UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN FACULTAD DE CIENCIAS FORESTALES

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1 UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN FACULTAD DE CIENCIAS FORESTALES EFECTIVIDAD BIOLÓGICA DE ESPECIES NATIVAS DE HONGOS MICORRÍCICOS ARBUSCULARES EN CEDRO ROJO (Cedrel odort L.) EMMANUEL FERNÁNDEZ CRUZ T E S I S Presentd como requisito prcil pr obtener el grdo de: MAESTRÍA EN CIENCIAS FORESTALES Enero 2013

2 UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN FACULTAD DE CIENCIAS FORESTALES SUBDIRECCIÓN DE POSGRADO T E S I S EFECTIVIDAD BIOLÓGICA DE ESPECIES NATIVAS DE HONGOS MICORRÍCICOS ARBUSCULARES EN CEDRO ROJO (Cedrel odort L.) Presentd por: Ing. Emmnuel Fernández Cruz Como requisito prcil pr obtener el grdo de: MAESTRÍA EN CIENCIAS FORESTALES COMITÉ EVALUADOR DE TESIS: Asesor externo Linres, Nuevo León. México Enero 2013

3 AGRADECIMIENTOS A Dios, por drme l fuerz y guirme en el cmino que tú mismo trzste pr mí. Al Consejo Ncionl de Cienci y Tecnologí (CONACYT) por otorgrme l vitl bec pr relizr los estudios de mestrí en ciencis forestles. A l Fcultd de Ciencis Forestles de l Universidd Autónom de Nuevo León y en especil l cuerpo de profesores-investigdores que forjron mi perfil profesionl con sus conocimientos y experienci. Al comité de tesis, donde todos los integrntes de mner honest, cpz y respetuos creron un mbiente de confinz y responsbilidd en el desrrollo de est investigción. Al Dr. José Gudlupe Mrmolejo Moncivis por l confinz brindd, clidez y sencillez que lo crcteriz, conformndo un mbiente de trbjo plcentero, sí como en cd un de sus certds recomendciones. Le grdezco su pcienci y tolernci l comprtir sus conocimientos que hor son prte de mi formción profesionl. Al Dr. Césr Mrtín Cntú Ayl por sus certds recomendciones en el ámbito científico, grcis por siempre estr dispuesto conversr sobre l estructurción de l tesis, demás de sus comentrios y sugerencis que mejorron este escrito. Al Dr. Humberto González Rodríguez por su ctiv prticipción, propositiv y entusist en l elborción de l investigción, grcis por sus comentrios, sugerencis, certds observciones y por su mistd. Al Dr. Heriberto Méndez Cortés mi sesor externo y migo por ser precursor en mi formción científic, con su entusist prticipción en el nálisis estdístico, generción de gráficos, sus certdos comentrios en torno l escrito, presentción de tesis y extrem pcienci y tolernci. Grcis por comprtirme prte de tu conocimiento y experienci. A Cecili Css López por l mistd incondicionl, sus siempre tindos consejos dentro y fuer del lbortorio. Así como tmbién te grdezco el sber escuchrme en tiempos difíciles. i

4 DEDICATORIA A mis pdres Felicitos Fernández Elvir y Herlind Cruz Rebolledo por su consistente poyo en l relizción de mis ideles, nlizndo cd tropiezo y consejándome en cd victori con l finlidd de hcer de mí, un hombre honesto y mejor ser humno preprdo pr l vid. A mis hermns Adrin Fernández Cruz y Jehymi Fernández Cruz que sin dud su poyo integro y buenos deseos hicieron posible lcnzr un peldño más. Grcis por conformr el equipo más fuerte e invencible, cpcitdo pr resolver culquier problem en nuestr empres fundd con bses y columns de mor fmilir. Pr mi hijín, Emmnuel Fernández Chávez promotor de pensmientos positivos pr seguir educándome y poder hcerlo tmbién contigo. Indudblemente l mujer dulce, dign, hermos, inteligente, responsble y noble que me entregó su mor incondicionl. Cludi Verónic Dori Treviño que viviste cd uno de mis ltibjos y te mntuviste firme pr logrr uno más de nuestros objetivos. Hs hecho de mí un mejor hombre con tus sbis plbrs unds invriblemente preciss cciones. Que Dios te bendig siempre Cludit del lm mí y me permit grdecerte el resto de nuestrs vids. ii

5 EFECTIVIDAD BIOLÓGICA DE ESPECIES NATIVAS DE HONGOS MICORRÍCICOS ARBUSCULARES EN CEDRO ROJO (Cedrel odort L.) Emmnuel Fernández Cruz RESUMEN Debido l importnci en l intercción simbiótic de hongos micorrícicos rbusculres (HMA) con especies vegetles, sí como l escs informción de los beneficios que ofrecen estos hongos en especies tropicles de importnci económic y forestl. El presente estudio tuvo como objetivo evlur los efectos de lguns especies de hongos micorrícicos ntivos del estdo de Vercruz socids plnts de Cedrel odort en l etp inicil de crecimiento. Se utilizron diferentes regímenes de fertilizción representds en prtes por millón (RF: 0, 12.5, 25, 37.5 ppm) de un mezcl de los fertilizntes entre l semn 1 l 5 después de l siembr (dds), en l semn 7 hst l 13 (dds) y en l semn 14 l 18 (dds). Ls vribles evluds fueron: el diámetro, l ltur, número de hojs cd 20 dís, mientrs que el peso seco del tllo y ríz sí como el porcentje de colonizción se determinó los 4 meses después de estblecido el experimento, el cul fue diseñdo en un rreglo fctoril letorizdo con bse los 2 fctores principles (HMA y regímenes de fertilizción). El nálisis de los dtos buscó el efecto en l regímenes de fertilizción (RF), l inoculción con HMA y en l combinción de estos dos fctores (RF*HMA) pr ls vribles evluds, trvés de modelo linel generl (GLM). El nálisis de vrinz mostró únicmente diferencis estdístics (p 0.05) entre l regímenes de fertilizción 25 ppm con respecto l 0 ppm. Ls especies Aculospor melle, Diversispor spurc y Glomus gregtum fueron ls que portron el myor desrrollo. Con los resultdos de este estudio severmos ls bonddes endomicorrícics ntivs, reduciendo eficientemente en 50% l utilizción excesiv de fertilizntes contminntes del medio mbiente y que son utilizds en l producción de plnt de Cedrel odort nivel ncionl. Además, estos hongos portron ls crcterístics morfológics principles pr l clidd de plnt cpz umentr l sobrevivenci en áres degrdds nturles y contribuir en el estblecimiento de ls comuniddes vegetles ntivs dentro de ls resturciones y/o plntciones forestles comerciles implementds en los trópicos mexicnos. Plbrs clves: Cedro rojo, HMA, simbiosis, régimen de fertilizción, eficienci micorrícic. iii

6 BIOLOGICAL EFFECTIVENESS OF NATIVE STRAINS OF ARBUSCULAR MYCORRHIZAL FUNGI IN RED CEDAR (Cedrel odort L.) Emmnuel Fernndez Cruz SUMMARY Due to the importnce of the symbiotic interction of rbusculr mycorrhizl fungi (AMF) with plnt species nd the scrce informtion of the benefits offered by these fungi in tropicl plnt species of economic importnce nd forestry. This study ws imed to review the effects of some species of ntive mycorrhizl fungi ssocited with Cedrel odort plnts in the initil growth stge from Vercruz stte. We used different fertiliztion rtes represented in prts per million (RF: 0, 12.5, 25, 37.5 ppm) of mixed of fertilizer between 1 to 5 weeks fter plnting (p), in week 7 to 13 (p) nd t week 14 to 18 (p). The vribles evluted were: dimeter, height, number of leves ech 20 dys, wheres the dry weight of the stem nd root s well s the rte of coloniztion were determined t 4 months fter the experiment set, which ws designed in rndomized fctoril rrngement bsed on two min fctors (HMA nd fertiliztion rtes). The dt nlysis sought to effect fertiliztion rte (RF), inocultion with AMF nd the combintion of these two fctors (RF * HMA) for the vribles evluted, through generl liner model (GLM). Anlysis of vrince showed only sttisticl differences (p 0.05) between fertiliztion rtes 25 ppm with respect to 0 ppm. Aculospor melle, Glomus gregtum, nd Diversispor spurc were the species tht contributed most with the plnt development. With the results of this study we ssert the goodness of ntive endomycorrhizl reducing by 50% efficiently the excessive use of fertilizers environmentl pollutnts nd tht re used in the production of plnts of Cedrel odort in Mexico. In ddition these fungi provided the min morphologicl chrcteristics of plnt qulity which cn increse plnt survivl in degrded nturl res nd contribute to the estblishment of ntive plnt communities in restortion nd / or commercil forest plnttions in the mexicn tropics. Keywords: red cedr, HMA, symbiosis, fertiliztion regime, mycorrhizl efficiency iv

7 ÍNDICE GENERAL Págin ÍNDICE DE CUADROS... vii ÍNDICE DE FIGURAS... viii 1. INTRODUCCIÓN HIPÓTESIS GENERAL OBJETIVO GENERAL Objetivos específicos: REVISIÓN DE LITERATURA Ls selvs Generliddes de C. odort y su importnci L reforestción en ecosistems tropicles y los HMA Hongos micorrícicos rbusculres Estructurs y psos de l simbiosis micorrícic rbusculr Fctores perjudiciles pr el proceso de l simbiosis micorrícic rbusculr en ls plnt Beneficios entre micorrizs y su hospedero Los HMA en l resturción de ecosistems tropicles Producción de plnt tropicl socid con HMA destind l resturción de ecosistems tropicles Producción de plnt en viveros forestles y el mnejo de HMA El sustrto en l producción de plnt forestl Crcterístics del sustrto mezcl bse utilizdo por CONAFOR Fertilizción en l producción de plnt forestl tropicl ncionl Antecedentes del uso de HMA en plnts de C. odort MATERIALES Y MÉTODOS Sitio experimentl v

8 5.2. Diseño experimentl pr evlur l respuest de plántuls C. odort socids con HMA Sustrto mezcl bse en l producción de C. odort Inoculnte micorrícico rbusculr Regímenes de fertilizción plicds plántuls de C. odort socids con HMA Estblecimiento del experimento Vribles de estudio Análisis estdístico RESULTADOS Respuest de vribles de crecimiento Respuest l eficienci de colonizción de HMA en C. odort DISCUSIÓN CONCLUSIÓN LITERATURA CITADA ANEXOS vi

9 ÍNDICE DE CUADROS Cudros Págins 1 Componentes del sustrto empledo en l producción de plnt forestl en los viveros de l CONAFOR Propieddes Químics por componentes del sustrto mezcl bse Propieddes Físics por componente del sustrto mezcl bse Propieddes físic y químics del sustrto Mezcl bse Progrm de fertilizción pr especies forestles tropicles CONAFOR Diseño fctoril pr evlur l respuest de C. odort inoculd con HMA bjo regímenes de fertilizción Mezcl bse utilizd por CONAFOR Especies micorrícics de dos ecosistems tropicles de Vercruz Bsd en el Progrm de fertilizción pr especies forestles tropicles de CONAFOR (2003) Cálculos de l cntidd de fertiliznte por formul, con bse l nitrógeno Resumen del nálisis de vrinz pr vribles de respuest vii

10 ÍNDICE DE FIGURAS Figurs Págins 1 Estructur morfológic de un árbol de C. odort Mp de distribución de C. odort L. en México: Tomdo de Benítez et l., (2004) Digrm sinóptico de l clsificción de los hongos micorrícicos rbusculres. Tomdo de Montño et l., Psos en el desrrollo de micorrizs rbusculres. Tomdo de Perniske (2008) Ls vís poplástics y simplástic son cminos prlelos pr l bsorción de gu y nutrientes. Tomdo de Tck y Meers (2010).. 10 Descripción generl de diversos mecnismos (incluyendo procesos hipotéticos) que son medidos por ls hifs e influyen en l formción de mcrogregdos y microgregdos del suelo. Tomdo de Rilling y Mummey (2006) Loclizción de l Fcultd de Ciencis Forestles en Linres Nuevo León, México Respuest de vribles de crecimiento bjo el régimen de fertilizción plnt de C. odort socid con HMA. A: Altur. B: Diámetro. C: Número de hojs- en los niveles de cd fctor. Niveles de fctores con l misms letrs son estdísticmente igules (Tukey p 0.05). 30 Peso seco éreo de C. odort por fctor, l finl del cultivo estblecido dentro del lbortorio. A. peso seco folir/áre folir. B. peso seco ríz. C. peso seco éreo. L mism letr indic que son estdísticmente igules según l prueb Tukey p Respuest l eficienci en inoculción de HMA plnts de C. odort bjo regímenes de fertilizción. A. porcentje rbúsculos. B. porcentje de vesículs. C. porcentje de hifs. Niveles de fctores con l misms letrs son estdísticmente igules (Tukey p 0.05) Comprción de l ltur en plántuls inoculds con HMA ntivos de viii

11 l Selv lt (SA) y Selv medin (SM) con l especie micorrícic (R.i) Rhizophgus intrrdices Comprción de l colonizción de HMA ntivos y (R.i) Rhizophgus intrrdices Lminill pr observción l microscopio del porcentje de colonizción micorrícic Digrm pr el clreo y tinción de ríces colonizds ix

12 1. INTRODUCCIÓN El principl problem de bosques y selvs tropicles es l sobreexplotción de especies rbóres considerds precioss (Mrtínez y Grcí, 2007) por su clidd, durbilidd y color de l mder, como el cedro rojo (Cedrel odort. L) el cul es un especie que port grndes beneficios económicos pr l industri mderble (Brvo, 2007). Sin embrgo el bsto de est importnte mteri prim cus grn erosión l suelo por l extens pérdid de cobertur vegetl. Además, el cmbio de uso de suelo ejercido en ls últims décds por el crecimiento demográfico y ls plgs propicin l degrdción de los ecosistems tropicles donde se encuentrn ls poblciones de C. odort con importnci ecológic y económic pr los seres vivos, surgiendo l necesidd de resturr dichs áres medinte el estblecimiento de plntciones forestles conservcionists y de provechmiento forestl comercil (de l Torre et l., 2008). Ls cciones de reforestción forzosmente requieren plnt forestl cpz de dptrse en áres deforestds generlmente con suelos pobres en nutrientes. Está demostrdo que est cpcidd de dptción l proporcionn ciertos microorgnismos del suelo como los hongos micorrícicos rbusculres (HMA) l interctur simbióticmente con el sistem intr-rdicl de l myorí de ls plnts (Alrcón et l., 2001). Alguns ventjs observds en especies forestles son: l reducción en l utilizción de fertilizntes sintéticos hst en un 80% dentro de l producción de plnt forestl en viveros (Guerr, 2008) y les pueden yudr mejorr l dptbilidd l suelo hst en un 54% bjo condiciones nturles debido l simbiosis mutulist ejercid por estos microorgnismos (Monroy et l., 2007). Investigciones relizds por Gudrrm et l., (2004) y Amdor (2010), integrn herrmients biológics (HMA) en l producción de plnts de especies tropicles precioss en ls cules hn demostrndo ls bonddes endomicorrícics reflejds en ls estructurs morfológics de ls plántuls pr segurr su estblecimiento en cmpo; ellos hn utilizdo l especie micorrícic Rhizophgus intrrdices que es comercilizd pr cultivos grícols principlmente, pero no hn evludo l socición de l micobiot rbusculr ntiv socid C. odort. Ls especies de HMA ntivs identificds por Méndez (2012), en dos ecosistems tropicles del estdo de Vercruz portn beneficios pr el sustento de ls plnts de C. odort producids en viveros, sin embrgo, hce flt evlur l efectividd de ésts pr obtener un cep cpz de mejorr los sistems de producción de plántul. Por ests rzones fue importnte en este estudio documentr l eficienci de los HMA pertenecientes l fmilis Glomercee, Diversisporce y Aculosporcee socids plántuls de C. odort los 4 meses de edd, evlundo pr ello el crecimiento, desrrollo y l fctibilidd de reducir ls dosis de fertiliznte empleds en l producción de plnt nivel ncionl trvés del uso de HMA. 1

13 El nálisis experimentl dio put pr tomr decisiones en cunto l grupción de especies de HMA, ls cules portron un beneficio máximo en el suministro de nutrimentos l interior de l ríz y determinó que l utilizción de un consorcio de especies ntivs en l producción de plnt de C. odort puede ser útil pr lcnzr los índices de clidd de plnt requeridos en los ecosistems degrddos (Sntigo et l., 2007) y proporcionr l cpcidd de dptción un myor rngo de distribución de l especie, tnto en suelos fértiles muy húmedos como en suelos pobres en nutrientes y secos con los que cuent el estdo de Vercruz. Lo nterior permitirá poyr los progrms producción de plnt destind reforestción, resturción y plntciones forestles medino plzo de cuerdo l polític de desrrollo forestl sustentble pr l cul trbjn ls dependencis de gobierno como l CONAFOR trvés del progrm Pro-Árbol. Con el fin de contribuir y fortlecer el uso de ls herrmients biológics pr el estdo de Vercruz, se plnteó el presente estudio en el lbortorio de Micologí de l Fcultd de Ciencis Forestles (UANL). Con el que pr bordr l problemátic menciond se estbleció lo siguiente: 2. HIPÓTESIS GENERAL Existen diferencis en el crecimiento inicil de C. odort l utilizr especies de HMA procedentes de l selv medin subperennifoli y selv lt perennifoli. 3. OBJETIVO GENERAL Evlur l eficienci de HMA ntivos de dos ecosistems tropicles del estdo de Vercruz donde se distribuye C. odort Objetivos específicos: 1. Evlur l respuest de especies ntivs de HMA procedentes de dos ecosistems tropicles en plántuls de C. odort. 2. Determinr el régimen en concentrción de fertiliznte decudo pr l producción de plnt de C. odort socid con HMA. 2

14 4. REVISIÓN DE LITERATURA Est sección involucr los spectos más importntes dentro de est investigción, inicindo con l problemátic l extrcción indiscrimind de especies forestles precioss como C.odort, de l cul se describe su morfologí, usos, importnci, sí como ls cciones que se están mnejndo pr remedir los dños cusdos dichos ecosistems tropicles ctulmente perturbdos, trvés del estudio del funcionmiento y beneficios tnto de l especies rbóre en cuestión, como de ls micorrícics rbusculres (MA) ls cules desempeñn un ppel importnte trvés de l socición plnt-hongo en l resturción de los ecosistems tropicles degrddos. De est mner obtendremos un mplio pnorm del contexto en l que se desenvuelve este estudio Ls selvs Desde los ños setent, Gómez-Pomp et l., (1972) observron que los bosques y selvs tropicles ern menzdos en su biodiversidd, l grdo de l extinción de su flor y fun, e incluso los mismos utores previeron l desprición definitiv de ls selvs si no se tombn cciones que corrigiern l expnsión grícol descontrold y, según l FAO (1975) l tl indiscrimind de los árboles cusdo un grve y extens erosión, sequís e inundciones en ls zons tropicles. Según estimciones de l FAO (1997), en México se perdió l selv húmed un ts nul de 630,574 h, solmente en el periodo de Clculándose que l inicio del periodo hbí más de 55 millones de hectáres. A est ts de deforestción estimd, se clcul l pérdid de l cobertur forestl un ritmo celerdo de 1.1% de ls selvs l ño. En l zon tropicl húmed de los estdos de Vercruz, Tbsco, Oxc y Chips, el 13% de l superficie h sido convertid terrenos de cultivo y el 19% terrenos pecurios. L reducción net de est trnsformción es de 13 millones de h, es decir, un disminución de 68% de l superficie originl. Los dtos indicn que l finl de l décd de 1970 y principio de l décd de 1980 se deforestó 40% de l superficie restnte del trópico húmedo, dndo como resultdo en el trópico húmedo Vercruzno que l extensión originl del territorio se dedique en 26.3% ctividdes grícols, 30.9% ls ctividdes gnders y que 41.6% conserve l vegetción forestl nturl (Toledo y Ordóñez, 1998 citdos por Guevr et l., 2004). En prticulr, el estdo de Vercruz según INEGI (2011) const de 7,182,039.6 h de ls cules ctulmente están distribuids en 37.76% l Agricultur, 44.98% los pstizles, 1.99% en Bosques, 1.97% de Selv,.35% Mtorrl xerófilo. Esto d un ide de l distribución de ls 3

15 ctividdes económics del estdo, posiblemente por flt de lterntivs en el mnejo de l tierr. Actulmente, ls selvs ún siguen siendo víctims de l deforestción por cuss como l explotción forestl indiscrimind y disgénic, cortndo principlmente los mejores individuos de ls poblciones de árboles tropicles mderbles considerdos especies precioss pertenecientes l fmili de ls Meliáces como (Cob) Swieteni mcropyll King y C. odort ls cules son muy importntes económicmente pr l industri mderer (Ptiño, 1997; André et l., 2008). Además, l degrdción de los ecosistems tropicles y áres donde se distribuyen ls poblciones de C. odort se debe l pertur de cmpos de cultivo, potreros, el desrrollo de infrestructur urbn y de comunicciones, como l construcción de crreters, press, cminos, explotción petroler, viviends, y desde luego los fenómenos nturles entre los cules destcn los incendios, ls inundciones, los deslizmiento de tierr y los hurcnes (Geist y Lmbin, 2001; Ptiño, 1997). Pr impcto ecológico ejercido trvés de los ños, se necesit en l ctulidd, l resturción de dichs áres medinte el estblecimiento de plntciones forestles pr l conservción y pr el provechmiento forestl comercil (de l Torre et l., 2008) Generliddes de C. odort y su importnci C. odort es un árbol de hst 35 m de ltur y de 1.7 m de diámetro l ltur del pecho; el tronco derecho form veces pequeños contrfuertes poco prominentes, rms scendentes y gruess; de cop redonded y dens su cortez extern mplimente fisurd con ls costills escmoss (Figur 1), prdo grisáce moreno rojiz; l cp intern rosd y cmbi prdo mrillent, fibros y de sbor mrg; de un grosor totl en l cortez de 20 mm (Pennington y Srukhn, 2005). Ls hojs de est especie son compuests, lterns pripinnds y grndes, hst de 1m de lrgo. Peciolos de 8 10 mm de lrgo, delgdos, foliolos mm opuestos, oblicumente lnceoldos, comúnmente de cm de lrgo y cm de ncho. Ptiño (1997), report que en México el periodo de florción pr C. odort, ocurre entre los meses de myo y junio, principlmente en los estdos de Guerrero, Vercruz y Oxc; unque el myor rngo de florción y de fructificción se reliz en los meses de Mrzo Abril. Ls flores son msculins y femenins en l mism inflorescenci de hst 35 cm de lrgs, los pedicelos son de 1 2 mm de lrgo, tienen el cáliz esprcidmente pulverulento, los lóbulos gudos, pétlos oblongos de color crem verdoso de 5 6 mm de lrgo. Los frutos, son cápsuls con dehiscenci longitudinl septicid (se bre en cinco crpelos) presentn de 4 7 cm de lrgo; en estdo inmduro, 4

16 poseen un color verde y l mdurr se tornn leñosos de color cfé oscuro con l superficie extern lenticeld y lis; este fruto se desprende un vez liberds ls semills, cd fruto tiene de semills pequeñs y lrgds miden cm de lrgo y entre 5 8mm de ncho, con l prte seminl hci el ápice del fruto; l test es de color cstño rojizo; el embrión es recto, comprimido, color blnco o crem y ocup grn prte de l cvidd de l semill; tiene dos cotiledones grndes, plnos de cuerdo con Benítez et l.,(2004). Figur 1.- Estructur morfológic de un árbol de C. odort. Se distribuye desde México (ltitud 26º N) hst el norte de Argentin (ltitud 28º S), encontrándose tmbién en ls Isls del Cribe como Cub, Isl de Pinos, Mrtinic, Antigu, ls Antills (Gutiérrez y Ricker, 2012; Pcheco y Brown, 2006). En México se encuentr desde l vertiente del Golfo en el sur de Tmulips y sureste de Sn Luis Potosí hst l Penínsul de Yuctán y en l vertiente del Pcífico desde Sinlo hst Guerrero y en l depresión centrl y cost de Chips (Figur 2). Por lo generl crece en suelos fértiles, con buen drenje, tnto en bosques tropicles como subtropicles secos y húmedos, y se present desde el nivel del mr hst 1,200 msnm, conviviendo con especies del genero Pinus (Citron 2008; Ptiño 1997; Pennington y Srukhn, 2005). En Vercruz se encuentr en ls inmediciones de Crdel, Pso de Ovejs, Actopn, L 5

17 Glori, Córdob, Tezonpn, Ctemco, Sn Andrés Tuxtl, Acyucn, y Ls Chops (Niembro et l., 2010). Figur 2. Mp de distribución de C. odort L. en México: Tomdo de Benítez et l., (2004). Est especie tiene un grn importnci económic debido que es utilizd pr l industri como mteri prim en l elborción de muebles finos, instrumentos musicles especilmente guitrrs, chps decortivs entre otros usos. Por ests rzones Ptiño (1997) segur que est especie h sido provechd de un mner disgénic por el lto vlor comercil, empobreciendo ls áres nturles de bosques y selvs en México y el extrnjero. Desfortundmente, en los últimos ños, estos ecosistems hn sido impctdos hst en un 50% debido ls lts tss de deforestción quedndo solo relictos de poblciones en sitios poco ccesibles (Ms et l., 2003; Velázquez et l., 2001). L degrdción de selvs está socid principlmente los cmbios en el uso del suelo con fines pr l gricultur (Mrtínez et l., 2009). En estos suelos, existe un excesiv plicción de fertilizntes inorgánicos que repercuten en el empobrecimiento grn escl (Pimentel et l., 2005). Otro de los fctores que h impctdo ests selvs, es l mplición de pstizles pr l gnderí, específicmente en estdos del sureste Mexicno, donde más del 80% de su superficie en más de 30 ños. Lo nterior h propicido un disminución de los contenidos de mteri orgánic y de nitrógeno, cuyos componentes son esenciles pr el desrrollo de ls plnts (Slzr et l., 2004) L reforestción en ecosistems tropicles y los HMA L presión demográfic derivd de ls ctividdes económics h sido evlud por diversos utores como: Mrtínez y Rmírez (2001); Geist y Lmbin (2001); Geist y 6

18 Lmbin (2002); Hfich et l., (2012); los cules severn que es l cus de l creciente deforestción en ls selvs tropicles, debido l demnd de mder y productos no mderbles. L problemátic ntes mnciond, confirm l necesidd de relizr plntciones y elborr progrms de reforestción, los cules, frecuentemente no hn obtenido los resultdos esperdos por diferentes cuss como: el tque de plgs, bj fertilidd de los sitios de estblecimiento y l flt de práctics decuds de producción de plántuls en vivero, hciendo que existn bjs tss de supervivenci y crecimiento en cmpo (Mexl et l., 2002). Dichs consecuencis son firmds puesto que nivel ncionl l supervivenci de plántuls en el cmpo Mexicno es de 55% según el V informe de gobierno (2011). El nterior porcentje de sobrevivenci en cmpo es plicble ls plntciones o reforestciones hechs con C. odort, l especie forestl tropicl más empled pr l reforestción y plntciones comerciles en diverss regiones tropicles de México y otros píses Ltinomericnos (Rodríguez et l., 2011), cuys mders poseen un lto vlor económico en mercdos interncionles (Chpel, 2012). El éxito de l supervivenci de plántuls en cmpo ument con el uso de hongos micorrícicos rbusculres (HMA) hst en 54% (Monrroy et l., 2007) formndo socición simbiótic trvés de ls ríces secundris de l myorí de ls plnts, est socición dt de ños prehistóricos (Bonfnte y Genre, 2008), l cul h evoluciondo trvés de los siglos pr mejorr l ptitud de ls especies vegetles y de los hongos simbiontes (Johnson et l.,1997), l grdo de depender un orgnismo del otro, como l especie Leucen leucocephl que es ltmente dependiente de l micorrizción (Brundrett et l.,1994). Existen diversos trbjos que explicn los beneficios de los HMA mejorndo l productividd de l plnt pero esto no siempre es el cso, puesto que tmbién se considern prsito sobre ls plnts cundo el costo de l simbiosis super los beneficios ofertdos por el simbionte (Johnson et l., 1997). Por est rzón se tienen que evlur ls posibiliddes de integrr pquetes biotecnológicos como los HMA en l recuperción de ecosistems tropicles degrddos, empezndo por los sistems de producción de plnt forestl en el pís Hongos micorrícicos rbusculres El vocblo micorriz formdo etimológicmente del término griego mykos (hongo) y del vocblo ltino Rhiz (ríz) fue presentdo por primer ocsión por el botánico, ptólogo y micólogo Alemán Albert Bernrd Frnk en 1885 pr designr l socición que se producí entre ls hifs de lgunos hongos del suelo con los órgnos subterráneos de l grn myorí de ls plnts superiores. Según Alrcón et l., (2001) dich socición es mutulist ddos los beneficios que report l mism pr mbos 7

19 Glomeromycot prticipntes, y comprende l penetrción rdicl por prte del hongo y l crenci de respuest perjudicil hci éste por prte de l plnt hospeder. De cuerdo Red (1999), ls micorrizs (termino que se refiere l socición plnt-hongo) se dividen en tres grupos fundmentles según l estructur de l micorriz formd: Ectomicorrizs o formdors de mnto; Ectendomicorrizs, que incluye Arbutoides y Monotropoides; y ls Endomicorrizs, crcterizds por l colonizción intrcelulr del hongo, y que su vez se subdividen en Ericoides, Orquidoides y Arbusculres; estos últimos formdores de ls llmds micorrizs rbusculres (HMA). L primer evidenci inequívoc de HMA en un simbiosis endomicorrícic, trsciende de fósiles del periodo Devónico Inferior (Prniske, 2008) con más de 400 ños de ntigüedd, indicndo que l trnsferenci de nutrientes es un fenómeno ntiguo que pudo hber estdo en existenci cundo ls plnts invdieron l tierr (Tylor et l., 1995). Así mismo, el hecho de que más del 90% de ls plnts terrestres (fitobiontes) tengn uno o más de estos hongos socidos (micobiontes), muestr l eficienci de est socición mutulist, su globlidd y l estrech coevolución plnt-hongo micorrícico, sí como su relevnci en el reino vegetl (Montño et l., 2007). Con estos ntecedentes nos dmos cuent que por más de 100 ños se hn estudido los micobiontes socidos ls plnts. 8

20 Figur 3.-Digrm sinóptico de l clsificción de los hongos micorrícicos rbusculres. Tomdo de Young (2012). L endomicorrizs se crcterizn por colonizr intrcelulrmente el córtex rdicl o se que no hy mnto externo que pued verse simple vist. Ls hifs se introducen inicilmente entre ls céluls de l ríz, pero luego penetrn en el interior de ésts, formndo vesículs limenticis y rbúsculos. Por ello este grupo se ls conoce tmbién como micorrizs vesículo-rbusculres (MVA) los cules constituyen l simbiosis más extendid sobre el plnet encontrándose colocdos dentro del phylum monofilético, los Glomeromycot (Figur 3) (Prniske, 2008; Schüßler y Wlker, 2010) Estructurs y psos de l simbiosis micorrícic rbusculr Durnte l simbiosis micorrícic según Perniske (2008) se desrrolln los siguientes procedimientos en ls estructurs especilizds de los HMA (Figur 4): 1.- Espors. Ls espors son el fruto del hongo que formn el principl fuente de inóculo (Méndez, 2012) ls cules, con ls fitohormons estrigolctons exudds de ls ríces inducen o inhiben l germinción y l rmificción de ls hifs, umentndo su ctividd fisiológic (Giovnetti et l., 1993). 2.- L identificción moleculr de fctores de señlizción en hongos que inducen ls respuests específics (en conjunto, llmdos fctores Myc) pr l simbiosis micorrícic se hicieron evidentes en experimentos donde se detectó el gen Enod11- promotor GUS (b-glucuronids) el cul se ctiv en l proximidd de ls hifs de los hongos. Este fctor Myc se encontró que er un molécul difusible que en l ctivción trnscripcionl induce simbiosis de genes relciondos (Kosut et l., 2003). En este pso ls moléculs difusibles liberds por el hongo micorrícico son percibids por ls céluls de ríces de l plnt hospeder trvés de l señlizción del clcio. (Novzio et l., 2007). 3.- L formción de presorios o hifopodios, es el contcto relizdo después de l señlizción entre hongo-plnt, por ls hifs mdurs del hongo (Perniske, 2008). 4.- Como consecuenci de l químic secuencil y l estimulción mecánic, ls céluls vegetles producen un prto de pre-penetrción (PPA). Posteriormente, un hif fúngic que se extiende desde el hifopodio entr en l PPA, l cul guí l hongo trvés de céluls de l ríz hci l cortez. Aquí, el hongo sle de l célul de l plnt y entr en el poplsto, donde se rmific y crece lterlmente lo lrgo del eje de l ríz. Ests hifs inducen el desrrollo de PPA como ls estructurs interns de ls céluls 9

21 Ríz de un plnt corticles, pr posteriormente psr ests céluls y formr rbúsculos (Giovnetti et l., 1993). 5.- El hongo se dentr en ls céluls interns de l cortez donde se rmific dicotómicmente en bundnci dndo un form de árbol, pudiendo llenr por completo el espcio de ls céluls corticles, posiblemente buscndo un grdiente de zúcr rdil entre el tejido vsculr y l cps exteriores de céluls que pueden estr involucrdos en l introducción de ls céluls del hongo y l formción de rbúsculos Los rbúsculos se proponen pr ser el lugr clve de intercmbio bidireccionl de crbono entre ls céluls de ls ríces y ls hifs de hongos micorrícicos rbusculres (Blee y Anderson, 1998). Plántul Strig Espor Reconocimiento mutuo Formción de PPA Penetrción hongo del Epidermis Cortez exterior Cortez interior Endodermis Cilindro vsculr Figur 4.- Psos en el desrrollo de micorrizs rbusculres (MA).Tomdo de: Perniske (2008). 6.- Ls vesículs, que se proponen pr funcionr como órgnos de lmcenmiento de los hongos, son veces, pero no siempre, formds en MA y están presentes en el poplsto (Figur 5). Nuevs espors se sintetizn típicmente fuer de l ríz de l plnt en el extremo delntero de ls hifs fúngics individules (Perniske, 2008). Plsmodesm Tir Csprin Pred celulr Vcuol Cmino poplstico ( trvés de ls céluls) Cmino simplstico ( trvés del citoplsm) Citoplsm Figur 5.- Ls vís poplástics y simplástic son cminos prlelos pr l bsorción de gu y nutrientes. Tomdo de: Tck y Meers (2010). 10

22 Fctores perjudiciles pr el proceso de l simbiosis micorrícic rbusculr en ls plnt Los HMA son microorgnismos obligdos simbióticos del suelo que colonizn ls ríces de l myorí de ls plnts (Moucheshi et l., 2012) proporcionndo l plnt huésped myor cpcidd pr bsorber gu y nutrientes del suelo; de mner reciproc l plnt proporcion fuentes de crbono solubles l hongo. Sin embrgo, existen condiciones dverss en los suelos nturles debido l constnte cmbio mbientl del suelo con respecto l humedd, l tempertur, l disponibilidd de nutrientes, mnipulción del suelo por ls práctics grícols. Con l intención de mejorr los suelos pr el rendimiento de los cultivos se gregn productos químicos tóxicos pr ls plnts, fectndo l función de los microorgnismos simbiontes micorrizógenos debido ls condiciones edáfics modificds tles como: l composición del suelo, l humedd, l tempertur, el ph, cpcidd de intercmbio ctiónico, y tmbién por fctores estresntes ntropogénicos incluyendo l compctción del suelo, metles y pesticids (Entry et l., 2002; Prsd et l., 2011). El fósforo en el suelo es el principl mcronutriente pr todos los orgnismos (Vnce et l., 2003) sin embrgo en exceso limit l producción de propágulos infectivos de HMA según los resultdos encontrdos por Arrig et l., (2009). He quí donde surge l necesidd de llevr cmpo plnt inoculd rtificilmente, pues ls perturbciones fectn l cntidd de inóculo y especies ntivs, ls cules siempre están en condiciones de estrés dentro de los ecosistems tropicles degrddos (Cuenc et l., 2003; Rmos y Gudrrm, 2004) Beneficios entre micorrizs y su hospedero Los HMA son mutulists por ls trnsferencis de crbono orgánico (C) que l plnt entreg l hongo y el fósforo (P) que se entreg en l dirección opuest (Smith y Smith, 2012), formndo el grupo de microorgnismos generlist con myor bundnci y responsbles de l dependenci micotrófic del 90% de ls plnts terrestres del plnet (Montño et l., 2007). Debido l ctividd del micelio externo del hongo se provee myor cpcidd de bsorción de los nutrimentos del suelo medinte l red de hifs que el hongo pued generr (Alrcón y Ferrer, 1999). Ests hifs extr rdicles procedentes de los hongos tienen un myor hbilidd, comprdo con ls ríces, pr explorr el suelo y tomr nutrimentos minerles que se difunden muy lento en l solución del suelo (Rmos y Gudrrm 2004). 11

23 Según Atleklett y Wllnder (2012) trvés de l utilizción de HMA se optimiz l bsorción de nutrientes como el nitrógeno (N), lo cul repercute en un myor producción de bioms y colonizción de HMA en l plnt. Slgdo et l., (2012) encontrron que l lt concentrción de nitrógeno N inhibe dich colonizción por R. intrrdices sin incrementr el crecimiento de l plnt. El potsio (K) en concentrciones bjs es optimizdo en l plnt incrementndo hst un 26% el contenido de mteri sec (Srikhni y Alisghrzd, 2012). El fósforo (P) es un mcro nutriente importnte pr todos los orgnismos y sirve pr múltiples funciones como elemento estructurl clve en los ácidos nucleicos, fosfolípidos, enzims y coenzims. Está implicdo en el metbolismo energético, l ctivción de intermedirios metbólicos y cscds de trnsducción de señl. Por lo tnto, un fuente fible de fósforo y el mntenimiento de fósforo celulr en l homeostsis es esencil pr l vid. L velocidd de bsorción de fosfto por ls ríces en crecimiento es mucho más lt que l ts de difusión suelo fosfto, lo que result en l formción de un zon de gotmiento en el nivel de sistem de l ríz y, en consecuenci, limit el suministro de fósforo l plnt. Los HMA optimizn el trnsporte de fosftos l interior de l ríz (Krndshov y Bucher, 2005). El fosfto es probblemente trnsportdo dentro del hongo como polifosfto (pólipo), y un vez en ls hifs intr-rdicl de ls cdens lrgs están hidrolizds, fcilitndo l trnsferenci de l plnt huésped (Hrrison y vn Buuren, 1995; Ohtomo y Sito, 2005). El beneficio de l simbiosis es más visible cundo éstos se encuentrn en suelos deficientes en fósforo; en est condición, plnts inoculds con HMA presentn myores tss de crecimiento (Alrcón y Ferrer, 1999) pues con l similción de otros elementos con poc movilidd edáfic como Cu, Zn, K, C, Fe y Mg (Flores y Cuenc, 2004; Hernández y Sls, 2009) y otros micronutrientes como Mo, B en cultivos u orgnismos vegetles medinte hifs extr rdicles del hongo hci el interior de l ríz, lo cul se ve reflejdo en un myor bioms (Koide, 2006; Mrín, 2005; Sánchez et l., 2006). Los hongos micorrícicos puede desempeñr un ppel importnte en l protección de ls plnts contr l contminción de rsénico (As) (Chen et l., 2007). En l producción de plnt forestl ls dosis de fertilizntes se pueden disminuir hst en 50 u 80% con l utilizción de HMA (Guerr 2008). Ls HMA se hn estudido como biocontrol de enfermeddes de l ríz (Montño et l., 2007) principlmente en cultivos grícols como el jitomte donde según Gómez et l., (2008) firm que ls plnts de jitomte umentn su colonizción por HMA en ls ríces de l plnt infectds por el ptógeno Phytophthor cpsici, lo que puede deberse l competenci por compuestos de crbono, lo que puede ser un de ls cuss de l reducción en el desrrollo del ptógeno en plnts micorrizds, y que el crecimiento de mbos orgnismos simbiontes y ptógenos, depende de los fotosinttos disponibles en el hospedero. L pudrición de l ríz por Fusrium oxysporum f. sp. sprgi en plántuls de Asprgus officinlis fue disminuid en l plnts inoculds 12

24 con HMA según Mohmmd y Mtsubr (2012). Algunos géneros micorrícicos rbusculres como Funneliformis mossee, Rhizophgus intrrdices y Gigspor rose colonizron en diferentes niveles l ríz de ls plnts de cebd sin embrgo, todos los hongos micorrícicos rbusculres reduce clrmente el nivel de ls lesiones de l ríz debido l ptógeno Geumnnomyces grminis. Estos resultdos obtenidos por Cstellnos et l., (2012) indicn que lgunos hongos micorrícicos rbusculres necesitn lts tss de colonizción de ríz pr proteger ls plnts contr hongos ptógenos, mientrs que otros ctún en bjs tss de colonizción de ríces. Efectos Biológicos II Intercciones de l red limentici del hongo Efectos Biológicos I Influenci del hongo micorrícico en l comuniddes microbins (Bcteris) Efectos Bioquímicos Relción de los productos del micelio (incluyendo glomlin, etc.) procedente de l descomposición o vid de ls hifs Efectos Físicos Alineción de ls prtículs y l que presión que ejerce Efectos Físicos l Hifs enredndo prtículs/micro gregdos lterdos el régimen de gu (ciclos secoshúmedos) Micro gregdos µm Micro gregdos <53 µm Arcill Limo/ren Prtículs de mteri orgánic Hif fúngic Exuddos de l ríz Productos del Micelio Figur 6.- Descripción generl de diversos mecnismos (incluyendo procesos hipotéticos) que son medidos por ls hifs e influyen en l formción de mcrogregdos y microgregdos del suelo. Tomdo de Rilling y Mummey (2006). L simbiosis mutulist por HMA lter ls relciones hídrics, independientemente del estdio de l plnt, siendo de grn vlor ecológico y que fvorece el estblecimiento, vigor, productividd y supervivenci de ls plnts en un medio con condiciones 13

25 limitds de gu (Rmos y Gudrrm, 2004) o el exceso de ell debido l cmbio climático (Mrtínez, 2011). Otro fctor mbientl es l slinidd del suelo excesiv que fect l creción, el desrrollo y crecimiento de ls plnts, lo que result en importntes pérdids en l productividd, sin embrgo microorgnismos como los HMA puede proteger ls plnts contr l slinidd, livindo el estrés oxidtivo inducido por l sl (Abdel y Choxing 2011; Ruiz et l., 2012) Un de ls funciones más importnte de los HMA se reflej en l fisiologí y morfologí de l plnt huésped modificndo l ríz, trvés de l cul yud l resturción del suelo nivel ecosistem y medinte ls hifs extr rdicles que prticipn como el principl mecnismo pr trpr y enlzr jerárquicmente micro y mcroprtículs, debido l producción y exuddo de l proteín Glomlin. Los mecnismos en l estructurción del suelo se dividen en procesos físicos, bioquímicos y biológicos; sí como sus intercciones resltds (Figur 6) (Riiling, 2004; Rilling y Mummey, 2006) Los HMA en l resturción de ecosistems tropicles Existen lgunos trbjos de resturción en los ecosistems tropicles donde l principl herrmient es l utilizción de hongos micorrícicos rbusculres socidos plántuls de importnci económic en los trópicos. Los resultdos obtenidos muestrn los beneficios ecofisiológicos de l inoculción con estos hongos en diferentes especies leñoss vegetles. Conocer l respuest de cutro especies forestles tropicles de Cost Ric l plicción del Rhizophgus fscicultum en vivero y cmpo fue el objetivo de Hernández y Sls (2009). En l fse de vivero se evlúo el diámetro bsl, ltur totl, peso seco del follje y rdiculr, bsorción de nutrimentos en el follje y el sistem rdiculr. En cmpo se cuntificó ltur totl, diámetro, y bsorción de nutrimentos en el follje. Los resultdos mostrron myores incrementos promedio en todos los trtmientos inoculdos (ronrón, Astronium grveolens, l tec, Tecton grndis y el mrillón, Terminli mzoni) sí como en l bsorción de nutrimentos como el Mg, Cu, Zn, Mn y Fe, tnto en el follje como en el sistem rdiculr. En l reserv de l biosfer de Chmel-Cuixml en México fueron inoculds en vivero seis especies tropicles con especies micorrícics procedentes del sitio destindo l reforestción donde Hunte et l., (2012) después de un ño de evlución determino que ls especies involucrds en el experimento difieren en su cpcidd pr beneficirse de los HMA y l myor cpcidd de respuest en ltur de l plnt y l producción de hojs fue exhibido por ls especies de crecimiento lento Swieteni 14

26 humilis, Ltiflor Hintoni y Cordi lliodor. Al finl de l tempord de crecimiento (noviembre), l ltur de ls plnts de ls especies de crecimiento rápido Tbebui donnel-smithii, Ceib pentndr y Guzum ulmifoli no fueron influencidos por HMA. Sin embrgo, los inóculos de HMA umentron l producción de hojs de tods ls especies vegetles, independientemente de ls crcterístics funcionles de ls especies, lo que sugiere un mejor provechmiento del espcio sobre el suelo y l generción de un mbiente limitdo luz bjo el dosel, lo que contribuyó l supresión de pstos. L inoculción de ls plántuls sembrds en áres de pstizles bndondos se recomiend pr l resturción ecológic debido l lt cpcidd de respuest de crecimiento de ls plántuls en l myorí de ls especies. En Los Tuxtls, Vercruz Álvrez et l., (2007) nlizron el efecto de los hongos micorrícicos rbusculres sobre el crecimiento y l supervivenci de dos especies plántuls (Piper uritum y Rollini jimenezzi) en l primer etp en inverndero donde el fctor de micorrizción produjo diferencis significtivs en el peso seco folir y proporción del áre folir, posteriormente fueron trsplntds en áres degrds derivds de ls selv tropicl húmed destcándose ls plnts micorrizds con diferencis significtivs en tres de ls vribles dsométrics de l plnt y umento l sobrevivenci de ls misms en cmpo. Se determino que l utilizción de diferentes gremios tiene myores posibiliddes de éxito en l resturción debido ls respuests ecofisiológics diferentes de cuerdo ls condiciones mbientles. Los trbjos relizdos en ls selvs se enfocn l resturción ecológic l cul se define como l recuperción de un ecosistem que h sido perturbdo, degrddo o destruido tomndo en cuent l biodiversidd y procesos ecológicos hciendo énfsis en l sucesión pr trtr de reproducir un ecosistem igul l perdido, de est mner se trt de estblecer un comunidd vegetl que contemple ls especies de los diferentes estdios sucesiónles junto con especies que hyn permnecido después de los disturbios. El suelo es un fctor determinnte en l resturción pues requiere del desrrollo de un vegetción ntiv (Mrtínez y Grcí, 2007) pr construir un ecosistem lo más precido l que nteriormente existió (Brdshw, 1997; Hnselwndter, 1997 citdos por Álvrez et l., 2007). Los HMA colonizn un grn vriedd de especies vegetles, sin embrgo, se sbe que l mgnitud de los beneficios que portn estos simbiontes su hospedero depende directmente de l preferenci entre colonizdor simbionte-huésped plnt y vicevers, determinndo el éxito ecológico de mbs especies, sí como l estructur de l comunidd fúngic y vegetl en el ecosistem (vn der Heiiden, 1998). En ls selvs los HMA formn simbiosis micorrícic con l myorí de ls especies vegetles (Álvrez et l., 2007) yudndo principlmente en l dquisición de los nutrientes y gu (Smith y Smith, 2012). Por estos resultdos observdos se puede 15

27 determinr que, l utilizción de HMA en l producción de plántuls portn un estblecimiento y crecimiento vegettivo exitoso (Rmos y Gudrrm, 2004) determinndo el rumbo de ls comuniddes vegetles y micro fúngics en l sucesión ecológic (Aziz et l., 1995) Producción de plnt tropicl socid con HMA destind l resturción de ecosistems tropicles. El éxito del estblecimiento de ls plnts en ecosistems tropicles degrddos depende l intercción con microorgnismos del suelo. Se sbe que los microorgnismos que destcn en los suelos tropicles son hongos micorrícicos rbusculres (Alexnder y Lee, 2005). L simbiosis mutulist entre plnt y hongo h sido estudid mplimente, sin embrgo no hn sido plicds por los progrms de reforestción y resturción suelos degrddos tropicles, posiblemente por l dificultd pr ser mnipuldos y producirlos grn escl (Chnwy et l citdo por Rmos y Gudrrm, 2004). En México, los esfuerzos pr lcnzr l sustentbilidd se limitn l producción de biofertliznte de índole grícol, como lo hce l compñí Mexicn Biosustent que inuguró l segund myor plnt de biofertiliznte in vitro del mundo en el estdo de Michocán, especilizd en l producción de hongos micorrícicos y bcteris promotors del crecimiento vegetl, donde se producen especies con eficienci comprobd en l colonizción y los beneficios en plnts de importnci grícol (SAGARPA, 2012) dejndo de ldo l producción de inóculo pr especies forestles lo que repercute en un nul utilizción de estos hongos en progrms de resturción con plnt forestl tropicl grn escl (Rmos y Gudrrm, 2004). Los estudios pr l producción de especies ntivs son escsos, pesr que deberín ser l prioridd en l producción de biofertilizntes y que se segur el éxito en el desrrollo de l socición y con ello el mejor desrrollo de ls especies vegetles. (Urgiles et l., 2008). Logrr esto, implic un conocimiento básico de l riquez y bundnci de especies de hongos micorrizógenos presentes en ls selvs de Vercruz y de sus efectos sobre ls posibles plnts hospeders (Méndez, 2012). Es indudble que flt informción pr el mnejo y producción de inoculntes de hongos micorrizógenos, pero es imprescindible tomr en cuent l importnci de est socición en progrms de mnejo de ecosistems nturles, como son l repoblción y resturción de mbientes tropicles deteriordos (Rmos y Gudrrm, 2004). El trbjo de Méndez, (2012) proporcion l bse pr el mnejo de hongos micorrizógenos ntivos propios de C. odort reflejndo l lt diversidd micorrícic presente dentro de los ecosistems tropicles del estdo de Vercruz, l cul es 16

28 indispensble pr entender l intercción plnt-microorgnismo y con ello l función que cumple en el mnejo, conservción y propgción de especies forestles en áres con lgún disturbio. El mismo utor segur que existe un fuerte relción micorrícic entre estos hongos y C. odort; nte ello, sugiere replicr estos hongos pr utilizrlos en l producción de plántuls, fin de logrr un mejor dptción l estblecerls en condiciones nturles Producción de plnt en viveros forestles y el mnejo de HMA En el 2007 los viveros del pís produjeron millones de plántuls pr el progrm Pro-Árbol, de ls cules 23.7 millones de plántuls (12.7%) fueron de C. odort, Vercruz fue uno de los estdos más poydos pr reforestciones ese ño según el Informe pr l Auditorí Superior de l Federción (2009). L Numerli Históric del Anurio Estdístico de Vercruz Igncio de l Llve del 2011 (SEFIPLAN, 2011) indic que l demnd de plnt forestl umento más de 2.3 veces con respecto l ño Dich demnd es bstecid por 65 viveros reconocidos oficilmente por l CONAFOR según INEGI, (2011) de los cules se pueden detectr 26 viveros en distintos municipios del estdo que producen plnts comunes tropicles, sin embrgo es probble, según el estudio relizdo por Rodríguez en el 2010 que solo 12 viveros del estdo de Vercruz, tmbién produzcn plántuls de C. odort, dicho por l especilidd de estos en l producción de plnt de Swieteni mcrophyll, cinco vinculdos l Secretrí de Desrrollo Agropecurio Rurl Forestl y Pesc (SEDARPA) y siete l Comisión Ncionl Forestl (CONAFOR). Logrndo un producción proximd en el 2011 de 6 millones 953 mil plnts de C. odort pr todo el estdo de Vercruz (SEFIPLAN, 2008; SEFIPLAN, 2011) destinds l reforestción y/o ls plntciones forestles comerciles El sustrto en l producción de plnt forestl El sustrto es el soporte físico pr el cultivo de ls plnts en contenedor. Este término se plic en l producción de plnt en vivero, se refiere todo mteril sólido diferente del suelo que puede ser nturl o sintético, minerl u orgánico y que colocdo en un contenedor, de form pur o mezcld, permite el nclje de ls plnts trvés de un sistem rdicl. (Pstor, 1999) Ls funciones más importntes de un sustrto en l producción de plántuls son el proveer el gu suficiente l semill y posteriormente l plántul, l mismo tiempo suministrr los nutrimentos necesrios pr el buen desrrollo y crecimiento, permitiendo el buen intercmbio gseoso entre l tmósfer y el sustrto (Rodríguez et l., 2010; Berrospe et l., 2012). 17

29 En el estdo de Vercruz el 58 % de los viveros forestles pertenecen CONAFOR y utilizn l denomind Mezcl bse (Cudro 1) compuest por Pet moss, Vermiculit y Agrolit, pues es l mezcl que mejores resultdos presentdo según los reportes de los viveros forestles militres de Syul y Jmy Jlisco, demás de su fácil trbjo y prevención de ptógenos como el Fusrium sp. cusnte del Dmping-off (Rodríguez, 2010; Aldm y Aguiler, 2003). Cudro 1.- Componentes del sustrto empledo en l producción de plnt forestl en los viveros de l CONAFOR. Mteril Mezcl bse Pet moss 61% Vermiculit (grdo medio) 21% Agrolit 18% Osmocote ( )* 4.73 gr/litro de mezcl bse *Concentrción del fertiliznte de liberción controld. Según Zmor et l., (2005) l mezcl de Pet moss y Agrolit cuentn con ls crcterístics físics y químics de cd componente (Cudro 2,3) ideles pr l producción en contenedores de culquier tipo de plnt debido ls condiciones de ireción, espcios porosos, cntidd de mteri orgánic y el volumen de gu disponibles un vez mezcldos de cuerdo ls proporciones requerids pr l especie vegetl cultivr (Cudro 4) Crcterístics del sustrto mezcl bse utilizdo por CONAFOR L mezcl bse es l combinción del sustrtos químicmente inertes y ctivos; los sustrtos químicmente inertes ctún como soporte de l plnt, no interviniendo en el proceso de dsorción y fijción de los nutrientes, por lo que hn de ser suministrdos medinte l solución fertiliznte. Los sustrtos químicmente ctivos sirven de soporte l plnt pero su vez ctún como depósito de reserv de los nutrientes portdos medinte l fertilizción lmcenándolos o cediéndolos según ls exigencis del vegetl (Toledo, 2006). Posee un elevd cpcidd de intercmbio ctiónico, fvoreciendo un mejor provechmiento de los fertilizntes, ph óptimo, conductividd eléctric idóne, evitndo problems de slinidd (AGROLITA). Actulmente según Rodríguez et l., (2010) en viveros con un myor nivel de tecnificción se utilizn mezcls de sustrtos rtificiles como vermiculit, grolit y pet-moss en sustitución de suelo forestl debido l fcilidd de operción y prevención de los ptógenos. Sin embrgo, estos sustrtos crecen de propágulos micorrícicos y de nutrientes esenciles pr el funcionmiento de l simbiosis. 18

30 Adicionlmente cundo estos sustrtos son usdos pr l preprción de inóculos micorrícicos su efecto en l colonizción de ls ríces es ún contrdictorio y h sido poco estudido (Corkidi et l., 2004). Cudro 2.- Propieddes Químics por componentes del sustrto mezcl bse. Sustrto ph CE MO C Mg K P CIC Pet-moss Agrolit Vermiculit* > meq/l Tomdo de Zmor et l., (2005) y *Tomdo de (Agrolit 2). Componentes del cudro, ph: potencil hidrómico, CE: conductividd eléctric, MO: mteri orgánic, CIC: coeficiente de intercmbio ctiónico. Cudro 3.-Propieddes Físics por componente del sustrto mezcl bse. Sustrto Densidd (gr.cm 3 ) Aprente Rel Porosidd% AR% CA% EPT% MS% Pet-moss Agrolit Vermiculit* kg/m litros/m Tomdo de Zmor et l., (2005) y *Tmdo de Toledo, (2006). Componentes del cudro AR: gu retenid, CA: cpcidd de ireción. EPT: espcio poroso totl, MS: mteril solido. Cudro 4.- Propieddes físic y químics del sustrto Mezcl bse Propieddes Físics Densidd.09 g/cm 3 Porosidd % Retención de Humedd 45% Propieddes Químics ph CE.87 ds/m CIC meq/100gr Tomdo de AGROLITA (1), Componentes de cudro ph: potencil hidrómico, CE: conductividd eléctric, CIC: coeficiente de intercmbio ctiónico Fertilizción en l producción de plnt forestl tropicl ncionl 19

31 L producción de plnt en los viveros oficiles en contenedores que utilizn como medio de crecimiento sustrtos inertes los cules no portn nutrientes ls plnts, se hce fundmentl l práctic de fertilizción pr el cultivo (Aldm y Aguiler, 2003). El siguiente Cudro (5) muestr ls fertilizntes empledos en l producción de plnt, los cules tienen un lto porcentje de (P) fósforo en l fse de desrrollo inicil y de endurecimiento, segurmente porque es un nutriente esencil pr el crecimiento de ls plnts (Hrrison y vn Buuren, 1995). Sin embrgo, en l producción de plnt forestl micorrizd es necesrio reducir el porcentje de P en ls fórmuls de fertilizntes utilizds, y que myor concentrción de P disminuye el porcentje de colonizción de HMA (Lucs, 2011). Cudro 5- Progrm de fertilizción pr especies forestles tropicles CONAFOR Fse de desrrollo Etp de Aplicción Durción (semns) Germinción Crecimiento inicil Crecimiento rápido Endurecimien to lignificción Fertiliznte (Fórmul) Sin fertiliznte Concentrción Recomendd de N (ppm) Gr/Litro Sin dosificdor Fertiliznte pr diferentes cntiddes de solución (Kg) 10 L 20 L 30 L Sin fertiliznte Tomdo de Aldm y Aguiler, (2003). Los HMA son cpces de optimizr l bsorción de P del suelo debido los cmbio bioquímicos de l ríz efectudos por el hongo (estos cmbios son explicdos en el subtem 4.4.3) (Vnce et l., 2003). Por estos motivos Miysk et l., (2003) recomiend en l producción de inóculo micorrícico rbusculr, plicciones de fertilizntes que contengn de 5 6 % de P Antecedentes del uso de HMA en plnts de C. odort En el bosque tropicl húmedo de Dnts, Huánuco, Perú se evluó l presenci de hongos micorrizicos en socición simbiótic con ls especies C. odort, Copifer reticult y Cedreling cteneformis pr determinr el tipo de micorriz, registrr y cuntificr los propáglos de micorrizs versículo rbusculres en el suelo, sí como cuntificr l infección micorrícic en ls ríces de ls especies estudids. C. odort y 20

32 Cedreling cteniformis presentron HMA y Copifer reticult presentó HMA e indicios de micorriz ectotrófic (ME); se hllron nódulos fijdores de nitrógeno en Cedreling cteneiformis. El potencil de inóculo de HMA en el bosque de Dnts fue lto. Se preció un relción invers entre el número de propágulos y ls condiciones edáfics del bosque. (Mecins et l., 1991). Se estudiron ls relciones entre ls plnts y micorrizs rbusculres (MA) l diversidd de hongos, y sus efectos sobre l función del ecosistem, en un serie de réplics de prcels forestles tropicles en l Estción Biológic L Selv, Cost Ric. En dichs prcels tenemos los monocultivos replicdos de cd un de ls tres especies de árboles de importnci comercil: C. odort L. (Melicee), Cordi lliodor (R & P) Chm. (Borgincee); Hyeronim lchorneoides Allemão (Euphorbicee). Ls prcels tenín 12 ños de edd y ern monocultivos de tres especies de árboles o policultivos de ls especies de árboles con dos especies de sotobosque dicionles. El índice de diversidd de Shnnon de l comunidd de espors de HMA mrco diferencis significtivs entre ls tres especies de árboles, pero no fue significtivmente diferente entre prcels de monocultivo y policultivo. L comunidd de especis de HMA se conformo por 16 morfo especies, sin embrgo ls especies que myormente componen l comunidd son Aculspor morrowie, A. scrobicult, A. spinos, A. melle, P. occultum-like, nd G. etunictum/geosporum-like representndo el 90% de ls espors de l comunidd (Lovelock y Ewel, 2005). En el Cmpo Experimentl El Plmr, INIFAP, ubicdo en Tezonp, Ver. Se evluron tres métodos de inoculción de micorriz (R. intrrdices) en l producción de plnts de C. odort en contenedor de 310 ml, donde se estbleció un diseño experimentl completmente l zr con 4 trtmientos: T1 inoculción en sustrto; T2 inoculción en riego; T3 inoculción en semill y T4 testigo. Ls mediciones se relizron cd 15 dís evlundo ls vribles ltur, número de hojs y diámetro del tllo. Al finl del experimento se midieron peso fresco y seco de ríz y tllo, número de espors, colonizción micorrícic y se obtuvo l eficienci del simbionte medinte el índice de clidd de ls plántuls. De cuerdo los resultdos el trtmiento que promovió myor intercción micorrícic fue el de inoculción en semill, incrementndo el desrrollo de ls plnts de C. odort, demás l socición de G. intrrdices con C. odort indic un dependenci micorrícic lt; y medinte l inoculción con micorrizs se mejor l bsorción de nutrimentos por prte de l plnt promoviendo un myor desrrollo en menor tiempo reduciendo su estnci en el vivero (Amdor, 2010). Rodríguez et l., (2011) en el nálisis de los hongos micorrícicos rbusculres y su implicción en l producción y mnejo de especies neotropicles forestles concluye que en el estblecimiento de plntciones forestles comerciles y reforestción con especies de mders precioss como ls meliáces pr stisfcer l demnd creciente de 21

33 mder, deben incluirse los HMA como un fctor obligdo pr incrementr los contenidos nutrimentles de ls plnts y por lo tnto mejorr su crecimiento y producción, disminuyendo el tiempo de ls primers etps de crecimiento de C. odort en ls que es susceptible l tque de l principl plg el gusno brrendor (Hypsipyll grndell Z.). Esto implicrí hcer modificciones en ls práctics comunes de los sistems de producción de plnt de los viveros, que pudiern resultr perjudiciles l estblecimiento y funcionmiento de l simbiosis fectndo l relción costo-beneficio del mntenimiento de l simbiosis. Dentro de un inverndero se evluó el efecto de los hongos micorrícicos rbusculres en el desrrollo inicil de C. odort; por ello, se relizó un bioensyo utilizndo diferentes fuentes de inóculos procedentes de dos ecosistems tropicles donde se distribuye est especie en el estdo de Vercruz. Se estblecieron cutro trtmientos: 1, inoculción direct con un consorcio de espors; 2, inoculción con ríces colonizds provenientes de cmpo; 3, sin inoculción; 4, sin inoculción en suelo ntivo no estéril (T1, T2 y T3 en suelo ntivo esterilizdo). Los resultdos mostrron diferencis estdístics en los prámetros de crecimiento de los inoculntes provenientes de selv medin subperennifoli, en donde T4 rrojó los mejores resultdos. Lo que demuestr un lt relción micorrícic entre C. odort y los HMA, principlmente con Aculospor melle que muestr l myor frecuenci reltiv dentro del ecosistems de l selv lt y G. ggregtum dentro de l selv medin, demás el uso de herrmients moleculres refirmo principlmente l presenci ests especies de hongos en el interior de ríces de C. odort (Méndez, 2012). 5 MATERIALES Y MÉTODOS 5.1. Sitio experimentl El presente estudio se llevó cbo en el Lbortorio de Micologí de l Fcultd de Ciencis Forestles (FCF) perteneciente l Universidd Autónom de Nuevo León (UANL) en Linres, Nuevo León, México, (Figur 7) pr evitr ls inclemencis del tiempo y poder controlr l tempertur; y que en Linres ls helds de invierno son extrems de hst -8 C presentds entre los meses de noviembre febrero seguids por temperturs extremdmente cálids de hst 45 C en primver-verno, oscilndo l tempertur medi nul entre los 12 y 18 C. Debido estos fctores climtológicos fue necesrio estblecer el experimento entre los meses de mrzo gosto por ser el 22

34 intervlo de tiempo más cálido y benéfico pr l decud propgción de HMA en cultivos trmp y l eficienci de estos hongos en el crecimiento de C. odort. Golfo de México Océno Pcífico Linres Crreters Nuevo León-Mpio. Linres Figur 7.- Loclizción de l Fcultd de Ciencis Forestles en Linres Nuevo León, México Diseño experimentl pr evlur l respuest de plántuls C. odort socids con HMA Con bse l sistem de producción de plnt en contenedor de l CONAFOR, en el cul se emplen diferentes dosis de fertiliznte (RF) plicdos de cuerdo cd etp de crecimiento de ls plántuls pr ls especies tropicles (Cudro 9) y, ls ventjs de l simbiosis mutulist proporciond por los HMA. Se diseño el experimento incluyendo los dos fctores menciondos (RF y HMA), integrdos por diferentes niveles en cd fctor; El primer fctor (A) HMA ntivos lo integrron (7 niveles) 2 especies de l selv medin y 2 especies de l selv lt, 2 consorcios extrídos del suelo ntivo más 1 testigo sin inoculnte y el segundo fctor (B) RF lo conformó 4 niveles en prte por millón: 0, 12.5, 25 y 37.5 ppm de los fertilizntes empledos en ls etps de crecimiento (el nivel 25 ppm es el más recomenddo por l CONAFOR ) dentro de l producción de plnt tropicl nivel ncionl. De est mner son posibles 28 23

35 combinciones de trtmiento (Cudro 6) con 6 repeticiones, dndo un totl de 168 contenedores de evlución pr un diseño fctoril letorizdo. Cudro 6.- Diseño fctoril pr evlur l respuest de C. odort inoculd con HMA bjo regímenes de fertilizción. Fertiliznte ppm. (A) (B 1 ) Acuulospor melle Hongos Micorricicos Arbusculres (B) Selv Alt Selv Medi Testigo (B 2 ) Rhizophgus custos (B 3 ) Consorcio SA (B 4 ) Glomus grgtum (B 5 ) Diversispor spurc (B 6 ) Consorcio SM 0 (A 1 ) (A 1 B 1 ) (A 1 B 2 ) (A 1 B 3 ) (A 1 B 4 ) (A 1 B 5 ) (A 1 B 6 ) (A 1 B 7 ) 12.5 (A 2 ) (A 2 B 1 ) (A 2 B 2 ) (A 2 B 3 ) (A 2 B 4 ) (A 2 B 5 ) (A 2 B 6 ) (A 2 B 7 ) 25 (A 3 ) (A 3 B 1 ) (A 3 B 2 ) (A 3 B 3 ) (A 3 B 4 ) (A 3 B 5 ) (A 3 B 6 ) (A 3 B 7 ) 37.5 (A 4 ) (A 4 B 1 ) (A 4 B 2 ) (A 4 B 3 ) (A 4 B 4 ) (A 4 B 5 ) (A 4 B 6 ) (A 4 B 7 ) Cd combinción (A n B n ) fue repetid 6 veces. (B 7 ) 5.3. Sustrto mezcl bse en l producción de C. odort L CONAFOR desde que inició de mner intensiv l producción de plnt en contenedores, h utilizdo un sustrto rtificil bse de pet-moss, vermiculit y grolit denomindo mezcl bse (Cudro 7) que se h estndrizdo pr l producción de plnt en contenedor y corresponde ls proporciones que mejores resultdos hn ddo en los Viveros Forestles Militres de Syul, y Jmy, Jlisco. Cudro 7.- Mezcl bse utilizd por CONAFOR. Mteril Mezcl bse Pet moss 61% Vermiculit (grdo medio) 21% Agrolit 18% Osmocote ( ) 4.73 gr/ litro de MB Tomdo de Aldm y Aguiler, (2003) 5.4. Inoculnte micorrícico rbusculr L inoculción en este trbjo se relizó con 20 espors por especie de hongos micorrícicos. El inóculo fue lmcendo en el lbortorio de Micologí de l Fcultd de Ciencis Forestles de l UANL por Méndez (2012), posterior un estudio bsdo en l estdístic descriptiv pr determinr l diversidd de HMA que estuviern directmente socidos C. odort bjo dos ecosistems tropicles selecciondos, l selv medin subperennifoli y l selv lt perennifoli donde pr cd uno de los 24

36 escenrios, el mismo utor, determino ls 2 especies micorrícics (Cudro 5) más fuertemente representds en el suelo donde se encontrb l rizósfer de los árboles. Cudro 8.- Especies micorrícics de dos ecosistems tropicles de Vercruz. Selv medin perennifoli **Glomercee ***Glomus ggregtum N.C. Schenck & G.S. Sm. *Diversisporles **Diversisporce ***Diversispor spurc (L.J. Kenn., J.C. Stutz & J.B. Morton) C. Wlker & Schuessler Selv lt perennifoli *Glomerles **Glomercee ***Rhizophgus custos (C. Cno & Y. Dlpé) C. Wlker & Schuessler **Aculosporcee ***Aculospor melle Spin & N.C. Schenck Tomdo de Méndez (2012).*Genero ** Fmili *** Especie y su nombre científico Regímenes de fertilizción plicds plántuls de C. odort socids con HMA. Ls dosis de fertiliznte usds como referenci en este experimento son ls recomendds por l Aldm y Aguiler, (2003) (Cudro 9) en el progrm de fertilizción pr especies forestles tropicles que consiste en 4 fses de desrrollo. Cudro 9.- Bsd en el Progrm de fertilizción pr especies forestles tropicles de l CONAFOR (Aldm y Aguiler, 2003). Fse de desrrollo Etp de plicción Durción (semns) Fertiliznte (formul) Germinción Sin fertiliznte Concentrción recomendd de N (ppm) Crecimiento inicil 1 4ª - 6ª Crecimiento rápido 1 7ª - 10ª Endurecimiento o lignificción 1 11ª - 13ª ª - 16ª Sin fertiliznte 25

37 Pr fines de este trbjo, ls dosis de fósforo (P) se redujeron en ls fórmuls de l fse inicil y crecimiento rápido 7% debido que myores concentrciones de este elemento se ve disminuid l micorrizción (Cllejs et l., 2009; Gutiérrez et l., 2009). Los cálculos de ls cntiddes de fertilizntes plicdos C. odort se muestrn en el Cudro 10. Cudro 10.- Cálculos de l cntidd de fertiliznte por formul, con bse l nitrógeno. Fertilizción en ppm requerids Inicil (7-7-17) Cntidd de fertiliznte (mg/l) por fse de desrrollo Rápido ( ) Lignificción (4-7-35) * * * Concentrciones recomendds de N Estblecimiento del experimento L siembr se relizó en contenedores bols de polietileno negro de 7x18x6 cm (756 cm 3 ) pr producción de plnt mner trdicionl, ls cules se llenron con el sustrto mezcl bse previmente húmedo, presionndo ligermente l momento del llendo. Previmente l siembr, el dí 9 de febrero se plicó un riego pesdo l sustrto de cd contenedor y con el extremo redondo de un probet esterilizd se hizo un protubernci cóncv donde se colocron 3 semills de C. odort sin esterilizr e inmeditmente se depositron 20 espors de ls diferentes especies de HMA entre ls semills procurndo que l emerger l rdícul los 8 dís (16 de febrero) ést, tuvier contcto con el inoculnte micorrícico. Se plicó un riego cd 5 dís con 100 ml cd contenedor mnteniendo el sustrto cpcidd de cmpo. El 29 de febrero presentd l germinción totl en un 70% y l liberción de los cotiledones de cd plnt; Se procedió relizr el trsplnte de ls plántuls que emergieron en un mismo contenedor, est cción fue compñd de un segund inoculción direct l ríz con 20 espors más de HMA correspondiente cd cep ntiv, tnto ls plnts trsplntds como l que ocupó el lugr de germinción inicil. Se plicó un riego pesdo pr evitr el estrés de ls plántuls y l muerte. Enseguid se letorizron ls 6 repeticiones de ls diferentes especies de HMA entre los 4 niveles de fertilizción propuestos conformndo el mismo número de bloques, donde uno de los riegos fue sustituido con l plicción de 100 ml de solución mdre menciondos nteriormente en el Cudro 7, optimizndo sí el progrm de fertilizción. 26

38 Pr l prevención y reducción de l presenci de Fusrium sp. se estbleció el periodo de 5 dís pr l plicción de los riegos, y que ls condiciones de tempertur promedio de 26 C, l humedd, l bj ts de iluminción solr y l escs evporción del sustrto ocsiondo por el lugr donde se estbleció el experimento, propició ls condiciones pr que se presentr l mortlidd del 21.15% (56 plnts) de ls plnts debido l presenci de este hongo cusnte del Dmping-off Vribles de estudio Ls vribles de estudio divergen entre y dentro de ls etps de este estudio en dos ctegorís bien definids; ls que son medibles determinds por ls 5 fechs de evlución estblecids y ls vribles extríds del muestreo destructivo l que conllev l evlución de colonizción intrrrdicl de los hongos formdores de micorriz. L vribles medibles en l respuest de C. odort l inóculo ntivo son l ltur, el diámetro y el número de hojs compuests. Ls tres vribles se empezron medir 47 dís después del trsplnte (ddt), mientrs el peso seco de l prte ére y de l ríz se determinron 10 dís después de l últim medición (136 ddt). En l medición de l ltur se tomó como punto de prtid l bse del tllo y como punto de referenci l yem picl más lt, este ejercicio se relizó con l mism regl metálic en cd un de ls fechs de medición. L determinción del diámetro se relizó en l bse del tllo utilizndo un solo vernier digitl en tods ls fechs de medición. El conteo del número de hojs se relizó de form mnul contndo tods ls hojs visibles lo lrgo del tllo en cd fech. Determinción del porcentje de colonizción intrrdicl, pr est vrible se cortó 1 g de ríces secundris y se utilizó el método de Philips y Hymn (1970) (Anexo 1) que consiste en l colorción de ls estructurs de HMA (rbúsculos, vesículs e hifs, que son estructurs de formción del hongo dentro de l ríces de l plnts) dentro del sistem rdiculr de ls plnts, donde solo se evluó l presenci o usenci de ls estructurs del hongo en intersecciones de ls ríces evluds (Anexo 2). 27

39 El peso seco éreo y rdiculr se determinó colocndo l prte ére y rdiculr de ls plántuls en un bols de ppel de estrz etiquetd de cuerdo l trtmiento y se introdujeron en l estuf de secdo hst obtener el peso constnte Análisis estdístico Todos los dtos obtenidos en ls vribles de estudio del diseño experimentl, fueron ordendos y sometidos su nálisis de vrinz (ANOVA) utilizndo el progrm estdístico Minitb 15 medinte el siguiente procedimiento del modelo estdístico pr dos fctores propuesto por Kuehl, (2001) y se plicó un comprción múltiple de medis trvés de l prueb Tukey ( α=0.05). Donde: i = 1, 2,. Niveles del fctor A. j = 1, 2, b. Niveles del fctor B. k= 1, 2, r. Replics de combinciones. = es l medi de l combinción de los trtmientos A i y B j. = son los errores experimentles letorios con medi 0 y vrinz σ 2. El nálisis de dtos estrá en función l cumplimiento de los supuestos de normlidd y homogeneidd de vrinz de los dtos como lo consider Kuehl, (2001). 6. RESULTADOS 6.1. Respuest de vribles de crecimiento Los resultdos se nlizron por efecto en l regímenes de fertilizción (RF) el cul fue el único que presentó diferencis significtivs (p 0.05), demás del inoculción con HMA y en l combinción de estos dos fctores (RF*HMA) en busc de un respuest trvés de ls vribles de crecimiento. En el Cudro 11 se resumen los vlores numéricos de dichos fctores en ls diferentes vribles evluds. 28

40 Cudro 11.- Resumen del nálisis de vrinz pr vribles de respuest Vrible RF HMA RF*HMA CM F P CM F P CM F P CME Altur Diámetro * N. Hojs Peso/Áre folir Peso seco ríz Peso seco tllo Arbúsculos * Vesículs * Hifs * * Muestr ls diferencis significtivs (Tukey p 0.05) de los fctores en cd vrible de respuest. En l vrible ltur de plnt los trtmientos fctoriles no mostrron efecto significtivo en l últim evlución relizd hst con ls plnts ls cules no se les plicó fertilizción. Aun que el régimen 0 ppm no fue diferente que los demás, presentó ls menores lturs de ls plnts. L fertilizción con 12.5 ppm presentó poco más de 4 mm menos en comprción con el régimen 25 ppm. Los HMA ntivos hcen su función de bsorción de los nutrientes l grdo que especie A. melle reflejó más su cpcidd de similción en l myor ltur de ls plnts, mostrndo 2.28 cm más que ls plnts no inoculds (Figur 8A). Por otr prte, el diámetro de ls plnts bjo el nivel de fctor 25 ppm tribuyó diferencis significtivs (p 0.05) resultndo ser superior ls plnts no fertilizds, unque no fue diferente significtivmente de ls concentrciones de fertiliznte 12.5 y 37.5 ppm. Ls plnts no fertilizds presentron menor diámetro, determinndo l importnci de l fertilizción en l producción de plnt micorrizd. L especie D. spurc umento el diámetro de ls plántuls en más de 1.1mm en comprción con ls no inoculds (Figur 8B). Lo nterior nos indic l cpcidd de los HMA en l similción de los nutrientes. En cunto l número de hojs, no se presentron diferencis l comprr el nivel de fertilizción 0 ppm con el régimen de 25 ppm. Sin embrgo, l similción de los 29

41 Numero de hojs Dimetro (mm) Altur de l plnt (cm) nutrientes por l especie micorrícic A. melle proporcionó el crecimiento en promedio de 1.8 hojs más que ls plántuls inoculds con R. custos (Figur 8C). A 10.5 Dosis de Fertiliznte HMA ppm 12.5 ppm 25 ppm 37.5 ppm Acuulospor melle Diversispor spurc Glomus grgtum Rhizophgus custos Selv Alt Selv medin Testigo B Dosis de Fertiliznte b HMA 1.65 bc c c 0 ppm 12.5 ppm 25 ppm Dosis de Fertiliznte 37.5 ppm Acuulospor melle Diversispor spurc Glomus grgtum Rhizophgus custos Selv Alt Selv medin Testigo HMA ppm 12.5 ppm 25 ppm 37.5 ppm Acuulospor melle Diversispor spurc 30 Glomus grgtum Rhizophgus custos Selv Alt Selv medin Testigo

42 Peso seco de l ríz (g) Peso seco re folir/re folir Figur 8.- Respuest de vribles de crecimiento bjo el régimen de fertilizción plnt de C. odort socid con HMA. A: vrible Altur. B: vrible Diámetro. C: vrible Número de hojs- en los niveles de cd fctor. Niveles de fctores con l misms letrs son estdísticmente igules (Tukey p 0.05). El nálisis de vrinz pr l vribles peso seco folir (g) / áre folir (cm 2 ), peso seco tllo y peso seco ríz, muestr que en los fctores involucrdos sí como en su combinción, no existen diferencis significtivs, no obstnte, l comprción de medis indic que l dosis de fertiliznte 25 ppm fue superior l incrementr el peso seco de dichs vribles en ls plnts inoculds con l especie micorrícic D. spurc en l vrible peso seco folir/áre folir (Figur 9A), l especie A. melle dio más peso seco de l ríz y el tllo (Figur 9B,C) seguid d l especie R. custos. A Dosis de Fertiliznte HMA ppm 12.5 ppm 25 ppm 37.5 ppm Acuulospor melle Diversispor spurc Glomus grgtum Rhizophgus custos Selv Alt Selv medin Testigo B Dosis de Fertiliznte HMA ppm 12.5 ppm 25 ppm 37.5 ppm Acuulospor melle Diversispor spurc Glomus grgtum Rhizophgus custos Selv Alt Selv medin Testigo 31

43 Peso seco tllo (g) C ppm Dosis de Fertiliznte 12.5 ppm 25 ppm HMA 37.5 ppm Acuulospor melle Diversispor spurc Glomus grgtum Rhizophgus custos Selv Alt Selv medin Testigo Figur 9.- Peso seco folir de C. odort por fctor, l finl del cultivo estblecido dentro del lbortorio. A. peso seco folir/áre folir. B. peso seco ríz. C. peso seco tllo. L mism letr indic que son estdísticmente igules según l prueb Tukey p L combinción de mbos fctores indic en el Cudro 11 que no existe intercción en ls vribles ntes evluds con respecto ls especies micorrícics y los diferentes regímenes de fertilizción Respuest l eficienci de colonizción de HMA en C. odort Ls diferencis significtivs (p 0.05) en l eficienci de colonizción intrrrdicl por los HMA en C. odort se debió principlmente ls diferentes concentrciones de fertiliznte, presentándose el myor porcentje de rbúsculos, vesículs e hifs un concentrción de 25 ppm en el régimen de fertilizción. Los rbúsculos y hifs estuvieron presentes en y 47.4 % en ls intersecciones de ls ríces evluds respectivmente, mbs estructurs del hongo micorrícico rbusculr fueron superiores en ls plnts inoculds con l especie A. melle y R. custos (Figur 10A,C) mientrs que ls vesículs tuvieron un myor presenci dentro de ls ríces de plnts socids tmbién con l especie micorrícic R. custos (Figur 10B). L comprción de medis pr l combinción de mbos fctores indicó que todos los trtmientos son igules (Cudro 11). 32

44 Prcentje de hifs Prcentje de vesiculs Porcentje de rbusculos A Dosis de Fertiliznte b b HMA ppm c 12.5 ppm 25 ppm 37.5 ppm Acuulospor melle Diversispor spurc Glomus grgtum Rhizophgus custos Selv Alt Selv medin B 60 Dosis de Fertiliznte HMA 50 b 40 b ppm 12.5 ppm bc 25 ppm 37.5 ppm Acuulospor melle Diversispor spurc Glomus grgtum Rhizophgus custos Selv Alt Selv medin C 50 Dosis de Fertiliznte HMA b b bc 0 ppm 12.5 ppm 25 ppm 37.5 ppm Acuulospor melle Diversispor spurc Glomus grgtum Rhizophgus custos Selv Alt Selv medin Figur 10.-Respuest l eficienci en inoculción de HMA plnts de C. odort bjo regímenes de fertilizción. A. % rbúsculos. B. % de vesículs. C. % hifs. Niveles de fctores con l misms letrs son estdísticmente igules (Tukey p 0.05). 33

45 7. DISCUSIÓN A. melle portó myor ltur ls plnts y es un de ls especies micorrícics rbusculres con más presenci en ls selvs lts, ls cules se crcterizn por ls bundntes precipitciones y árboles con más de 30 (m) metros de ltur. Es posible según Aziz et l., (1995) que l estructur de este ecosistem (selv lt) se promovido por el tipo de microorgnismos mutulists con los que se socin ls plnts en su medio mbiente nturl. El myor porcentje de rbúsculos e hifs fueron encontrdos en el interior de ls ríces en l etp inicil de crecimiento de ls plnts de C. odort socids con A. melle y que ests estructurs micorrícics son fundmentles pr l trnsferenci bidireccionl de nutrientes y gu según Blee y Anderson (1998). Esto coincide con ls condiciones mbientles del experimento, puesto que el sustrto siempre mntuvo l humedd cpcidd de cmpo. Condiciones decuds pr el inóculo procedente de l selv lt donde ls precipitciones supern l cpcidd de cmpo. Méndez, (2012) segur que en condiciones mbientles nturles, l tempord de lluvis promueve myormente l presenci hifs y rbúsculos dentro de l comuniddes micorrícics. D. spurc es un especie que se crcteriz por no formr vesículs en el interior de ls ríces que coloniz y es el primer registro en ls Selvs medins perennifolis según Méndez (2012), y que sólo se hn estudido pr el estdo de Vercruz ls especies de l selv lt perennifoli en los trbjos de Gudrrm y Álvrez (1999). Sin embrgo, en este estudio dich especie fue l segund que presentó myor porcentje de vesículs y produjo el myor diámetro en ls plnts. Esto es de considerrse debido que l formción de vesículs son reservorios de nutrientes del hongo según Perniske (2008), los cules pueden ser un estrtegi pr l nutrición de él mismo en ls tempords más secs del ño. L especie G. gregtum otorg ls plnts l cpcidd de soportr con myor fcilidd el fctor de estrés hídrico en mbientes nturles (Ruiz, 2003). Nosotros, encontrmos que est especie micorrícic produjo l menor bioms rdiculr. Sin embrgo, es común de cuerdo Lovelock et l., (2002), que en mbientes húmedos se presente con menor frecuenci reltiv ls especies del género Glomus, y que l humedd del experimento se mntuvo cpcidd de cmpo y con bj iluminción. Ls nteriores observciones coinciden en este trbjo, puesto que el porcentje de colonizción por G. gregtum fue menor en comprción con A. melle. Lo nterior indic que est especie podrí requerir menor suministro de gu en l producción de plnt forestl y que l especie G. gregtum h sido identificdo en ecosistems secos según (Gudrrm et l., 2007) y result ser menor reltivmente en presenci de A. melle en condiciones nturles húmedos Lovelock et l., (2002). L respuest G. 34

46 Dimetro (mm) Altur (cm) grgtum estuvo influencid por l lt humedd y bj luminosidd. Pues se sbe que l respuest de los HMA está en función de los fctores mbientles en los que se desenvuelven (Rodríguez 2010). En este estudio encontrmos que los vlores de ls principles vribles evluds como l ltur, el diámetro y peso seco de l ríz son mucho menores que los encontrdos en otros trbjos donde se utilizron especies de HMA ntivos comprdos con l especie comercilizd R. intrrdices en l producción de plnt de C. odort (Figur 11). Méndez (2012) reportó que el inoculnte micorrícico de l selv medin port myores incrementos en ltur y bioms sec rdiculr. Él tribuyó los resultdos ls condiciones mbientles y edáfics, ls cules celern el proceso de colonizción. Amdor (2010) muestr ltos vlores numéricos en ls vribles evluds, l inoculr plnt con R. intrrdices. Este utor, encontró que ls diferencis en ltur y diámetro de ls plnts de C. odort se deben l defolición nturl, y l máxim producción de bioms l tribuye l cpcidd de similción de nutrientes por est especie micorrícic. En contrste, Rodríguez (2010) compró inoculntes ntivos del genero Aculospor y Glomus (ls misms especies socids C. odort) contr R. intrrdices y no encontró diferencis significtivs en l respuest morfológic de ls plnts inoculds SA SM SA SM R.i Fernández, 2013 Méndez, 2012 Amdor, SA SM SA SM R.i Fernández, 2013 Méndez, 2012 Amdor,

47 Peso seco riz (g) SA SM SA SM R.i Fernández, 2013 Méndez, 2012 Amdor, 2010 Figur 11.- Comprción de l ltur en plántuls inoculds con HMA ntivos de l selv lt (SA) y selv medin (SM) con l especie micorrícic R. intrrdices (R.i). En nuestro trbjo tribuimos los bjos vlores de ls vribles evluds ls condiciones mbientles principlmente l humedd y tempertur, ls cules precen beneficir l especie A. melle. Es por ello que obtuvo myores incrementos dentro del consorcio selv lt en comprción con ls demás especies y el consorcio de l selv medin, resultdo contrrio l encontrdo por Méndez (2012). Los porcentjes de colonizción no tuvieron respuest en relción con ls diferentes fuentes de inóculo. Ésto es debido que l colonizción empezó desde el inicio de l germinción de ls semílls, umentndo conforme l plnt se desrrollb. Con los trbjos de Amdor (2010) y Rodríguez (2010) se pueden comprr ls fuentes de inóculo del presente trbjo y de Méndez, (2012) observándose myor porcentje de colonizción por ls HMA ntivos en comprción con R. intrrdices (Figurs 12). Sin embrgo Rodríguez (2010) dentro de su estudio, los HMA ntivos presentron menor colonizción, sin diferencis significtivs. Es necesrio hcer énfsis en l utilizción de los HMA ntivos y que están dptdos fctores mbientles tropicles en los que se distribuye C. odort. Ls crcterístics de crecimiento prticulres de ls plnts observds en el presente trbjo, tribuids por los HMA ntivos otorgn l plnt colonizd por el hongo procedente de dos diferentes ecosistems tropicles (selv lt y medin) l fcultd de dptrse culquier terreno destindo pr reforestciones, resturciones y/o plntciones comerciles forestles con culquier crcterístic mbientl (Gudrrm et l., 2007). El consorcio de HMA ntivos procedente de l selv lt con el que se inoculron ls plnts demostró ser superior en tods ls vribles evluds en comprción con l selv medin. Est fuente de inóculo según Smith y Smith (2012) trvés de l cpcidd pr bsorber los nutrientes mejor l cpcidd de producir fotosinttos útiles pr l plnts, lo cul se trduce como el umento en l producción 36

48 Colonizción en % de bioms (Gudrrm y Sánchez 2004). Además, ls plnts micorrizds mnifiestn un umento de l conductnci estomátic en ls hojs, lo que tre consigo un myor cntidd de solutos en l plnt, que son utilizdos en l producción de bioms vegetl según Echevrrí et l., (2011). El mismo utor muestr que los consorcios como inoculntes ntivos portn myores incrementos en ls vribles evluds, coincidiendo con los resultdos encontrdos en nuestro estudio, un que fuesen similres los de más trtmientos. Indicndo demás que con los consorcios de HMA ls plnts soportn y se recupern mejor después de l presenci de un déficit hídrico, lo que puede estr socido l ocurrenci de efectos sinérgicos entre ls diferentes especies que lo conformn, potenciándose uns otrs Fernández, 2013 Méndez, 2012 Amdor, 2010 Rodriguez,2010 Ntivos R.i Figur 12.- Comprción de l colonizción de HMA ntivos y R. intrrdices (R.i). Con el uso de HMA en l producción de plnt se puede umentr ls probbiliddes de éxito de progrms de reforestción y/o resturción (Gudrrm y Sánchez 2004) l utilizr ls especies micorrizs ntivs (Klinhoff 2012) que están dptds los terrenos donde se distribuye C. odort. Pr los progrms de reforestción y resturción, l clidd en l producción de plnt forestl, se trduce como l cpcidd que tienen ls plnts pr sobrevivir en cmpo; est cpcidd se puede evlur en l etp de vivero contemplndo ls crcterístics morfológics, principlmente l ltur más lt, diámetro y formción de ríces en ls plnts de cuerdo Sntigo et l., (2007). En nuestro estudio, el incremento en dich clidd de plnt y l posible cpcidd de sobrevivir myormente en cmpo se encontró l evlurse ls vribles ntes mencionds. Dichs crcterístics de clidd en plnts fue tribuid por ls especies micorrícics A. melle, D. spurc y G. gregtum, cuys funciones primordiles fue l similción de nutrientes, reflejndo un myor incremento no significtivo en ltur, diámetro y formción de ríces en l etp de vivero. Sin embrgo es prudente proponer el uso de ests micorrizs rbusculres, por ser ls 37

49 principles componentes de l comunidd ntiv micorrícic rbusculr de ls ríces de los árboles y el subsuelo de donde se distribuye C. odort en el estdo de Vercruz (Méndez, 2012). El uso de HMA ntivos mixtos es beneficioso pr ls plnts ntivs en l resturción de ecosistems degrddos y recomenddo pr mejorr los tributos morfológicos, fisiológicos, l sobrevivenci de ls plántuls en suelos perturbdos y demás, los efectos positivos de l inoculción se mntienen en el tiempo, incluso después de un periodo prolongdo de sequí en cmpo, y que el suelo impone un fuerte presión de selección sobre l respuest de l plnt l simbiosis (Klinhoff 2012). Por su prte, l utilizción de este tipo de inoculnte increment l productividd vegetl, se reduce l competenci entre individuos umentndo l diversidd, se modific l velocidd y dirección de l sucesión vegetl (Gudrrm y Sánchez 2004) otorgndo un herrmient muy útil en l resturción de ecosistems. L Comisión Ncionl Forestl, cred por decreto presidencil el 4 de bril del 2001, es un Orgnismo Público Descentrlizdo cuyo objetivo es desrrollr, fvorecer e impulsr ls ctividdes productivs, de conservción y resturción en mteri forestl, sí como prticipr en l formulción de los plnes, progrms, y en l plicción de l polític de desrrollo forestl sustentble (CONAFOR 2012). Así es el compromiso de est dependenci de gobierno que, en el Informe pr l Auditorí Superior de l Federción (2009) se reportó que en el ño 2007 los viveros del pís produjeron millones de plántuls pr el progrm Pro-Árbol, de ls cules 23.7 millones de plántuls (12.7%) fueron de C. odort, misms que requirieron un poco más de $ 1, 329, pesos solo pr cubrir ls necesiddes de fertilizción de ese ño. Con l plicción de estos hongos micorrícicos en l etp de vivero se pudiese reducir l inversión en groquímicos de tipo fertiliznte más de $ 664, pesos nivel ncionl pr l producción en contenedor de C. odort, y que en este estudio se demostró que reducir el 50% l dosis de fertiliznte (12.5 ppm) con respecto 25 ppm que plic l CONAFOR, d los mismos resultdos en el desrrollo de ls plnts de C. odort en l etp de vivero, refirmndo que l bsorción de nutrientes es mejord por este tipo de endófitos según Guerr (2008). L reducción de costos es el efecto colterl del uso de estos simbiontes micorrícicos, puesto que en l producción de plnt tropicl el principl beneficio es justrse l polític de desrrollo forestl sustentble pr l cul trbj CONAFOR. Utilizndo HMA ntivos en l producción de plnt se dejrí de contminr con más de ls 37,600 tonelds de fertiliznte (según los insumos utilizdos en l producción de plnt tropicl de l CONAFOR Aldm y Aguiler 2003) que son utilizdos en l producción de C. odort en el pís. Además que l micorriz rbusculr ntiv debe ser considerd como un simbiosis multifuncionl cuyos efectos no se restrinjn l reducción de costos en l nutrición de los cultivos, sino que incluyen tmbién beneficios en términos de l dptbilidd de ls plnts frente l estrés mbientl (ptógenos, 38

50 metles pesdos según Prsd et l., 2011, sequí), del uso sostenido del suelo y de l conservción de l diversidd biológic (Guerrero et l., 1996), este ultimo beneficio, es el más importnte dentro de l resturción y que con ls micorrizs ntivs se pueden determinr el rumbo de ls comuniddes vegetles de los ecosistems tropicles (Aziz et l., 1995). 8. CONCLUSIÓN L flt de diferencis significtivs entre ls fuentes de inóculo, determinn rechzr l hipótesis nul, pues se podrín lcnzr los mismos resultdos en l producción de plnt con culquier de ls especies ntivs según el nálisis de los dtos. Sin embrgo, l usr ls especies más representtivs integrntes de l comunidd micorrícic de los suelos ntivos con respecto los ecosistems tropicles de Vercruz, se determin que l utilizción de un consorcio de especies ntivs integrdo por ls especies A. melle, D. spurc y G. gregtum, en l producción de C. odort será útil pr lcnzr los índices de clidd de plnt y proporcionr l cpcidd de dptción de l especie rbóre un myor rngo de distribución tnto en suelos fértiles y muy húmedos como en suelos pobre y secos. Sin embrgo, es necesrio seguir evlundo el efecto de este consorcio propuesto, pr segurr que no influye un especie en l colonizción de otr y hcer comprciones con otrs especies comerciles; sí como extender estudios en busc de l relción que pudiese existir entre poblciones nturles de otros Estdos donde se encuentre C. odort y hongos micorrícicos rbusculres. Es posible disminuir ls dosis de fertiliznte utilizds por l CONAFOR con l utilizción de HMA ntivos en l producción de C. odort en contenedores, conrtibuyendo demás, con tecnologís estrtégics de desrrollo sustentbles útiles en l resturción de los ecosistems tropicles. Sin embrgo, ún qued por resolver l problemátic de bstecer l demnd de inóculo nivel ncionl, en el momento determinnte de ceptr est herrmient biológic en l producción de plnt dentro del sistem forestl, pues l producción de inóculo grn escl sigue siendo un reto pr l demnd de plnt nivel ncionl. 39

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60 nursery: step towrds reforesttion with ntive species in the Andes of Ecudor. New Forests 38: pp V informe de gobierno V informe de gobierno, Desrrollo sustentble. Aprovechmiento sustentble de los recursos nturles. p vn der Heijden., Mrcel G.A., Boller T., Wiemken A. y Snders I.R Different rbusculr mycorrhizl fungl species re potentil determinnts of plnt community structure. Ecology 79: pp Vnce C.P., Uhde S.C. y Alln D.L Phosphorus cquisition nd use: criticl dpttions by plnts for securing nonrenewble resource. Tnsley review. New Phytologist (2003) 157: pp Velázquez A., Ms J.F., Myorg S.R., Plcio J.L., Bocco G., Gómez R.G., Lun G.L., Trejo I., López G.J., Plm M., Perlt A., Prdo M.J. y González M.F. (2001). El inventrio forestl ncionl Potencil de usos y lcnces. Ciencis, 64: pp Young J.P.W A moleculr guide to the txonomy of rbusculr mycorrhizl fungi. New Phytologist (2012) 193: pp Zmor M, B.P., Sánchez G.P., Volke H, V.H., Espinoz V.D., Glvis S.A Formulción de Mezcls de sustrtos medinte progrmción linel. Intercienci Vol. 30 numero 006. pp

61 10. ANEXOS Evlución del porcentje de colonizción biotrófic por HMA en el sistem rdiculr de ls plnts Pr l determinción de l presenci del hongo micorrízico-rbusculr en ls ríces de ls plnts de cedro y l cuntificción de l colonizción de ésts, se utilizó l colorción de ls estructurs del hongo dentro de l ríz, su observción l microscopio y el conteo de l infección. Pr est evlución se utilizó el método de Philips y Hymn (1970). Este método permitió evlur el porcentje de estructurs de l micorriz: vesículs y rbúsculos dentro de l ríz. Enjugr con gu corriente KOH l 10% KOH l 10 % 121 C, 10 HCL 1%, 10 min. Colornte l 0.05 % 121 C, 10 min Azul de tripno l 0.05% en lctoglicerol Figur 13.- Digrm pr el clreo y tinción de ríces micorrizds. 50

62 Evlución del porcentje de infección por estructurs micorrícics Después de l tinción, ls ríces se colocron en cjs petri con suficiente gu destild. Se tomron 15 segmentos de ls ríces más fins de 1 cm y se colocron de form prlel en el portobjetos previmente cudriculdo y se les gregó uns gots de lctoglicerol. Posteriormente se colocó el cubreobjetos quedndo lists ls lminills pr su observción l microscopio. El porcentje de infección de ríces se determinó con bse los segmentos colonizdos por el hongo. Pr ello, se tomron como número de segmentos totles 25 cmpos de observción en un lminill (Figur 11). Solo se contron los segmentos que presentron estructurs (vesículs y rbúsculos) en cd uno de los cmpos de observción, tomndo en cuent solo l presenci de l estructur sin importr l bundnci de ls misms en cd un de ls intersecciones de l ríz con l líne horizontl del portobjetos. Intersección de observción Rices Figur 14.- Lminill pr observción l microscopio del porcentje de colonizción micorrícic. Un vez relizd l observción microscópic de ls ríces y hber procedido contr los segmentos rdicles colonizdos o no colonizdos por los HMA, se procede clculr el porcentje de l frecuenci de colonizción de cd un de ls estructurs micorrícics (rbúsculos, hifs y vesículs) con l siguiente fórmul: 51