano. Aunque las bacterias se encuentren en toda la naturaleza, su presencia en ciertos ambientes críticos, tales como plantas de fabricación de productos estériles o de procesamiento de alimentos, constituye una amenaza constante. Y cuando bacterias dañinas ingresan a la población, los epidemiólogos deben trabajar rápidamente para prevenir la propagación de enfermedades. Para controlar bacterias no deseadas, es necesario saber de qué organismo se trata y cómo ingresó en su proceso o en la población. Ahora puede obtener las respuestas a estas preguntas importantes automática y simultáneamente con el Sistema DuPont RiboPrinter. EL Sistema DuPont AYUDA A LOS HOSPITALES A ENCONTRAR LA FUENTE DE BACTERIAS PELIGROSAS Cuando a varios bebés en la unidad de neonatología de un hospital se les diagnosticó septicemia, los epidemiólogos se enfocaron en encontrar la fuente en forma rápida y precisa. Los microbiólogos del hospital examinaron muestras tomadas de los bebés y de los elementos de la guardería -que incluyen las nuevas incubadoras incorporadas recientemente-, utilizando métodos bioquímicos tradicionales. Aunque se hallaron bacterias tales como Pseudomonas fluorescens en diversos lugares de la guardería, las pruebas bioquímicas indicaron que todos los bebés estaban infectados con Ralstonia picketii. El hospital solicitó la ayuda de un laboratorio experto externo que utilizaba el Sistema DuPont RiboPrinter. Estos genetistas rápidamente descubrieron que el organismo que enfermaba a los bebés no se correspondía con los parámetros de identificación de Pseudomonas fluorescens o de Ralstonia picketti. Su huella genética era idéntica a una de la reserva de humidificación de las nuevas incubadoras. No obstante, el suministro de agua que llegaba a la incubadora no contenía un organismo con esa huella. Una secuenciación de ADN identificó las bacterias como MC5, un organismo que está estrechamente relacionado con Ralstonia solanacearum y que anteriormente pertenecía a la familia Pseudomonas. Se sabe que la MC5, una cepa tan nueva que no tenía nombre, degrada el plástico. Esto hizo que los investigadores llegaran a la conclusión de que lo más probable era que las bacterias se estuvieran filtrando de la reserva plástica de la incubadora al agua que se utilizaba para humidificar la guardería. El Sistema DuPont RiboPrinter ayudó a determinar con precisión la fuente de infecciones, lo que le permitió al hospital tomar medidas rápidas para reemplazar las incubadoras y para prevenir más casos de septicemia entre estos frágiles pacientes. UNA SOLUCIÓN AUTOMÁTICA PARA IDENTIFICAR Y PARA CARACTERIZAR BACTERIAS EN CUALQUIER ENTORNO Cargue hasta 8 muestras a la vez en la unidad automatizada. IDENTIFICACIÓN DE GÉNERO Y DE ESPECIE La identificación taxonómica se proporciona automáticamente al comparar el aislado desconocido con una base de datos integrada de alrededor de patrones que abarcan más de 180 géneros y de especies. Las huellas genéticas (patrones de RiboPrint ) se generan para cada muestra en 8 horas. Fuente Número Producto final DUP Manos DUP Línea de descarga DUP ATCC 6051 DUP-9501 Materia prima 473 DUP Materia prima 811 DUP Superficie de bancos 92 DUP Etiqueta Patrón de RiboPrint DIFERENCIACIÓN DE CEPAS (CARACTERIZACIÓN) La discriminación de subespecies junto con los datos fuente asociados ayudan a determinar si usted ha visto previamente una cepa especial en su ambiente y, si así fuera, dónde y cuándo. 2 3

3 EL Sistema DuPont AYUDA A LAS EMPRESAS FARMACÉUTICAS A DESCARTAR A UN TRABAJADOR COMO FUENTE DE CONTAMINACIÓN Un fabricante de productos de alta calidad para el cuidado de la vista comparó los métodos bioquímicos tradicionales con el Sistema DuPont RiboPrinter, a fin de demostrar la diferencia en la información microbiana confiable. En primer lugar, la empresa examinó dos aislados de Staphylococcus, uno a partir de la falla de una prueba de esterilidad y otro, de las prendas de vestir de un trabajador de la línea. La realización de pruebas convencionales, tanto con un perfil de ácidos grasos como con un resultado colorimétrico, indicó que los aislados eran S. haemolyticus. A su vez, el Sistema DuPont RiboPrinter pudo discriminar y establecer, en forma automática, que efectivamente eran diferentes cepas de S. haemolyticus. Estos resultados demostraron que la falla de esterilidad no se debía a contaminación por parte del trabajador de la línea. La empresa necesitaba buscar al culpable en otro lado. El uso del Sistema DuPont RiboPrinter demostró ser más útil que confiar en información de otras pruebas que no podían proporcionar tanta información, en especial, más allá del nivel de las especies. El sistema le permite a este fabricante tener mayor confianza en el carácter definitivo de la información microbiana. EL Sistema DuPont COMPARA REGIONES ALTAMENTE CONSERVADAS DEL GENOMA PARA DISTINGUIR MÁS DE 180 GÉNEROS Y DE ESPECIES. Los patrones de RiboPrint caracterizan aislados ambientales, agentes patógenos, organismos Highly conserved que provocan region deterioro, cepas de of genera variation control, organismos beneficiosos o cualquier bacteria importante para los profesionales de control de calidad en las industrias farmacéuticas y de los alimentos, o para epidemiólogos y otros Highly conserved region of genera variation profesionales de la salud pública. Región altamente Highly conserved conservada region de variación of genera de géneros variation Region Region of species variation of species variation Region Región of de species variación variation de especies Region Región of de strain variación Region variation de of cepas strain variation MÁS QUE SECUENCIACIÓN 16S El Sistema DuPont automatiza el análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) y se enfoca en la región codificadora de ARNr del genoma bacteriano. Las enzimas de restricción, tales como EcoRI o Pvull, cortan el ADN bacterial en fragmentos que se procesan para formar un patrón de bandas característico o huella. El sistema captura una imagen del patrón de bandas y lo digitaliza como patrón de RiboPrint. Este patrón puede luego compararse con una base de datos de referencia de patrones a partir de muestras históricas que se ejecutó previamente en un sitio particular o sobre un instrumento específico. La tecnología del Sistema DuPont investiga una porción mucho más grande del genoma bacteriano que lo que pueden hacerlo otros sistemas de identificación bacteriana. En lugar de tan solo analizar la región que codifica la secuencia 16S de ARNr, el Sistema DuPont investiga las regiones que codifican las secuencias 5S, 16S y 23S, así como las regiones espaciadoras y los genes flanqueantes en ambos lados. Esta gran exhaustividad de la información es lo que permite una diferenciación altamente precisa entre las cepas de las mismas especies, aun aquellas con la misma secuencia 16S. SONDA Tamaño de fragmento creciente 16S B D C A E Fragmentos de cada muestra de un patrón de bandas de acuerdo con el tamaño. 23S Gen X ARNr 16S ARNr 23S 5S Gen Z Sitios EcoRI A B C D E Sitios EcoRI 5S Los patrones de banda de cada muestra, junto con las líneas de los marcadores, se capturan en una imagen de gel digitalizada. EL Sistema DuPont AYUDA AL CERVECERO A MONITOREAR LAS ESPECIES QUE PROVOCAN EL DETERIORO DE NUEVAS CERVEZAS Investigadores de una gran empresa de elaboración de cerveza realizaron un estudio de supervivencia de organismos ambientales utilizando diversas metodologías moleculares, incluido el Sistema DuPont RiboPrinter. Para el estudio, agregaron a la cerveza 170 cepas de Lactobacillus. De estas 170 cepas, 55 pudieron sobrevivir, incluidas 45 cepas de L. brevis, 3 cepas de L. lindneri, 1 cepa de L. casei y 6 cepas desconocidas que no fueron identificadas por ensayos de PCR o de tintura fluorescente. Los patrones de RiboPrint de las seis cepas desconocidas no estaban dentro de los RiboGroups para otro Lactobacillus. En su lugar, formaron dos nuevos RiboGroups de tres cepas cada uno, a los que el cervecero llamó LA-2 y LA-6. El análisis con la secuenciación 16S indicó que LA-2 tenía una semejanza >99 % a L. collinoides. Aunque los resultados de los análisis de 16S sugirieron un alto nivel de correlación, los patrones de RiboPrint para LA-2 fueron particularmente diferentes de aquellos para L. collinoides. En el caso de LA-6, la secuenciación 16S no pudo corresponderse con los aislados de ningún organismo y, por ende, no proporcionó información adicional alguna. Estimulados por la discriminación mucho más sutil de los patrones de RiboPrint, los investigadores sintieron que ahora podían monitorear estos dos organismos que provocan el deterioro ambiental, por medio del uso habitual del Sistema DuPont RiboPrinter. El informe final muestra el patrón de RiboPrint junto con los Más allá de la identificación taxonómica confiable, el Sistema datos asociados para cada muestra. DuPont distingue cepas individuales, proporcionando 4 la granularidad de la información necesaria para rastrear, para seguir la tendencia y para controlar su ambiente. 5

4 CONTROLAR SU AMBIENTE MICROBIANO ES MÁS RÁPIDO Y FÁCIL CON EL SISTEMA DuPont. Con un panorama dinámico e integral de cualquier ambiente microbiano, puede rastrear y administrar datos al nivel de las cepas y determinar exactamente la contaminación con mayor rapidez, facilidad y precisión que antes. EL MAPEO DE SU AMBIENTE CON EL Sistema DuPont LE PERMITE: Establecer parámetros iniciales de flora autóctona. Monitorear aumentos y tendencias. Rastrear contaminantes hasta su fuente. Enfocarse en las áreas precisas para realizar intervenciones efectivas. Evaluar la eficacia de la higiene y de la capacitación. MAPEE SU INSTALACIÓN E INGRESE MUESTRAS EN EL Sistema DuPont Siga el rastro de muestras y clasifique fácilmente los patrones de RiboPrint con software simplificado. CONOZCA LA IDENTIDAD DE LA MUESTRA Los géneros y las especies se proporcionan automáticamente al comparar el patrón de RiboPrint con la base de datos de identificación integrada de aproximadamente patrones que abarcan más de especies. CREE UNA BASE DE DATOS DE IDENTIFICACIÓN PERSONALIZADA En forma opcional, asigne géneros y especies de su muestra a partir de una base de datos separada de sus propias identificaciones personalizadas. EL SISTEMA DuPont AYUDA A UN FABRICANTE DE FÓRMULAS PARA BEBÉS A MANTENER LA SEGURIDAD DE LOS PRODUCTOS Un fabricante de fórmula para bebés descubrió que su producto terminado estaba constantemente contaminado con bajos niveles de Enterobacter sakazakii 1. La empresa se dio cuenta de que las bacterias podían crecer rápidamente en la leche reconstituida y quisieron entender cómo se contaminaba el producto. El personal de control de calidad pudo aislar E. sakazakii, que se hallaba con frecuencia en productos provenientes de dos fábricas y con poca frecuencia en productos de una tercera. Aunque los procesos de producción eran esencialmente los mismos en cada una de las tres fábricas, las operaciones y la disposición variaban en forma considerable. Muestra ambiental Muestra del producto final Muestra de pre-producción Muestra de aire RASTREE Y SIGA LA TENDENCIA Los patrones de RiboPrint se agrupan automáticamente con patrones similares, para formar Ribogrupos con muestras ejecutadas previamente. Los datos a nivel de cepa permiten rastrear la fuente de organismos y monitorear las tendencias. COMPARTA Y CONSTRUYA Software de cliente remoto Realice muchas tareas del software del Sistema DuPont desde otra computadora en una red de área local o amplia. Analice datos desde una computadora de oficina, en lugar de utilizar la computadora del sistema. Ejecute la interfaz de usuario en forma paralela con otras aplicaciones, para que importe datos más convenientemente desde el Sistema DuPont a informes, a hojas de cálculo o a presentaciones. Estación de trabajo de convergencia de datos Integre datos automáticamente desde múltiples sistemas DuPont en una base de datos central para un mejor análisis de los datos. Conecte en red múltiples sistemas DuPont y compare muestras individuales con aquellas recogidas en otros sitios o en otros países. Un estudio microbiano de materias primas y de muestras ambientales en cada establecimiento produjo varios cientos de muestras de E. sakazakii. La selección preliminar con métodos bioquímicos no fue útil para rastrear la contaminación, pero el Sistema DuPont RiboPrinter pudo discriminar a nivel de cepa, permitiéndoles a los investigadores discernir cuáles cepas estaban confinadas a un solo establecimiento y cuáles eran comunes a las tres fábricas. Las tendencias importantes también se hicieron evidentes. Por ejemplo, se descubrió una fuente significativa de contaminación cuando los investigadores determinaron que la flora residente de un tipo específico de E. sakazakii había podido evadir los regímenes estándar de limpieza y de desinfección. La empresa cambió sus prácticas de limpieza para encargarse de este asunto e incorporó la información para este organismo en la base de datos. Al monitorear los cambios en la flora a nivel de cepa, el equipo puede reconocer un problema en el proceso o prácticas de higiene y rápidamente dirigir los equipos de limpieza y los ingenieros hacia el área problemática. El Sistema DuPont RiboPrinter fue el elemento clave de ayuda para que esta empresa se encargue, rápida y definitivamente, de la fuente y de la ruta de contaminación a lo largo de todas sus complejas operaciones de producción. 1 Nota: El organismo Enterobacter sakazakii se reclasificó en junio de 2008 en el nuevo género Cronobacter. El género Cronobacter es sinónimo de Enterobacter sakazakii. Controle los datos que convergen, junto con la frecuencia de cargas y los procesos que se realizan 6 sobre los datos. 7

5 EL SISTEMA DuPont ES AUTÓNOMO, CONFIABLE Y FÁCIL DE USAR ESTACIÓN DE TRABAJO Es el cerebro del Sistema DuPont. Controla la unidad de caracterización, analiza y almacena datos y genera informes impresos. La estación de trabajo incluye: teclado de computadora personal, mouse, monitor, lectora/ grabadora de CDs, impresora láser y UPS. El software exclusivo proporciona avisos fáciles de entender, monitoreo de procesos, diagnósticos y análisis completos de datos. UNIDAD DE CARACTERIZACIÓN Este instrumento automatizado realiza la digestión de restricción de ADN, la separación electroforética y la transferencia y la detección de membranas. Asimismo, registra automáticamente datos en la estación de trabajo anexa. Su diseño modular simplifica la resolución de problemas y el mantenimiento. La carga y la operación son fáciles e intuitivas y requieren poca capacitación. Membrana Captura fragmentos de ADN para su procesamiento final. AGUA PURIFICADA Para rehidratación por sistema cerrado de elementos descartables secos y enjuague de componentes. VEHÍCULO DE MUESTRAS Tiene lugar para ocho muestras. PAQUETES DE PREPARACIÓN DE ADN Enzima de restricción y tampón de lisis para romper las bacterias, y para liberar y para fragmentar el ADN; ADN marcador para ayudar a normalizar los patrones. CASETE DE GEL Mantiene el gel de electroforesis prefabricado. Separa los fragmentos de ADN en bandas discretas. RESPUESTAS RÁPIDAS Y AUTOMATIZADAS QUE REQUIEREN MANO DE OBRA MÍNIMA Después de 30 minutos de una simple preparación, el Sistema DuPont automatiza el resto del proceso, reduciendo la mano de obra requerida y minimizando errores gracias a la técnica. Y con resultados en solo 8 horas, el Sistema DuPont permite comprender la contaminación en una fracción del tiempo que normalmente tomaría. BASE E INSERCIONES DE MP Mantiene la sonda de ADN, conjuga y sustrae (que potencia la reacción química para crear bandas brillantes de los fragmentos de ADN). EQUIPO DE PREPARACIÓN DE MUESTRAS La preparación de las muestras se realiza con rapidez, en forma segura y simple, con este equipo especializado. Este mezclador portátil dispersa células en la solución del tampón. La estación de tratamiento térmico desactiva las muestras bacterianas y las convierte en inofensivas. Pozo Well Gel DNA Fragmentos fragments de ADN Desplazamiento de fragmentos DNA fragment de ADN travel Membrana Membrane Anode Ánodo Desplazamiento Membrane travel de la membrana PREPARACIÓN DE MUESTRAS PREPARACIÓN DEL ADN SEPARACIÓN Y PROCESAMIENTO DE DETECCIÓN PROCESAMIENTO DE INFORME IMPRESO Este es el único paso que tiene lugar fuera de El ADN se extrae a partir TRANSFERENCIA LA MEMBRANA Luego, la emisión de luz DATOS Un informe que caracteriza la unidad automatizada del Sistema DuPont del lisado celular bacteriano Los fragmentos de desde los fragmentos e identifica la bacteria y Después de la hibridación Mediante el uso de RiboPrinter hibridados es capturada que incluye su patrón de. Las colonias puras elegidas de una placa y se divide en fragmentos ADN se separan de con una sonda de algoritmos exclusivos, se desactivan por medio de un tratamiento térmico. mediante una enzima de por una cámara digital y RiboPrint se imprime acuerdo con el tamaño ADN etiquetada, se se extrae un patrón de restricción. se almacena como datos automáticamente para su molecular por medio de introduce un agente RiboPrint para cada de imágenes. revisión. Las sofisticadas la electroforesis de gel quimioluminiscente. muestra a partir de los herramientas de análisis y luego se transfieren a datos de las imágenes. Este de datos le permiten una membrana. patrón se compara con otros patrones de RiboPrint almacenados en el sistema procesar la información y compartir los datos estandarizados en su red 8 de usuarios. 9 para caracterizar y para identificar la muestra.

6 TODO LO QUE NECESITA PARA OBTENER RESPUESTAS RÁPIDAS Y AUTOMATIZADAS COMPONENTES DEL SISTEMA Unidad de caracterización Estación de trabajo de la computadora Impresora Estación de tratamiento térmico ELEMENTOS DESCARTABLES DEL SISTEMA Vehículos y tampón de muestras Elementos para elección de colonias Casetes de gel y membranas Enzimas de restricción (elija EcoRI, Pvull o su propia enzima personalizada) Agentes de lisado Sondas, incluida la IS6110 Conjugación, base y sustrato Paquete de preparación de ADN DNA prep pack PAQUETES DE VALIDACIÓN Para industrias reguladas Protocolos detallados ya establecidos ESTACIÓN DE TRABAJO DE CONVERGENCIA DE DATOS Computadora con software mejorado Centraliza datos de sistemas múltiples en una base de datos SISTEMA DE CLIENTE REMOTO Computadora con software de análisis solamente Para uso fuera del laboratorio 10

7 SOBRE DuPont Nutrición & Salud DuPont Nutrición & Salud es un negocio dedicado a brindar una amplia gama de ingredientes a base de componentes biológicos sostenibles y diagnósticos moleculares avanzados, anteriormente disponibles bajo el nombre Qualicon, para proporcionar alimentos más seguros, más saludables y más nutritivos. Las empresas farmacéuticas, de cosméticos y de cuidado personal también pueden utilizar diagnósticos innovadores, tales como el Sistema DuPont RiboPrinter, para ayudar a controlar su ambiente de fabricación. Más allá de identificar y de documentar problemas de contaminación, este método automatizado genera huellas a nivel de cepa que rápidamente ayudan rastrear la fuente y a realizar un seguimiento de la propagación de bacterias no deseadas. Para obtener más información sobre sistemas de monitoreo microbiano de DuPont, visite Copyright 2013 DuPont. Todos los derechos reservados. El Ovalo de DuPont, DuPont, The miracles of science, RiboPrint y son marcas o marcas registradas de E.I. du Pont de Nemours and Company o de sus entidades afiliadas. Usar para investigación y desarrollo, para pruebas de aseguramiento de calidad y de control de calidad bajo la supervisión de personas técnicamente cualificadas. No aprobado para uso clínico. Lea las limitaciones de la garantía y la responsabilidad antes de usar. Número de control de revisión 1A-077.1/A4 Pocket-1212.