PROPAGACIÓN DE CASTAÑO A GRAN ESCALA USANDO MICROPROPAGACIÓN FOTOAUTOTRÓFICA

Transcripción

1 PROPAGACIÓN DE CASTAÑO A GRAN ESCALA USANDO MICROPROPAGACIÓN FOTOAUTOTRÓFICA Betriz Cuenc Vler Luquero Rmos, L. 2, Ocñ Bueno, L. 2 y Vidl González, N. 3 1 TRAGSA. Vivero de Mced. bcuenc@trgs.es 2 TRAGSA. Subdirección de Soporte Técnic e Innovción 5 Dpto. Fisiologí Vegetl. Instituto de Investigciones Agrobiológics de Glici (CSIC) Plsenci, 3 de junio de 217

2 ANTECEDENTES Micropropgción clásic Propgción vegettiv de los MFR de cstño tolerntes l tint Micropropgción trdicionl cr y poco eficiente Recientes protocolos de cultivo usndo sistems de inmersión temporl (Cuenc et l., 215) Propgción fotoutotrófic (PAM): eliminción del zúcr exógeno pr promover l ctividd fotosintétic y conseguir un mejor climtción. Inmersión líquid trnsitori (TIS) OBJETIVO Propgr clones de cstño resistentes l tint bjo condiciones fotoutotrófics (cultivo PAM) tnto en l etp de multiplicción como en el etp de enrizmiento. Cultivo fotoutotrófico (PAM)

3 FASE DE PROLIFERACIÓN: metodologí Brotes en inmersión continu en biorrectores 1 l con 1 l MS 1/2N, con,5 mg/l BA y soporte de cubos de ln de roc. Conexión prototipo PAM (Cuenc et l., 215): LEDs blncos y fotoperiodo 16/8 h 25 /2 C Condiciones fotomixotrófics Condiciones fotoutotrófics (PAM) niveles mbientles de CO 2 ( 4 ppm) bj intensidd lumínic (PPF 5 µmol/m.s niveles ltos de CO 2 ( 2 ppm) lt intensidd lumínic (PPF 15 µmol/m.s) Ensyo de 4 genotipos (C42, C53, P42 y P43) evlundo: Tipo de explnto Tmño del explnto Concentrción de scros Intensidd de luz Niveles de CO 2 L evlución se hizo cuntificndo: Nº brotes /explnto (NB) Coeficiente de multiplicción (CM) Longitud del brote más lrgo (LB) Nº de brotes enrizbles/explnto (BE) Niveles de pigmentos fotosintéticos (clorofil, y b y crotenoides) Secciones picles y/o medis Cllos bsles

4 FASE DE PROLIFERACIÓN: resultdos I Tmño de explntos: CM P42 b Secciones picles clon P42 1,5 cm 3 cm Tipo de explntos y concentrción de scros: En condiciones fotomixotrófics, explntos picles más grndes prolifern mejor, pero ún mejor lo hcen los cllos bsles, especilmente en scros 3%. CM Secciones picles P43 scros 3% scros 1% b Secciones bsles Concentrción de CO2: ppm 2 ppm C53 b b b NB LB (cm) CM En condiciones fotoutotrófics, un concentrción de CO 2 más lt produce más brotes y más lrgos, pero no fect los pigmentos fotosintéticos. clorofil +b C53 crotenoides µg/g peso fresco

5 FASE DE PROLIFERACIÓN: resultdos II Intensidd lumínic: C53 12 secciones picles 5 PPF secciones picles 15 PPF secciones bsles 5 PPF A 1 secciones bsles 15 PPF A 8 6 A A 4 B B 2 B B NB CM B B BE A A Los cllos bsles crecen mejor con myor intensidd luminos pero sin efecto significtivo. El tipo de explnto, tuvo influenci significtiv en tods ls vribles (p<,1) 8 P42 Secciones picles Secciones bsles NB LB (cm) CM P43 C53 C42 Los brotes de cstño prolifern en condiciones fotoutotrófics sin scros. CM medios de 3 y 5 pr secciones picles y bsles respectivmente

6 FASE DE ENRAIZAMIENTO: metodologí Brotes enrizbles en biorrectores 16 l + 2,5l de 1/3 GD sin PGRs ni scros, trs inmersión bsl 1g/l AIB 2 min. Conexión l prototipo PAM (Cuenc et l., 215): LEDs blncos y fotoperiodo 16/8 h 25 /2 C Ensyo con 15 genotipos en los que se evluron: o Form y tmño de los bloques de ln de roc empledos como sustrto (Kiemplugs y Blocks AO de Grodn ) o Niveles de CO 2 (4 2 ppm)

7 FASE DE ENRAIZAMIENTO: resultdos I Concentrción de CO 2 : % Enrizmiento Mezcl de clones CO 2 (ppm) Form y tmño de los bloques de ln de roc: Los explntos en Blocks enrizron mejor que en Kiemplugs sin diferencis significtivs. Los Blocks son más fáciles de mnejr y más brtos Los mejores porcentjes de enrizmiento sin scros, se obtiene con C 2 en ls concentrciones entre 12 y 15 ppm Mezcl de clones % Enrizmiento Blocks AO Kiemplugs

8 FASE DE ENRAIZAMIENTO: resultdos II Aclimtción: Los brotes enrizdos en PAM sin scros tienen un elevd ts de supervivenci y de re emprendimiento del crecimiento. El vlor medio de enrizmiento en Blocks y climtción posterior de los 15 clones fue del 52%, oscilndo entre el 28,3 y el 93,8% dependiendo de l composición clonl del lote enrizr.

9 CONCLUSIONES Se h conseguido por primer vez l proliferción y enrizmiento de cstño en condiciones fotoutotrófics Pr l proliferción es necesrio someter los explntos niveles decrecientes de scros en subcultivos sucesivos pr modificr su estdo fisiológico y dptrlos sobrevivir sin crbohidrtos ñdidos Los mejores resultdos en proliferción se obtuvieron en condiciones de PPF 15 µmol/m.s y 2 ppm de CO 2 emplendo cllos bsles como explntos Los mejores resultdos en enrizmiento se obtuvieron sin scros sin necesidd de dptción, emplendo Blocks AO de Grodn y con concentrciones de CO 2 entre 12 y 15 ppm. El enrizmiento PAM fue eficiente, consiguiendo buenos porcentjes en l climtción posterior, por lo que el sistem PAM puede plicrse de modo eficiente l propgción grn escl de cstño.

10 AGRADECIMIENTOS Este proyecto h sido prcilmente finncido por el progrm FEDER-INTERCONNECTA 213/214 del CDTI (EXP64828/ITC-21334). Dr. Betriz Cuenc Vler bcuenc@trgs.es