RepublicofEcuador EDICTOFGOVERNMENT±

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1 RepublicofEcuador EDICTOFGOVERNMENT± Inordertopromotepubliceducationandpublicsafety,equaljusticeforal, abeterinformedcitizenry,theruleoflaw,worldtradeandworldpeace, thislegaldocumentisherebymadeavailableonanoncommercialbasis,asit istherightofalhumanstoknowandspeakthelawsthatgovernthem. NTE INEN 0548 (1981) (Spanish): Alimentos para animales. Determinación de vitamina A

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3 Norma Técnica Ecuatoriana ALIMENTOS PARA ANIMALES DETERMINACIÓN DE VITAMINA A INEN OBJETO Instituto Ecuatoriano de Normalización, INEN Casilla Baquerizo Moreno E8-29 y Almagro Quito-Ecuador Prohibida la reproducción 1.1 Esta norma establece el método para determinar el contenido de vitamina A en alimentos para animales. 2. RESUMEN 2.1 El contenido de vitamina A se basa en la medida de coloración azul que se obtiene con tricloruro de antimonio en solución clorofórmica a 620 nm. La absorbancia se mide mediante el uso de un colorímetro. 3. INSTRUMENTAL 3.1 Colorímetro foto eléctrico, de lectura directa, para mediciones de transmisión y absorbancias de luz, en una longitud de onda de 620 nm. 3.2 Aparato de digestión, con condensador o refrigerante de reflujo adaptable a la boca de un matraz Erlenmeyer de 500 cm Embudo de separación, de 500 cm Matraz volumétrico, de 50 cm Pipetas. 3.6 Baño de agua, con regulador de temperatura, ajustado a 40 ± 1 C. 3.7 Balanza analítica, sensible al 0,1 mg. 4. REACTIVOS 4.1 Alcohol etílico absoluto o isopropanol, reactivo para análisis. De tal pureza que, cuando se mida en una célula de cuarzo 1 cm 3 de agua destilada, deberá tener una absorbancia no mayor de 0,01 en nm y no mayor de 0,05 a 300 nm. 4.2 Solución e/ 50% de hidróxido de potasio. Disolver 50 g de hidróxido de potasio en 100 cm 3 de agua. 4.3 Eter etílico, libre de peróxidos, con punto de ebullición alrededor de 40 C. 4.4 Sulfato de sodio anhidro, granular, reactivo para análisis (no debe absorber vitamina A). 4.5 Cloroformo, redestilado (conteniendo al rededor de 1 % de etanol). (Continúa)

4 4.6 Solución de tricloruro de antimonio. Disolver 113,4 g de tricloruro de antimonio en 300 cm 3 de cloroformo (ver 4.5). Añadir 5 g de cloruro de calcio y filtrar en caliente. Diluir el filtrado a 500 cm 3 con cloroformo. 4.7 Solución patrón de vitamina A. Es una solución de acetato de vitamina A cristalina en aceite de semilla de algodón, encerrada en una cápsula de gelatina, conteniendo 3,44 mg de trans acetato de vitamina A por gramo de solución. Un gramo de esta solución tiene asignado USP, unidades. La unidad USP está definida como la actividad de 0,344 µm de acetato de vitamina A, lo cual es equivalente a 0,3 µm de vitamina A alcohol. 4.8 Solución Indicadora de fenolftaleína. Disolver 0,5 g de fenolftaleína en 100 cm 3 de alcohol etílico de 95-96% (V/V). 4.9 Curva de calibración. Cortar la punta de la cápsula que contiene la solución estándar (ver 4.7) y colocar su contenido sobre un vidrio de reloj, previamente limpio y pesado Pesar con toda precisión su contenido, transferir a un matraz volumétrico de 50 cm 3, disolver y llevar a volumen con cloroformo (ver 4.5). Esta solución debe ser usada tan pronto como sea preparada, pero nunca después de ocho horas Hacer una serie de diluciones con la solución 4.9.1, tomando volúmenes de modo que la alícuota tratada con cloroformo y cloruro estannoso dé una transmisión entre %, en el colorímetro a 620 nm (ver 6.10 y 6.12). (Las lecturas deben realizarse en un tiempo máximo de 15 segundos, después de la adición de la solución del cloruro estannoso). El 100% de transmisión debe ser ajustado a paralelo con agua Con los datos obtenidos construir un gráfico; valores de extinción medidos frente a la cantidad de acetato de vitamina A expresados en µm o en unidades internacionales (ver nota 1). 5. PREPARACION DE LA MUESTRA 5.1 Moler aproximadamente 5 g de muestra, en un micro molino que contenga un tamiz de abertura de 1 mm, según Norma INEN 104, y que a través de él pase aproximadamente un 95% del producto. 5.2 Transferir rápidamente la muestra homogenizada a un recipiente herméticamente cerrado, hasta el momento del análisis. 6. PROCEDIMIENTO 6.1 La determinación debe realizarse por duplicado sobre la misma muestra preparada. 6.2 Pesar, con aproximación al 0,1 mg, aproximadamente 5 g de muestra preparada y colocar en el matraz Erlenmeyer de 500 cm 3. NOTA 1. La curva de calibración obtenida debe ser una línea recta.

5 6.3 Agregar 40 cm 3 de alcohol absoluto, 7 cm 3 de la solución de hidróxido de potasio y conectar el matraz Erlenmeyer al refrigerante. Mantener la ebullición durante 30 min, agitando el matraz Erlenmeyer periódicamente para evitar que quede material adherido a las paredes. 6.4 Retirar el matraz Erlenmeyer del refrigerante y enfriar. Agregar 30 cm 3 de agua y transferir la solución al embudo de separación. 6.5 Extraer la solución por tres veces con 50 cm 3 de éter cada vez y transferir a otro embudo de separación. Reunir los extractos etéreos y cautelosamente agregar 100 cm 3 de agua, imprimir suaves movimientos giratorios, dejar decantar y cuando se observe formación de dos capas visibles, que debe ser dentro de 2 min, remover la parte acuosa. 6.6 Repetir el lavado por varias veces, usando cada vez 50 cm 3 de agua y sacudimientos vigorosos, hasta que el último líquido de lavado no dé reacción alcalina a la fenolftaleína. 6.7 Evaporar el extracto etéreo lavado sobre el baño de agua ajustado a 40 ± 1 C, hasta obtener aproximadamente 20 cm 3, y luego agregar 3 a 6 g de sulfato de sodio anhidro, agitar y decantar. 6.8 Transferir el líquido claro decantado a un frasco volumétrico de 50 cm 3. Lavar varias veces el sulfato de sodio con éter y adicionar los líquidos de lavado al líquido claro y luego llevar a la marca con éter. 6.9 Comprobar si la vitamina A ha sido extraída completamente del sulfato de sodio, por adición de unas gotas de tricloruro de antimonio Evaporar a sequedad, cuidadosamente, en el baño de agua, una alícuota de la solución contenida en el frasco volumétrico (ver 6.8) y el residuo redisolverlo en una cantidad suficiente de cloroformo, de manera que se obtenga una solución entre 7 a 15 unidades internacionales de vitamina A por cm Transferir a la cubeta del colorímetro el residuo redisuelto, añadir 3 cm 3 de la solución de tricloruro de antimonio y leer inmediatamente la absorbancia en 620 nm (la lectura debe realizarse en un tiempo máximo de 15 segundos) Al mismo tiempo que se realiza el trabajo indicado en 6.11 y con otra cubeta que contenga 2 cm 3 de cloroformo, 3 cm 3 de la solución de tricloruro de antimonio, ajustar el colorímetro a 100% de transmisión, usando la longitud de onda a 620 nm y leyendo inmediatamente, como se anota en CALCULOS 7.1 El contenido de vitamina A en la muestra se determina de acuerdo con la curva estándar correspondiente y el resultado se expresa en unidades internacionales de vitamina A por kilogramo de muestra. 8. ERRORES DE METODO 8.1 La diferencia entre los resultados de una determinación efectuada por duplicado no debe exceder de 2 UI/cm 3 ; en caso contrario, debe repetirse la determinación.

6 9. INFORME DE RESULTADOS 9.1 Como resultado final, debe reportarse la media aritmética de los dos resultados de la determinación. 9.2 En el informe de resultados, deben indicarse el método usado y el resultado obtenido. Debe mencionarse, además, cualquier condición no especificada en esta norma o considerada como opcional, así como cualquier circunstancia que pueda haber influido sobre el resultado. 9.3 Deben incluirse todos los detalles necesarios para la completa identificación de la muestra.

7 APENDICE Z Z.1 NORMAS A CONSULTAR INEN 104 Tamices de ensayo. Tamaños nominales de las aberturas, Z.2 BASES DE ESTUDIO Método AOAC de análisis. AOAC 39. Vitamin A in mixed feeds. Association of Official Analytical Chemists. Washington, Métodos de análisis de vitaminas. The association vitamin chemists U.S.A. Método colorimétrico, color azul Carr-Price. Ed, pp 68, Editorial Academia Leon. España, Norma Hindú IS: Indian Standard Specification for Compounded feeds for cattle. Determination of vitamin A. (Carr-Price method). Indian Standard Institution. Nueva Delhi, Rolf Strohecher - Heinz M. Henning. Análisis de vitaminas: Valoración de Vitamina A en alimentos y piensos. 2the. Ed, pp, 64, Editorial Paz Montalvo. Madrid, Association of vitamin chemists. Vitamin Assay. Colorimetric method (Carr - Price blue color). Ed, 1 pp 24, Editorial Interscience publishens, Inc. Nueva York, London, 1967.

8 Documento: NTE INEN 548 INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA TÍTULO: ALIMENTOS PARA ANIMALES. DETERMINACIÓN DE LA VITAMINA A Código: AL ORIGINAL: Fecha de iniciación del estudio: REVISIÓN: Fecha de aprobación anterior por Consejo Directivo Oficialización con el Carácter de por Acuerdo No. de publicado en el Registro Oficial No. de Fecha de iniciación del estudio: Fechas de consulta pública: de a Subcomité Técnico: Al ALIMENTOS PARA ANIMALES Fecha de iniciación: Fecha de aprobación: Integrantes del Subcomité Técnico: NOMBRES: Lic. Emilio Herrera Ing. Alfonso Romero Ing. Nelson Villacís Dr. José Lucio Dr. Jorge Anhalzer Ing. Fausto Peñafiel Dra. Leonor Orozco Dra. María Navas INSTITUCIÓN REPRESENTADA: Agrosol de Ecuador Ecuadorian Feed Ministerio de Agricultura Ministerio de Agricultura Alimentos Anhalzer INEN INEN INEN Otros trámites: 4 Esta norma sin ningún cambio en su contenido fue DESREGULARIZADA, pasando de OBLIGATORIA a VOLUNTARIA, según Resolución de Consejo Directivo de y oficializada mediante Acuerdo Ministerial No. 235 de publicado en el Registro Oficial No. 321 del El Consejo Directivo del INEN aprobó este proyecto de norma en sesión de Oficializada como: Registro Oficial No. Por Acuerdo Ministerial No.

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