11 knúmero de publicación: kint. Cl. 7 : A61K 7/48. Número de solicitud europea: kfecha de presentación:

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1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 knúmero de publicación: kint. Cl. 7 : A61K 7/48 A61K 7/06 A61K 31/12 A61K 31/36 A61K 7/0 12 k TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3 86 k Número de solicitud europea: kfecha de presentación: k Número de publicación de la solicitud: k Fecha de publicación de la solicitud: k 4 Título: Utilización de piperonal como un aditivo antiinflamatorio para cosméticos y medicamentos. k Prioridad: DE k 73 Titular/es: Société des Produits Nestlé S.A. P.O.Box Vevey, CH k 4 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Stiehm, Thomas y Baur, Markus ES T3 k 4 Fecha de la publicación del folleto de patente: Aviso: k 74 Agente: Isern Jara, Jorge En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 DESCRIPCION Utilización de piperonal como un aditivo antiinflamatorio para cosméticos y medicamentos La presente invención, se refiere a utilizaciones de piperonal, las cuales nacen de la reciente comprensión del hecho de que, el piperonal, tiene propiedades anti-inflamatorias. El piperonal (heliotropina, piperonilaldehido, 3,4-(metilendioxi)benzaldehido), es un compuesto conocido, el cual existe en varios aceites de flores y tipos de vainilla y que se puede preparar sintéticamente y, debido a su olor dulzáceo del tipo heliotrópico, o parecido, se utiliza en perfumería, en particular, para perfumar el jabón. El piperonal, se utiliza también como repelente contra los piojos del cabello (J R Soc Helth. 1993; 113(6): ). El documento Pharmacy and Pharmacology Comunications, volumen 4, n2, 1998, 3-6, da a conocer la utilización del piperonal curcuminoide como anti-inflamatorio. En referencia con las aplicaciones conocidas descritas del piperonal en cosméticos, se han llevado ya a cabo varias investigaciones, las cuales apuntaban a confirmar la aceptabilidad toxicológica del piperonal para las conocidas aplicaciones. No obstante, los efectos medicamentosos de utilidad del piperonal, no se han dado a conocer hasta el momento actual. La presente invención, se basa en la realización, es decir, comprensión, asumida en base a experimentos in vitro, utilizando un modelo de test de ensayo reconocido, en cuanto al hecho de que, el piperonal, tiene un efecto anti-inflamatorio. Esta comprensión, es decir, el hecho de darse cuenta de estas propiedades, hace del piperonal un producto interesante para una amplia gama de nuevos tipos de aplicaciones, para las cuales, hasta ahora, éste no se había utilizado, o se había utilizado de una forma diferente y, para las cuales, éste no se habría sin la anteriormente citada nueva comprensión, por ejemplo, también porque, en el caso de tales aplicaciones, el perfumado no es usual o parecería como inapropiado, o eran comunes otros aditivos de perfume. La presente invención, de este modo, se refiere al uso del piperonal (heliotropina) como un aditivo antiinflamatorio en la preparación de productos cosméticos y medicamentos, en términos completamente generales. Además de un agente antiinflamatorio, el cual es adicionalmente notable debido a su olor placentero, es apropiado, de una forma particular, para productos cosméticos y medicinales, destinados a aplicaciones externas en la piel, siendo posible el mencionar, como ejemplos de tales productos, adicionalmente a los jabones y los champús, los ungüentos, las soluciones, pañuelitos o paños limpiadores, proyecciones pulverizadas ( sprays ) y gotas para los ojos, en cada caso, en forma de productos para aplicaciones cosméticas, pero también en forma de productos para propósitos medicinales. Un aspecto particularmente interesante, parece también ser la adición de piperonal a productos cosméticos y medicinales del tipo consistente en emulsiones (emulsiones del tipo agua en aceite o emulsiones W/O -del inglés water/oily emulsiones del tipo aceite en agua o emulsiones O/W -del inglés oil/water-), tales como las cremas y las lociones. Adicionalmente a ello, el piperonal, puede también añadirse a champús, con objeto de mejorar su compatibilidad con la piel, en particular, champús suaves para bebés y niños pequeños. Otros productos que pueden estar en contacto con la piel y que pueden ser mencionados, son los emplastes, parches o esparadrapos, en los cuales, el piperonal puede incorporarse en el interior del adhesivo. El efecto antiinflamatorio de una adición de piperonal, puede no obstante utilizarse en medicamentos típicos, en donde, el piperonal, puede utilizarse adicionalmente a otros ingredientes activos, los cuales son decisivos para el tipo de medicamento y determinar su aplicación. El piperonal, se puede no obstante utilizar como el único ingrediente activo, en medicamentos previstos para inhibir la inflamación. Ejemplos que pueden ser mencionados, son medicamentos para tratar inflamaciones, debidas por ejemplo a dermatitis solares o erupciones cutáneas debidas a pañales, para la curación de heridas y para el tratamiento de enfermedades inflamatorias crónicas, tales como la psoriasis y el eczema constitucional. Tal como en el caso de los cosméticos, las formas de medicamentos que se aplican de una forma externa (tópicamente), son de nuevo de un interés primario, por ejemplo, medicamentos en forma de emulsiones para propósitos dermatológicos, a pesar del hecho de que deben también incluirse los medicamentos que actúan de una forma transdérmica, en los cuales, los ingredientes activos medicinales, se absorben por vía de la piel, incluyendo los parches o emplastos de ingredientes activos. 2

3 1 Un aditivo de piperonal antiinflamatorio, es no obstante también apropiado para medicamentos que se aplican internamente, en donde, los ingredientes activos del medicamento, se absorben por vía de las membranas de las mucosas, por ejemplo, en el caso de medicamentos administrados por vía rectal o por vía vaginal, en forma de supositorios, o también en el caso de medicamentos administrados por vía peroral, en los cuales, el piperonal puede desarrollar una acción antiinflamatoria protectora o de curado, en el tracto digestivo. Para la utilización de piperonal como un aditivo antiinflamatorio para cosméticos y medicamentos, no existen limitaciones críticas con respecto a las cantidades aplicadas, determinándose el límite inferior de las cantidades que pueden utilizarse mediante la cantidad a partir de la cual puede asumirse de una forma sensible una acción antiinflamatoria significante. El límite superior de las cantidades aplicadas, puede determinarse, en los casos individuales, en base a varios tipos de consideraciones, las cuales incluyen: efectos no deseados de alto olor o sabor intenso, consideraciones de estabilidad, compatibilidad con el medio portador, tales como por ejemplo, una de base ungüento o una composición líquida, u otros ingredientes activos, factores de solubilidad y de factores de transportación, además de otros. De una forma general, la cantidad aplicada, se encuentra comprendida en una gama situada dentro de unos márgenes que van de un 0,01 a un 2 %, en peso, basado en el producto cosmético o medicamento, siendo las cantidades que se utilizan usualmente, las correspondientes a una gama situada dentro de unos márgenes que van del 0,01 al 1,0 %, en peso y, de una forma preferible, dentro de unos márgenes que van del 0,01 a al 0, %, en peso. Ejemplos de la parte experimental 2 Las propiedades antiinflamatorias, de establecieron en los experimentos que se describen en mayor detalle a continuación: Experimentos in vitro Las propiedades antiinflamatorias del piperonal, se demostraron en un modelo de ensayo in vitro, utilizando células de piel inmortalizadas (queratinocitos). Estos queratinocitos (véase el documento de patente internacional WO 97/23 2), se trataron, con este propósito, con substancias causantes de inflamación, de una forma más específica, con conocidos irritantes de la piel, en forma de un éster de forbol (12- O-tetradecanoilforbol acetato, el cual se abrevia mediante las siglas TPA) y, como respuesta a este tratamiento, éstos exhibían una reacción metabólica inflamatoria típica, de una forma particular, un incremento en la secreción de la citocina causante de inflamación TNF-α (factor de necrosis tumoral alfa). Una substancia que inhibe la secreción del TNF-α en el caso de queratinocitos tratados con TPA, en el modelo arriba indicado, en una forma dependiente de la dosis, se ve como una substancia antinflamatoria potencial. De una forma específica, el test de ensayo, se lleva a cabo sometiendo queratinocitos humanos in vitro, inmortalizados en cultivo, a un tratamiento causante de inflamación, utilizando el anteriormente mencionado 12-O-tetradecanoilforbol 13-acetato (TPA). Las líneas de células inmortalizadas utilizadas, son las líneas de células DK2, FK2 ótambién DK7, las cuales se describen en la publicación de solicitud de patente internacional WO 97/23 2. Las líneas de células FK2 y DK2, se depositaron en fecha de Octubre de 199, en concordancia con el tratado de Budapest, en el depósito DSM (Deutsche Sammlung für Microorganismen und Zellkulturen, GmbH, Mascheroder Weg 1b, D Braunschweig, Alemania), y se les dio los nombres de deposición DSM ACC22 y DSM ACC2238. La línea de células DK7-NR, se depositó en fecha 19 de Marzo de 1998, en el instituto Pasteur, París (CNCM), con el número I Es también posible el utilizar la línea de queratinocitos inmortalizados HaCaT, la cual se describe por parte de Boukamp y colegas en J. Cell. Biol., 6, , 1988). Procedimiento de test de ensayo in vitro Se procedió a inocular placas de Petri (de 6 cm de diámetro), las cuales contenían 4 ml de medio nutriente NR-2 exento de suero (véase la publicación de patente internacional WO 97/23 2; Biofluids -Biofluídos-), con líneas de células de queratinocitos inmortalizados in vitro, anteriormente mencionados, arriba. Tan pronto como se observó la confluencia del linón celular, se procedió a reemplazar el medio nutriente por medio nutriente fresco NR-2 enriquecido con calcio (CaCl 2 1, mm). Las placas, se incubaron durante un transcurso de tiempo de 2 días, el medio nutriente se reemplazó por medio nutriente fresco y, las placas, se incubaron durante un transcurso de tiempo adicional de 2 días. Las células, se alimentaron 3

4 entonces durante un transcurso de tiempo de 2 días, con medio nutriente fresco NR-2 enriquecido con calcio (CaCl 2 1,mM),elcualcontenía piperonal, en la deseada concentración de ensayo. De una forma paralela, se preparó un lote idéntico, sin aditivo piperonal Durante las últimas 24 horas de la incubación anteriormente mencionada, arriba, se añadió TPA en etanol o una cantidad correspondiente de etanol, en una cantidad de ng/ml. Se procedió, a continuación, a aislar los sobrenadantes y, por mediación del conocido ensayo ELISA (Ruwag AG. Zurich, Suiza) y utilizando anticuerpos específicos del TNF-α (BioSource Itern., US, números de catálogo KHC0012 y KHC13), se determinó la concentración de TNF-α en el sobrenadante. Resultados Los resultados obtenidos, se encuentran recopilados en la tabla 1, que se facilita a continuación, y se muestran gráficamente en la figura 1. La figura 1, muestra, en forma de gráfico, el efecto correspondiente a concentraciones variables de piperonal, en la secreción de TNF-α, en queratinocitos humanos tratados con TPA. TABLA 1 Tratamiento Cantidad de TNF-α ± SD %del % de inhibición determinada control (pg/ml) Control: TPA sin piperonal 299, 1,2 0,0 0 TPA + 0,01 % de piperonal 331,2 47,1 1,6 Ninguno TPA + 0,0 % de piperonal 78,1 19,2 26,1 73,9 TPA + 0,1 % de piperonal 0,6 19,8 33,6 66,4 TPA + hidrocortisona 2,4 43, 73,6 26,4 TPA de control: sin TPA 11,0 3,1 - - Sin TPA + 0,01 % de piperonal 7,9 2,1 - - Sin TPA + 0,0 % de piperonal 8,9 1,1 - - Sin TPA + 0,1 % de piperonal 6,3 2, - Aclaraciones: TPA = 12-O-tetradecanoilforbol 13-acetato SD = desviación standard en porcentaje - = no aplicable 4

5 Estos resultados, muestran de una forma clara el hecho de que, el piperonal, tiene un fuerte efecto inhibitorio en la secreción de TNF-α de queratinocitos que están tratados con TPA, siendo este efecto significativamente más fuerte que el conocido efecto antiinflamatorio de la hidrocortisona. 1 Al mismo tiempo, los experimentos de control efectuados sin TPA, muestran el hecho de que, el piperonal en sí mismo-dentro de los límites de la precisión y exactitud que acontezcan en las medicionesno provoca un incremento de la secreción de TNF-α, a saber, éste no debe ser considerado, en sí mismo, como desencadenante de la inflamación. Adicionalmente a ello, otros experimentos, han establecido el hecho de que, el piperonal, no exhibe actividad citotóxica durante el tratamiento de los queratinocitos anteriormente mencionados, en las concentraciones utilizadas en los experimentos. La supresión probada de la secreción de la substancia desencadenante de la inflamación en el TNF-α, en el test anteriormente mencionado, arriba, con piperonal, sugiere de esta forma una acción antiinflamatoria, hasta ahora desconocida, del piperonal. Tests de ensayo in vivo El test de ensayo, estaba destinado a investigar si un gel que contuviera piperonal, influenciaba en un eritema producido por irradiación UV. En el test de ensayo in vivo descrito, la gravedad del eritema producido por irradiación UV, se determinó procediendo a medir la perfusión cutánea capilar en la región irradiada y mediante la evaluación del enrojecimiento, utilizando un índice de enrojecimiento. La acción del gel con contenido en piperonal, se sometió a test de ensayo, en este caso, en comparación con piel no tratada. En el caso no tratado, la perfusión de la piel, se incrementó en 3, veces el valor normal, 6 horas después de que el eritema se hubiese desencadenado mediante irradiación UV local de un área de piel humana y, el valor incrementado, permaneció de una forma invariable, durante un transcurso de tiempo de 24 horas, y descendió a 2,3 veces al valor normal, después de un transcurso de tiempo de 48 horas. Si la piel se había tratado inmediatamente después de la irradiación, con un gel que contenía un 0,2 %, en peso, de piperonal (Carbopol gel), la perfusión de la piel, incrementaba únicamente a 2,3 veces el valor normal, después de irradiación idéntica a la anteriormente descrita, arriba, y caía a 1,7 veces el valor normal, después de un transcurso de tiempo de 24 horas. Después de un transcurso de tiempo de 48 horas, se alcanzaba un valor, que era 1,3 veces el del valor normal. El gel con contenido en piperonal, alcanzaba también una significante reducción del enrojecimiento de la piel, de una forma específica, una reducción a una mitad, de la de un eritema no tratado, después de unos transcursos de tiempo de, respectivamente, 6 horas, 24 horas y 48 horas. Algunas formulaciones más ilustrativas para los productos cosméticos que contienen un aditivo piperonal en concordancia con la presente invención, se encuentran a disposición en la lista que se facilita a continuación. Todas las cantidades a las que en ella se hace referencia, se dan en cantidades correspondientes a porcentajes en peso. Ejemplo 1 0 Gel Carbomer 0,7 % Hidróxido sódico 0,7 % Piperonal 0,2 % Agente conservante Agua Resto hasta 0 %

6 Ejemplo 2 Loción corporal 1 Poligliceril-3-diisoestearato 2,0 % Aceite mineral 8,0 % Isopropil palmitato,0 % Octildodecanol 4,0 % Carbomer 0,3 % Cocoilglutamato sódico 0,2 % Hidróxido sódico, % intensidad 1,2 % Agente conservante Perfume Piperonal 0,2 % Agua Resto hasta 0 % Ejemplo 3 Champú suave 2 3 Lauril sulfato sódico 7,0 % Cocamidopropilbetaína 2,0 % Laurilsulfonosuccinato sódico 2,0 % Piperonal 0,2 % Cloruro sódico Agente conservante Perfume q.s Agua Resto hasta 0 % 4 0 6

7 REIVINDICACIONES 1 1. Utilización de piperonal con un aditivo antiinflamatorio, en la preparación de productos cosméticos y medicamentos. 2. Utilización de piperonal, en concordancia con la reivindicación 1, como un aditivo antinflamatorio para los productos cosméticos y medicinales, para el cuidado de la piel y el cuidado del cabello. 3. Utilización de piperonal, en concordancia con la reivindicación 1, como un aditivo antiinflamatorio para cosméticos o medicamentos, los cuales se aplican tópicamente o son transdérmicos, en forma de champús, emulsiones del tipo W/O (agua en aceite) y O/W (aceite en agua), ungüentos, soluciones, soluciones, pañuelitos o paños limpiadores, proyecciones pulverizadas ( sprays ) y gotas para los ojos. 4. Utilización de piperonal, en concordancia con la reivindicación 1, como un aditivo antiinflamatorio, para medicamentos, los cuales se administran por vía peroral, por vía rectal o por vía vaginal NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté onoincluída en la mencionada reserva. 7

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