SODIO ENZIMÁTICO. 01 Español - Ref.: 124. Ref.:124. Instrucciones de Uso. Finalidad. Principio. Precauciones y cuidados especiales
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- María Concepción Cano Ruiz
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1 SODIO ENZIMÁTICO Instrucciones de Uso Ref.:24 Finalidad. Sistema para determinación cuantitativa de ión sodio en muestras de suero, por reacción enzimática, en modo cinético. [Solamente para uso diagnóstico in vitro.] Principio. El ión sodio activa la reacción enzimática entre β-d-galactosidasa dependiente de sodio y su sustrato ONPG (O-nitrofenil-β-D-galactopiranosa) convirtiéndolo a O- nitrofenil y galactosa. La velocidad de formación del producto en 405 nm está relacionada a la cantidad de sodio presente en la muestra. ONPG Características del sistema. Metodología. Reactivos CAL - 4. CAL 2 - Na+ β-d-galactosidasa O-nitrofenil + galactosa El método Sodio Enzimático - Labtest fue desarrollado utilizando la especificidad de la enzima β-d- galactosidasa dependiente de sodio y es una alternativa práctica a las metodologías fotometría de llama y Electrodo Ión Selectivo (ISE) que demandan el uso de sistemas específicos. Los componentes de la reacción se encuentran distribuidos en 2 reactivos, listos para uso, confiriendo mayor estabilidad a la forma líquida. La gran especificidad analítica, de sencilla y facil aplicación en analizadores automáticos, capaces de medir absorbancias en 405 nm, permite la realización de la medición del ión juntos con los demás exámenes bioquímicos, confiriendo rapidez y practicidad al proceso analítico. Enzimática. Reactivo - Listo para uso. Almacenar entre 2-8 ºC. Contiene tampón <500 mm ph 8,5; cryptand >0,4mM; β-d- galactosidasa <8U/mL, isotiazolona 0,02%. Reactivo 2 - Listo para uso. Almacenar entre 2-8 ºC. Contiene tampón <500 mm ph 6,5; ONPG >0,5 mm; isotiazolona 0,02%. Calibrador - Listo para uso. Almacenar entre 2-8 ºC. Ver la concentración en el rótulo del frasco. Preparación líquida que contiene iones sodio en solución tampón 50 mm ph 7,4 y azida sódica <0,095%. Calibrador 2 - Listo para uso. Almacenar entre 2-8 ºC. Ver la concentración en el rótulo del frasco. Preparación líquida que contiene iones sodio en solución tampón 50 mm ph 7,4 y azida sódica <0,095%. Los reactivos deben permanecer fuera de la temperatura de almacenamiento solamente por el tiempo necesario para obtenerse el volumen a ser utilizado. Los reactivos no abiertos, almacenados en las condiciones indicadas, son estables hasta la fecha de caducidad impresa en el rótulo. Durante la manipulación, los reactivos y los calibradores están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden causar reducción de su estabilidad. Se debe asegurar que los calibradores estén en equilibrio con la temperatura ambiente antes del uso. Los calibradores deben ser homogeneizados con suavidad antes del uso Se debe asegurar que la determinación de sodio sea realizada antes de la determinación de potasio siempre que ambos los analitos sean determinados en la misma muestra. Se sugiere insertar, en el protocolo de los instrumentos automáticos, el lavado de la sonda antes de la realización del ensayo para determinación de sodio, con la finalidad de reducir la contaminación del reactivo oriunda de arrastre. La existencia de burbujas en los reactivos y/o en las muestras (calibradores, controles y muestras de pacientes) durante la ejecución del ensayo es causa común de errores en la determinación del analito. Se sugiere no mezclar reactivos de lotes distintos. Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la manipulación de los reactivos, los que no deben ser pipeteados con la boca. Se debe tener cuidado para evitar la ingestión y en caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y buscar auxilio médico. Los calibradores contienen azida sódica que es tóxica. Se debe tener cuidado para evitar la ingestión, y en caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y buscar auxilio médico. La azida puede formar compuestos altamente explosivos con las cañerias de plomo y cobre. Por lo tanto, utilizar grandes volúmenes de agua para descartar reactivos y calibradores. Material necesario y no provisto Precauciones y cuidados especiales Analizador capaz de medir con exactitud absorbancia en 405 nm. es de la línea Qualitrol H - Labtest. Pipetas para medir muestras y reactivos. Cronómetro. 0 Español - Ref.: 24
2 Usar solamente suero. El analito es estable por 7 días entre 2-8 ºC y hasta 2 meses en temperatura igual o inferior a 20 ºC negativos, almacenado en recipiente apropiado para congelamiento. Asegurar que las muestras estén descongeladas y homogeneizadas antes de su utilización. No usar muestras con señales de contaminación o muestras congeladas y descongeladas repetidas veces. Se debe crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) para la recolección, preparación y almacenamiento de la muestra. Destacamos que los errores debidos a la muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el procedimiento analítico. Como ningún ensayo conocido puede asegurar que las muestras de sangre no transmitan infecciones, todas ellas deben ser consideradas como potencialmente infectivas. Por lo tanto, al manipularlas se debe seguir las normas establecidas para bioseguridad. Para descartar los reactivos y el material biológico, sugerimos aplicar las normas locales, estatales o federales de protección ambiental. Concentraciones de cloruro de potasio (KCl) hasta 0 mm, bilirrubina conjugada hasta 40 mg/dl, bilirrubina no conjugada hasta 40 mg/dl, ácido ascórbico hasta 0 mm, hemoglobina hasta 500 mg/dl y triglicéridos hasta 000 mg/dl no producen interferencias significativas. Sistema manual y semi-automático. Muestra Interferencias Procedimiento Identificar tres tubos con las siguientes denominaciones: Calibrador, Calibrador 2 y Test. Pipetear conforme establecido en la tabla abajo: En caso de reducción de los volúmenes, es fundamental que se observe el volumen mínimo necesario para la medición fotométrica. Volúmenes de muestras menores que 0,0 ml son críticos en aplicaciones manuales y deben ser usados con cautela porque aumentan la imprecisión de la medición. Cálculos Sistema manual. Calcular la diferencia entre la absorbancia y la absorbancia 2 para cada calibrador ( Abs): N 2 Calcular el factor según la ecuación descripta a continuación: [Cal. ] = concentración del Calibrador [Cal. 2] = concentraçión del Calibrador 2 [Cal. 2] - [Cal. ] 62,2-08, 54, Factor = = = = 25,5 Abs Cal. 2 - Abs Cal.,286 -,035 0,25 Factor = 25,5 Calibradores Concentración (mmol/l) 08, 62,2 En seguida, calcular la intersección aplicando la siguiente ecuación: Intersección = Factor x Abs Cal. - [Cal. ] = 25,5 x,035-08, = 223,0-08, = 4,9 Intersección = 4,9 Absorbancia Abs 0,677 0,847 Abs 2,72 2,33 Abs Abs - Abs 2,035,286 Para obtener la concentración de la muestra, calcular el delta de la absorbancia y aplicar en la siguiente ecuación Reactivo Muestra Calibrador 0,500 ml 0,020 ml Tubo Calibrador 2 Test 0,500 ml 0,500 ml 0,020 ml 0,020 ml Concentración de la muestra (mmol/l) = Abs muestra x factor - intersección Ejemplo Homogeneizar. Ajustar el zero del fotómetro con agua destilada o desionizada. Homogeneizar y transferir inmediatamente para la cubeta termostatizada a 37 ºC ± 0,2 ºC. Disparar simultaneamente el cronómetro y registrar la absorbancia (A ) tras 60 segundos. 5. Reactivo 2 0,250 ml 0,250 ml 0, 250 ml Aguardar y registrar la absorbancia (A 2) decurridos 80 segundos. El procedimiento sugerido es adecuado para fotómetros cuyo volumen mínimo de solución necesario para medición es menor o igual a 0,8 ml. Se debe verificar la necesidad de ajuste del volumen para el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente, sin perjuicio para el desempeño de la prueba, manteniéndose inalterado el procedimiento de cálculo. Muestra Concentración de la muestra (mmol/l) = Abs muestra x factor - intersección. Concentración de la muestra (mmol/l) =,76 x 25,5-4,9 Concentración de la muestra (mmol/l) = 38,5 Calibración. Absorbancia Abs Abs 2 0,8,98 Abs Abs - Abs 2,76 Se debe asegurar que los calibradores estén en equilibrio con la temperatura ambiente antes del uso. Homogeneizar con suavidad los calibradores antes del uso. Se sugiere que los puntos de la curva de calibración sean obtenidos a partir de duplicado de cada calibrador. 02 Español - Ref.: 24
3 Sistema Manual y Semi- automático Calibración de 2 puntos Puntos y 2: Calibrador y 2 Sistema Automático. Realizar, diariamente, el blanco de reactivo con agua desionizada. Calibración de 3 puntos Punto 0: Agua desionizada Puntos y 2: Calibrador y 2. Intervalo de calibraciones: Cuando el control de calidad lo indique; Cuando se utilice un nuevo lote de reactivos; Cuando se utilicen nuevos frascos de reactivos de un mismo lote, en caso de que una nueva calibración haya sido realizada durante la utilización del frasco anterior. Parámetros para analizadores automáticos *Los volúmenes de muestra y reactivos pueden ser cambiados proporcionalmente sin perjuicio para el desempeño de la prueba. En caso de reducción de los volúmenes es fundamental que se observe el volumen mínimo necesario para la medición fotométrica. 80 mmol/l Parámetros Tipo de Reacción Dirección de la Reacción λ de Onda primario λ de Onda secundario Temperatura Calibración Intervalo operativo. interno de calidad. Aplicación Cinética Crecente 405 nm 660 nm 37 ºC 3 puntos Punto 0: Blanco (Água desionizada) Punto : Calibrador Punto 2: Calibrador 2 Modelo de la Calibración Multi Punto Linear Volumen de Muestra* 8 µ L Volumen de R* 200 µ L Volumen de R2 00 µ L Después de 60 segundos de incubación Lectura (Absorbancia ) a 37 ºC de R + muestra + R2 Después de 80 segundos de incubación Lectura 2 (Absorbancia 2) a 37 ºC de R + muestra + R2 El intervalo operativo de medición es de 80 a El laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que defina claramente los reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para especificaciones de calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. Se debe utilizar materiales de control para monitorear la imprecisión de la medición y los desviaciones de la calibración. Se recomienda utilizar los productos de la línea Qualitrol H - Labtest para control interno de calidad en ensayos de química clínica. 2 Intervalo de referencia. Los siguientes valores deben ser usados sólo como orientación. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio intervalo de referencia en la población atendida. Suero: mmol/l. Conversión: Unidades SI (mmol/l) x = Unidad Convencional (meq/l) Características de desempeño Estudios de recuperación. En una muestra con concentración de sodio igual a 20,7 mmol/l se añadió diferentes cantidades del analito, obteniéndose los siguientes resultados Inicial 20,7 20,7 El error sistemático proporcional estimado en los niveles de decisión de 35 y 50 mmol/l son,55 mmol/l y,72 mmol/l, respectivamente. Estudios de comparación de métodos. El método propuesto fue comparado con método Electrodo Ión Selectivo (ISE), habiéndose obtenido los siguientes resultados: Número de muestras Intervalo de concentración (mmol/l) Ecuación de regresión Concentración (mmol/l) Añadida 34,5 5,7 Coeficiente de correlación Utilizando la ecuación de regresión, el error sistemático (bias) fue igual a,44% y 2,8% en las concentraciones de 35 y 50 mmol/l, respectivamente. Estudios de precisión. Esperada 55,2 72,5 Los estudios de precisión fueron realizados utilizando muestras con concentraciones iguales a 28,9 mmol/l y 55,8 mmol/l. 3 Método Comparativo Encontrada 57 Porcentual de recuperación 52,4 98,2 7,7 99,5 Método Labtest Método Labtest =,088x Comparativo - 9,9478 0,983 Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo Muestra Muestra 2 N Media DE CV (%) 40 28,9,66, ,8,72, Reproducibilidad - Imprecisión total Muestra Muestra 2 N Media DE CV (%) 40 28,9 2,0, ,8 2,56,65 03 Español - Ref.: 24
4 El error total (error aleatorio + error sistemático) estimado en los niveles de decisión iguales a 35 mmol/l y 60 mmol/l son 4,02% y 4,9%, respectivamente. Sensibilidad metodológica. Límite de detección: 4,98 mmol/l. Equivale a 3 desviaciones estándar (DE) obtenida a partir de 40 mediciones de una muestra con concentración de sodio igual a 28,9 mmol/l. Efectos de la dilución de la matriz. Una muestra de concentración igual a 72,5 mmol/l fue utilizada para evaluar la respuesta del sistema en la dilución de la matriz con agua desionizada. Utilizando factores de dilución entre, y,43 se encontró un promedio de recuperación igual a 98,5 %. Observaciones Presentación Producto Sodio Enzimático Equipo Referencia Labmax /38 Linha CS 24-/ /58 CAL CAL 2 CAL CAL 2 CAL CAL 2 Contenido X 24 ml 2 X 4 ml X 38 ml 2 X 20 ml 2 X 38 ml 2 2 X 20 ml. La limpieza y el secado adecuados del material utilizado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos. 2. El laboratorio clínico tiene por objetivo proveer resultados exactos y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa potencial de errores analíticos. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar reactivos, utilizar en mediciones y para el uso en el enjuague final de la vidriería, el agua debe tener resistividad megaohm.cm o conductividad microsiemens/cm y concentración de silicatos <0, mg/l. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada ocurre liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran capacidad de oxidación y reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso en horas, modificando los resultados de forma imprevisible. Por ello es fundamental establecer un programa de control de calidad del agua. Referencias. M.N. Berry, et al., (988) Clin. Chem. 34,2295. El número de pruebas en aplicaciones automáticas depende de los parámetros de programación de cada equipo. Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantia] Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de las especificaciones hasta la fecha de caducidad indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Servicio de Apoyo al Consumidor sac@labtest.com.br 2. C.A. Burtis, E.R. Ashwood, D. E. Bruns - Tietz Text book of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4 ed. 3. Labtest: Datos de Archivo. Edición: Octubre, 20 Ref.: 30 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reproducción bajo previa autorización 04 Español - Ref.: 24
5 PROTOCOLO DE AUTOMACIÓN PARA EL LABMAX Sodio Enzimático Ref. 24 Item Name DATA INFORMATION UNITS DECIMALS ANALYSIS TYPE # mmol/l 0 RATE Na24 CALIBRATION TYPE Linear STANDARD #4 #5 #3 #6 Main W.Length Sub W.length 2 METHOD Enzimático CORR. SLOPE INTER Y = X + 0 NORMAL RANGE Serum Urine Plasma CSF Dialysis Other LOW MALE HIGH LOW FEMALE HIGH # Posición de a 77 en el panel de la concentración del analito que figura en el material calibrador (Ref. 24.3) y calibrador 2 (Ref. 24.4) Item Name ASPIRATION KIND SAMPLE REAGENT VOL REAGENT2 VOL MONITOR Single # Double VOLUME Third Mix. OFF ON 3 µl R Blank Water Blank R-Blank 0 LEVEL POINT SPAN Na24 DATA PROCESS READ MAIN SUB FACTOR Blank correction PROZONE CHECK FIRST SECOND THIRD ABSORBANCE LIMIT START END LOW HIGH ENDPOINT LIMIT LINEAR CHECK(%) START END LIMIT(%) Low Low 0 99 High High 2 Item Name AUTO RERUN SW # Na24 AUTO RERUN CONDITION (ABSORBANCE) 3 ON OFF Absorbance Range AUTO RERUN RANGE (RESULTS) Serum Urine Plasma CSF Dialysis Other Lower Higher Lower Higher Prozone Range 05 Español - Ref.: 24
6 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro Symbols used with ivd devices Conteúdo suficiente para < n > testes Contenido suficiente para < n > tests Contains sufficient for < n > tests Risco biológico Riesgo biológico Biological risk Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) Marca CE Marcado CE CE Mark Calibrator Material Tóxico Tóxico Poison Calibrator Material Reagente Reactivo Reagent Limite de temperatura (conservar a) Temperatura limite (conservar a) Temperature limitation (store at) Fabricado por Elaborado por Manufactured by Representante Autorizado na Comunidade Europeia Representante autorizado en la Comunidad Europea Authorized Representative in the European Community Número do lote Denominación de lote Batch code Consultar instruções de uso Consultar instrucciones de uso Consult instructions for use e Número do catálogo Número de catálogo Catalog Number e negativo negativo Negative control Adições ou alterações significativas Cambios o suplementos significativos Significant additions or changes e positivo positivo Positive control Produto diagnóstico in vitro Dispositivo de diagnóstico in vitro In vitro diagnostic device e Liofilizado Liofilizado Lyophilized Corrosivo Corrosivo Corrosive Ref.: Español - Ref.: 24
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