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1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 kn. de publicación: ES kint. Cl. 6 : A61K 31/ A61K 31/46 12 k TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3 86 knúmero de solicitud europea: k Fecha de presentación : k Número de publicación de la solicitud: k Fecha de publicación de la solicitud: k 4 Título: Método para transplante de óvulos fertilizados. k Prioridad: JP / JP 34398/89 k 73 Titular/es: Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. 4-7, Doshomachi 3-chome Chuo-ku Osaka-shi Osaka 41, JP k 4 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Katsumi, Akira k 4 Fecha de la publicación del folleto de patente: k 74 Agente: Díez de Rivera y Hoces, Alfonso ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 DESCRIPCION Esta invención se refiere a un uso de un agente parasimpatolítico para la fabricación de una composición veterinaria como un aditamento para el trasplante de óvulos fertilizados. Más particularmente, la invención se refiere al uso de un agente parasimpatolítico tal como bromuro de prifinio o butilbromuro de escopolamina para la fabricación de una composición veterinaria como un aditamento para el trasplante de óvulos fertilizados, en el que el agente se utiliza para el tratamiento de ganado vacuno receptor. La invención tiene aplicación en el campo de la producción animal. Con el fin de producir especies mejoradas de ganado vacuno o similar y reducir el coste de producción del mismo, se está extendiendo la técnica de trasplantar óvulos fertilizados. Para el trasplante de óvulos fertilizados, existen dos procedimientos, principalmente el trasplante quirúrgico que comprende una operación quirúrgica y un trasplante no-quirúrgico utilizando un anestésico local, por ejemplo lidocaína. El bromuro de prifinio, uno de los parasimpatolíticos utilizados en esta invención, se conoce por el nombre químico de bromuro de 1-1-dietil-3-(difenilmetileno)-2-metilpirrolidinio y ha sido utilizado como fármaco en veterinaria. Entre las indicaciones conocidas de este fármaco están la reducción del tono y el espasmo incrementado, de la función motora incrementada, y del dolor del tubo alimenticio asociado con las enfermedades gastrointestinales (enfermedades del estómago anterior tales como la impacción ruminal, y enfermedades gastrointestinales tales como la gastroenteritis y el catarro y el cólico gastrointestinal) y la reducción del tono y el espasmo incrementados y dolor del tracto urinario asociados con urolitiasis. El butilbromuro de escopolamina también se ha utilizado como fármaco para seres humanos. Las indicaciones conocidas incluyen reducción del espasmo e incremento de la función motora en úlcera gástrica/duodenal, esofagoespasmo, piloroespasmo, gastritis, enteritis, cólico intestinal, estreñimiento espástico, diarrea funcional, colecistitis, colangitis, colelitiasis, disquinesia biliar, secuelas de gastrectomía/colecistectomía, piedras urinarias, cistitis, uretroespasmo/citoespasmo debido a la inserción de un instrumento, dismenorrea y espasmo del útero inferior en el parto y pretratamiento para roentgenografía y para la endoscopia del tracto digestivo. De los métodos para trasplantar óvulos fertilizados, el trasplante quirúrgico consigue una tasa alta de concepción pero tiene como desventajas que es muy laborioso y necesita tiempo. El trasplante no quirúrgico no necesita tanto tiempo pero tiene la desventaja de tasas de concepción bajas. Como para el métododetrasplantenoquirúrgico, el procedimiento bajo anestesia con un anestésico local, tal como lidocaína, ha sido ampliamente utilizado, pero debido a que el procedimiento relaja el esfínter anal así como la pared rectal, el aire entra en el recto cuando se inserta la mano para el trasplante. Este aire aumenta el recto que interfiere con el procedimiento de trasplante y, por lo tanto, actúa como un factor de reducción de la tasa de concepción. Nippon Yakurigaku Zasshi, Vol. 69, no. 2, 1973, páginas describe los efectos inhibidores de butilbromuro de atropina y escopolamina sobre la contracción inducida por serotonina de útero de rata estro aislado y el efecto de bromuro de butoxibencil-hiosciamina. Arzneim. Forsh., vol. 17, no. 7, 1967, páginas describe el efecto de agentes espasmolíticos sobre la actividad mecánica y eléctrica del útero de rata aislado. Entre los diversos compuestos ensayados está también N-n-butil-escopolamina, y este compuesto mostró el efecto más fuerte contra la actividad mecánica del útero de rata inducido por acetilcolina. Folia Medica, vol. 24, no. 1, 1982, páginas describe el efecto de algunos espasmolíticos utilizados clínicamente sobre el útero y otros músculos lisos. Los compuestos ensayados incluyen papaverina, no-spa, alcocina, espasmalgón, y buscolisina, en los que el último compuesto es idéntico al bromuro de n-butil-escopolamina. Arzeim.-Forsch., vol. 26, no. 7, 1976, páginas describe la contracción colinérgica de la vejiga urinaria del perro por estimulación eléctrica del nervio pélvico y el ligamento lateralia Nerves y su afectación por butilbromuro de atripina y escopolamina. En este documento se describe que el butilbromuro de escopolamina posee efectos periféricos similares a la antimuscarina, y propiedades bloqueadoras de los ganglios similares a antinicotina. El resultado de la estimulación de la contracción de la vejiga urinaria puede impedirse cuantitativamente por este compuesto. 2

3 1 2 3 Acta Physilogica Scandinavica, vol. 484, suppl., 1980, páginas 1-24, describe la inervación secremotora uterina y las respuestas secretoras a diferentes tipos de estimulación que incluyen la estimulación del campo transmural, carbacol, metoxiamina, isoprenalina y las influencias de estrógeno y progesterona sobre esta respuesta. Acta Physiologica Scandinavia, vol. 124, no.3, 198, páginas describe el control neural colinérgico y adrenérgico de la función del músculo liso en el cérvix uterino de rata no preñada. También describe el bloqueo de las contracciones uterinas por atropina, escopolamina y tetrodotoxina y mantiene que las contracciones no fueron afectadas por propanolol, fenoxibenzamina y yohimbina. El documento GB-A describe una composición alimenticia para animales que comprende un alimento animal y una pequeña cantidad de sustancia reguladora de la peristalsis contenida en la misma. Esta sustancia es principalmente específica de los músculos gastrointestinales lisos y es preferiblemente bromuro de propantelina, bromuro de atropina o metantelina. El inventor de esta invención dirigió una investigación asidua para mejorar la tasa de concepción después del trasplante de un óvulo fertilizado en una forma conveniente y encontró que la administración de un agente parasimpatolítico tal como bromuro de prifinio o butilbromuro de escopolamina a ganado vacuno receptor relaja no sólo la pared rectal sino también la pared uterina sin conllevar una relajación del esfínter anal, con el resultado de que el instrumento de trasplante puede insertarse más profundamente en el útero para ayudar a conseguir una mejora notable en la tasa de concepción. Esta invención está basada en el hallazgo anterior. La composición veterinaria que se utiliza según la presente invención es aplicable a ganado, por ejemplo ganado vacuno y vacas lecheras, cerdos, caballos y otros. Ejemplos de los parasimpatolíticos utilizados en esta invención incluyen bromuro de prifinio, butilbromuro de escopolamina, atropina y otros. La administración y dosificación del agente parasimpatolítico no es crítica pero puede escogerse según el agente particular a emplear. Generalmente, sin embargo, se obtienen resultados satisfactorios cuando se utiliza bromuro de prifinio en una dosis intravenosa de a 0 mg/animal o se utiliza butilbromuro de escopolamina en una dosis intravenosa de 80 a 1 mg/animal al ganado receptor. Cuando se utiliza también bromuro de prifinio en la recogida de óvulos, se aseguran resultados satisfactorios por inyección intravenosa de 0-0 mg/animal al ganado donante. La técnica para trasplantar óvulos fertilizados es la misma que la utilizada convencionalmente pero es preferible realizar el procedimiento de trasplante mientras las paredes rectal y uterina permanecen relajadas después de la administración del medicamento. Ejemplos Ejemplo 1 4 Se disolvió bromuro de prifinio (7, g) en agua destilada para inyección (1.000 ml) y la solución acuosa resultante, en partes de ml, se vertió en ampollas, las cuales se sellaron a continuación. La inyección preparada de esta manera se utilizó en el Ejemplo 3. 0 Ejemplo 2 Se disolvió butilbromuro de escopolamina (2,0 g) en agua destilada para inyección (0 ml) y la solución acuosa resultante, en partes de ml, se vertió en ampollas, las cuales se sellaron a continuación. La inyección preparada de esta manera se utilizó en el Ejemplo 4 a continuación. Ejemplo 3 Se hizo una comparación en el ganado donante en la recogida de óvulos, entre un grupo que comprendía ejemplares Holstein y ejemplares Negro Japonés (un total de 1 animales) con anestesia epidural caudal con lidocaína y un grupo que comprendía 1 ejemplar Holstein y 6 ejemplares Negro Japonés (un total de 7 animales) con inyección intravenosa de bromuro de prifinio. Se hizo una comparación 3

4 similar en el ganado receptor en el trasplante utilizando animales para anestesia epidural con caudal de lidocaína y 23 animales para inyección intravenosa de bromuro de prifinio. La dosis para ganado donante en la recogida de óvulos fue 7 mg/animal ( ml) intravenosamente y la dosis para ganado receptor en el trasplante fue 37, mg/animal ( ml) intravenosamente. Inmediatamente después de la inyección intravenosa de bromuro de prifinio, se encontró tanto en el ganado donante como en el receptor una detención en la peristalsis rectal, relajación de la pared rectal yrelajación de la pared del útero en un grado notorio. La duración de la acción en ganado donante fue 9,6 minutos sobre la media. La duración media de la acción en ganado receptor fue 28,4 minutos. Los resultados se muestran en la siguiente tabla. 1 2 Cantidad de Cantidad Porcentaje ganado de ganado de concepción trasplantado impregnado Anestesia Un óvulo 4 1 2,0% epidural fresco con lidocaína Dos óvulos 8 4 0,0% frescos Un óvulo 39 2,6% congelado 3 Dos óvulos ,4% congelados Total 19 31,7% 4 0 Inyección Un óvulo 2 2 0,0% intravenosa de fresco bromuro de prifinio Dos óvulos 1 0 0,0% frescos Un óvulo ,1% congelado Dos óvulos 6 6 0,0% congelados Total ,6% 4

5 Ejemplo 4 Se inyectó intravenosamente butilbromuro de escopolamina 0 mg/animal ( ml), en lugar de 37, mg/animal ( ml) de bromuro de prifinio en el Ejemplo 3, a ganado receptor en el trasplante y se trasplantaron los óvulos fertilizados de la misma forma que en el Ejemplo 3. Los óvulos fertilizados se obtuvieron de la misma manera que en el Ejemplo 3. Los resultados se muestran en la siguiente tabla. Cantidad de Cantidad Porcentaje ganado de ganado de concepción trasplantado impregnado 1 Bromuro Un óvulo 2 1 0,0% de butil- fresco escopolamina Dos óvulos frescos 2 Un óvulo 4 4 0,0% congelado Dos óvulos 1 0 0,0% congelados 3 Total 7 71,4% La tasa de concepción después del trasplante de óvulos fertilizados según esta invención es superior al 0%, lo cual es un parámetro de tecnología de trasplante de óvulos fertilizados que se espera conseguir en un futuro cercano por el método no quirúrgico e incluso superior al % lo que es un parámetro de tecnología de trasplante de óvulos fertilizados que es deseable conseguir (Chikusan-no-kenkyu 42(11), 9-14) y, por lo tanto, esta invención se cree que proporciona un beneficio de gran alcance para la industria animal. 4 0

6 REIVINDICACIONES 1. Un procedimiento para preparar una composición veterinaria para su utilización como un aditamentoparaeltrasplantedeóvulos fertilizados, en el que se presenta un agente parasimpatolítico en una forma que pueda utilizarse como inyección intravenosa. 2. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que un agente parasimpatolítico se disuelve en agua destilada para inyección en una concentración de 0,7 a 2,0 g/0 ml, se vierte en ampollas y después se sellan. 3. Un procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que el agente parasimpatolítico es butilbromuro de escopolamina o bromuro de prifinio NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté onoincluída en la mencionada reserva. 6