TEMA 17. Infecciones del tracto gastrointestinal. Análisis microbiológico de muestras fecales.

Transcripción

1 TEMA 17 Infecciones del tracto gastrointestinal. Análisis microbiológico de muestras fecales.

2 Tema 19. Infecciones del tracto gastrointestinal. Análisis microbiológico de muestras de heces. 1. Características generales del tracto gastrointestinal 2. Microbiota normal del tracto gastrointestinal 3. Afecciones del tracto gastrointestinal 4. Patología de las infecciones del tracto gastrointestinal 4.1. Mecanismos inespecíficos de defensa del hospedador 4.2. Participación de la microbiota normal en la defensa del hospedador 4.3. Mecanismos patogénicos de agentes que causan infecciones del tracto gastrointestinal Enfermedades gastrointestinales asociadas con microorganismos productores de toxinas Enfermedades gastrointestinales asociadas con microorganismos invasores 5. Toma de muestras 6. Transporte de muestras al laboratorio 7. Detección directa en heces de agentes de gastroenteritis 8. Cultivo de materia fecal

3 1. Características generales del tracto gastrointestinal - Esófago, estómago, intestino delgado (ID) (duodeno, yeyuno, íleon), intestino grueso (IG) (ciego, colon) y ano - Mucosa: capa que tapiza TGI incluyendo células y secreciones adyacentes - Células epiteliales diferentes según segmento: - Microvellosidades (ID) - Mucus (IG) - Incorporación de líquidos y secreciones (8L/día) - Absorción de sustancias (epitelio intestinal)

4 1. Características generales del tracto gastrointestinal - TGI de adulto sano recibe hasta 8 litros líquido/día, por ingestión y por secreción glandular (salivares, páncreas, vesícula biliar y estómago) - La mayor parte de este líquido debe ser reabsorbida - Cualquier alteración en el flujo normal o en la reabsorción del líquido afecta profundamente al hospedador

5 2. Microbiota normal del tracto gastrointestinal - Neonatos colonizados por microbiota epitelial normal en las primeras horas - Posteriormente, al deglutir más bacterias, varía microbiota - Microbiota de IG se establece relativamente pronto

6 2. Microbiota normal del tracto gastrointestinal - Acidez de estómago impide colonización (excepción Helicobacter pylori) - En primer tramo de ID microbiota escasa ( bacterias/ml) (principalmente, lactobacilos, estreptococos y levaduras) - Aumenta a bacterias/ml en el íleon distal (aparecen enterobacterias y Bacteroides) - En IG (adultos) predominan especies anaerobias (Bacteroides, Clostridium, Peptostreptococcus, Bifidobacterium, etc.) que superan a 1 a aerobias y facultativas (E. coli, otras enterobacterias, enterococos y estreptococos, principalmente) - Bacterias 80% peso seco heces persona sana ( bacterias/gramo)

7 3. Afecciones del tracto gastrointestinal Gastroenteritis - Náuseas, vómitos, diarreas de poca intensidad, dolor abdominal Diarrea - Heces líquidas, afectación del intestino delgado, pérdida abundante de líquidos Disentería - Afectación del intestino grueso, inflamación, heces líquidas con sangre y mucosidad, dolor abdominal Enterocolitis - Inflamación de la mucosa intestinal (ID e IG)

8 4. Patología de las infecciones del tracto gastrointestinal 4.1. Mecanismos inespecíficos de defensa del hospedador: Para causar infección del TGI sobrepasar defensas del hospedador Acidez del estómago Peristaltismo Moco IgA secretora Presencia de eosinófilos

9 4.2. Participación de la microbiota normal en la defensa del hospedador - Microbiota normal participa como mecanismo de defensa Síndrome de colitis seudomembranosa (colitis asociada a los antibióticos) - Tratamiento prolongado con antimicrobianos - C. difficile, presente en número escaso y controlado por microbiota normal, es resistente natural a muchos antibióticos - Cuando se reduce microbiota, Clostridium prolifera y sintetiza toxinas (enterotoxina y citotoxina) - Provoca diarrea moderada que remite tras suspender tratamiento

10 4.3. Mecanismos patogénicos de agentes que causan infecciones del tracto gastrointestinal - Existen, generalmente, varios mecanismos para causar infección: a) Producción de toxinas que afectan a la secreción de líquidos, las funciones celulares o las funciones neurológicas b) Invasión del epitelio de la mucosa, provocando o no la destrucción celular c) Invasión de la mucosa y enfermedad sistémica - Virus (rotavirus, hepatitis A, B, C, Norwalk) - Protozoos (Entamoeba histolytica, Giardia lamblia) - Parásitos (Strongyloides, Anisakis, Taenia)

11 5. Toma de muestras - Cantidad de heces: 5 ml (líquidas), volumen equivalente a una nuez (sólidas) - Envase de plástico (con cuchara) - Las muestras sospechosas de contener sigelas (muy delicadas), si es posible, deben sembrarse al lado de la cama del paciente

12 5. Toma de muestras - Si no se dispone de heces, pueden sustituirse por hisopado rectal (no válido para detectar parásitos o antígenos virales, pero sí para virus) - Si no se aísla un agente en el primer cultivo deben enviarse dos muestras adicionales en días siguientes - Otras tomas de muestra menos frecuentes son aspirado duodenal y proctoscopia

13 6. Transporte de muestras al laboratorio - Como normal general máximo 2h a temperatura ambiente - Muestra no procesada en dos horas: colocar en medio de transporte (Cary-Blair); mantener a temperatura ambiente, no refrigerar - Si se sospecha presencia de Campylobacter: colocar inmediatamente hisopo en medio de transporte Cary-Blair (evitar desecación) - Muestras para detectar citotoxina de C. difficile: deben congelarse ( 70ºC ó 20ºC) hasta procesamiento (pueden ser descongeladas, centrifugadas y filtradas y el filtrado nuevamente congelado)

14 6. Transporte de muestras al laboratorio - Muestras para cultivo de virus no procesada en dos horas: refrigerar - Hisopo rectal para cultivo de virus: colocar en medio Hansk

15 7. Detección directa en heces de agentes de gastroenteritis - Preparaciones en fresco: detectar parásitos - Microscopio de contraste de fases o campo oscuro: morfología y movilidad de Campylobacter y Vibrio - La presencia de leucocitos indica existencia de proceso inflamatorio (relacionado con microorganismos de carácter invasivo) - Tinción de Gram: - Neutrófilos PMN y acúmulos de cocos Gram positivos: posible infección por estafilococos - Bacilos Gram negativos delgados y curvos: posible infección por Campylobacter - Bacilos Gram positivos grandes y delgados con paredes paralelas: presencia de C. difficile

16 7.1. Pruebas previas al cultivo - Enzimoinmunoanálisis útil para detectar virus (rotavirus) y otros patógenos (E. coli) - Sondas genéticas disponibles para varios patógenos (Salmonella, Shigella, Yersinia, E. coli)

17 8. Cultivo de materia fecal - Rutinariamente: investigar presencia de Campylobacter, Salmonella y Shigella - Buscar Yersinia enterocolitica en áreas con incidencia elevada - Cuando se solicite: búsqueda de vibrios, C. difficile y micobacterias

18 8. Cultivo de materia fecal Rutinariamente sembrar: - agar sangre (permite crecimiento de levaduras, estafilococos, enterococos y bacilos Gram negativos) - medio moderadamente selectivo (MacConkey o EMB) - medio selectivo y diferencial (agar entérico de Hektoen, agar xilosa-lisina-desoxicolato XLD) - medio muy selectivo (depende del coste) (agar SS, agar verde-brillante, agar sulfito de bismuto) Caldo selenito Se pueden utilizar caldos de enriquecimiento para aumentar probabilidad de detección de Salmonella, Shigella (caldo GN, caldo selenito F, caldo tetrationato)

19 8. Cultivo de materia fecal Salmonella en agar Hektoen Salmonella en agar Verde Brillante

20 8. Cultivo de materia fecal - Para detectar Campylobacter: agar Campy con sangre, agar Skirrow (vancomicina, trimetoprim, anfotericina B, polimixina B y sangre de oveja) - Cultivar en microaerofilia y 42ºC -Se puede aumentar la recuperación de Campylobacter utilizando un caldo de enriquecimiento (caldo tioglicolato Campy) Agar Campy con sangre

21 8. Cultivo de materia fecal - Para detectar bacterias Gram positivas: agar Base Columbia con colistina y ácido nalidíxico (CNA) (Columbia-CNA) - Para detectar Vibrio cholerae: - Prueba de la oxidasa sobre agar sangre (positiva) - Agar TCBS (tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa) Vibrio cholerae en Agar TCBS

22 8. Cultivo de materia fecal - Para detectar Yersinia enterocolitica: agar CIN (cefsulodina, irgasán (3,3,4,5- tetraclorosalicilanilida) y novobiocina) -Para detectar Clostridium difficile: agar CCF (cicloserina, cefoxitina, huevo, fructosa). También medio CCYE. - La citotoxina de C. difficile se detecta por el efecto citopático en cultivos celulares (Vero, Hela, etc.) Agar CCF Agar CIN