LDL Liquiform. 01 Espanhol - Ref.: 111. Ref.:111. Instrucciones de Uso. Finalidad. Principio. Metodologia. Reactivos
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- José Montes Quintero
- hace 6 años
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1 LDL Liquiform Instrucciones de Uso Ref.: Finalidad. Sistema para la determinación homogénea directa del colesterol LDL en suero y plasma. [Solamente para uso diagnóstico in vitro.] Principio. En la primera reacción, un tensioactivo específico presente en el Reactivo solubiliza los quilomicrones, las lipoproteínas de alta densidad y las lipoproteínas de muy baja densidad (HDL y VLDL). El colesterol solubilizado es consumido por la acción de la colesterol esterasa (CHE) y de la colesterol oxidasa (CHOD) en una reacción no formadora de color. En la segunda fase, un tensioactivo presente en el Reactivo solubiliza el colesterol de la LDL, que es hidrolizado por la colesterol esterasa a colesterol libre y a ácidos grasos. El colesterol libre es oxidado por la colesterol oxidasa a colest-4-en-ona y peróxido de hidrógeno. Luego ocurre una reacción de acoplamiento entre el peróxido de hidrógeno, la 4-aminoantipirina y la disulfobutilmetatoluidina sódica (DSBmT), catalizada por la peroxidasa, produciendo una quinoneimina que tiene un máximo de absorbancia a 546 nm. La intensidad del color formado es directamente proporcional a la concentración del colesterol LDL en la muestra. Primera fase CHE + CHOD LDL+HDL+VLDL+Quilomicrones + Tensioactivo LDL+Producto incoloro Segunda fase LDL + Tensioactivo CHE Características del sistema. Colesterol + Ácidos grasos CHOD Colesterol + O Colest-4-en-ona + HO Peroxidasa HO + DSBmT + 4-Aminoantipirina Quinoneimina + 4 HO El procedimiento para la determinación del colesterol LDL, que combina la ultracentrifugación con la precipitación química, basado en el método de referencia (MR) del Centers for Disease and Prevention (CDC) insume mucho tiempo y operaciones y tiene aplicación limitada en el laboratorio clínico. El sistema LDL Liquiform de Labtest es un método homogéneo líquido para la medición directa del colesterol LDL y consiste de un proceso simple y de fácil ejecución. Posee equivalencia con el método de referencia y presenta características de precisión y exactitud que superan significativamente los requisitos de desempeño propuestos por el Programa Nacional de Educación en Colesterol (NCEP), en vigencia desde 998. El sistema LDL Liquiform está certificado por la Cholesterol Reference Method Laboratory Network (CRMLN). El programa de certificación de la CRMLN utiliza métodos de referencia o métodos de comparación que son rigurosamente estandarizados por los métodos de referencia del CDC. La especificidad es conseguida por la acción selectiva del tensioactivo presente en el Reactivo que posibilita el consumo del colesterol presente en las partículas no LDL. Valores de triglicéridos de hasta 93 mg/dl, bilirrubina hasta 0 mg/dl, hemoglobina hasta 500 mg/dl, ácido ascórbico hasta 50 mg/dl y gammaglobulinas hasta 5000 mg/dl no interfieren significativamente en la reacción. La flexibilidad del método lo torna fácilmente aplicable a analizadores automáticos capaces de procesar una reacción de punto final con dos reactivos. Metodologia. Reactivos. - Tensioactivo selectivo. Reactivo - Almacenar entre - 8 ºC. Reactivo líquido listo para usar. No congelar. Contiene tampón ph 6,3; colesterol esterasa <500 U/L; colesterol oxidasa <500 U/L, peroxidasa <300 U/L, 4-aminoantipirina <0,%; ascorbato oxidasa <3000U/L y tensioactivo <,0%.. - Reactivo - Almacenar entre - 8 ºC. Reactivo líquido listo para usar. No congelar. Contiene tampón ph 6,3; tensioactivo <,0% y DSBmT <,0 mm Calibrador - Almacenar entre - 8 ºC. Reactivo liofilizado. Concentración indicada en el rótulo del frasco. Después de la reconstitución es estable semanas entre - 8 ºC. Preparado que contiene colesterol LDL humano y azida sódica 0,%. Los reactivos no abiertos almacenados en las condiciones indicadas son estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo. Los reactivos y, cuando mantenidos en bandeja refrigerada en el equipo, son estables hasta 4 semanas. Este período de estabilidad puede ser cambiado debido a las características y condiciones de manutención del equipo. Por lo tanto, sugerimos que el control de la calidad sea utilizado para monitorear el desempeño de los reactivos. Los reactivos después de abiertos cuando almacenados bien vedados entre y 8 ºC y no sometidos a contaminaciones química o microbiana, son estables hasta la fecha de expiración indicada en el rótulo. 0 Espanhol - Ref.:
2 Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la manipulación de los reactivos, los que no deben ser pipeteados con la boca. Los reactivos deben ser protegidos de la luz. El Calibrador contiene derivados de sangre humana y presentó resultados negativos a la presencia de HBsAg y de anticuerpos HCV y HIV utilizando ensayos aprobados. No obstante, ningún test conocido puede asegurar que productos derivados de sangre humana no transmitan enfermedades infecciosas. Por lo tanto, se recomienda manipularlos como siendo potencialmente infectivos, siguiendo las normas establecidas para bioseguridad. El Calibrador contiene azida sódica que es tóxica. No ingerir y, en caso de contacto con los ojos lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar auxilio médico. La azida puede formar compuestos altamente explosivos con las cañerías de plomo y de cobre. Por lo tanto, utilizar grandes volúmenes de agua para descartar el Calibrador. Concentraciones de triglicéridos de hasta 93 mg/dl no interfieren en los resultados de colesterol LDL. Muestras con triglicéridos >93 mg/dl no deben ser diluidas. Materiales necesarios y no provistos. Fotómetro capaz de medir con exactitud absorbancias entre 540 y 550 nm Precauciones y cuidados especiales Incubador o baño-maría a 37 ºC. Pipetas para medir muestras y reactivos. Cronómetro. Muestra Usar suero o plasma (heparina-litio y EDTA). Muestras con citrato u oxalato no deben ser usadas porque producen resultados falsamente disminuidos. Las muestras de suero o plasma pueden permanecer entre 5-30 ºC por hasta 4 horas. Cuando las mediciones no fueran realizadas dentro de las 4 horas, las muestras pueden ser almacenadas entre - 8 ºC por 5 días y por 30 días a 0 ºC negativos. Se debe almacenar a temperatura 80 ºC negativos cuando hubiera necesidad de preservación por períodos mayores de tiempo. Evitar los congelamientos y descongelamientos repetidos. Las muestras descongeladas deben ser bien homogeneizadas antes de su utilización. No usar vórtex o similar. No usar muestras con señales de contaminación microbiana. Las muestras de sangre deben ser consideradas como potencialmente infectivas. Por lo tanto, al manipularlas se deben seguir las normas establecidas para bioseguridad. Para descartar los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar las normas locales, estatales o federales de protección ambiental. Interferencias Concentraciones de bilirrubina total de hasta 0 mg/dl, hemoglobina hasta 500 mg/dl, ácido ascórbico hasta 50 mg/dl, gammaglobulinas hasta 5000 mg/dl y triglicéridos hasta 93 mg/dl no interfieren significativamente en la reacción. Muestras con concentraciones de triglicéridos >93 mg/dl no deben ser diluidas. Muestras con bilirrubina, hemoglobina, ácido ascórbico y gammaglobulina con concentraciones mayores a las arriba referidas deben ser diluidas en NaCl 50 mmol/l (0,85%) antes de realizar los ensayos. Multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas de interferencia en los resultados y en la metodología, se sugiere consultar: Preparación del calibrador. Adicionar,0 ml de agua desionizada o destilada al contenido del frasco del Calibrador. Dejar en reposo durante 5 minutos. Mezclar por inversión suave evitando la formación de espuma. Estable semanas entre - 8 ºC en recipiente herméticamente cerrado para evitar la evaporación del solvente. Procedimiento La metodología en formato bi-reactivo debe ser necesariamente realizada en dos etapas. Este procedimiento no es aplicable en analizadores semi-automáticos que utilizan únicamente cubeta de flujo. Rotular tubos de ensayo y proceder como sigue: Muestra Calibrador Reactivo Homogeneizar e incubar a 37 ºC durante 5 minutos. El nivel del agua en el baño debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de ensayo. Determinar las absorbancias A de la muestra y del Calibrador a 546 nm ( ), ajustando el cero con agua desionizada. Reactivo Homogeneizar y incubar a 37 ºC durante 5 minutos. Determinar las absorbancias A de la muestra y del Calibrador a 546 nm ( ), ajustando el cero con agua desionizada. Las absorbancias son estables por 5 minutos. Cálculos. Ver Linealidad. La primer lectura de la absorbancia (A ) debe ser corregida al volumen final de la reacción obteniéndose A concentración de LDL. Muestra 0,0 ml 0,75 ml cor Calibrador 0,0 ml 0,75 ml 0,5 ml 0,5 ml, antes de realizar el cálculo de la 0 Espanhol - Ref.:
3 A = A x 0,75 cor Colesterol LDL (mg/dl) = CC: concentración del Calibrador Ejemplo Muestra (A - A ) Calibrador (A - A ) x CC Muestra: A = 0,004 A cor = 0,003 A = 0,9 Calibrador: A = 0,00 A = 0,005 A = 0,54 Concentración del Calibrador: 3 mg/dl cor cor cor 0,9-0,003 Colesterol LDL (mg/dl) = x 3 = 40 0,54-0,005 interno de la calidad. El laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que defina con claridad los reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. es deben ser utilizados para evaluar la imprecisión y desviaciones de calibración. Recomiéndase utilizar un sistema de reglas de control para verificar la estabilidad del sistema de medición. Valores deseables o recomendables. Los siguientes valores substituyen a los de referencia y fueron determinados a partir de datos epidemiológicos tratados estadísticamente, que relacionan las concentraciones del colesterol con la prevalencia de la enfermedad arterial coronaria (DAC). Clasificación ATP III - Colesterol Total, LDL y HDL (mg/dl) Debido a la gran reproducibilidad que puede ser obtenida con la metodología, el método del factor puede ser empleado. FACTOR = CC Calibrador (A - A ) cor Colesterol Total Deseable Límite elevado Adultos 3 < Colesterol LDL (mg/dl) = Teste (A -A Ejemplo cor 3 Factor = = 74 0,54-0,005 ) x Factor Colesterol LDL Óptimo Limite óptimo Limite elevado Muy elevado Adultos 3 < Colesterol LDL (mg/dl) = (0,9-0,003) x 74 = 40 Calibración. CDC. El Calibrador es trazable al método de referencia del Calibraciones manuales Obtener el factor de calibración al usar un nuevo lote de reactivos o cuando el control interno de la calidad lo indique. Colesterol HDL Bajo (deseable) Adultos 3 <40 60 Sistemas automáticos Blanco de reactivos: agua o solución de cloruro de sodio 50 mmol/l (0,85%); Estándar: usar el calibrador del producto; Intervalos de calibración; Calibración en puntos al cambiar de lote; Calibración en puntos cuando el control de calidad lo indique. Linealidad La reacción es lineal entre 6,6 y 99 mg/dl. Para concentraciones superiores a 99 mg/dl, diluir la muestra con NaCl 50 mmol/l (0,85%), realizar una nueva determinación y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. Colesterol Total (mg/dl) Niños yadolescentes 4 Edad: a 9 años Deseable Limítrofe Colesterol LDL (mg/dl) Niños yadolescentes 4 Edad: a 9 años Deseable Limítrofe <70 70 a <0 0 a Espanhol - Ref.:
4 Colesterol HDL (mg/dl) Niños yadolescentes 4 Edad: <0 años Deseable Edad: 0 a 9 años Deseable mg/dl x 0,059 = mmol/l colesterol LDL Reproducibilidad - Imprecisión Total Muestra Muestra Muestra 3 N Media 98, 4,7 07,3 DE,,8 3,6 CV (%),7,95,73 Características de desempeño Estudios de recuperación. En dos muestras con concentraciones de LDL iguales a 55, mg/dl y 4,5 mg/dl se adicionaron cantidades diferentes del analito, obteniéndose los siguientes resultados: Actividad (mg/dl) Inicial 55, 4,5 El error sistemático proporcional medio estimado es igual a -0,0 mg/dl para el nivel de 30 mg/dl y -0,4 mg/l para el nivel de 60 mg/dl ó 0,5%, significativamente menor que el error sistemático analítico especificado por el National Cholesterol Education Program (NCEP) que es ±4,0%. Estudios de comparación de métodos. La exactitud del método fue verificada por comparación con el método de ultracentrifugación obteniéndose los siguientes resultados: Número de muestra Media (mg/dl) Ecuación da regresión Utilizando la ecuación de regresión el error sistemático (bias) estimado es igual a -,68% para el nivel de 30 mg/dl y -,% para el nivel de 60 mg/dl. Estos errores son menores que el error sistemático analítico especificado por el National Cholesterol Education Program (NCEP) que es ±4,0%. Estudios de precisión. Los estudios de precisión fueron realizados utilizando tres muestras. Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo Muestra Muestra Muestra 3 Concentración Añadida 53,3 43, Coeficiente de correlación N Esperada 08,5 84,6 Método Referencia (MR) Media 98, 46,5 09,8 5 Encontrada 0,3 8, ,,5 LDL Liquiform = 0,96*(MR)+3,0 mg/dl 0,96 DE 0,7 0,96,3 Percentaje de Recuperación (%) 0,7 98 LDL Liquiform CV (%) 0,73 0,66 0,6 La imprecisión encontrada cumple con la especificación del National Cholesterol Education Program (NCEP) que es 4,0%. El error total (error aleatorio + error sistemático) estimado es igual a 5,5% para el nivel de 30 mg/dl y 5,9% para el nivel de 60 mg/dl. Los resultados indican que el método cumple con la especificación del NCEP para el error total (,0%). Sensibilidad metodológica. Una muestra que no contenía colesterol LDL fue utilizada para calcular el límite de detección del ensayo, encontrándose un valor igual a 0,78 mg/dl, equivalente a la media de 0 ensayos más desviaciones estándar. Efectos de la dilución de la matriz. Una muestra con una concentración de,4 mg/dl fue utilizada para evaluar la respuesta del sistema a las diluciones de la matriz con solución de NaCl 50 mmol/l (0,85%). Usando factores de dilución iguales a y 4 se encontró una recuperación media del 0%, que corresponde a un error sistemático promedio igual al %. Significado clínico. La LDL es un producto del catabolismo de la VLDL. La hidrólisis de los triglicéridos de la VLDL por la lipoproteína lipasa (LPL) lleva a la formación de una lipoproteína de corta vida, denominada lipoproteína de densidad intermedia (IDL). Ésta, enseguida, es catabolizada por la lipasa hepática, formando la partícula de LDL, rica en colesterol. El catabolismo de la LDL sucede en el hígado y en los tejidos periféricos, a través principalmente de la interacción de esta lipoproteína con receptores de alta afinidad presentes en la membrana celular. Después de la unión de la LDL con el receptor en la superficie celular, la membrana de la célula se invagina, interiorizando la lipoproteína y formando vesículas endocíticas, las que se funden con los lisosomas intracelulares, y la LDL es hidrolisada por enzimas. El componente proteico es hidrolisado a aminoácidos y el colesterol esterificado es hidrolisado a colesterol libre por acción de una lipasa ácida. Este colesterol formado es utilizado en la síntesis de membranas y en la regulación de eventos metabólicos que involucran la síntesis de colesterol endógeno y la esterificación del colesterol libre. El colesterol formado inhibe también la síntesis de los receptores de LDL, interrumpiendo la fijación de la LDL, evitando así que las células queden sobrecargadas de colesterol. Con el aumento de los niveles de LDL en el plasma, las células removedoras captan mayores cantidades de la lipoproteína circulante para degradación. Un receptor en el macrófago se une a las formas oxidadas de la LDL y las internaliza. En la pared arterial, tanto los macrófagos como las células del músculo liso, sobrecargadas de ésteres de colesterol por haber actuado en el mecanismo de remoción descripto antes, se transforman en células espumosas que son el marco de la placa aterosclerótica. 04 Espanhol - Ref.:
5 Estudios retrospectivos y prospectivos demuestran claramente una interrelación curvilínea entre los niveles del colesterol sérico, más específicamente el colesterol LDL, y la patogénesis de la arterioesclerosis y de la Enfermedad Arterial Coronaria (DAC). Entre tanto, se observa que el colesterol HDL tiene un efecto protector en la DAC. Aún con valores de colesterol dentro de los límites deseables, los valores elevados del colesterol LDL están asociados a un aumento del riesgo para la DAC. Los valores aumentados de LDL pueden ser encontrados en la diabetes mellitus, en el hipotiroidismo, en las hepatopatías, en la enfermedad renal crónica, en la hipercolesterolemia familiar, en la menopausia, en fumadores, en hipertensos, en individuos medicados con atenolol, propranolol, captopril, carbamazepina, furosemida, lacidipina y anticonceptivos orales. Tanto el colesterol total como las fracciones LDL y VLDL pueden ser disminuidos con dieta o con medicamentos. La reducción del % en el valor del Colesterol Total disminuye la prevalencia de la DAC en aproximadamente un %. Las concentraciones del colesterol en las fracciones LDL y VLDL y en la fracción HDL dependen de metabolismos distintos y no se debe intentar buscar una correlación entre sus valores de concentración. Observaciones. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos.. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa potencial de errores analíticos. El agua desionizada o destilada utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad megaohm.cm o conductividad microsiemens/cm y concentración de silicatos <0, mg/l. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer un programa de control de la calidad del agua. Referencias. Bachorik PS, Ross JW. Clin Chem 995;4: Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 98; 7: Executive Summary of the Third report of the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III). JAMA 00;85: Leite PF, Martinez TLR, Halpern A, Cendoroglo MS, Novazzi JP, Fonseca FAH, Dias JCA. Risco cardiovascular: fatores metabólicos e nutricionais: diagnóstico e tratamento. São Paulo: Loyola, 994. p Labtest: Datos de Archivo. Presentación Producto LDL Liquiform Están disponibles aplicaciones para sistemas automáticos. *El número de ensayos en aplicaciones automáticas depende de los parámetros de la programación. Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantía] Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto, dentro de las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en los rótulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente. Labtest Diagnóstica S.A. Referencia -/40 CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Servicio de Apoyo al Consumidor Contenido X 30 ml X 0 ml X,0 ml sac@labtest.com.br Revisión: Julio, 0 Ref.: 803 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reproducción bajo previa autorización 05 Espanhol - Ref.:
6 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro Symbols used with ivd devices Conteúdo suficiente para < n > testes Contenido suficiente para < n > tests Contains sufficient for < n > tests Risco biológico Riesgo biológico Biological risk Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) Marca CE Marcado CE CE Mark Calibrator Material Tóxico Tóxico Poison Calibrator Material Reagente Reactivo Reagent Limite de temperatura (conservar a) Temperatura limite (conservar a) Temperature limitation (store at) Fabricado por Elaborado por Manufactured by Representante Autorizado na Comunidade Europeia Representante autorizado en la Comunidad Europea Authorized Representative in the European Community Número do lote Denominación de lote Batch code Consultar instruções de uso Consultar instrucciones de uso Consult instructions for use e Número do catálogo Número de catálogo Catalog Number e negativo negativo Negative control Adições ou alterações significativas Cambios o suplementos significativos Significant additions or changes e positivo positivo Positive control Produto diagnóstico in vitro Dispositivo de diagnóstico in vitro In vitro diagnostic device e Liofilizado Liofilizado Lyophilized Corrosivo Corrosivo Corrosive Período após abertura Período post-abertura Period after-opening Ref.: 0 06 Espanhol - Ref.:
HDL LE. 01 Espanhol - Ref.: 98. Ref.:98. Instrucciones de Uso. Finalidad. Principio. Metodologia. Reactivo Características del sistema.
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