BLOQUE II.1. PROCESO ANALÍTICO GENERAL
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- Nieves García Núñez
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1 BLOQUE II.1. PROCESO ANALÍTICO GENERAL 1. Introducción: Proceso analítico 2. Toma de muestra 3. Almacenamiento y conservación de la muestra 4. Cadena de custodia
2 BLOQUE II.1. PROCESO ANALÍTICO GENERAL 1. Introducción: Proceso analítico 2. Toma de muestra 3. Almacenamiento y conservación de la muestra 4. Cadena de custodia
3 BLOQUE II.2. PROCESO ANALÍTICO GENERAL 5. Preparación de la muestra para el análisis 5.1. Muestras sólidas 5.2. Muestras liquidas 6. Técnicas de separación Técnicas de extracción - Extracción liquido-liquido - Extracción liquido-sólido - Microextracción en fase sólida - Extracción de compuestos volátiles
4 BLOQUE II.2. PROCESO ANALÍTICO GENERAL 5. Preparación de la muestra para el análisis 5.1. Muestras sólidas 5.2. Muestras liquidas 6. Técnicas de separación Técnicas de extracción - Extracción liquido-liquido - Extracción liquido-sólido - Microextracción en fase sólida - Extracción de compuestos volátiles
5 Preparación de la muestra para el análisis Muestra Líquida Sólida Gas Separación del analito Separación del analito Transformación a estado líquido (digestión o disolución) Volatilización del analito, sin alterar la muestra. No tratamiento (técnicas de análisis de muestras sólidas) Solubilización del analito Análisis directo
6 Preparación de la muestra para el análisis Muestras sólidas La mayoría de las técnicas de análisis forense requieren poner la muestra en disolución.
7 Preparación de la muestra para el análisis Muestras sólidas Hay excepciones: volatilizar los compuestos de interés antes de su análisis.
8 Preparación de la muestra para el análisis Muestras sólidas * Disolución de una muestra: proceso de transformación de la muestra sólida en fase líquida, pudiendo realizarse este proceso con o sin cambio químico. * Disolución total: destrucción de la materia orgánica o de otros constituyentes de la matriz que puedan interferir en la recuperación del analito. Vía húmeda Fusión Vía seca
9 Preparación de la muestra para el análisis Muestras sólidas * La digestión de la muestra supone la destrucción total de la misma, por lo que no es posible identificar analitos orgánicos. * En análisis elemental, este procedimiento puede implicar riesgos de contaminación o pérdida de analitos, por lo que se recomienda preparar siempre un blanco con el fin de comparar.
10 Preparación de la muestra para el análisis Muestras sólidas Ejemplo: DIGESTION POR VÍA HÚMEDA * En presencia de ácidos fuertes (clorhídrico, nítrico, sulfúrico, perclórico, etc.) y calor (convencional) o por radiación microondas (en bombas de teflón). 1
11 Preparación de la muestra para el análisis Muestras líquidas * Si la muestra es líquida: o Facilitar la disolución por agitación mecánica. o Disolución asistida por ultrasonidos o Maceración de la muestra con el disolvente, etc. * El REACTIVO o DISOLVENTE debe producir la completa disolución de la muestra.
12 Preparación de la muestra para el análisis Muestras líquidas * Eliminación de partículas en suspensión y materia orgánica: - Filtración: Elimina las partículas en suspensión. La eficacia del proceso depende del tamaño de poro del filtro, el aparato de filtración y el procedimiento utilizado.
13 Preparación de la muestra para el análisis Muestras líquidas * Eliminación de partículas en suspensión y materia orgánica: - Centrifugación: Separación de fases en muestras líquidas.
14 BLOQUE II.2. PROCESO ANALÍTICO GENERAL 5. Preparación de la muestra para el análisis 5.1. Muestras sólidas 5.2. Muestras liquidas 6. Técnicas de separación Técnicas de extracción - Extracción liquido-liquido - Extracción liquido-sólido - Microextracción en fase sólida - Extracción de compuestos volátiles
15 Técnicas de separación Principio: transferencia de materia entre dos fases. En una de ellas la concentración del(los) analito(s) se ha reducido y en la otra se ha incrementado. * Complemento o alternativa a la simple puesta en disolución de la muestra.
16 Técnicas de separación Objetivos: Aumentar la sensibilidad del análisis. Eliminar interferencias Poner la especie de interés en el medio adecuado para su análisis.
17 Técnicas de separación Muestra con 5 analitos: A, B, C, D, E A B, C, D, E Separación de A del resto de los componentes de la muestra! Considerar los componentes de la muestra como A B C D E analitos y separarlos entre sí!
18 Técnicas de separación Técnicas de extracción TÉCNICAS DE SEPARACIÓN TÉCNICAS DIFERENTES TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS/ ELECTROFORÉTICAS (Elevada eficacia separativa) Preparación de la muestra Separaciones analíticas Clasificación de las técnicas de separación
19 Técnicas de separación Técnicas de extracción TÉCNICAS DE SEPARACIÓN TÉCNICAS DIFERENTES TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS/ ELECTROFORÉTICAS (Elevada eficacia separativa) Preparación de la muestra Separaciones analíticas Clasificación de las técnicas de separación
20 Técnicas de extracción Técnicas de separación * Objetivo: arrancar el analito de la matriz a la que está unido. * La muestra se debe poner en contacto con un extractante (sólido, líquido, gas o fluido supercrítico) en determinadas condiciones con el objeto de debilitar las interacciones analitomuestra e incrementar las interacciones analito-extractante. similia similibus solvuntur (similar disuelve a similar)
21 Técnicas de extracción Técnicas de separación Extracción líquido-líquido Principio: Diferencia de solubilidad de un analito entre dos fases líquidas inmiscibles (fase acuosa y fase orgánica). Aplicación a: * Muestras líquidas. * Compuestos preferentemente inorgánicos o compuestos orgánicos no volátiles o semivolátiles.
22 Técnicas de extracción Técnicas de separación Extracción líquido-líquido One-step liquid liquid extraction of cocaine from urine samples for gas chromatographic analysis. M. Farina Forensic Science International, Volume 127, Issue 3, Page 204 Abstract An improved technique for cocaine extraction from urine samples for gas chromatographic (GC) analysis is described. Employing a simple liquid liquid extraction (LLE) of cocaine with a mixture of ethyl ether:isopropanol (9:1) the method presents a mean recovery of 74.49%. Limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) were 5 and 20ng/ml, respectively. The method is highly precise (coefficient of variation (CV) <8%) and linear from 20 to 2000ng/ml. It can he applied to detect the presence of cocaine in urine as a marker of its recent use in drug abuse treatment protocols.
23 Técnicas de extracción Técnicas de separación Extracción en fase sólida (líquido-solido) Principio: Se hace pasar una muestra líquida (o sólida o en fase de vapor, pero en disolución) a través de una fase sólida (utiliza las mismas fases estacionarias que en cromatografía líquida de alta eficacia).
24 Técnicas de extracción Técnicas de separación Extracción en fase sólida (líquido-solido) Solid Phase Extraction of Morphine from Whole Blood by Means of Bond Elut Certify Columns Chen X-H; Hommerson ALC; Zweipfenning PGM; Franke J-P; Harmen- Boverhof CW; Ensing K and de Zeeuw R, Journal of Forensic Sciences 1993: 38: 668 Abstract The use of Bond Elut Certify columns for the isolation of morphine from whole blood was evaluated. In order to monitor possible losses and the elution profile of morphine, a small amount of the tritiated analogue was added to the samples. Four sample pre-treatment methods, three protein precipitation methods and one sonication/dilution method, were tested. The latter one gave the best results. Following the analytical procedure described, more than 80% of 3H morphine was recovered from blood samples for concentrations of morphine ranging from 5 to 4000 ng/ml.
25 Técnicas de extracción Técnicas de separación Microextracción en fase sólida (líquido-sólido) Principio: Técnica de extracción SÓLIDO-LÍQUIDO o SÓLIDO-GAS que elimina totalmente el uso de disolventes. * Consiste en una fibra de sílice fundida y revestida con un material adsorbente. La fibra está unida a un émbolo de acero inoxidable con un mango de protección.
26 Técnicas de extracción Técnicas de separación Microextracción en fase sólida (líquido-sólido) * El muestreo, separación y preconcentración del analito se produce simultáneamente.
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30 Técnicas de extracción Técnicas de separación Extracción de compuestos volátiles Compuestos orgánicos volátiles (VOCs) - Extracción de espacio de cabeza estático - Purga y trampa
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