Tiroxina Libre Modular: Cobas 6000 Test: Inmunoensayo competitivo.
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- Inés Muñoz Ramos
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1 INDICE 1. Propósito del examen Principio y método del procedimiento utilizado para el examen Características de desempeño Tipo de muestra Preparación del paciente, indicaciones generales Tipo de contenedor y aditivos Equipo y reactivos requeridos Controles ambientales y de seguridad Procedimientos de calibración, trazabilidad metrológica Pasos del procedimiento Procedimientos de control de calidad Evaluación Externa de la Calidad Interferencias Principio del método para el cálculo de resultados incluyendo resultado de medición de incertidumbre de valores de la magnitud medida Intervalos de referencia biológicos o decisión clínica Intervalo reportable de resultados del examen Instrucción para determinar resultado cuantitativo cuando un resultado no está dentro del intervalo de medición Valores de alerta o críticos Interpretación clínica del laboratorio Fuentes potenciales de variación Referencias Control de cambios y vigencia CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 1 de 10
2 Información de la prueba EXAMEN EQUIPO/METODO Tiroxina Libre Modular: Cobas 6000 Test: Inmunoensayo competitivo. SINONIMOS/ABREVIACIONES T4 Libre, FT4 DEPARTAMENTO Hormonas CLAVE/CODIGO D-LC-05/ Propósito del examen. La Tiroxina (T4) es la principal hormona tiroidea secretada al torrente sanguíneo por la glándula tiroidea. Junto con la Triyodotironina (T3) desempeña un papel vital en la regulación del metabolismo e influye en el sistema cardiovascular, el crecimiento y el metabolismo óseo. Así mismo contribuye al desarrollo normal de las funciones gonadales y del sistema nervioso. La T4 circula en sangre en forma de hormona libre y unida al suero en una mezcla equilibrada. La Tiroxina Libre (FT4) que representa el 3.03 % de la T4, es la forma biológica activa. La tiroxina restante, ligada a proteínas séricas como la globulina fijadora de tiroxina (75%), la prealbumina (15%) y la albumina (10%), es inactiva. La determinación de T4 Libre tiene la ventaja de no depender de variaciones en la concentración ni en la capacidad de fijación de estas proteínas ligantes y por ello no requiere la determinación adicional de un parámetro de fijación (captación de tiroxina, globulina fijadora de tiroxina). Por esta razón, la T4 Libre es una útil herramienta para evaluar la función tiroidea en el marco del diagnóstico clínico de rutina. La T4 Libre se determina conjuntamente con la TSH frente a la sospecha de una disfunción tiroidea. Su determinación también es idónea para supervisar la terapia tirosupresora. El equilibrio entre las formas ligada y libre de T4 esta determinado por la concentración de las constantes de asociación de las globulinas ligantes de hormona tiroidea: Globulina Ligante de Hormona Tiroidea (TBG), Prealbumina Ligante de Tiroxina (TBPA) y albumina, en orden de importancia. CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 2 de 10
3 2. Principio y método del procedimiento utilizado para el examen Técnica de competición con una duración total de 18 minutos. 1era incubación: 15µL muestra, un anticuerpo específico Anti-T4, marcado con un complejo de rutenio. 2da incubación: Tras la incorporación de T4 biotinilada y de micriopartículas recubiertas de estreptavidina, los sitios de unión aun libres del anticuerpo marcado se ocupan formándose un complejo anticuerpo-hapteno. El complejo total se fija a la fase solida por la interacción entre la biotina y la estreptavidina. La mezcla de reacción es trasladada a la célula de lectura donde, por magnetismo, las micropartículas se fijan a la superficie del electrodo. Los elementos no fijados se eliminan posteriormente con el reactivo ProCell/ProCell M. Al aplicar una corriente eléctrica definida se produce una reacción quimioluminiscente cuya emisión de luz se mide con un foto multiplicador. Los resultados se obtienen mediante una curva de calibración generada por el sistema a partir de una calibración a dos puntos y una curva master incluida en el código de barras del reactivo. 3. Características de desempeño Datos del fabricante. Precisión: Suero Repetibilidad Media Desviación estándar CV Precicontrol Universal pmol/l pmol/l 1.8 % Precicontrol Universal pmol/l pmol/l 1.6 % Total/Intermedia Media Desviación estándar CV Precicontrol Universal pmol/l pmol/l 1.9 % Precicontrol Universal pmol/l pmol/l 2.3 % Límite inferior de detección. <0.3 pmol/l Intervalo de medición pmol/l CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 3 de 10
4 Recuperación. ±10% Diagnomol Refiérase al reporte de verificación de métodos (FR-BQ-04). 4. Tipo de muestra. Suero 5. Preparación del paciente, indicaciones generales. Ayuno mínimo de 8 horas. 6. Tipo de contenedor y aditivos Suero: recolectar en tubo tapón amarillo (gel separador) o tubo tapón rojo (sin aditivos). 7. Equipo y reactivos requeridos. Reactivos Soluciones de trabajo El rack pack de reactivo lleva la etiqueta FT4 II. M. Micropartículas recubiertas de estreptavidina (tapa transparente), 1 frasco 12mL; micropartículas recubiertas de estreptavidina: 0.72 mg/ml; conservante. R1 Anticuerpo anti-t4-ru(bpy) 2+3 (tapa gris), 1 frasco, 18 Ml; Anticuerpo monoclonal Anti-T4 (oveja) marcado con quelato de rutenio 75 ng/ml; tampón fosfato 100 mmol/l, ph 7.0; conservante. R2 T4 biotina (tapa negra), 1 frasco, 18 ml; T4 biotinilada 2.5 ng/ml; tampón fosfato 100 mmol/l, ph 7.0; conservante. Equipo Modular Cobas 6000: Modulo C601 con NS: Controles ambientales y de seguridad El instrumento de medición se opera entre 30 y 85% de humedad y entre 18 y 32ºC (FR-AC-21). Para controlar la temperatura, nuestro laboratorio cuenta con equipos de aire acondicionado. El personal sigue los lineamientos indicado en el Manual de Bioseguridad CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 4 de 10
5 9. Procedimientos de calibración, trazabilidad metrológica. FT4 II Calset consiste en una matriz de tampón/proteína lista para el uso completada con L- Tiroxina en 2 intervalos de concentración. El Calset puede combinarse con todos los lotes de reactivos. Reactivos Soluciones de trabajo: FT4 II Cal1: 2 frascos, con 1.0 ml de calibrador 1 c/u. FT4 II Cal12 2 frascos, con 1.0 ml de calibrador 2 c/u. Trazabilidad: El Test Elecsys FT4 II ha sido estandarizado frente al método Elecsys FT4. El test FT4 puede trazarse al Enzymun-Test que, a su vez, ha sido estandarizado mediante diálisis de equilibrio. Refiérase a la cadena de trazabilidad correspondiente. Cada reactivo Elecsys contiene un código de barras que incluye información específica para la calibración del lote de reactivos. La curva máster predefinida es adaptada al analizador a través del Calset correspondiente. Intervalo de calibraciones: Efectuar una calibración por lote con reactivos frescos (registrados como máximo 24 horas antes en el analizador). Se recomienda repetir la calibración de acuerdo a los siguientes criterios: 1.- Expiración de acuerdo a tiempos establecidos por proveedor: a). - Después de 8 semanas si se trata del mismo lote de reactivos. b). Después de 7 días (al emplear el mismo estuche de reactivos en el analizador) c). En caso necesario: Si el control de calidad se encuentra fuera del intervalo definido 2.- Cambio de lote. 3.- Como recurso al C.C.I. 4.- Después de realizado un mantenimiento preventivo. 10. Pasos del procedimiento. Se realiza el encendido automático del equipo (programado), se procede a realizar el registro de mantenimiento diario y semanal del analizador cobas 6000, de acuerdo a lo requerido. Se realiza una revisión en LIS de lo que se tiene de carga de trabajo, se verifica que prueba requiere de calibración para realizarla, se proceder a montar el control de calidad interno de las pruebas, si es necesario se realiza un reproceso de controles de acuerdo a los criterios de aceptación del C.C.I., utilizando las Multireglas Westgard. Una vez cumplido con el C.C.I, se procede con el corrimiento de pruebas de acuerdo a lo requerido en LIS. CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 5 de 10
6 La programación del análisis de las muestras en el equipo, se lleva a cabo conforme a lo indicado en el manual de usuario del instrumento. De acuerdo a los criterios del Q. responsable del área y/o Gerente, se determina si alguna prueba requiere un reproceso, de lo contrario se procede a la validación en LIS y la generación del PDF. Para su posterior liberación de resultado a cliente por parte del área de envió de resultados. 11. Procedimientos de control de calidad. Control de Calidad Interno Material: Liquichek Immunoassay Plus Control NIVEL 1,2 y 3 Catálogo: 360 (Liquichek Immunoassay Plus Control NIVEL 1,2 y 3) Presentación: 4 x 5 ml para los niveles 1, 2 y 3. Almacenamiento: Conservar a -20ºC estable hasta la fecha de caducidad indicada. Una vez abierto y en porciones, a 2 a 8ºC 12 semanas. Frecuencia de uso: Diaria, siempre que haya muestras de pacientes por analizar. Tamaño de la corrida analítica: 12 horas (8:00 a 20:00 horas). Ubicación dentro de la corrida analítica: al inicio y al final de la corrida. (4) Preparación: Listos para su uso. Procesamiento: Se deben descongelar en el refrigerador (2 a 8ºC) y posteriormente, llevar a temperatura ambiente (15 a 25ºC) durante 15 minutos antes de su uso. Programar el análisis del material de control en el instrumento de medición de acuerdo a lo indicado en el manual de uso proporcionado por el fabricante. En el procedimiento de control de calidad se describen lo relacionado con la planificación de la calidad. 12. Evaluación Externa de la Calidad Proveedor: PACAL Frecuencia de participación: Mensual Para mayor información, refiérase al procedimiento Control de Calidad. CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 6 de 10
7 13. Interferencias Criterio: Recuperación dentro de ±10% del valor inicial. Suero Ictericia: Sin interferencias significativas hasta un valor de bilirrubinas < 701 µmol/l ó > 41 mg/dl. Hemólisis: Sin interferencias significativas hasta un valor de Hemoglobina < mmol/l ó < 1 g/dl. Lipemia (intralipid): Sin interferencias significativas hasta un valor de <2000 mg/dl. Biotina: < 81.8 nmol/l ó <20 ng/ml. IgG: < 7g/dL. IgM: < 1g/dL. IgA: <1.6g/dL. No sé han observado interferencias por factores reumatoides (hasta 1200 UI/mL) ni en muestras de pacientes en dialisis. 14. Principio del método para el cálculo de resultados incluyendo resultado de medición de incertidumbre de valores de la magnitud medida. El analizador cobas c601 calculan automáticamente la concentración de analito de cada muestra. (en pmol/l, ng/dl ó ng/l) Factor de conversión: pmol/l x = ng/dl ng/dl x = pmol/l pmol/l x = ng/l Para dar seguimiento a la incertidumbre es responsabilidad de la Gerencia de Laboratorio revisarla una vez al año. 15. Intervalos de referencia biológicos o decisión clínica. Adultos 9 Hombres Mujeres Embarazadas 9 1er trimestre 2o trimestre 3er trimestre Niños 9 Recién nacidos ng/dl ng/dl ng/dl ng/dl ng/dl ng/dl CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 7 de 10
8 6 días a 3 meses ng/dl 4 a 12 meses ng/dl 1 a 6 años ng/dl 7 a 11años ng/dl 12 a 20 años ng/dl 16. Intervalo reportable de resultados del examen ng/dl 17. Instrucción para determinar resultado cuantitativo cuando un resultado no está dentro del intervalo de medición. Los valores inferiores al límite de detección se indican como <0.023 ng/dl. Los valores superiores al intervalo de medición se indican como >7.76 ng/dl. No diluir las muestras destinadas a la determinación de FT4, ya que la T4 en sangre se encuentra en equilibrio entre la hormona Libre y la ligada a proteína. Se produce un cambio en la concentración de las proteínas de fijación, este equilibrio también sufre alteraciones. 18. Valores de alerta o críticos. > 4.0 ng/dl (Tirotoxicosis) Interpretación clínica del laboratorio. Concentraciones elevadas Hipertiroidismo. Hipertiroidismo factico. Concentraciones bajas Hipotiroidismo Primario (Defectos tiroideos intrínsecos) 20. Fuentes potenciales de variación. Ingesta de alimentos 4 horas previas al estudio 21. Referencias. 1. Química Clínica Pesce/Kaplan, Editorial Medica Panamericana, 1era edición Inserto, TSH , V 22.0, Español. 3. Guía Clínica de Pruebas de Laboratorio TIETZ, Editorial Medica Panamericana 1era edición Inserto TSH Calset , V 7.1, Español. 5. Manual del Operador cobas 6000 analyzer series V CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 8 de 10
9 Heil Wolfgang, Koberstein Rudolf, Mannheim Zawta, Reference Ranges for Adults and Children Pre-Analytical Considerations, Roche Diagnostics, 9ª edición, Campuzano Maya German, Valores Críticos en el Laboratorio Clínico: de la Teoría a la práctica. Medicina y Laboratorio 2011; 17: Control de cambios y vigencia. Versión Fecha Motivo del cambio Realizado por QC Alejandro de Marzo de de febrero de Elaboración del procedimiento. Revisión del procedimiento. Dauzon Movis, T.L.C. Victor Hugo García Jiménez. Q Ana Rosa Ramírez CONFIDENCIAL: Autorizado solo para uso interno Pag. 9 de 10
PSA libre. Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 602
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