Antonio Andrés Postigo Antón IDIBAPS Institut d'investigació Biomèdica August Pi i Sunyer

Transcripción

1 LAS PROTEÍNAS ZEB EN LA PROGRESIÓN TUMORAL. PAPEL DE ZEB1 Y ZEB2 EN LA TRANSFORMACIÓN ONCOGÉNICA, LA TRANSICIÓN BENIGNO-MALIGNO Y LA PROLIFERACIÓN Y SUPERVIVENCIA DE LA CÉLULA CANCEROSA Antonio Andrés Postigo Antón IDIBAPS Institut d'investigació Biomèdica August Pi i Sunyer 1

2 1. Resumen Los factores de transcripción ZEB1 y ZEB2 desempeñan un papel clave en las últimas etapas de progresión del CRC, ya que promueven la invasión y metástasis tumoral. Los factores ZEB son inducidos, entre otros mecanismos, por la activación de mutaciones de las vías Wnt y K-Ras en carcinomas pulmonares (CP) y colorrectales (CCR). Este proyecto ha investigado el papel de los factores ZEB como efectores de Wnt o K-Ras en las etapas iniciales del desarrollo del carcinoma. Los principales resultados obtenidos son los siguientes: 1) ZEB1 es una diana y efector de las mutaciones K-Ras y Rb1 y regula la expresión de Bmi1 en etapas tempranas del desarrollo tumoral (J. Biol. Chem, 289: 4116). 2) Diferentes umbrales de ZEB1 son requeridos en la iniciación y metástasis de CP mediada por Ras (Nature Commun, 5: 5660). 3) ZEB1 y TCF4 modulan recíprocamente sus actividades transcripcionales para regular la expresión del gen diana Wnt (Oncogene, 34: 5760). 4) El peor efecto de supervivencia de ZEB1 en pacientes con CCR depende de altos niveles del antagonista de Wnt DKK1 cuya expresión se activa directamente por ZEB1 (Gut, 66: 666). 5) Los macrófagos asociados a tumores (TAM) dependen de ZEB1 para sus funciones promotoras del cáncer. 6) La polarización mitótica divergente de ZEB1 y ZEB2 establece el destino en las células que inician el tumor (Nat Commun, en revisión con comentarios menores). Estos resultados establecen ZEB1 y ZEB2 como factores clave durante las primeras etapas del inicio del carcinoma y en la respuesta inmune antitumoral. La disección de los mecanismos moleculares por los cuales los factores ZEB regulan estos procesos ofrece nuevas oportunidades en estrategias que apuntan a inducir la senescencia en las células cancerosas o a mejorar la respuesta inmune antitumoral. 2

3 2. Resultados obtenidos a) ZEB1 como diana y efector de las mutaciones K-Ras y Rb1 y su papel en la regulación de la expresión de Bmi1 (J. Biol. Chem, 289: ) Antes de este estudio no estaba claro cómo Ras causa la represión de Bmi1 en las células primarias para suprimir la formación de tumores. Ras también induce el factor de transcripción EMT ZEB1 para desencadenar la invasión tumoral y la metástasis. Encontramos que la activación de Rb1 en respuesta a Ras mutante provoca la represión dominante de ZEB1 en células primarias, pero la pérdida de la ruta de Rb1 es un sello distintivo de las células cancerosas y, en ausencia de dicha represión de Rb1, Ras indujo ZEB1 en células cancerosas. Se sabe que ZEB1 reprime mir-200 en el contexto de un ciclo de represión mutua. Debido a que mir-200 reprime Bmi1, la inducción de ZEB1 conduce a la inducción de Bmi1. Por lo tanto, encontramos que el estado de la ruta Rb1 dicta los efectos opuestos de Ras mutante en el bucle ZEB1 - mir-200 en células primarias frente a células cancerosas. Este ciclo no solo desencadena EMT, sorprendentemente demostramos que actúa como efector de Ras para regular la expresión de Bmi1 y, por lo tanto, la decisión crítica entre la senescencia inducida por oncogenes y el inicio del tumor. Del mismo modo, se requirió ZEB1 elevada para mantener la expresión de Bmi1 en fibroblastos de embriones de ratón Ras-TKO (MEF). De acuerdo con una mayor dependencia de las células cancerosas en la inducción de ZEB1 mediada por Ras, la eliminación de ZEB1 en Ras-TKO-MEF a un nivel que todavía estaba por encima de la observada en los MEF de tipo salvaje condujo a la pérdida de viabilidad. Como era de esperar, esta caída de ZEB1 en Ras-TKO-MEF condujo a un aumento en mir-200 a un nivel similar al de los MEF de tipo salvaje. La activación de un alelo K-Ras oncogénico por recombinación en células somáticas conduce a cáncer espontáneo en ratones K-RasLA1. La inmunotinción demostró que ZEB1 era baja o estaba ausente en el epitelio normal, pero se indujo en todos los adenocarcinomas. Al igual que ZEB1, Bmi1 también se indujo en estos adenocarcinomas. Usando la hibridación in situ, encontramos que mir-200a y mir-200c eran altos en el epitelio pulmonar normal, pero fueron reprimidos en adenocarcinomas donde su expresión solo era evidente en los vasos sanguíneos. Estos resultados proporcionan evidencia de un bucle ZEB1 - mir-200 inducido por Ras en el adenocarcinoma de pulmón iniciado por Ras que está relacionado con la inducción de Bmi1. Tomados en conjunto, nuestros hallazgos sugieren un papel imprevisto para la inducción de 3

4 ZEB1 temprano en el inicio y la progresión del cáncer. Bmi1 tiene un papel central en el mantenimiento de células madre cancerígenas y nuestros estudios plantean la interesante posibilidad de que la inducción de ZEB1 mediada por Ras esté impulsando la reprogramación de células cancerígenas a células madre cancerígenas al menos en parte mediante la inducción de Bmi1. b) Se requieren diferentes umbrales de ZEB1 para la iniciación y metástasis tumoral mediada por Ras (Nature Commun, 5: 5660) Como se indicó anteriormente, la mutación de la ruta Ras es frecuente en carcinomas donde se induce ZEB1. Aunque ZEB1 está clásicamente relacionado con la EMT y la metástasis tumoral, tiene una segunda función emergente en la generación de células iniciadoras del cáncer. La inducción de Ras de ZEB1 es necesaria para el inicio del tumor y vinculamos esta función a la represión de PTEN, cuya pérdida es crítica para la aparición de células iniciadoras del cáncer. Estos dos roles para ZEB1 en la progresión tumoral se pueden distinguir por su requerimiento de diferentes niveles de ZEB1. Un umbral inferior de ZEB1 es suficiente para el inicio del cáncer, mientras que la inducción adicional es necesaria para la metástasis tumoral. A diferencia de ZEB1, PTEN se reprime en tumores dirigidos por Ras e incluso una disminución parcial de PTEN es suficiente para promover el inicio del cáncer. Se requiere PTEN para el desarrollo epitelial pulmonar normal y la eliminación de PTEN en el epitelio pulmonar de ratón adulto conduce a hiperplasia y adenocarcinoma. En consecuencia, PTEN se expresó en pulmón normal, pero ZEB1 estaba ausente. Tampoco fue evidente ZEB1 en los adenomas benignos, que continuaron expresando PTEN y el marcador epitelial E-cadherina. La activación de mtorc2 por PI3K conduce a la fosforilación mtor-catalizada y a la activación de Akt en S473 (Akt-S473). De acuerdo con la expresión de PTEN, Akt-S473 estaba ausente en el pulmón normal y los adenomas. Se indujo ZEB1, se reprimieron PTEN y E-cadherina y Akt-S473 se acumuló en focos de adenocarcinoma que se iniciaban dentro de los adenomas, y este patrón persistió a medida que los adenocarcinomas se expandieron en las vías respiratorias grandes. A continuación, examinamos las expresiones de ARNm de ZEB1 y PTEN en microarrays de adenocarcinoma de pulmón humano. El ARNm de ZEB1 fue más alto en tumores con K-Ras mutante o una mutación de la vía Ras activadora en el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) que en tumores de tipo salvaje para K-Ras y EGFR, y los niveles de ARNm de PTEN se correlacionaron inversamente con ZEB1. Se observó una 4

5 diferencia significativa en la supervivencia del paciente simplemente dividiendo los tumores en dos grupos en función de los niveles de ARNm de PTEN. c) ZEB1 y TCF4 modulan recíprocamente sus actividades transcripcionales para regular la expresión del gen diana Wnt (Oncogene 34: ) Este estudio se llevó a cabo para investigar si ZEB1 modula la señalización Wnt y es efector de la expresión de genes Wnt en el contexto de los CRC. La vía canónica Wnt (TCF4/β-catenina) desempeña un papel crucial durante la embriogénesis, la renovación y diferenciación de las células madre, mientras que las mutaciones de los componentes de la vía tienen un papel patogénico en una serie de enfermedades humanas. La evidencia in vivo muestra que la mutación de APC no es suficiente para activar la señalización Wnt, que requiere señales exocrinas adicionales del estroma peritumoral. Por lo tanto, en CRC primarios con mutación APC, los genes diana de Wnt solo se expresan en el frente tumoral pero no en el centro ni en áreas bien diferenciadas. La vía de Wnt está estrechamente regulada en múltiples niveles y, durante la embriogénesis, la señalización de Wnt varía significativamente a lo largo de los tejidos con gradientes temporales y específicos de tejido de la actividad de Wnt que regulan el patrón del tejido y la diferenciación celular. Descubrimos que la capacidad de ZEB1 para regular al alza los genes diana de Wnt en células CRC depende críticamente de la prevalencia de una vía canónica activa de Wnt. Se cotransfectaron ZEB1, β-catenina y TCF4, de manera combinada o aislada, junto con los informadores del promotor upa y LAMC2 en dos de estas líneas celulares de CRC: SW480 (con APC mutante y una localización de β-catenina predominantemente nuclear que da como resultado la señalización Wnt activa) y HCT116 (donde β-catenina permanece principalmente membranosa/citoplásmica y la actividad de Wnt es baja). En las células SW480, donde los niveles de TCF4 constituyen el principal factor limitante para mejorar la señalización de Wnt, la sobreexpresión de ZEB1 no solo activó la actividad del promotor de upa sino que mejoró aún más su transcripción por TCF4, β-catenina o ambos. Mientras tanto, la activación de la señalización Wnt en células Wnt-low HCT116 mediante la sobreexpresión de β-catenina hizo que ZEB1 pasara de ser un represor a un activador de la transcripción de upa. Se observaron resultados similares en células SW480 y HCT116 con respecto al promotor LAMC2. También confirmamos esta cooperación transcripcional a nivel endógeno examinando si la ZEB1 exógena podría activar la transcripción de varios objetivos de Wnt en células SW480 en ausencia de TCF4 5

6 endógeno o β-catenina. La cooperación de TCF4 y ZEB1 requirió su físico entre sí. Usando un modelo de ratón de tumorigénesis intestinal inducida por Wnt [ratones APC (Min/+)], descubrimos que la expresión in vivo de LAMC2 también dependía de la cooperación entre ZEB1 y la señalización de Wnt. En resumen, ZEB1 y TCF4/βcatenina modulan mutuamente las actividades transcripcionales en la regulación de los genes diana Wnt proinvasivos. d) El peor efecto de supervivencia de ZEB1 en pacientes con CCR depende de niveles altos del antagonista de Wnt DKK1, cuya expresión se activa directamente por ZEB1 (Gut, 66: ) La senescencia implica un paro irreversible del ciclo celular y constituye un importante mecanismo supresor tumoral. La represión de genes proliferativos durante la senescencia se logra en parte a través de la condensación de cromosomas en focos de heterocromatina asociados a la senescencia (SAHF). La señalización de Wnt retrasa tanto la senescencia replicativa como la inducida por oncogenes. Sin embargo, el papel de la senescencia en la iniciación y progresión del cáncer inducido por Wnt aún no se entiende completamente. Un objetivo clave de Wnt en la progresión tumoral es el factor de transcripción ZEB1. ZEB1 puede activar o reprimir directamente la expresión génica mediante el reclutamiento de coactivadores (por ejemplo, p300) o correpresores (por ejemplo, CtBP). Hasta este estudio, los mecanismos por los cuales ZEB1 promueve la iniciación y progresión del tumor más allá de su inducción de una EMT eran poco conocidos. Este estudio encontró que una peor supervivencia determinada por ZEB1 en CRC dependía de altos niveles simultáneos del antagonista de Wnt DKK1, cuya expresión fue activada transcripcionalmente por ZEB1. En células cancerosas con TP53 mutante, ZEB1 bloqueó la formación de focos de heterocromatina asociados a la senescencia al inicio de la senescencia activando una nueva cascada reguladora que implica la posterior activación de DKK1, mutante p53, Mdm2 y CtBP para reprimir en última instancia macroh2a1 (H2AFY). En un modelo de cáncer de colon transgénico en ratones, la regulación por disminución parcial de ZEB1 fue suficiente para inducir H2AFY y desencadenar la senescencia tumoral in vivo, dando como resultado una menor carga tumoral y una supervivencia mejorada. La capacidad de ZEB1 para inducir tumorigénesis en un modelo de ratón xenoinjertado requiere la represión de H2AFY por ZEB1. Por último, el peor efecto de supervivencia de ZEB1 en pacientes con CRC depende en última instancia de la baja expresión de H2AFY y de los genes 6

7 asociados a la senescencia. Podemos concluir que la capacidad tumorígena de ZEB1 depende de su inhibición de la senescencia de células cancerosas a través de la activación de una nueva ruta molecular identificada en este documento. Estos resultados establecen ZEB1 como un objetivo potencial en estrategias terapéuticas destinadas a inducir la senescencia. e) Los macrófagos asociados a tumores (TAM) dependen de ZEB1 para sus funciones promotoras del cáncer (EMBO J., 36: ) Los macrófagos asociados a tumores (TAM) son agentes críticos en la diafonía entre las células cancerosas y su microambiente. La secreción de células cancerosas y no malignas en el microambiente de las quimioquinas (por ejemplo, CCL2/MCP1), citoquinas (por ejemplo, IL4, IL13) y factores de crecimiento (por ejemplo, VEGF, CSF1/MCSF, CSF2/GMCSF) desencadena el reclutamiento en el tumor de los monocitos proinflamatorios F4/80low circulantes que expresan el receptor CCL2 CCR2 y su adquisición de un fenotipo TAM. Aunque los TAM tienen cierta superposición de expresión génica con los macrófagos M2, sus transcriptomas aún son distintos. La capacidad de los carcinomas para reclutar y activar TAM depende en gran medida de que las células malignas hayan adquirido un fenotipo mesenquimático indiferenciado como parte de la llamada transición epitelial a mesénquima (EMT). A su vez, los TAM liberan factores que promueven la verosimilitud de las células cancerosas, la angiogénesis y la progresión tumoral y la resistencia a la quimioterapia, todos los signos distintivos del cáncer asociados con un EMT. Un inductor clave de la EMT en las células cancerosas es el factor de transcripción ZEB1, que se expresa mediante células malignas en el frente invasivo de los carcinomas. ZEB1 dota las células cancerosas de un fenotipo proinvasivo y similar a un tallo, y determina un peor pronóstico clínico en la mayoría de los cánceres. Dado que los TAM son las células inmunes más abundantes en el microambiente tumoral y ZEB1 se expresa mediante células cancerosas a la vanguardia de los tumores, donde las células cancerosas interactúan con su microambiente, investigamos si ZEB1 desempeña un papel en la diafonía entre las células cancerosas y los TAM. Mientras que ZEB1 se ha caracterizado en linfocitos normales y malignos, su expresión y función en macrófagos permanecieron desconocidas. Usando ratones Zeb1 (+/ ), los ratones Zeb1 nulos ( / ) son letales en embriones; caracterizamos aquí la expresión y función de ZEB1 en macrófagos normales y TAM, y encontramos que los TAM dependen de ZEB1 para su función promotora de 7

8 tumores. ZEB1 se restringió a la fracción F4/80low de macrófagos y TAM donde activa genes asociados a SPM y TAM. Los macrófagos requieren niveles completos de ZEB1 para su activación hacia TAM con un fenotipo promotor de tumores F4/80low, que incluye la expresión de Ccr2 y Mmp9. Además, la expresión de ZEB1 por TAM indujo CCL2, CD74 y un fenotipo mesenquimático/de tipo tallo en células cancerosas. Por lo tanto, la expresión de ZEB1 por TAM F4/80low activó un bucle CCR2-MMP9-CCL2 entre células tumorales y TAM. La expresión de ZEB1 por parte de los TAM determinó una supervivencia peor en pacientes con carcinoma de ovario. A su vez, la infiltración de TAM se correlacionó con un aumento de ZEB1 en las células tumorales, donde la alta expresión concomitante de CCL2 o CD74 determinó un peor pronóstico. f) La polarización mitótica de los factores de transcripción establece el destino en la formación de células cancerosas (Nat Commun, aceptado con comentarios menores) En muchos tumores se han identificado poblaciones pequeñas de células cancerosas denominadas células madre de cáncer (CSC) o células iniciadoras de tumores. Una diferencia clave entre las células madre normales y las CSC es que las primeras muestran un fenotipo de tipo epitelial, mientras que las CSC se caracterizan por una EMT opuesta, que puede ser inducida por factores de transcripción EMT tales como ZEB1 y ZEB2. Este EMT en CSC está relacionado con la alta expresión de CD44, que marca CSC en tumores, incluidos cánceres de mama y pulmón, y se ha demostrado que un bucle positivo CD44/Zeb1 conduce la EMT y la reprogramación de células cancerosas existentes a un fenotipo CSC. Este ciclo puede iniciarse mediante la inducción de TGFbeta por Zeb1 en cultivo celular, pero hasta nuestro estudio no estaba claro si dicho ciclo está presente o es funcional in vivo. Utilizamos un modelo de cáncer iniciado por K-Ras para buscar un bucle CD44/Zeb1 in vivo y abordar su papel potencial en la generación de células cancerígenas. Las mutaciones de la vía Ras, que incluyen K-Ras en sí y EGFR, se han utilizado ampliamente en modelos de ratón de AC de pulmón humano. Estas mutaciones son mutuamente excluyentes en AC de pulmón humano, lo que sugiere que son redundantes y, por lo tanto, equivalentes en la activación de la vía Ras. Encontramos evidencias de que un bucle CD44/ZEB1 positivo se inicia en pequeños grupos de células derivadas de células de adenoma en división en sitios de acumulación de hipoxia, EMT y TGF-β en el interior de adenomas en expansión. La represión de ZEB2 por ZEB1 inicia la 8

9 señalización de TGF-β en estos clústeres de células y activa factores de transcripción y vías importantes para la formación de CSC. Estas dos divisiones de células secuenciales muestran polarización nuclear temprana de factores de transcripción en diferentes polos celulares, y luego establece destinos parentales e hijas antes de la citocinesis. La mutación o caída de ZEB1 en el pulmón bloqueó la producción de estas células generadoras de cáncer ZEB1+, CD44+ de las células de adenoma, a su vez inhibiendo la formación de células cancerosas. Estos resultados proporcionan evidencia de que un bucle CD44/ZEB1 se activa in vivo en sitios de hipoxia y acumulación de TGF-β en adenomas precancerosos en expansión, y este bucle inicia una vía de dos pasos en la que las células precancerosas pasan a células cancerosas a través de una población intermedia estable. El estudio proporciona evidencia de que esta población de células generadoras de cáncer iniciales es independiente de CSC que se generan en tumores a través de la reprogramación por p53 de células cancerosas existentes. 3. Relevancia e implicaciones futuras El proyecto investigó una cuestión oportuna y muy relevante en oncología molecular: los mecanismos implicados en el inicio del tumor y la progresión de la CCR. El CRC es una de las principales causas de muerte por cáncer en los países occidentales. Cada año se diagnostican alrededor de nuevos casos de CCR en España y en Cataluña, donde personas viven con la enfermedad diagnosticada. El CCR es la segunda causa de muerte por cáncer en España, y se registran muertes al año, de las cuales en Cataluña. Aunque el diagnóstico precoz y una mejor quimioterapia han mejorado sustancialmente la supervivencia de los pacientes con CCR, la supervivencia a 5 años se sitúa por debajo del 50% porque las recaídas a menudo son refractarias al tratamiento. Como se indica en la siguiente sección («Bibliografía científica»), el proyecto ha resultado en seis artículos originales y una revisión invitada en decil-1, revistas de factores de alto impacto, todos con el investigador principal del proyecto como autor de contacto. La mayoría de estos artículos involucraron modelos de ratón, que refuerzan el valor preclínico de los resultados obtenidos en líneas celulares y enfoques de alto rendimiento. Los resultados obtenidos han mejorado significativamente nuestra comprensión sobre el papel y el mecanismo de acción de 9

10 las proteínas ZEB en la progresión del cáncer, así como en los mecanismos moleculares implicados en las células madre del cáncer y el inicio del tumor. Más allá de expandir el conocimiento existente, creemos que los resultados obtenidos en este proyecto no solo tendrán aplicaciones traslacionales diagnósticas y pronósticas a corto plazo, sino que los datos publicados en este proyecto pueden establecer factores ZEB como objetivos terapéuticos a medio plazo. La incorporación del estudio de ZEB al análisis de patología de rutina del material tumoral resecado ayudaría a los médicos a tomar decisiones informadas y basadas en experimentos y a tomar decisiones sobre la respuesta de los pacientes al tratamiento. Del mismo modo, los artículos que se originaron en el proyecto revelaron nuevos, e incluso inesperados, roles y mecanismos de acción para ZEB que creemos que podrían abrir nuevas vías en el diseño de terapias moleculares específicas y dirigidas. Además, el hecho de que ZEB1 y ZEB2 se expresen en la mayoría de los carcinomas nos lleva a creer que la evidencia recogida en el CCR puede tener implicaciones similares para otros carcinomas como los carcinomas de pulmón. Nuestro trabajo ha demostrado que la regulación negativa parcial de ZEB1 es suficiente para activar la senescencia in vivo en tumores y para reducir su crecimiento y que el papel de ZEB1 como determinante de un peor pronóstico en CRC depende de bajos niveles de marcadores de senescencia GLB1 y H2AFY. Por lo tanto, ZEB1 podría representar un objetivo nuevo e importante en los enfoques de terapia del cáncer destinados a inducir la senescencia. El papel de ZEB1, que promueve la progresión tumoral, la resistencia a la quimioterapia y una peor supervivencia a través de su doble expresión en células cancerosas y TAM, tiene importantes implicaciones traslacionales. El objetivo de ZEB1 en las células cancerosas se está considerando en los ensayos clínicos, pero nuestros datos sugieren que la inhibición del crecimiento tumoral y la mejora de la respuesta a la quimioterapia también requerirían la selección de ZEB1 en los TAM. 4. Bibliografía científica (solo como autor para correspondencia) Originales 1) Liu Y, Sánchez Tilló E, Lu X, Clem B, Telang S, Cuatrecasas M, Chesney J, Postigo A*, Dean DC*. (*Autores para correspondencia.) The ZEB1 transcription factor acts in a negative feedback loop with mir200 10

11 downstream of Ras and Rb1 to regulate Bmi1 expression. J. Biol. Chem , Factor de impacto: 4,6 2) Liu Y, Lu X, Huang L, Wang W, Jiang G, Dean KC, Clem B, Telang S, Jenson AB, Cuatrecasas M, Chesney J, Darling DS, Postigo A*, Dean DC*. (*Autores para correspondencia.) Different thresholds of ZEB1 are required for Ras-mediated tumour initiation and metastasis. Nature Commun, 5:5660. doi: /ncomms6660. Factor de impacto: 12,2 3) Sánchez-Tilló E, De Barrios O, Valls E, Darling DS, Castells A, Postigo A*. (*Autor para correspondencia.) ZEB1 and TCF4 reciprocally modulate their transcriptional activities to regulate Wnt target gene expression. Oncogene : Factor de impacto: 8,4 4) De Barrios O, Gyorffy B, Fernández-Acenero MJ, Sánchez-Tilló E, Sánchez-Moral L, Siles L, Casal I, Roue G, Castells A, Postigo A*. (*Autor para correspondencia.) ZEB1-induced tumourigenesis requires senescence inhibition via activation of DKK1/mutant p53/mdm2/ctbp and repression of macroh2a1. Gut, : Factor de impacto: 16,6 5) Cortes M, De Barrios O, Sánchez-Moral L, Darling DS, Lawrence T, Postigo A*. (*Autor para correspondencia.) Tumor-associated macrophages require ZEB1 for their recruitment and tumorpromoting roles. EMBO J., : Factor de impacto: 9,8 6) Liu Y, Siles L, Lu X, Dean K, Cuatrecasas M, Postigo A*, Dean DC*. (*Autores para correspondencia.) Mitotic Polarization of Transcription Factors Establishes Fate in Forming Cancer Cells. Nat Commun Aceptado con comentarios menores. Factor de impacto: 12,2 11

12 Revisión invitada 1) Maurel J, Postigo A. Prognostic and Predictive Biomarkers in Colorectal Cancer. From the Preclinical Setting to Clinical Practice. Current Cancer Drug Targets (8): Factor de impacto: 3,5 12