Prueba de anticuerpos anti-vih. Anti-HIV antibody test
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- Juana Ortega Blanco
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1 ABC del laboratorio Prueba de anticuerpos anti-vih Anti-HIV antibody test Código SCPC (Sociedad Colombiana de Patología Clínica): Código CUPS (Codificación Única de Procedimientos en Salud): Sección: Endocrinología. Nivel de complejidad: media. Metodología: CMIA (Ensayo quimioluminiscente de micropartículas) Sinónimos: anticuerpos anti-hiv1/hiv2/agp24. Definición El ensayo para la detección cualitativa y simultánea del antígeno p24 del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y los anticuerpos frente al VIH tipo 1 y 2 (VIH-1 y VIH-2) es un ensayo quimioluminiscente de micropartículas (CMIA) realizado en suero o plasma humano como ayuda diagnóstica de las infecciones por el VIH-1/VIH2-2. Espectro clínico de aplicación El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) es el agente causal del síndrome de la Inmunodeficiencia humana adquirida (SIDA), un retrovirus del género Lentivirus que ataca el sistema inmune, debilitándolo, volviendo gradualmente a la persona infectada inmunodeficiente, lo que conduce a una mayor sensibilidad a infecciones y enfermedades. La pandemia del VIH/SIDA genera numerosas pérdidas humanas, deterioro de la calidad de vida de millones de personas, consecuencias económicas negativas debido al incremento de recursos necesarios para la atención en salud y la incapacidad y muerte de miles de personas en edad productiva, lo que en conjunto la sitúan como uno de los mayores desafíos para la salud humana. Según la UNICEF (del inglés, United Nations International Children s Emergency Fund) Centroamérica es la subregión más afectada, después del Caribe, por la epidemia del VIH/SIDA en la región de Latinoamérica y el Caribe. Entretanto, el SIDA es una de las primeras diez causas de muerte en tres de los seis países de Centroamérica: Honduras, Guatemala, Panamá. Se estima que en Centroamérica hay actualmente personas viviendo con VIH mientras que en América latina se encuentran de personas que viven con VIH y en el Caribe. La situación de la epidemia en Colombia es concentrada debido a la prevalencia en por lo menos una de las poblaciones con factores de vulnerabilidad: hombres que Medicina & Laboratorio / Volumen 22, Números 5-6,
2 tienen sexo con hombres supera el 5%, mientras que la prevalencia en mujeres gestantes no supera el 1%. La tendencia de la infección es creciente y la población de mayor afectación por edad es el grupo de 25 a 34 años. El VIH se transmite por vía sexual, sanguínea y vertical (infección prenatal o perinatal). Hay ciertos factores que incrementan el riesgo de que una persona contraiga el VIH como: practicar el coito anal o vaginal sin protección, padecer alguna otra infección de transmisión sexual como sífilis, herpes, clamidia, vaginosis bacteriana, entre otros, compartir agujas, jeringas, soluciones u otros materiales contaminadas usados para la inyección de drogas, recibir transfusiones sanguíneas sin garantías de seguridad o ser objeto de procedimientos médicos que impliquen corte o perforación con material instrumental no esterilizado, pincharse accidentalmente con una aguja infectada, en particular en el personal sanitario. Los grupos más expuestos a factores de vulnerabilidad y riesgo de infección por el VIH en Colombia son los hombres que tienen sexo con hombres, los trabadores sexuales, los usuarios de drogas inyectables, los adolescentes, las mujeres, en especial las gestantes, la población privada de la libertad, en situación de desplazamiento forzoso y habitantes de la calle. Los síntomas por VIH dependen del estadio en que se encuentre; en las primeras semanas siguientes al contagio las personas pueden no manifestar síntomas o presentar una afección de tipo gripal, con fiebre, cefalea, erupción o dolor de garganta. A medida que la infección va debilitando el sistema inmunitario aparecen manifestaciones clínicas como las ocasionadas por infecciones oportunistas, ciertos tipos de cáncer, síntomas generales y neurológicos u otras manifestaciones clínicas graves. Las pruebas para la detección del VIH incluyen pruebas de tamizaje y pruebas confirmatorias. Dentro de las pruebas de tamizaje, también conocidas como pruebas de escrutinio, cribado, screening o presuntivas, se encuentran las pruebas rápidas, fundamentadas en la afinidad antígeno-anticuerpo medida por inmunocromatografía, membranas de flujo y aglutinación, y las pruebas basadas en el principio de inmunoensayo enzimático (EIA), que pueden ser tipo ELISA, MEIA, CMIA, ECLIA, CLIA, entre otras. Actualmente, se utilizan pruebas de cuarta generación para el tamizaje de VIH, las cuales permiten la detección simultánea de anticuerpos contra el VIH-1/VIH-2 y del antígeno p24 del virus, lo que reduce el período de ventana de detección de 13 a 15 días, pudiendo revelar más temprano si la persona se encuentra infectada, e incrementa la sensibilidad hasta un 99,9%, disminuyendo la posibilidad de obtener un falso negativo. Las pruebas confirmatorias, también llamadas pruebas suplementarias, corresponden a las técnicas de inmunoelectrotransferencia (p. ej. el Western Blot), 260 Volumen 22, Números 5-6, / Medicina & Laboratorio
3 Prueba de anticuerpos anti-vih el cultivo viral y los ensayos de inmunofluorescencia indirecta (IFI). Las pruebas de confirmación se deben utilizar sólo para resolver los casos con resultados no concluyentes. Actualmente, una variedad de países aplican una selección de diferentes pruebas de VIH en un orden particular para reducir al mínimo los costos al disminuir el número de análisis confirmatorios a realizar. La Organización Mundial de la Salud (OMS) recomienda que los países pongan a prueba los algoritmos que utilizan pruebas rápidas de diagnóstico o combinaciones de pruebas rápidas y análisis inmunoenzimáticos, en lugar de combinaciones de análisis inmunoenzimáticos e inmunoelectrotransferencias. En el caso de Colombia, en marzo de 2015, el Instituto Nacional de Salud (INS) publicó el Protocolo de Vigilancia en Salud Pública para el evento de VIH-SIDA, donde indican los algoritmos para el diagnóstico en los siguientes grupos: mayores de 18 meses, adolescentes y adultos no gestantes, gestantes y menores de 18 meses. En general las pruebas presuntivas para VIH pueden ser rápidas o enzimoinmunoanálisis (EIA) de tercera o cuarta generación. Como segunda prueba, posterior a un resultado reactivo, se realiza una prueba diferente a la usada inicialmente que puede ser en formato de prueba rápida o de EIA de tercera o cuarta generación. Si luego de estos dos resultados el diagnóstico no es concluyente se realiza una tercera prueba que puede ser otra prueba rápida o una prueba EIA (de tercera o cuarta generación diferentes a las ya utilizadas), determinación de la carga viral (ARN cuantitativo) o un Western Blot. Fundamento El ensayo para determinar la presencia de antígeno p24 del VIH y de los anticuerpos frente al VIH-1 y el VIH-2 es un inmunoanálisis quimioluminiscente de micropartículas de dos pasos. En el primer paso se combinan la muestra, el tampón de lavado, el diluyente del ensayo y las micropartículas paramagnéticas recubiertas de antígenos recombinantes del VIH-1/VIH-2 y anticuerpos monoclonales de ratón anti-p24, a las que se unen los anticuerpos contra el VIH-1/VIH-2 y los antígenos p24 del VIH presentes en la muestra. Después de un lavado se adiciona el conjugado marcado con acridinio (antígenos recombinantes de VIH-1/VIH-2, péptidos sintéticos y los anticuerpos monoclonales de ratón anti-p24 del VIH) al que se unen los anticuerpos contra el VIH-1/ VIH-2 y los antígenos p24 del VIH. Luego de otro ciclo de lavado se adicionan las soluciones preactivadora y activadora y la reacción quimioluminiscente resultante se mide en unidades relativas de luz (URL). Existe una relación directamente proporcional entre la cantidad de antígeno del VIH y de anticuerpos anti-vih presentes en la muestra y las URL detectadas por el sistema óptico del equipo. La presencia o ausencia del antígeno p24 del VIH o Medicina & Laboratorio / Volumen 22, Números 5-6,
4 de los anticuerpos anti-vih-1/vih-2 en la muestra se determina comparando la señal quimioluminiscente de la reacción respecto a la señal del punto de corte (S/ CO) determinado por la calibración del ensayo. Control de calidad La especificidad del ensayo ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo es mayor o igual que 99,5% y la sensibilidad del 100%. El requisito de control de calidad recomendado para el ensayo es el análisis de una muestra única de los controles de diferente concentración cada 24 horas, cada día de su uso. En el Laboratorio Clínico Hematológico se realiza diariamente el corrido de dos controles, uno no reactivo y otro reactivo, usando controles de primera opinión; también se procesa un control externo a través del Colegio Americano de Patólogos (CAP), con una periodicidad de tres veces al año. Preparación del paciente y manejo de las muestras Preparación del paciente El paciente no requiere condiciones de ayuno ni otras condiciones especiales. Tipo de muestra Suero humano (incluyendo el suero recogido en tubos con separador) Plasma recogido con: EDTA de potasio, heparina de sodio, heparina de litio, citrato de sodio, ACD, CPDA-1, CPD, oxalato potásico. Manejo y conservación de las muestras Después de su recogida, las muestras de suero o plasma separadas se pueden almacenar hasta por 3 días a temperatura ambiente (entre 15 C y 30 C) o hasta 14 días refrigeradas a una temperatura entre 2 C y 8 C. Si se supone que el análisis se va a retrasar más de los tiempos mencionados se debe separar el suero o el plasma del coágulo, los eritrocitos o el separador del gel y almacenar congelado a una temperatura igual o inferior a -20 C. No se recomienda someter las muestras a múltiples ciclos de congelación y descongelación. Antes de transportar las muestras se recomienda retirar del coágulo, el separador o los eritrocitos. En este caso las muestras se deben preparar y etiquetar de acuerdo a las normativas vigentes que rigen el transporte de muestras clínicas y sustancias infecciosas. Las muestras se pueden enviar a una temperatura entre 2 C y 8 C (con hielo) o a -20 C o menos (con hielo seco). No se debe superar el periodo de almacenamiento de 14 días para las muestras transportadas entre 2 C y 8 C (con hielo). 262 Volumen 22, Números 5-6, / Medicina & Laboratorio
5 Prueba de anticuerpos anti-vih Valores esperados El sistema ARCHITECT calcula el punto de corte (CO) utilizando la media de la señal quimioluminiscente (URL) a partir de tres réplicas del calibrador 1 y almacena el resultado para cada lote de reactivos de calibración. El sistema calcula un resultado basado en la relación de la URL de la muestra respecto a las URL del punto de corte para cada muestra y control. De esta manera: Punto de corte (CO) = valor medio de las URL del calibrador 1 x 0,40 Señal del punto de corte (S/CO) = URL muestra/url del punto de corte Las muestras con una S/CO menor que 1,00 se consideran NO REACTIVAS. Las muestras con una S/CO mayor o igual que 1,00 se consideran REACTIVAS. Interpretación de resultados Los resultados NO REACTIVOS indican que el antígeno p24 del VIH y los anti-vih-1/vih-2 no fueron detectados, por lo que se consideran negativos para la infección por VIH y la muestra no requiere ser evaluada nuevamente. Un resultado REACTIVO indica la posible presencia del antígeno p24 del VIH, los anti-vih-1/vih-2, o ambos. Toda muestra inicialmente reactiva se debe centrifugar y volver a analizar por duplicado. La reactividad en una o ambas pruebas repetidas es altamente predictiva de la presencia del antígeno p24 del VIH y los anticuerpos contra el VIH-1/VIH-2; en este caso la muestra se reporta como reactiva y debe ser evaluada por un ensayo complementario. La no reactividad en ambas pruebas repetidas indica que el antígeno p24 del VIH y los anti-vih-1/vih-2 no fueron detectados, por lo que se debe reportar la muestra como no reactiva. Los resultados del ensayo ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo y ensayos suplementarios se deben interpretar junto con otros datos clínicos del paciente, la historia médica y otros resultados de laboratorio. Interferentes No utilizar muestras que hayan sido inactivadas por calor, que se encuentren mezcladas, intensamente hemolizadas o con contaminación microbiana evidente No utilizar líquidos corporales distintos de suero o plasma Medicina & Laboratorio / Volumen 22, Números 5-6,
6 Las muestras de suero o plasma no deben presentar fibrina, eritrocitos ni otras partículas en suspensión Comprobar la presencia de burbujas en las muestras antes de procesarlas. En caso de presentarlas retírelas con un bastoncillo Limitaciones Si los resultados del ensayo no son coherentes con los datos clínicos se recomienda realizar otro análisis para confirmar los resultados. Las muestras de pacientes que hayan recibido preparados a base de anticuerpos monoclonales de ratón con fines diagnósticos o terapéuticos pueden contener anticuerpos humanos antiratón (HAMA) que pueden causar resultados falsamente elevados o disminuidos en los ensayos que emplean anticuerpos monoclonales de ratón. Los reactivos del ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo contienen un componente que reduce el efecto de las muestras reactivas para HAMA. Los anticuerpos heterófilos del paciente pueden reaccionar con las inmunoglobulinas del reactivo e interferir en los inmunoanálisis in vitro. Los pacientes en contacto con animales o productos con suero de origen animal pueden ser propensos a esta interferencia y dar valores anómalos. Bibliografía recomendada Abbott laboratories. HIV Ag/Ab Combo. Wiesbaden, Alemania García F, Álvarez M, Bernal C, Chueca N, Guillot V. Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH, del tropismo viral y de las resistencias a los antirretrovirales. Enferm Infecc Microbiol Clin 2011; 29: Organización Mundial de la Salud. Nota descriptiva N 360: VIH/SIDA Disponible: fs360/es/. Consultado: abr Organización Mundial de la Salud, Organización Panamericana de la Salud. Métodos de prestación de servicios de orientación y pruebas de detección del VIH: marco de un programa estratégico. Washington D.C., Estados Unidos: Organización Mundial de la Salud; República de Colombia, Ministerio de Salud y Protección Social, Instituto Nacional de Salud. Protocolo de Vigilancia en Salud Pública: VIH - SIDA Disponible: gov.co/lineas-de-accion/subdireccion-vigilancia/sivigila/protocolos%20sivigila/pro%20 VIH%20-%20SIDA.pdf. Consultado: abr República de Colombia, Ministerio de Salud y Protección Social, Fondo de Población de las Naciones Unidas (UNFPA), Instituto de Evaluación Tecnológica en Salud, Asociación Colombiana de Infectología. Guía de práctica clínica (GPC) basada en la evidencia científica para la atención de la infección por VIH/Sida en adolescentes (con 13 años o más de edad) y adultos. Bogotá, Colombia Disponible: co/sites/rid/lists/bibliotecadigital/ride/vs/ PP/GPC-corta-VIH-ADOLESCENTES-ADUL- TOS-final.pdf. Consultado: abr Volumen 22, Números 5-6, / Medicina & Laboratorio
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