TOXINAS EMERGENTES EN EL MAR ARGENTINO

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1 TOXINAS EMERGENTES EN EL MAR ARGENTINO Nora Montoya, Mario Carignan y Hugo Benavides Proyecto Marea Roja INIDEP-Argentina

2 Detección de Ficotoxinas: Dificultades Matrices biológicas complejas Toxinas estructuralmente relacionadas, pero con diferente toxicidad específica Ausencia de grupos cromóforos Ocurrencia simultanea de varios grupos de toxinas Bio-transformaciones a través de la red trófica Labilidad de algunas toxinas Falta de estándares comerciales Toxinas Emergentes

3 Toxinas emergentes: NUEVOS DESAFÍOS Grupo de biotoxinas que han sido recientemente detectadas por medio de equipos de alta complejidad (HPLC-MS) Su distribución mundial esta actualmente bajo estudio Nuevas toxinas para la región Para algunas, no ha sido completamente establecida su toxicidad Diferentes toxinas en diferentes organismos vectores

4 Objetivo : Estudiar las toxinas Emergentes Proteger la salud humana Disminuir las consecuencias económicas y ambientales Eliminar barreras de comercialización

5 Objetivo : Estudiar las toxinas Emergentes Exigencias sanitarias de control Métodos vigentes Limites para el consumo Tipos de toxinas en la región Estructura y propiedades químicas (lipofílicas ) Mecanismos de acción Organismos productores y afectados

6 Bioensayo con ratones : No se considera adecuado para la detección de las denominadas Toxinas Lipofílicas Ventajas: Uso universal, alto nivel de protección Desventajas: FALSO NEGATIVO Azaspiracidos: Método convencional de toxinas diarreicas (con hepatopancreas) solo es medido el 40 % del contenido total (James et al., 2002). FALSO POSITIVO Toxinas iminas cíclicas toxinas de rápida acción : espasmos y corto tiempo de supervivencia

7

8

9 Espectrometría de Masas (MS) INIDEP Investigación Apto para el método de la UE Estudios estructurales Esquire 6000, BRUKER Fuente de ionización a presión atmosférica (API) Trampa iónica multi-stage (MSn) Monitoreo de reacciones múltiples (MRM)

10 Toxinas Diarreicas de Moluscos 49 campañas: octubre 2008 a marzo de 2011 Variables ambientales Uruguay Río de la Plata Muestras Microbiológico Berberechos Fitoplancton: Cuali y cuantitativo (Hasle,1978) Pigmentos: HPLC (Zapata et al., 2000) Toxinas HPLC-MS/MS (Fernández Puente et al., 2004)

11 CONCLUSIONES Se identificaron tres especies potencialmente productoras de toxinas diarreicas en el plancton de Villa Gesell D. tripos, D. acuminata y D caudata Las mayores concentraciones de D. caudata y D. acuminata coincidieron con el máximo valor de temperatura del agua y la disminución de salinidad observada durante el verano Se detectó OA y PTX2 en las muestras de plancton PTX2 en células aisladas de D. caudata OA y DTX en berberechos HPLC- MS/MS: permitió la detección de toxinas emergentes para la region

12 IMINAS CICLICAS: espirolidos Los SPXs son un grupo de toxinas marinas conocidas como toxinas de rápida acción por su rápido efecto letal en bioensayos con ratones. Son producidas por el dinoflagelado Alexandrium ostenfeldii Son neurotóxicos (actuan sobre los receptores nicotínico de acetilcolina) en el sistema nervioso central, no se conoce su toxicidad en humanos (LD50) La legislación actual de la Unión Europea, no establece un límite en el contenido de SPXs Alexandrium ostenfeldii

13 IMINAS CICLICAS: espirolidos No toxicas, formadas en mejillones Junto con las gymnodiminas (GYMs), pinnatoxinas (PnTXs) y pteriatoxinas (PtTXs);

14 ESPIROLIDOS Muestras plancton y mejillones y material vivo 30 de octubre y 6 de noviembre de 2010 El primer hallazgo en Argentina de toxinas SPXs en mejillones, en muestras naturales de fitoplancton provenientes del Canal de Beagle y en los cultivos del dinoflagelado A. ostenfeldii mantenidos en el laboratorio

15 ESPIROLIDOS Separación cromatográfica y cuantificación de los SPXs (Ciminniello et al, ) a) extracción y purificación, b) separación, análisis y cuantificación por cromatografía con detección MS c) confirmación inequívoca por espectrometría de masas en tandem (MS 2 ) y comparación con los espectros obtenidos para el estándar bajo iguales condiciones. Compuestos sospechados de ser IC: estudios de fragmentación y los resultados obtenidos se compararon con los iones principales y sus fragmentos característicos reportados en la bibliografía la pérdida característica de moléculas de agua y la presencia de los iones m/z= 164 y m/z = 150

16 Fragmentación de 13-desMe C H m/z 150 Iminas cíclicas Ciminiello et al, 2006

17 Toxinas Paralizantes de Moluscos Plancton Alexandrium ostenfeldii Se detecto TPM en una muestra de plancton de octubre 2007 No se detecto TPM en cultivo Hernando et al, 2012 C C GTX GTX dcgtx GTX GTX neostx STX 13.90

18 Conclusiones Nuevo tipo de toxinas emergentes en Argentina: espirolidos Se identificaron en mejillones, plancton y cultivo de Alexandrium ostenfeldii Se identifico y cuantificó a 13-desMe-spirolide C y otros espirolidos, que por falta de estándar no fueron cuantificados No existe regulación sobre estas toxinas No presentan riesgo pues el control se realiza por bioensayo

19 Muchas gracias!!! Proyecto Marea Roja

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