Epidemiología molecular de Klebsiella pneumoniae, productora del gen bla KPC en muestras invasivas en el Ecuador

Transcripción

1 Epidemiología molecular de Klebsiella pneumoniae, productora del gen bla KPC en muestras invasivas en el Ecuador

2 Klebsiella pneumoniae y sus riesgos Resistencia en el Ecuador Detección de mecanismos de resistencia Epidemiología molecular Electroforesis de campos pulsados (PFGE) Tipificación multilocus de secuencias (MLST)

3 Klebsiella pneumoniae se considera un patógeno oportunista causante de un gran número de infecciones asociadas al área de la salud

4 SERIN- CARBAPENEMASAS Klebsiella pneumoniae carbapenemasa (KPC) Ampicilina: Cefazolina: Ceftriaxona: Ertapenem: Meropenem: Imipenem: Aztreonam: Resistente Resistente Resistente Resistente Resistente Resistente Resistente Enzimas hidrolíticas, cuyo centro activo es la serina Pueden ser cromosómicas o adquiridas

5 Infecciones sistémicas Estancias hospitalarias prolongadas Dificultad en establecer terapias Diseminación clonal (BROTES)

6 Centro Referencia Nacional de Resistencia a los Antimicrobianos (RAM) Brindar información oportuna y de calidad con respecto a resistencias antimicrobianas en microorganismo de interés en salud pública. Laboratorio coordinador del sistema de vigilancia Laboratorios asociados de la Red

7 HOSPITAL 1 (QUITO) HOSPITAL 2 (QUITO) HOSPITAL 3 (QUITO) HOSPITAL 4 (QUITO) HOSPITAL 5 (GUAYAQUIL) HOSPITAL 6 (CUENCA)

8 Total de aislamientos % de las cepas de Kpn

9 Establecer relaciones clonales entre las cepas de Klebsiella pneumoniae productora del gen bla KPC y determinar la secuencia tipo predominante.

10 MUESTRAS INVASIVAS 80 aislados de Klebsiella pneumoniae PERIODO DIVERSAS CASAS DE SALUD RESISTENCIA A CARBAPENÉMICOS

11 Pruebas fenotípicas Identificación de género y especie: Pruebas bioquímicas Determinar perfiles de susceptibilidad: Difusión de disco y Concentración mínima inhibitoria Pruebas rápidas para la detección de carbapenemasas: TEST DE HODGE, SINERGIA: APB, EDTA Y CIM.

12 Método de Inactivación del carbapenémico (Van der Zwaluw, et al; 2015)

13 Pruebas genotípicas PCR CONVENCIONAL Tipificación multilocus de secuencias (MLST) Electroforesis de campo pulsado (PFGE)

14 PFGE Protocolo de trabajo PULSNET para Enterobacterias 42 aislados de Klebsiella pneumoniae

15 MLST 14 aislados de Klebsiella pneumoniae Protocolo de trabajo propuesto por el Instituto Pasteur

16 RESULTADOS OBTENIDOS

17 Categoría de Edad 80 77, ,5 Adultos Neonatos Pediátricos % Salas de Hospitalización , ,25 8,75 5 6,25 2,5 3,75 5 2,5 2,5 1,25 2,5 2, % Ilustración 3 Salas de hospitalización **CAR: Cardiología; CGE: Cirugía general; CTX: Consulta externa EME: Emergencia; HEM: Hematología; MED: Medicina Interna; NCI: Neurocirugía; NEF: Nefrología; NEO: Neonatología; NEU: Neurología; NMO: Neumología; ONC: Oncología; PED: Pediatría; UCI: Unidad de cuidados intensivos; UQUE: Unidad de quemados.

18 PERFILES DE SUSCEPTIBILIDAD Antibióti cos* R (%) I (%) S (%) AMC MDR XDR PDR AK 51,2 7,5 41,2 ATM CAZ CIP 58,8 28,8 12,5 CTX ETP 98,8 1,2 0 IMP MER FOX GN 91,2 0 8,8 NA 61,2 27,5 11,2 CT 6,2 0 93,8 SXT 93,8 1,2 5 TE 61,2 2,5 36,2 TIG a 3,8 22,5 73,8 FEP TPZ 98,8 1,2 0

19 No. ID MIC E-TEST IMP ETP CT MEM CT 278 >=16 >=8 <=0,5 2 0, >=16 >=8 <=0,5 3 0, <=0,5 0,5 0, >=16 >=8 <=0,5 >=32 0, >=8 <=0,5 3 0, >=16 >=8 <=0,5 >=32 0, >=8 <=0,5 3 0, >=16 >=8 <=0,5 4 0, <=0,5 1 0, >=16 4 <=0,5 1 0, >=16 >=8 <=0,5 >=32 0, >=16 >=8 <=0,5 3 0, >=8 <=0,5 4 0, >=16 >=8 >=16 >=32 12 Determinación de la susceptibilidad mediante MIC

20 KPC+BLEE; 26% KPC; 11% KPC+AmpC; 26% KPC+AmpC + BLEE; 36% KPC+AmpC KPC+AmpC + BLEE KPC KPC+BLEE Corresistencia en K. pneumoniae KPC.

21 Correlación de métodos fenotípicos y genotípicos No. Aislados de K. pneumoniae IMP R MEM R Test de Hodge (+) CIM (+) Sinergi a APB (+) PCR- KPC (+) % 100% 100% 100% 95% 100%

22 PATRONES CLONALES OBTENIDOS POR PFGE Mes/Año ID Hosp. Muestra Sala de Hosp. A B C 5 grupos clonales Relación al 70% según el INDICE DE DICE D E

23 MLST cepa ID rpob gapa mdh pgi tonb infb phoe Secuencia tipo (ST) C C * C C C C C C C C C C C C

24

25 CONCLUSIONES Todos los aislamientos presentan perfiles de resistencia en la categoría de MDR y XDR, además cierto aislamientos corresponden a PDR.

26 La mayoría de los aislamientos presentan sensibilidad a tigeciclina y colistin. Todos los métodos fenotípicos evaluados se presentan como buenos indicadores para la identificación o diagnóstico de Kpn-KPC.

27 Las 80 cepas analizadas amplificaron para el gen bla KPC, lo que nos sugiere una resistencia a todos los B-lactámicos. La subtipificación por PFGE revela diversidad clonal entre las cepas analizadas con la presencia de un clon predominante en cada casa de salud.

28 Las Secuencias Tipo (ST) más prevalentes en nuestro estudio fueron la ST 258 y la ST 25. Se observó brotes intrahospitalarios policlonales en cada casa de salud, planteando que la transmisión horizontal es la principal vía de contagio de Kpn-KPC

29 AGRADECIMIENTOS ESCUELA DE BIOANALISIS Paúl A. Cárdenas MD, MSc, DIC, PhD

30 Equipo de trabajo del Centro de Referencia Nacional de Resistencia a los Antimicrobianos

31 BIBLIOGRAFIA Córdova, E., Gomez, N., & Paste, F. (2012). Descripción clínica y epidemiológica de un brote nosocomial por Klebsiella pneumoniae productora de KPC en Buenos Aires, Argentina. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica, 30 (7), Van der Zwaluw, K., de Haan, A., Pluister, G. N., Bootsma, H. J., de Neeling, A. J., & Schouls, L. M. (2015). The Carbapenem Inactivation Method (CIM), a Simple and Low-Cost Alternative for the Carba NP Test to Assess Phenotypic Carbapenemase Activity in Gram-Negative Rods. PLoS ONE, 10(3), e Iñiguez, D., Zurita, J., Alcocer, I., Ortega, D., Gómez, A., & Maldonado, L. (2012). Klebsiella pneumoniae productora de carbapenemasa tipo KPC-2: Primer reporte en Ecuador. Revista de la Facultad de Ciencias Médicas (37), López, J., & Echeverri, L. (2010). K. pneumoniae: la nueva superbacteria? Patogenicidad, epidemiología y mecanismos de resistencia. Revista médica de la Universidad de Antioquia, 23 (2), Nicola, F., Nievas, J., & Smay, J. (2012). Evaluación de diversos métodos fenotípicos para la detección de carbapenemasas KPC en Klebsiella pneumoniae. Revista Argentina de Microbiología, 44 (4), Muñoz, S., Poirel, L., Bonomo, R., Schwab, M., Cornaglia, G., Garau, J., y otros. (2013). Clinical epidemiology of the global expansion ok Klebsiella pneumoniae carbapenemases. The Lancet Infectious Diseases, 13 (9), Van der Zwaluw, K., Haan, A., Pluister, G., Bootsma, H., Neeling, A., & Schouls, L. (2015). The Carbapenem Inactivation Method (CIM), a Simple and Low-Cost Alternative for the Carba NP Test to Assess Phenotypic Carbapenemase Activity in Gram-Negative Rods. Ploes One, 10 (3), Zurita, J., Alcocer, I., Ortega, D., Barba, P., Yauri, F., Iñiguez, D., y otros. (2013). Carbapenem-hydrolysing b- lactamase KPC-2 in Klebsiella pneumoniae isolated. Journal of Global Antimicrobial Resistance, 1,