FORTALECIMIENTO DEL PROCESO DE CERTIFICACION DE CÍTRICOS PARA COLOMBIA

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1 FORTALECIMIENTO DEL PROCESO DE CERTIFICACION DE CÍTRICOS PARA COLOMBIA Boletín divulgativo No. Código: Palmira, Agosto de 2006

2 Proyecto: Fortalecimiento del Centro de Investigación Palmira como un centro de referencia nacional para la producción de plántulas certificadas y el mejoramiento de la productividad de cítricos en Colombia. FORTALECIMIENTO DEL PROCESO DE CERTIFICACION DE CÍTRICOS PARA COLOMBIA Por: Álvaro Caicedo Arana 1 Jairo Ramírez Rojas 2 Claudia L. Bermúdez 3 Jorge Enrique Gomez H 4 Juan Pablo Rivera C 5 Oscar Julián Muñoz R 6 Carlos Octavio Gómez 7 1 I.A. Ms.C. Investigador, CORPOICA. C. I. Palmira. acaicedo@telesat.com.co 2 Economista, Investigador, CORPOICA. C. I. Palmira. jramirezr@telesat.com.co 3 I.A. Investigador, CORPOICA. C. I. Palmira. claudiabermudez@telesat.com.co 4 I.A. MSc. Investigador CORPOICA C.I. Palmira jorgegomezh@telesat.com.co 5 I. Agric. Investigador, CORPOICA, C. I. Palmira. juanpablorivera@telesat.com.co 6 Biólogo, Auxiliar de Investigación, CORPOICA, C. I. Palmira. oscarive9@hotmail.com 7 Tec. Agro. Auxiliar de Investigación, CORPOICA, C. I. Palmira. caogobo@hotmail.com

3 1. INTRODUCCIÓN Los cítricos son los frutales de mayor importancia en el mundo, tanto por el área sembrada como por su producción. En el año 2003, se produjeron 97.3 millones de toneladas de cítricos, lo cual representa el 22% de la producción mundial de frutas, seguido de la producción de uvas y bananos con una participación del 15% y 14% respectivamente. Igualmente más de 100 países producen cítricos en el mundo, siendo los principales productores Brasil, Estados Unidos y China con participaciones del 21.4%, 14.5% y 11.1% respectivamente. Colombia ocupa el puesto 30 en la producción mundial con una producción de toneladas sembradas en hectáreas. La tasa de crecimiento de la producción en los últimos diez años ha sido del 6.8% en volumen y del 7% en área, índices muy superiores al de la fruticultura colombiana que registró crecimientos del 3.6% en producción y de 5.4% en área sembrada, MADR (2006). En Colombia los cítricos participan con el 1.8% del área sembrada en cultivos permanentes, y con 1.1% del área total sembrada en el país. Uno de los grandes desafíos de la citricultura nacional es alcanzar los rendimientos obtenidos en países como España e Israel, que a través de programas de certificación de plántulas, han conseguido aumentar su producción entre un 15 y 20% (Caicedo A, 2004). Los desordenes fitosanitarios debidos a enfermedades sistémicas causadas por virus y viroides, se pueden solucionar a través de estrategias de producción de material de propagación libre de enfermedades sistémicas, basados en programas de diagnóstico, detección y eliminación de patógenos (Huertas, 2003). Es importante resaltar que la citricultura nacional está amenazada por enfermedades de origen viral: tristeza, exocortis, psorosis y blight, entre otras, que están limitando la productividad, la calidad de la fruta y la vida útil de los árboles. La amplia difusión de estas enfermedades, es el resultado de la producción de material de propagación infectado. En este sentido, Corpoica ha canalizado importantes recursos de entidades como Colciencias y Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural de Colombia para fortalecer, tanto la infraestructura de de casas de malla, laboratorios y equipos, como el adiestramiento de personal técnico en actividades de microinjertación, diagnóstico serológico y molecular y procesos de certificación de países como Brasil. En tal sentido, el presente boletín técnico recopila los aspectos de mayor relevancia de los resultados obtenidos en desarrollo del proyecto cofinanciado por Colciencias, sobre saneamiento del material elite del BG de cítricos del C.I. Palmira, adecuación de la infraestructura, equipamiento de laboratorios, estudios de la demanda de los viveristas y capacitación del personal de investigación.

4 2. OBJETIVO DEL PROYECTO Desarrollar procesos de saneamiento de variedades elite de cítricos en el C.I. Palmira para beneficio del sector citrícola del país Objetivos Específicos Producir plantas madre SANAS de cultivares elite del banco de germoplasma (BG) de cítricos del C.I. Palmira. Diagnosticar enfermedades sistémicas en plantas madre elite utilizando métodos de serología. Capacitar y transferir tecnología sobre procesos de limpieza fitosanitaria. 3. METODOLOGIA La metodología incorporada para sanear plántulas de cítricos está basada en la implementación de estrategias que permiten, oficialmente, producir plantas sanas como insumo básico del Programa de Certificación de Plántulas de Cítricos. Corpoica C.I. Palmira, viene incorporando estos procesos mediante la implementación de protocolos de limpieza fitosanitaria, a través de biotecnológicas, como la microinjertación in Vitro de ápices meristemáticos de cítricos y la posterior comprobación de ausencia de CTV mediante serología. A partir de este proceso se ha logrado obtener material limpio de esta enfermedad viral, constituyendo así plantas madre de variedades elite de alta demanda comercial. A partir de la multiplicación masiva de yemas sanas de estas plantas madre limpias, se busca fortalecer de manera integral el Centro de Investigación Palmira, como un centro de referencia nacional en procesos de saneamiento. Las variedades que serán entregadas a los viveristas, mediante yemas limpias producidas bajo condiciones controladas de casa de malla antipulgón, se continuarán multiplicando por parte de viveristas que cuenten con condiciones apropiadas de protección del material madre, libre de insectos vectores como el áfido pardo de los cítricos (Toxoptera citricida), y otros contaminantes. Este material base, se podrá seguir multiplicando de manera intensiva y escalonada para atender la demanda de lo productores citricolas. 4. RESULTADOS. En la actualidad se está haciendo seguimiento permanente a las plantas madre confinadas en casas de malla antipulgón del C.I. Palmira. De igual manera esta conservación de la sanidad de las variedades será suministrada por viveros productores acondicionados para tal fin. Ambos permitirán garantizar al sector citricola la calidad y saneamiento fitosanitario de yemas y/o varetas (material de propagación) con excelentes condiciones comerciales. La autenticidad varietal o calidad genética del material de propagación es suministrada por Corpoica, entidad responsable de la conservación y mantenimiento de los bancos de

5 germoplasma, y recursos genéticos de cítricos de interés para el sector citrícola. En primera instancia, se han seleccionado 50 materiales o introducciones (Tabla 1), provenientes del BG de cítricos del C.I. Palmira. Así mismo, se ha hecho el seguimiento a viveros localizados en el Valle del Cauca y en la zona cafetera del sur occidente colombiano Microinjertación de cultivares del Banco de Germoplasma de Cítricos del C.I. Palmira. El proceso de saneamiento por medio de la técnica de microinjertación in-vitro, se ha desarrollado aplicando la metodología desarrollada por Roistacher y Navarro (1994). La Tabla 1, detalla el resultado obtenido con la técnica y el número de plantas procesadas por cada material o introducción seleccionada, como también el patrón definitivo utilizado al momento de realizar la practica de reinjertación para la conformacion de las futuras plantas madre. Los materiales fueron seleccionados del Banco de Germoplasma de Cítricos del C.I. Palmira (BG), atendiendo las prioridades de la demanda del sector citricola del país. En este sentido se procesaron 107 materiales o introducciones del BG, los cuales sirvieron de plantas donadoras de yemas que garantizan la calidad varietal del material de origen. Estas plantas son sometidas a manejos especiales en nutrición, plagas, riego y poda. Esta ultima labor se realiza antes de tomar las yemas con destino al laboratorio de biotecnología, en donde se le extraen los primordios foliares para dejar finalmente 2-3 primordios de hojas en formación y la yema o meristemo apical. En el proceso se seleccionaron diferentes especies del grupo de los cítricos (naranjas, mandarinas, limas ácidas, pomelos, clementinas, algunos híbridos, patrones y otras especies de interés para la investigación. Se dio especial énfasis a materiales criollos colectados en el país por sus bondades de calidad del fruto y que actualmente se encuentran en procesos de evaluación en finca de agricultores. La Tabla 1, destaca la realización de microinjertos realizados, correspondientes a 107 introducciones. Es de resaltar que el 17.11% de los microinjertos realizados se desarrollaron exitosamente, llegando finalmente a plantas microinjertadas vivas en casa malla post-reinjeracion. El numero de microinjertos trabajados, se descartaron (82.89%) por diversos factores, entre ellos: contaminación de las soluciones nutritivas (medios sólidos y liquidos), oxidación de tejidos de los materiales, rechazo al medio de cultivo, reabsorción de la yema en el patrón, o microinjertos prendidos con reacción positiva al virus de la Tristeza de los Cítricos, lo cuales fueron eliminados, entre y otras razones desconocidas de naturaleza fisiológica y de posible interacción genética del patrón y la copa. Lo anterior destaca la rigurosidad del proceso en términos de alto volumen de yemas microinjertadas y pocas plantas madre sanas a CTV para futuros procesos de incremento y multiplicación masiva de plantas hijas sanas.

6 Nº de Introdu cción Se utilizaron 3 patrones puente en la fase de microinjertacion (Carrizo, Troyer y CPB). En todas las variedades se observaron muertes de plantas por no prendimiento de la yema microinjertada. Cinco variedades fueron plantadas en suelo directamente, con el propósito de evaluar su desarrollo y precocidad en el proceso de crecimiento de la planta al sitio definitivo, evaluación que permitió establecer que el metodo del reinjerto en patrones ya desarrollados permiten una mayor y mas rapida respuesta en el proceso de consolidar la planta madre en el sitio definitivo. Lo patrones utilizados en las reinjertaciones son: naranjo Agrio, citranjes Carrizo y Troyer, citrumelo CPB-4475, Cleopatra, Sunky X English y limón Volkameriana dependiendo de la copa a reinjertar. Tabla 1. Variedades del Banco de Germoplasma de Cítricos del C.I. Palmira, micro injertados y saneados para CTV, conservados en casa malla antipulgón, C.I. Palmira, Julio/06. NOMBRE Común NOMBRE Científico PROCEDENCIA TIPO DE MATERIAL Microinjerto trabajado Patrón re-injerto Total plantas Sanas 0014 Jaffa Citrus sinensis USA Riverside-California Introducido 18 SXE, NA Jopa Citrus sinensis USA Riverside-California Introducido 20 NA, Indian River Citrus sinensis USA Riverside-California Introducido 20 CARR Oneco Nucelar Citrus reticulata USA Riverside-California V. Mejorada 40 VOL, CL Australian Navel Citrus sinensis USA Riverside-California Introducido 20 CPB Valencia 1-D-E Citrus sinensis USA Riverside-California Introducido 22 CARR Parson Brown Citrus sinensis USA Riverside-California V. Mejorada 20 CARR Dancy Citrus tangerina USA Riverside-California Introducido 18 NA Owari Satsuma Citrus satsuma USA Riverside-California Introducido 20 NA Siam Citrus paradisci USA Riverside-California Introducido 23 CPB Marsh 1-D-E Citrus paradisci USA Riverside-California Introducido 40 CARR Duncan Citrus paradisi USA Riverside-California Introducido 20 CARR Rangpur Citrus limonia USA Riverside-California Introducido 35 CPB Pajarito Citrus aurantifolia Valle del Cauca V. Agricultor 21 NA ICA Bolo Citrus reticulata Valle del Cauca V. Mejorada 15 CLEO ICAHamlinNuc 7 Citrus sinensis Desconocido V. Mejorada 40 NA,C Enterprise Citrus sinensis Desconocido Introducido 55 V, C, NA, CA, CPB Perrine Citrus aurantifolia Desconocido Introducido 21 CARR ICA-Manuelita Citrus paradisci Valle - Palmira V. Mejorada 17 CARR Red Blush Citrus paradisci Desconocido Introducido 10 CARR Salerma Citrus sinensis Valle - Palmira V. Agricultor 13 CARR Galicia Citrus sinensis Valle - Palmira V. Agricultor 30 CARR García Valencia Citrus sinensis Valle - Palmira V. Agricultor 12 CARR Pera del Rio Citrus sinensis Brasil - Rio de Janeiro Introducido 34 CARR 3 CPB, NA, CLEO ValencCostaRic Citrus sinensis Costa Rica Introducido Valle Washingto Citrus sinensis Valle - Palmira Introducido 40 NA Tahiti Citrus aurantifolia Desconocido Introducido 20 CARR, NA Seminole Híbrido Desconocido Introducido 14 NA Mineola Híbrido Desconocido Introducido 20 CARR 1

7 Nº de Introdu cción NOMBRE Común NOMBRE Científico PROCEDENCIA TIPO DE MATERIAL Microinjerto trabajado Patrón re-injerto Total plantas Sanas 0232 Pearl Híbrido Desconocido Introducido 11 CARR Lerma Citrus sinensis Valle - Palmira V. Agricultor 31 NA, VOL Real Nápoles Citrus limón Valle - La Cumbre Introducido 18 SXE Canaria Citrus reticulata Antioquia - Medellín Introducido 34 CARR Ton Kin Citrus limón Antioquia - Medellín Introducido 17 VOL Eureka Citrus limón Antioquia - Medellín Introducido 17 CLEO C. Sunki Citrus sunky Brasil Sao Paulo Introducido 35 CARR Lima Nativa Citrus aurantifolia Colombia C.I. Palmira V. Agricultor 19 NA Rico Citrus sinensis Puerto Rico U. Pto. Rico Introducido 25 CPB Valen.Variegado Citrus sinensis Puerto Rico U. Pto. Rico Introducido 20 CARR Valenc.Campbel Citrus sinensis USA Indio-California Introducido 57 NA, CLE 16 CPB, NA, CLEO Valencia Frost Citrus sinensis USA Indio-California Introducido Valencia Olinda Citrus sinensis USA Indio-California Introducido 28 NA 7 CPB, CA, 0859 Fortune Citrus reticulata USA Riverside-California Introducido 33 NA Murcott Híbrido USA Riverside-California Introducido 32 NA Salustiana Citrus sinensis USA Riverside-California Introducido 56 CPB, CA, 0874 Fairchild Híbrido USA Riverside-California Introducido Pixie Citrus reticulata USA Riverside-California Introducido 22 NA, VOL 27 CPB, CA, NA 13 VOL, SXE Sanguinella Citrus sinensis Cartagena Introducido 35 CARR Calamondin Citrus madurensis Valle - Palmira Introducido 20 CARR Citrange Carrizo Híbrido USA Riverside-California Introducido 18 CARR Cidro Etrog Citrus medica USA Florida Introducido 15 NA Shamoutti Citrus sinensis USA Riverside-California Introducido 11 NA Star Ruby Citrus paradisi Valle - El Cerrito Introducido 18 CARR Arrayana Citrus reticulata Valle - Sevilla V. Agricultor 45 CARR, NA, VOL Dob.B. Satsuma Citrus satsuma USA Riverside-California Introducido 21 CARR Lane Late Citrus sinensis USA Riverside-California Introducido 23 NA Madame Vinous Citrus sinensis USA Riverside-California Introducido 25 NA Red Blush Citrus paradisi España IVIA-Valencia Introducido 15 CARR Valencia Olinda Citrus sinensis España IVIA-Valencia Introducido 14 CARR New Hall Citrus sinensis España IVIA-Valencia Introducido 17 NA Marsh Citrus paradisi España IVIA-Valencia Introducido 14 CARR Nave Late Citrus sinensis España IVIA-Valencia Introducido 12 NA Clemenulles Citrus clementina España IVIA-Valencia Introducido 38 CPB, CA, NA Clementina Fina Citrus clementina España IVIA-Valencia Introducido 14 SXE Navelina Citrus sinensis España IVIA-Valencia Introducido 16 NA Santander Citrus reticulata Santander - Lebrija V. Agricultor 12 SXE Clementina 85 Citrus clementina Francia Córcega Introducido 16 SXE Clementina 92 Citrus clementina Francia Córcega Introducido 14 SXE 1 CPB, CA, NA Corsica 1 Citrus clementina Francia Córcega Introducido 25 Tangelo CPB, CA, 2140 Híbrido Francia IRFA CIRAD Introducido 12 Orlando NA, C Minneola Híbrido Desconocido Introducido 42 CARR, 14

8 Nº de Introdu cción NOMBRE Común NOMBRE Científico PROCEDENCIA TIPO DE MATERIAL Microinjerto trabajado Patrón re-injerto 2145 Satsuma Okitsu Citrus satsuma Francia IRFA CIRAD Introducido 18 SXE Cafetera Nº1 Citrus sinensis Colombia -Zona Cafetera V. Agricultor 20 CARR Margarita Citrus sinensis Bolívar - Mompox V. Agricultor 18 TRO Tahití Citrus aurantifolia Francia Córcega Introducido 12 VOL Limaácidapajarit Citrus aurantifolia Quindío - Montenegro V. Agricultor 21 VOL ClemenCorsica2 Citrus clementina Francia Córcega Introducido 19 CARR Lima ácidatahití Citrus aurantifolia Francia Córcega Introducido 17 CARR Temple Híbrido Valle - Caicedonia Introducido 23 NA 3 C02 lima ácida criollo Citrus aurantifolia Magdalena - Cienaga V. Agricultor 17 VOL 1 C04 lima ácida criollo Citrus aurantifolia Atlántico - Santo Tomas V. Agricultor 20 VOL 1 C05 lima ácida criollo Citrus aurantifolia Atlántico - Santo Tomas V. Agricultor 15 VOL 1 C06 lima ácida criollo Citrus aurantifolia Atlántico - Santo Tomas V. Agricultor 10 VOL 1 C07 lima ácida criollo Citrus aurantifolia Atlántico - Santo Tomas V. Agricultor 13 CPB 1 C10 lima ácida criollo Citrus aurantifolia M/gdalena - Zona banan. V. Agricultor 16 CARR 2 C11 naranja criollo Citrus sinensis Magdalena - Santa Ana V. Agricultor 19 CPB 2 C15 naranja criollo Citrus sinensis Bolívar - Tupe V. Agricultor 21 CPB 3 C17 naranja criollo Citrus sinensis Bolívar - Margarita V. Agricultor 11 CARR 1 C20 naranja criollo Citrus sinensis Magdalena - Guamal V. Agricultor 22 SXE 2 C21 naranja criollo Citrus sinensis Magdalena - Guamal V. Agricultor 14 SXE 1 C22 naranja criollo Citrus sinensis Magdalena - Guamal V. Agricultor 12 CARR 1 C32 mandarinacriollo Citrus reticulata Tolima - Flandes V. Agricultor 17 VOL 1 C34 lima ácida criollo Citrus aurantifolia Tolima - Flandes V. Agricultor 24 VOL 3 C38 naranja criollo Citrus sinensis Tolima - Guamo V. Agricultor 12 VOL 1 C42 mandarinacriollo Citrus reticulata Cundinamarca - Mesistas V. Agricultor 14 CARR 1 C44 naranja criollo Citrus sinensis Cundinamarca - La Mesa V. Agricultor 27 TRO 4 C47 mandarinacriollo Citrus reticulata Cundinamarca - Tena V. Agricultor 25 CARR 3 C49 naranja criollo Citrus sinensis Cundinamarca - Tena V. Agricultor 18 CARR 2 C51 naranja criollo Citrus sinensis Cundinamarca - Tena V. Agricultor 22 NA, C Total plantas Sanas CPB, CARR 4 C52 lima ácida criollo Citrus aurantifolia C/dinamarca - Cachipay V. Agricultor 27 CPB 5 C56 naranja criollo Citrus sinensis Cundinamarca - Sasaima V. Agricultor 12 CPB 1 C58 naranja criollo Citrus sinensis Cundinamarca - Pacho V. Agricultor 15 CARR 1 C60 naranja criollo Citrus sinensis Cundinamarca - Pacho V. Agricultor 19 CPB 2 C63 naranja criollo Citrus sinensis Caldas - Anserma V. Agricultor 14 CPB 2 C73 naranja criollo Citrus sinensis Valle - Alcalá V. Agricultor 10 CARR 1 C74 naranja criollo Citrus sinensis Quindío - La Tebaida V. Agricultor 18 CPB 4 C78 naranja criollo Citrus sinensis Quindío - La Tebaida V. Agricultor 21 CPB CLONES Diversos Nombres 13 especies del genero Citrus y 9 hibridos 40 localidades o procedencias 3 tipos de colecta (100%) 7 Patrones 410 (17.11%)

9 4.2. Diagnóstico fitosanitario de los materiales microinjertados. Para afianzar el proceso de diagnóstico fitosanitario de otras enfermedades sistémicas, como psorosis, exocortis y xyloporosis, se vienen implementando protocolos estandarizados y adaptados a las condiciones locales para obtener diagnósticos confiables en procesos futuros de certificación. A continuación (Tabla 2) se presenta la sintomatología en campo y la comprobación en laboratorio utilizando los protocolos respectivos para cada enfermedad. Tabla 2. Diagnóstico de laboratorio, campo y pruebas utilizadas para diferentes enfermedades sistémicas. Enfermedad sistémica CTV o Tristeza de los cítricos Psorosis Leprosis Exocortis Blight Síntomas en campo Aclaramientos nerviales en hojas jóvenes, decaimiento y deficiencias nutricionales; frutos, ramas y hojas pequeñas y abarquilladas; acanaladuras en tallo y ramas, estrés del árbol, defoliación prematura. Agrietamiento, descamación de corteza en tronco y ramas primarias en árboles adultos, declinamiento del árbol, impregnación de goma (la mayoría de especies y cultivares son asintomáticas, especialmente observable en naranjas y tangelos). Lesiones cloróticas en hojas, frutos y ramas con áreas necróticas, círculos concéntricos con goma; caída del fruto y a veces muerte árbol Descamación de la corteza y producción de grietas sobre el patrón; la copa desarrolla diferentes grados de enanismo. Detención temprana del crecimiento, hojas con bordes ondulados, deficiencia de Zinc, secamiento descendente de ramas, defoliación, rebrotamiento en tronco y ramas primarias y muerte del árbol. Prueba laboratorio invernadero Serológica Biológica Serológica Biológica Molecular Molecular Molecular Biológica Serológica Biológica Descripción ELISA / Anticuerpo policlonal general Anti CTV lgg Limón Pajarito, Naranjo Agrio, Pomelo Duncan, limón Eureka, ELISA / Anticuerpo monoclonal CpsV Naranjo dulce, Tangor Dweet, mandarina Parson s special, cidro Arizona 861. RT-PCR / Primers específicos para psorosis RT-PCR / Primers específicos para leprosis Doble PAGE y dot-blot, hibridación molecular Cidro Etrog Arizona 861-S1, ELISpot / Anticuerpo monoclonal. Método de absorción de agua en el tronco, determinación de Zinc en el tallo.

10 4.3. Comprobación serológica al virus de la Tristeza de los Cítricos. Durante la ejecución del proyecto se realizaron 98 serologías mediante el empleo del lector de Elisa adquirido por el proyecto. Inicialmente se presentaron dificultades con la disponibilidad de suficiente material vegetativo para la obtención de las muestras necesarias para aplicar el protocolo de diagnostico Elisa. Esta es una de las etapas lentas del proceso que implica la aclimatación y endurecimiento de los materiales micro injertado que imposibilitan adelantar la prueba serológica de manera anticipada. Por lo anterior, la comprobación serológica se realiza en los meses subsiguientes a la reinjertación una vez se cuenta con material vegetativo suficiente para la prueba de Elisa. Para este procedimiento se incluyen todos los materiales que al momento de realizar el diagnostico serológico presenten condiciones apropiadas para la obtención de la muestra vegetal para el análisis. La Tabla 3, registra en detalle los materiales que han sido sometidos a serología para CTV en el C.I. Palmira, y permite visualizar el nivel de contaminación con este virus a través del desarrollo del proyecto. La nomenclatura utilizada para los diferentes materiales corresponde a la codificación que se le da a cada material una vez es microinjertado, endurecido y reinjertado en casa de malla antipulgón. Los materiales de reacción positiva son eliminados debido a la presencia de partículas virales, lo cual exige que este material sea erradicado, quedando en conservación para incremento de yemas solo aquellos materiales de reacción seronegativa. Esta es una practica que se realiza periódicamente, al menos una vez cada 6 meses sobre las plantas conservadas en casa de malla antiáfido. Es destacable el alto porcentaje (85.7%) de plantas saneadas por la técnica de microinjertación in-vitro. El nivel de descarte obedece fundamentalmente a microinjertos que al momento del corte de la yema apical involucraron tejido vascular que permite translocar las partículas virales hacia tejidos en crecimiento o en expansión. Dentro de este proceso es posible que se estén presentando falsos seronegativos por tratarse de plantas de pocos meses de reinjertadas en las cuales las partículas virales aun no han colonizado nuevos tejidos en formación por su baja concentración. Por lo anterior, este diagnostico debe ser reiterativo (cada 6 meses máximo) para demostrar la sanidad permanente del material de propagación, en especial aquellos materiales que son sometidos a multiplicación intensiva de yemas.

11 Tabla 3. Diagnóstico Serológico a CTV en cultivares del BG saneadas por microinjertación de ápices caulinares in-vitro, C.I. Palmira, Julio Introducción Serología Introducción Serología Introducción Serología Introducción Serología C C C C C C C C C C C-78-20B Serologia NEGATIVA (85.7%) 84 Serologia POSITIVA (14.3%) Manejo integrado de plagas en casa-malla antipulgón. Partiendo de la necesidad de generar, ajustar y validar tecnología que permita darle continuidad al proceso de limpieza fitosanitaria de las plantas saneadas en laboratorio, es necesario obtener información básica a cerca de la presencia de insectos plaga presentes en las casas de malla antiáfido (áfidos, ácaros, mosca blanca, lepidópteros ), para posteriormente establecer medidas de manejo integrado. En tal sentido, en las casas de malla del C.I. Palmira, se realiza un reconocimiento y monitoreo de insectos plaga asociados a cítricos. La presencia

12 de plantas en estas casa malla, como limón Pajarito, naranjo Agrio, naranja Madame Vinous, naranja Salerma y Toronja (Foto 1), constituyen por si mismo, fuente de alimentación y atracción para los insectos plaga mencionados, lo cual exige una mayor vigilancia y seguimiento de su incidencia y fluctuación, sumado a las condiciones ambientales de alta humedad y temperatura. En la casa de malla en estudio se registró una temperatura y humedad relativa promedio de 28 ºC y 63 % respectivamente. Foto 1. Condiciones ambientales de conservación de plántulas en casas de malla antipulgón, Corpoica, C.I. Palmira, Julio/2006. El seguimiento a las poblaciones plaga, se realizó por medio de muestreos cada 15 días calendario, programando un total de 27 muestreos/año. A las plantas de cada cubículo se observan visualmente de manera directa con la ayuda de un optivisor o lupa 25X (observación en hojas y ramas), con el fin de reconocer los insectos asociados y tipo de daño. Posteriormente se toman 10 hojas al azar del total de plantas, por cubículo, las cuales son llevadas al laboratorio de entomología, donde con la ayuda del estereoscopio y clave taxonómica, se hace el conteo y registro de los diferentes estados que existan de la plaga (número de posturas, número de ninfas, número de adultos, parasitismo ). Una vez terminan los muestreos, se obtiene el promedio de población por fecha con el fin de conocer la fluctuación poblacional. Las especies de insectos-plaga reportadas en este estudio son: acaro blanco Polyphagotarsonemus latus; acaro rojo: Tetranychidae pos, Panonychus sp,; mosca blanca Dialeurodes sp, Aleurodicus sp; minador: Phyllocnistis citrella

13 Stainon. El ácaro rojo y las moscas blancas se presentan como las especies de mayor incidencia. Por otra parte, poblaciones de minador y ácaro blanco se presentaron esporádicamente, reportando ácaro blanco esporádicamente. Lo anterior permite establecer que se hace necesario reforzar los controles en el ingreso de personal, especialmente, con el propósito de cumplir las medidas sanitarias necesarias para evitar la contaminación de las plantas madre, y así impedir la presencia de áfidos, Estos últimos no se han reportado en ninguna de las casas de malla en observación. Aunque los ácaros no tienen alas y son de tamaño que varía de 0,1 a 0,6 mm de largo, su importancia radica en que su ciclo biológico es corto, sumado a las condiciones ambientales que pueden provocar aumentos rápidos de sus poblaciones. El daño de estos ácaros fitófagos se produce al alimentarse de las capas superficiales de los tejidos foliares (hojas, tallos, ramas y frutos), extrayendo su contenido celular con su aparato bucal raspador chupador, provocando clorosis y caída de hojas. Otra plaga importante en casa malla, son las moscas blancas. La gran mayoría de ellas no afectan de manera sensible al cultivo, pero hay unas pocas que pueden llegar a producir importantes pérdidas económicas. Los daños se producen cuando las ninfas de estas moscas blancas se alimentan con sus estiletes de los tejidos foliares para succionar savia. Además, como consecuencia de su forma de nutrición y su sistema digestivo, se producen grandes cantidades de melaza, bloqueando la capacidad fotosintética de la planta. En la casa - malla se ha observado la especie Dialeurodes sp, (Foto 2). Esta especie pertenece a la subfamilia Aleyrodinae. La hembra oviposita en el envés de las hojas de manera dispersa. Foto 2. (a) Adulto Dialeurodes sp (b) Ninfa de Dialeurodes sp

14 El monitoreo permitió establecer la presencia de Aleurodicus sp, perteneciente a la subfamilia Aleurodicinae, especie originaria de América tropical. Esta especie deposita los huevos en el envés en forma de espiral, las ninfas se adhieren a la hoja con secreciones de cera en forma de filamentos largos (Foto 4). Foto 4. (a) Oviposición Aleurodicus sp (b) Ninfas con filamentos largos A través de la información obtenida sobre el número posturas y adultos de mosca blanca en hojas, se ha reportado baja incidencia de este insecto, no obstante se tiene información de los serios daños que esta plaga puede ocasionar cuando no se le controla oportunamente. En este estudio se presentaron dos picos de población de mosca blanca, el primero al inicio de marzo y el segundo al inicio de diciembre, lo anterior permitió hacer un manejo preventivo integrando labores culturales como, podas sanitarias, recolección de desechos, eliminación de arvenses, uso de control biológico por medio de entomopatógenos. En cuanto a la población de ácaro rojo se observó presencia de adultos de este insecto durante todos los meses, sin embargo se presentaron diferencias en la fluctuación poblacional, observándose tres picos de población. El primer pico se presentó al inicio del mes de marzo, el segundo a final de abril, y el tercero a mediados del mes de diciembre. De acuerdo a la fluctuación poblacional ( ácaros/modulo) en los dos primeros meses del año, ha permitido realizar prácticas culturales integradas como, podas sanitarias, eliminación de arvenses, recolección de residuos y medidas de tipo biológico como uso de entomopatogenos. En los meses siguientes al presentarse poblaciones altas (14-79 ácaros/modulo) se hizo necesario el uso de productos químicos en rotación. Se ha podido establecer que la población de ácaro rojo está relacionada con la humedad relativa (63% promedio en las casas de malla). Se registraron correlaciones negativas entre la humedad relativa y el número de individuos y posturas de ácaros. Lo anterior

15 permite confirmar investigaciones anteriores que establecen que la alta humedad atmosférica disminuye la presencia de ácaros. De ahí que sea necesario realizar un seguimiento diario de factores como humedad relativa y temperatura con el fin de determinar manejos apropiados modificando el ambiente como mecanismo de control Estudio de la demanda de material de propagación e Identificación de capacidades en viveros para un programa de certificación de cítricos en Colombia. El estudio de la demanda de material sano por parte de viveristas se enfocó hacia el conocimiento básico de la capacidad instalada, conocimientos técnicos, producción y demanda futura de material certificado por parte de viveristas y productores. A continuación se hace una descripción de las principales variables analizadas en encuesta realizada a los propietarios y/o administradores de los principales viveros localizados en la zona suroccidental, la cual responde por mas del 60% de la producción de plántulas cítricas para el país Análisis Encuesta de Viveros En Colombia según el ICA aparecen registrados 92 viveros de los cuales 55 o sea el 60% son productores y/o comercializadores de cítricos. El sector viverista citricola esta conformado por 42% productores, 13% comercializadores y 45% son producen y comercializan cítricos simultáneamente (Tabla 4). Del total de viveros con cítricos, Tolima cuenta con 27, Cundinamarca 21, Valle 12 y Antioquia 10. El resto se ubica en los departamentos de Córdoba (6), Putumayo (5), Risaralda (5), Santander (3), Caldas (1), Quindio (1) y Casanare (1). DPTO Tabla 4. NUMERO DE VIVEROS REGISTRADOS EN COLOMBIA Total viveros Colombia Viveros CITRICOS Viveros PRODUCTORES Cítricos Viveros COMERCIALI ZADORES Viveros PRODUCTORES COMERCIALIZA DORES ANTIOQUIA CALDAS CASANARE CORDOBA CUNDINAMARCA PUTRUMAYO QUINDIO RISARALDA SANTANDER TOLIMA VALLE TOTAL PARTICIPACION % 100% 59,8 41,8 12,7 45,5 FUENTE: MINAGRICULTURA-ICA, 2006.

16 Identificación de los viveros. Se encuestaron 9 viveros ubicados en: Valle del Cauca (6), Risaralda y Quindío (3), los cuales se consideran los mas representativos en cuanto a infraestructura, volúmenes, recursos y capacidades para enfrentar un programa de certificación de cítricos en Colombia. Estos 9 viveros tienen la mayor producción de plántulas en el país, injertos de cítricos y de otros frutales en el año Este volumen de producción representa aproximadamente el 60% de la producción anual de plántulas de cítricos del país Programa de certificación de Plántulas. De los viveros encuestados, el 90% respondieron que sí conocen los avances desarrollados en el programa Nacional de Certificación de Cítricos. Todos coinciden en que es importante producir plantas certificadas para la agricultura de Colombia. La razones aducidas son: plantas sanas, mas precoces, longevas y productivas; plantas de mejor calidad, sanidad y productividad. El 90% comenta que sí conoce la diferencia entre plántulas registradas y plántulas certificadas, igualmente conocen la normativa sobre viveros del 22 de diciembre de 2002 del ICA. La mayoría conocen o han escuchado sobre programas de certificación de plántulas de otros países, especialmente de Brasil, Argentina, Méjico, Cuba, España y Estados Unidos (Florida) Infraestructura y Equipos De los 9 viveros, 4 disponen de infraestructura mínima para acondicionarla a programas de certificación: Profrutales Ltda., granjas el Sesteo en Candelaria (Valle) y Venecia (Caicedonia), Vivero Jaibaná (Pereira) y Vivero Cicolsa de Armenia. El 89% cuenta con sistema de riego generalmente de aspersión. El único vivero que posee equipo de microinjertación es Profrutales en Candelaria (Valle) con una capacidad de microinjertos por año Personal del Vivero. Los viveros cuentan con personal permanente y eventual, afirmando que ocupan en promedio de 3 a 4 empleados eventuales por vivero, y en los permanentes no se puede hablar de promedio, pues los viveros grandes como Profrutales utilizan 50 personas, la Granja Venecia en Caicedonia 15, los demás utilizan en promedio entre 4 y 5 empleados. El 56% del tamaño de la muestra, afirman que han capacitado a su personal en instituciones como ICA, CORPOICA, CIAT, UNIVALLE, UNIQUINDIO, PROFRUTALES y Granja Venecia en procesos de producción de plántulas y conocen la importancia de la microinjertación de plántulas como herramienta biotecnológica para el saneamiento de las plantas madre.

17 Dinámica del mercado. De acuerdo con la encuesta realizada a los viveros del Valle y del Eje Cafetero la producción de plántulas de cítricos creció en un 21% al pasar de a plántulas entre los años y La producción de plántulas de otros frutales creció en este mismo periodo en un 61% al pasar de a plántulas (Tabla 5). Esto significa que aunque la producción de plántulas de cítricos es más del doble de otros frutales, sin embargo la dinámica de estos últimos ha sido más fuerte en los últimos cinco años, en términos relativos, por cuanto en términos absolutos ambos produjeron en promedio plántulas promedio año. Tabla 5. Producción de plántulas de cítricos y otros frutales, Julio AÑOS CITRICOS OTROS No. INDICE FRUTALES Plántulas INDICE Fuente: CORPOICA CI PALMIRA, Encuesta a Viveros Valle y Eje Cafetero, Abril El mayor porcentaje de la producción tiene como destino los departamentos de Valle, Caldas, Sur de Antioquia, Quindío y Risaralda (Figura 1). El volumen de plantas injertadas por semana es en promedio de a 2.300, sin tener en cuenta el vivero Profrutales que injerta plántulas por semana. El porcentaje de descartes por no prendimiento es en promedio 5%. DESTINO DE LA PRODUCCION 100,00% 90,00% 80,00% 70,00% 60,00% 50,00% 40,00% 30,00% 20,00% 10,00% 0,00% VALLE CALDAS ANTIOQUIA QUINDIO RISARALDA CAUCA NARIÑO TOLIMA BOLIVAR META Departamentos Destino de la producción Figura 1. Destino de la producción de plántulas de cítricos del total de viveros encuestados.

18 Características del material. Los patrones mas utilizados por los viveros son: Volkameriana, Carrizo, Sunki x English, Cleopatra, CPB-4475, Troyer y Flying Dragon. Los demás patrones son poco utilizados como son: C-35, Kryder 15-3, Swinglea y Sunky x Jacobson. El 70% de los viveros produce en su propio huerto la semilla para patrones, el 30% la adquiere de otros viveros productores. Las variedades que más se utilizan en árboles madre son: Salustiana, Tahití, Oneco, Valencia, Pajarito, Arrayana, T. Minneola, Sweetty, Wasghinton Navel,. Nativa y T. Orlando. Las yemas las adquieren en huertos madre propios. El tiempo que permanece el material en el vivero es en promedio 300 días, (aproximadamente 10 meses). Que variedad utiliza en árboles madre? 90,0% 80,0% 70,0% 60,0% 50,0% 40,0% 30,0% 20,0% 10,0% 0,0% SALUSTIANA TAHITI ONECO VALENCIAS PAJARITO ARRAYANA MINNEOLA SWETTY WASHINTON NATIVO ORLANDO PALMIRA RUBY HAMLIN SALERMA LINTERPRIZE LANDLATE CLEMENULES RANGPUR Figura 2. Distribución porcentual del variedades elite producidas por viveros del suroccidente de Colombia Información Sanitaria del Vivero. Las enfermedades de mayor ocurrencia en germinadores son: Damping off, Rhizotocnia, Pudricion de Raíces, Fusarium y Phytium. Las enfermedades en plántulas de vivero de mayor ocurrencia son: Alternaria, Antracnosis y Phytophthora. Las plagas que más atacan los semilleros son: Minador, Hormiga, Babosa, Ácaros y Áfidos. Las tres plagas de mayor ocurrencia en los viveros encuestados son: Minador, Acaro Rojo y Pulgones, este ultimo con amplias repercusiones con la diseminación del virus de la Tristeza de los cítricos, en especial en limas ácidas Tahití y Pajarito. Los viveros realizan controles preventivos así: el 56% fumigaciones, el 22% manejo cultural y desinfección del suelo. Un menor número de viveros utilizan: podas, lavados e inoculación con hongos.

19 En los primeros estados de desarrollo de los patrones es común la deficiencia en magnesio y zinc en un alto porcentaje, ampliamente relacionado con el uso de patrones trifoliados, y en menor medida la deficiencia de boro y cobre. El 67% de los viveros indican que no está permitido el acceso de visitantes al huerto madre o productor de yemas como medidas preventivas fitosanitarias Capacitación. El 67% de los viveros realiza jornadas de capacitación a los usuarios del vivero, el 78% entrega un instructivo de manejo de la planta, todos orientan al productor en la selección de patrones y de variedades cuando el agricultor asi lo demanda, y todos tienen vigilancia del Estado a través del ICA, la cual se hace periódicamente Conclusiones del estudio preliminar sobre viveros. La encuesta realizada a los viveros permite identificar que en el Valle del Cauca y el Eje Cafetero existe buena capacidad, tanto en infraestructura y equipos, como en personal capacitado, para vincularse fácilmente a un programa de certificación de cítricos, sin requerir mayores inversiones en infraestructura y equipo y con personal que se ha venido capacitando en tecnologías relacionadas con el manejo agronómico, fitosanitario y cultural, orientado a prestar un mejor servicio al agricultor con plantas de mejor calidad.. En infraestructura y equipos, invernaderos, casa de malla, sistema de riego y equipo de microinjertación. Algunos disponen de infraestructura mínima que requiere adecuaciones para procesos de multiplicación masiva de plántulas bajo estructura protegida, como es: Profrutales Ltda., granjas el Sesteo y Venecia del Comité de Cafeteros del Valle, vivero Jaibaná y Cicolsa. El 89% cuenta con sistema de riego generalmente de aspersión. Solo el vivero Profrutales Ltda, en Candelaria (Valle), posee equipo de microinjertación con capacidad de microinjertos año. Finalmente esta zona del suroccidente del país, aporta mas del 60% de la producción de plántulas de cítricos del país, lo cual la constituye como una región prioritaria para la vinculación de sus viveros más tecnificados para hacer parte fundamental del programa de certificación de plántulas de cítricos para Colombia Adecuación de infraestructura y equipos en procesos de limpieza fitosanitaria de cítricos enfocados a la certificación de plántulas. Mediante la adecuación y ampliación de la infraestructura disponible a nivel de casas de malla antipulgón el C.I. Palmira, amplio la capacidad instalada para la multiplicación intensiva de plántulas y yemas de materiales élite de cítricos, provenientes del Banco de Germoplasma, ya saneados por el proceso de microinjertación de ápices caulinares. En tres bloques o módulos de siembra de

20 500 mtr2 cada uno, se tienen los bloques de Fundación (plantas elite), Propagación (incremento de plántulas) y Multiplicación (incremento de yemas), Ver Figura 3.. La planificación de la siembra del material saneado obedece a la intensidad con que las plantas han de ser sometidas a la cosecha periódica de yemas. El bloque de fundación contiene las variedades elite del BG sanas, transplantadas directamente al suelo, distanciadas a 2.0 metros entre plantas, con mínima intervención de podas y máximas medidas de sanidad. Las yemas que de aquí se obtengan serán utilizadas en un principio para el establecimiento del Bloque de Propagación. Este bloque de igual área, contiene las variedades elite que inician un proceso de escalamiento de yemas, plantadas a 30x50x80 cm en surcos dobles directamente en el suelo. Serán las plantas responsables de suministrar plántulas para el establecimiento del bloque de Multiplicación y producción intensiva de yemas a escala comercial. PROGRAMAS DE LIMPIEZA FITOSANITARIA DE CÍTRICOS HACIA PROCESOS DE CERTIFICACIÓN DE PLÁNTULAS LABORATORIOS B. FUNDACIÓN MIC INVESTIGACIÓN BIOENSAYOS B. PROPAGACIÓN MIP MIAS Banco Germoplasma VIVEROS COMERCIALES B. MULTIPLICACIÓN SEMILLA CERTIFICADA Figura 3. Esquema general del proceso de multiplicación de plantas saneadas a partir del Banco de Germoplasma de cítricos del C.I. Palmira.

21 A continuación se describe la terminología empleada en el proceso de limpieza fitosanitaria de plántulas con enfoque hacia el Programa nacional de certificación de material de propagación de cítricos (Figura 1). BANCO DE GERMOPLASMA: El C.I. Palmira cuenta con 272 introducciones de clones de cítricos sobresalientes por características agronómicas y de interés general para la citricultura del país. Este es el reservorio de genes con que cuenta la investigación para futuros programas de mejoramiento. BIOENSAYOS: Pruebas de diagnostico fitosanitario para diagnostico y caracterización de aislados y razas de virus y otros patógenos, mediante el uso de plantas indicadoras, bajo condiciones de ambiente controlado. BLOQUE DE FUNDACION: Establecimiento de material élite o de mayor demanda comercial, plantada en casas de malla antipulgón, con el propósito de donar yemas sanas al proceso de incremento de material vegetativo con fines comerciales. BLOQUE DE MULTIPLICACION: Área de incremento final para la producción de yemas a escala comercial, desarrolladas en casas de malla antipulgón, el cual obtiene yemas del Bloque de Propagación y plántulas patrones para injertación. BLOQUE DE PROPAGACIÓN: Área de incremento escalonado de yemas a partir de plantas madre sanas obtenidas del Bloque de Propagación. INVESTIGACION: Estrategias de conocimiento que permiten resolver limitantes de la producción de plántulas en condiciones controladas de casas de malla e invernaderos dentro del proceso de limpieza fitosanitaria, diagnóstico y medidas preventivas y correctivas. LABORATORIOS: Laboratorios de microinjertación, de diagnostico fitosanitario (serológico y molecular), de calidad y caracterización de cítricos. MIAS: Manejo Integrado de Aguas y Suelos, orientado a satisfacer las necesidades de sustrato, hídricas y nutricionales de plantas madre saneadas en condiciones de ambientes controlados (casas de malla e invernaderos). MIC: Manejo Integrado del Cultivo, orientado al acondicionamiento de la planta en términos de practicas agronómicas, poda, macetas, control de arvenses y manejo del ambiente protegido (temperatura y humedad relativa principalmente). MIP: Manejo Integrado de Plagas de plantas saneadas por procesos de microinjertación de ápices caulinares, partiendo del diagnóstico, tanto en invernaderos, casas de malla, viveros y campo, como en laboratorio mediante pruebas serológicas, moleculares y de microscopia electrónica. SEMILLA CERTIFICADA: Semilla sexual (patrones) o asexual (yemas), en la cual se garantiza la pureza genética y fitosanitaria del material. Suministra semilla certificada a todo el proceso de producción de plántulas en bloques de fundación, propagación, multiplicación y bioensayos y viveros comerciales. VIVEROS COMERCIALES: Empresas comerciales encargadas de multiplicar, fomentar y/o comercializar plantas de cítricos saneadas dentro del proceso de limpieza vía Certificación Capacitación y transferencia de tecnología en procesos de certificación de plántulas de cítricos. En los años 2005 y 2006, los esfuerzos por consolidar los procesos de limpieza fitosanitaria de cítricos y de Certificación de plántulas libres de enfermedades virales estuvieron concentrados en la realización de una serie de eventos de capacitación y transferencia de tecnología con el propósito de consolidar las

22 experiencias exitosas de otros países que los hacen hoy en día competitivos con una citricultura mas longeva, rentable, menos contaminante y mas exitosos a partir de plantas sanas. Con la participación de 665 personas capacitadas, dos boletines técnicos, dos póster, 9 encuestas a viveristas citricolas, un video, 6 seminarios, 2 boletines de prensa, 5 talleres y un simposio internacional, como actividades de capacitación y transferencia de tecnología, unido al acondicionamiento de casas de malla antipulgón, equipamiento de laboratorio y personal capacitado en Brasil sobre multiplicación masiva de plántulas sanas en procesos de certificación y 169 plantas microinjetadas, 5 materiales criollos colectados y 92 serologias realizadas, se ha logrado posicionar y fortalecer al C.I. Palmira como un centro de referencia para la producción de plántulas sanas de cítricos para Colombia. 5. CONCLUSIONES. Son destacables los logros obtenidos con la realización del presente proyecto, los cuales se pueden resumir en el fortalecimiento de la capacidad instalada, equipamiento, experiencia del equipo ejecutor del proyecto, socialización de la información procesada y ante todo por la disponibilidad para el sector citricola nacional de material de propagación limpio de enfermedades sistémicas, comprobada por serologia a CTV en primera instancia. Con la implementación de estas técnicas biotecnológicas de limpieza fitosanitaria, la estandarización o ajuste de protocolos de diagnóstico y la adecuación de infraestructura de casas de malla antipulgón en el C.I. Palmira de Corpoica, se han establecido las condiciones necesarias para que el sector citrícola inicie un nuevo esquema de producción tecnificada de material de propagación de plántulas de cítricos. Este es un gran paso para el establecimiento e implementación del Programa Nacional de Certificación de Plántulas de Cítricos, lo cual permitirá el desarrollo de una citricultura tecnificada, de buenas condiciones fitosanitarias, longevas y rentables, y que represente beneficios a la economía del sector citricola del país. 6. Citas Bibliográficas. Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural, Observatorio agrocadenas Colombia. (Cítricos, estadísticas de la cadena, actualizado Abril 2006). Caicedo, A Primera Jornada Citrícola, C. I. Palmira. Oct Huertas, C.A., Varón, F, Campo, R.O., Derriick, K.S Presencia del declinamiento de los cítricos del Valle del Cauca. Colombia. Fitopatología Columbiana. 18 (2) Peñaranda, J., Acosta, O., Moreno L.P. Biología Molecular del Virus de la Tristeza Cítrica: aislamiento, purificación y caracterización molecular de algunas cepas de virus benignos y severos que afectan los cítricos en Colombia. Univ. Nac. de Colombia, Fac. Medicina, Lab. Bioquímica. Bogotá, Caicedo A, A. Muñoz O. J, Triviño A, J. y Gomez J. E Bases para la certificación de plántulas de cítricos libres de enfermedades en Colombia. Boletín tecnico Corpoica C.I. Palmira. 32 pp.