Utilidad del estudio genético en el diagnóstico e intervención familiar en la enfermedad de Wilson

Transcripción

1 Centre de Diagnòstic Biomèdic Utilidad del estudio genético en el diagnóstico e intervención familiar en la enfermedad de Wilson Cèlia Badenas Secció de Genètica Molecular Servei de Bioquímica i Genètica Molecular

2 ENFERMEDAD DE WILSON Herencia autosómica recesiva Afecta al metabolismo del cobre, que se acumula en hígado, cerebro, córnea, hígado y otros órganos Manifestaciones hepáticas, neurológicas,hematológicas, psiquiátricas o combinaciones de ellas Desde que el estudio genético está disponible el espectro fenotípico se ha aumentado Causada por mutaciones en un único gen: ATP7B - 2 -

3 PROTEÍNA ATP7B Proteína es una ATPasa tipo-p transportadora de cobre Expresada en casi todos los tejidos, pero predominantemente en el hígado ATP7B es necesaria para el transporte eficiente del cobre de los hepatocitos al sistema biliar En ausencia de la proteína hay una acumulación tóxica de cobre en diferentes tejidos, lo que da lugar a los síntomas 6 dominios de unión a cobre 8 dominios transmembrana 1 dominio de transducción dela energía de la hidrólisis del ATP 1 dominio de fosforilación Int J Mol Sci Mar; 16(3):

4 CONSEJO GENÉTICO : AR ATP7B Frecuencia 1/ individuos Portadores en población general 1/90 Probablemente infradiagnósticada Riesgo de portador 1/90 Riesgo de portador 2/3 Riesgo de afectado 1/180 Riesgo de portador 2/3x1/2=1/3 4

5 GEN ATP7B Cromosoma 13 (13q14.3) 16 tránscritos Mensajero de referencia NM_ exones 6655 bp de mrna 1465 aa - 5 -

6 GEN ATP7B 800 mutaciones descritas Pocos individuos homozigotos Variabilidad fenotípica - 6 -

7 Estudio molecular de EW Diferente incidencia según las poblaciones Diferente espectro mutacional Diferentes mutaciones recurrentes No se detectan las mutaciones europeas ni del este asiático 86 Frecuencia de portadores 1/11-7 -

8 DIAGNÓSTICO GENÉTICO DE ENFERMEDAD DE WILSON Secuenciación de Sanger: no cuantitativo wt/wt mut/wt mut/mut Estudio de duplicaciones/deleciones (MLPA) Secuenciación masiva (NGS) -8-

9 CONTROL DIAGNÓSTICO GENÉTICO DE ENFERMEDAD DE WILSON Secuenciación de Sanger Estudio de duplicaciones/deleciones (MLPA): cuantitativo CONTROL PACIENTE Secuenciación masiva (NGS) - 9 -

10 DIAGNÓSTICO GENÉTICO DE ENFERMEDAD DE WILSON Secuenciación de Sanger Estudio de duplicaciones/deleciones (MLPA) Secuenciación masiva (NGS)

11 RESULTADOS SOSPECHA DE EW Técnicas Sanger+ MLPA: detecta >98% de las mutaciones NGS AFECTADO: detección de dos mutaciones en el gen ATP7B Estudio padres para demostrar que ambos son portadores PORTADOR: baja probabilidad de afectado Estudio padres para identificar al portador Los portadores pueden tener niveles de ceruloplasmina plasmática bajos, cobre en orina en los límites de la normalidad, cobre en orina elevado tras estimulación con D- penicilamina y/o una elevación moderada del cobre hepático ( mg/g peso seco) NO MUTACIONES: baja probabilidad de afectado No estudio familiar PROBLEMA!! Variantes de Significado Clínico Incierto (VOUS)

12 RESULTADOS DIAGNÓSTICO GENÉTICO DE ENFERMEDAD DE WILSON 207 CASOS ÍNDICE: 59 afectados (2 mutaciones) 38 portadores (1 mutación) 110 no afectados (0 mutaciones) 100 familiares: 10 afectados 61 portadores 29 no portadores 11 parejas de portadores/afectados: 8 no portadores 3 portadores (1 cambio no descrito)

13 59 casos índice con dos mutaciones en el gen ATP7B 46 mutaciones diferentes 3 de ellas representan el 39% de los cromosomas mutados c g>a (10) p.met645arg (26) p.his1069gln (10) 1 mutación recurrente es una deleción Más de 30 polimorfismos (algunos no descritos) MUTACIONES MISSENSE 78/118 (66%) alelos 51 (86%) casos índice son portadores de al menos una mutación missense RESULTADOS DIAGNÓSTICO GENÉTICO DE ENFERMEDAD DE WILSON MUTACIÓN PROTEÍNA NUM PACIEXÓ TIPO DESCRITA? DEL EXÓ no proteína NO c.51+4a>t 2 I01 splicing SI c delaa+c inscp.val176serfs*28,p.gln260profs* frameshift NO* c.845delt p.leu282profs* frameshift SI c.347t>c p.ile116thr 1 02 missense SI c.331c>t p.gln111* 4 02 nonsense SI c.562c>t p.gln188* 2 02 nonsense SI c.721c>t p.gln241* 1 02 nonsense NO c g>t+c.3451c>t IVS2+5G>T+p.Arg1151Cys 1 I02,16 missense/splicing SI c g>a 10 I04 splicing SI c.1555g>a p.val519met 1 04 missense SI c.1739dela p.his580profs* frameshift SI c.3182g>a p.gly1061glu 2 06 missense SI c.1934t>g p.met645arg missense SI c.2218g>c p.ala740pro 4 08 missense NO c.2128_2133delggtggg p.gly710_gly711del 1 08 in-frame deletion NO c.2123t>c p.leu708pro 2 08 missense SI c.2332c>g p.arg778gly 1 08 missense SI c.2297c>t p.thr766met 1 08 missense SI c.2383c>t p.leu795phe 1 09 missense SI c.2532dela p.val845serfs* frameshift SI c.2605g>a p.gly869arg 1 11 missense SI c.2763t>a p.ser921arg 2 12 missense SI c.2795c>a p.ser932* 1 12 nonsense SI c g>t IVS13+5G>T 1 I13 splicing SI c t>a 1 I13 splicing SI c.3053c>t p.ala1018val 1 13 missense SI c.2906g>a p.arg969gln 1 13 missense SI c.2930c>t p.thr977met 1 13 missense SI c.2972c>t p.thr991met 1 13 missense SI c.3221c>t p.ala1074val 3 14 missense SI? c.3083_3085delinsg p.lys1028serfs* frameshift SI c.3190g>a p.glu1064lys 1 14 missense SI c.3207c>a p.his1069gln missense SI c.3311g>a p.cys1104tyr 2 15 missense SI c.3295g>a p.gly1099ser 1 15 missense SI c.3359t>a p.leu1120* 4 15 nonsense SI c.3556g>a p.gly1186ser 3 16 missense/splicing? SI c.3659c>t p.thr1220m 1 17 missense SI c.3694a>c p.thr1232pro 1 17 missense SI c g>c 1 I17 splicing SI c.3809a>g p.asn1270ser 5 18 missense SI c.3818c>t p.pro1273leu 1 18 missense SI c.3938t>g p.leu1313arg 1 19 missense N0 c.4022g>a p.gly1341asp 1 20 missense/splicing? SI c.4103t>c p.leu1368pro 1 20 missense SI

14 LOCALIZACIÓN DE MUTACIONES 25 España UK Coffey et al 2013 Brain 136:

15 CASO ÍNDICE: M645R/deleción exón 1 Heterozigoto M645R Deleción heterozigota exón 1 PADRE: M645R/normal Heterozigoto M645R Normal MADRE: deleción exón 1/normal Normal Deleción heterozigota exón

16 CASOS ESPECIALES: EW CON TRES MUTACIONES Tres pacientes con tres mutaciones IVS2+5G>T+R1151C/L1368P IVS2+5G>T+R1151C/ WT L1368P/WT

17 Varón de 6 años sin información clínica CASOS ESPECIALES: EW CON TRES MUTACIONES

18 CASOS ESPECIALES: EW EN DOS GENERACIONES Una familia con tres mutaciones y 4 afectados en dos generaciones A740P/WT 523_525ins;778dup/WT 523_525ins;778dup/ A470P 523_525ins;778dup/ A470P 523_525ins;778dup/ A470P M645R/ WT A740P/WT 523_525ins;778dup/WT 523_525ins;778dup/ M645R

19 TIPOS DE TEST Indispensable información clínica!!! Test diagnóstico (confimación/exclusión): sospecha de EW Secuenciación sanger + MLPA Test predictivo: familiar de afectado con riesgo de estar afectado Se tienen que conocer las mutaciones del caso índice Secuenciación y/o MLPA Test de portador (1): familiar de afectado a riesgo de ser portador Se tienen que conocer las mutaciones del caso índice Test de portador (2): pareja de afectado/portador a riesgo de tener descendencia afectada Secuenciación sanger + MLPA Test prenatal: se tienen que conocer las mutaciones en los padres Secuenciación y/o MLPA Test pre- implantacional/pre- concepcional: se tienen que conocer las mutaciones en los padres Secuenciación y/o MLPA Confirmación en muestra de LA o BC Cribado neonatal bioquímico?? Confirmación de positivos mediante estudio genético

20 CONCLUSIONES El tratamiento temprano y preciso de los enfermos de EW es simple y efectivo y puede prevenir el desarrollo de síntomas neurológicos y hepáticos, pero debido al amplio espectro de la enfermedad a veces es difícil llegar a un diagnóstico Probablemente infradiagnosticada A todo paciente con sospecha de Enfermedad de Wilson debe realizarse un estudio genético No correlación genotipo- fenotipo, pero Diferencia portadores de afectados Detecta individuos presintomáticos La detección de mutaciones en el gen ATP7B implica la ampliación del estudio a familiares a riesgo (asesoramiento genético) Familiares a riesgo Parejas de portadores Opciones reproductivas Cribado neonatal

21 MUCHAS GRACIAS