MONOLISA HBs Ag ULTRA 72408

Transcripción

1 MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 25 tests English p. 3 Français p. 11 Español p. 19 Deutsch p. 27 Italiano p. 35 Portugese p. 43 Svensk p. 51 Dansk p. 59 The other languages required in conformity to the European Directive can be obtained from your local Bio-Rad agent

2 2

3 MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 25 tests TEST FOR THE CONFIRMATION OF HBs Ag IN HUMAN SERUM OR PLASMA IVD Manufacturer Quality Control All products manufactured and commercialised by Bio-Rad are subject to a complete quality system starting from reception of raw materials to the final commercialisation of the product. Each lot is submitted to a quality control and only is released on the market when conforming to the acceptance criteria. The records relating to production and control of each single lot are kept within our company. 3

4 CONTENTS 1. INTENDED USE 2. PRINCIPLE OF THE MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY TEST 3. COMPOSITION OF THE KIT 4. PRECAUTIONS 5. HEALTH AND SAFETY INSTRUCTIONS 6. MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED 7. SHELF LIFE - STABILITY 8. COLLECTION AND HANDLING OF SPECIMENS 9. ASSAY PROCEDURE 10. CALCULATION AND INTERPRETATION OF THE RESULTS 11. PERFORMANCES 12. LIMITS OF THE TEST 13. LITERATURE 4

5 1 - INTENDED USE The MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY test is used to confirm the presence of hepatitis B surface Ag (HBs Ag) in samples of human serum or plasma found reactive by the MONOLISA HBs Ag ULTRA screening test (codes 72346/72348). 2 - PRINCIPLE OF THE MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY TEST The MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY test uses the principle of neutralization by excess of antibodies to anti-hbs (anti-hbs diluent: neutralization reagent) of the Ag HBs found in serum or plasma samples. It is recommended to test samples repeatedly found positive by the MONOLISA HBs Ag ULTRA screening test with the reagents from the MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY kit. If a sample is positive in HBs antigen, the anti-hbs antibodies in the neutralization reagent saturate the HBs antigen determinants of the sample which can no longer bind to the antibody fixed on the solid phase. A decrease in optical density will be observed when comparing the same sample in which the neutralization reagent is replaced by a negative control diluent not containing anti-hbs antibodies. Several dilutions of the sample will be analyzed, as required, to take into account variations in HBs Ag concentration. The test includes the following reactional phases : 1) Incubation of controls and samples positive in HBs Ag with the neutralization reagent and the conjugate in the presence of anti-hbs antibodies fixed on the solid phase. For each sample, control wells are provided by replacing the neutralization reagent with a negative control diluent. The remainder of the procedure is identical to the protocol for the MONOLISA HBs Ag ULTRA kit : 2) Washing, then development of the enzyme activity bound to the solid phase by addition of the substrate. 3) Stop of the development step, then reading of the optical densities at 450/ nm and interpreting the results. 3 - COMPOSITION OF THE KIT LABEL NATURE OF THE REAGENTS PRESENTATION RA Neutralization reagent 1 vial Tris NaCl buffer (ph 8.0) containing sheep serum and human serum negative in HBs antigen and in anti-hcv 0.7 ml and anti-hiv1/2 antibodies and supplemented with anti-hbs antibodies. Ready-to-use reagent Preservative : ProClin 300 (0.25%) RB Negative control diluent 1 vial Tris NaCl buffer (ph 8.0) containing sheep serum and human serum negative in HBs antigen and in anti-hcv 0.7 ml and anti-hiv1/2 antibodies. Ready-to-use reagent Preservative : ProClin 300 (0.25%) RC Sample diluent 1 vial 0.85% physiological saline solution. Ready-to-use reagent 27 ml Preservative : ProClin 300 (0.1%) 5

6 4 - PRECAUTIONS The quality of results is dependent upon the following good laboratory practices: Do not use expired reagents. Do not mix or combine reagents from MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY kits with different batch numbers during the same procedure. Before use, allow the reagents to stabilize at ambient temperature (18-30 C) for 30 minutes. Use glassware that is thoroughly washed and rinsed in distilled water or, preferably, use disposable material. Refer to MONOLISA HBs Ag ULTRA kit package insert. 5 - HEALTH AND SAFETY INSTRUCTIONS All of the reagents included in the kit are intended for in vitro diagnostic use. The material of human origin used for the preparation of reagents RA and RB has been tested and found negative in HBs antigen and in anti-hiv1, anti-hiv2 and anti-hcv antibodies. Since no method can absolutely guarantee the absence of HIV, HBV or HCV viruses or other infectious agents, consider these reagents, as well as patient samples, as potentially infections and handle them with precaution. For common health and safety instructions, refer to the MONOLISA HBs Ag ULTRA kit package insert. Some reagents contain ProClin 300 (0.04%, 0.1% and/or 0.5%) Xi Irritant R43 : may cause sensitisation by skin contact S28-37 : After contact with skin, wash immediately with plenty of soap and water. Wear suitable protective gloves. 6 - MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED Refer to the MONOLISA HBs Ag ULTRA kit package insert. 7 - SHELF LIFE - STABILITY Store the kit between +2 C and +8 C before use. Once opened, all of the reagents can be used up to the expiry date indicated on the box if they are stored between +2 C and +8 C. 8 - SAMPLES Refer to the MONOLISA HBs Ag ULTRA kit package insert. Samples with a very high concentration of HBs Ag can not be neutralized by the neutralization regent if they are tested in undiluted form. Refer to section 10 CALCULATION AND INTERPRETATION OF RESULTS, sub-section Test validation criteria. NOTE : samples with a high HBs Ag concentration, with an optical density greater than with the MONOLISA HBs Ag ULTRA test, can be tested directly when diluted to 1/100 in the sample diluent. 9 - ASSAY PROCEDURE Proceed as follows using the reagents from the MONOLISA HBs Ag ULTRA kit. 1. Prepare the washing solution (R2) and the reconstituted conjugate solution (R6+R7) : refer to section 8 PREPARATION OF REAGENTS, sub-section Reagents to be reconstituted in the MONOLISA HBs Ag ULTRA kit package insert. 2. Remove the microplate frame and the number of required strips (reagent R1) from the protective packing. 3. Distribute in the wells in the following order : Wells A1, A2 : 100 µl of the negative control (R3) from the MONOLISA HBs Ag ULTRA kit. Wells B1, B2 : 100 µl of the positive control (R4) from the MONOLISA HBs Ag ULTRA kit. Wells C1, C2, D1, D2 : 100 µl of the first sample to be confirmed. Wells E1, E2, F1, F2 : 100 µl of the second sample to be confirmed. 6

7 Wells G1, G2, H1, H2 : 100 µl of the third sample to be confirmed, and so forth. Depending on the used system, it is possible to modify the position of controls or the order of distribution. 4. Add 20 µl of the negative control diluent (RB) in wells A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1, H1 and 20 µl of the neutralization reagent (RA) in wells A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, H2, etc. 5. Distribute 50 µl of the reconstituted conjugate solution (R6+R7) in all the wells. Homogenize each mixture using a minimum of 3 aspirations. 6. Follow with step 7 and all subsequent steps contained in section 11 PROCEDURE in the MONOLISA HBs Ag ULTRA kit package insert CALCULATION AND INTERPRETATION OF RESULTS 1) Reactivity ratio of the controls and of the samples 1. For the positive control (R4) and the negative control (R3) from the MONOLISA HBs Ag ULTRA kit, calculate : OD controls with RB Reactivity ratio = [(OD R3 with RB + OD R3 with RA)/2] For each sample, calculate : Mean OD samples with RB Reactivity ratio = [(OD R3 with RB + OD R3 with RA)/2] ) Inhibition percentage 1. Calculate the inhibition percentages of the optical densities recorded for the positive control (R4) and the negative control (R3) treated with the neutralization reagent (RA) and the negative control diluent (RB). (OD controls with RB) - (OD controls with RA) Inhibition percentage = X 100 (OD controls with RB) 2. Calculate the inhibition percentages of the optical densities recorded for the samples treated with the neutralization reagent (RA) and the negative control diluent (RB). (mean OD samples with RB) - (mean OD samples with RA) Inhibition percentage = X 100 (mean OD samples with RB) 3) Test validation criteria 1. The values of the negative control (R3) with addition of negative control diluent (RB) or neutralization reagent (RA) must be less than or equal to OD units. For this same negative control (R3), the reactivity ratio must be less than 0.8. For the positive control (R4) with addition of negative control diluent (RB), the recorded optical density must be greater than For this same positive control (R4), the inhibition percentage must be greater than or equal to 50%. 2. For samples with an inhibition percentage < 50% and with a reactivity ratio 0.8, it is necessary to re-test these samples diluted in the sample diluent (1/100; 1/10,000; 1/1,000,000; etc., 100 X dilution) in order to obtain a reactivity ratio < 0.8 (sample not confirmed in this case) or confirmation of the neutralization of the sample tested (inhibition percentage 50%). 4) Interpretation of results A sample will be confirmed positive for HBs Ag if the reactivity ratio is greater than or equal to 0.8 and the inhibition percentage is greater than or equal to 50%. Sample reactivity ratio Inhibition percentage Interpretation % Confirmed 0.8 < 50% Not confirmed; to be diluted < 0.8 Whatever result Not reactive* * Not confirmed for diluted samples 7

8 Examples : Test OD values OD values Sample Inhibition Interpretation with RA with RB reactivity ratio percentage Positive % Confirmed control (R4) Negative % Not reactive control (R3) Sample % Not reactive Sample % Not confirmed; to be diluted Sample % Confirmed Dil. 1/100 Sample % Not confirmed; to be diluted Sample % Not confirmed Dil. 1/ PERFORMANCES The performances of MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay associated with MONOLISA HBs Ag ULTRA has been determined by testing samples from clinical patients with acute and chronic hepatitis B infection or with diseases unrelated to hepatitis B infection, and from commercial samples and seroconversion panels. More over the sensitivity limit has been tested using the French EFS HB panel, and the WHO standards (NIBSC code 00/588). Analytical Sensitivity All diluted sample concentrations from 0.06 ng/ml to 2.2 ng/ml from the EFS HB sensitivity panel and all positive results from WHO NIBSC panel were all confirmed with MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay. An HBs Ag concentration higher than 10 mg/ml was neutralised after dilution of this sample. Sensitivity Sensitivity studies have been performed on 337 positive samples from follow-up of chronic or acute HBV infected. All the positive samples were confirmed with MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay. A total of 15 well documented commercial HBV seroconversion panels (45 samples) were also studied. All the positive samples were neutralised. Specificity and Cross Reactivity An internal panel of 16 false positive samples with MONOLISA HBs Ag ULTRA was tested with MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay and were not confirmed. The analysis of 102 patients showing different pathologies or status not linked to the hepatitis B (pregnant women, rheumatoid factor, anti-nuclear antibodies, anti-mouse Ig or other viral or bacterial infections) were tested with MONOLISA Ag HBs ULTRA CONFIRMATORY and confirmed negative. More over, 37 samples positive with HBs Ag and also positive with different markers (Rheumatoid factors samples, antinuclear antibody samples, anti mouse Ig or viral infection samples) were tested with MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay; all these samples were confirmed positive for HBs Ag. 23 HBs Ag positive samples from the co infection Panel PCA201 BBI (with HBV, HIV, HCV and /or HTLV) were all confirmed with MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay pure or after dilution. 8

9 Assay Reproducibility The reproducibility of MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY assay has been determined, by the analysis of 4 samples : 1 negative sample (sample 1), 2 HBs Ag positive samples (samples 2 and 3) and 1 high HBs Ag positive sample (sample 4). The intra assay reproducibility has been evaluated by testing these 4 samples 30 times in the same run. The inter assay reproducibility has been evaluated by testing these 4 samples in duplicate during 20 days on 2 independent runs each days. Results are shown in the following tables : Table 1 : Intra assay reproducibility n = 30 sample 1 sample 2 sample 3 sample 4 (ratio 0.37) (ratio =1.32) (ratio =3.39) (ratio =18.39) Mean of percent of inhibition Standard deviation (SD) CV (%) NA 1.86% 0.69% 0.22% Table 2 : Inter assay reproducibility n = 40 sample 1 sample 2 sample 3 sample 4 (ratio 0.37) (ratio =1.32) (ratio =3.39) (ratio =18.39) Mean of percent of inhibition Standard deviation CV (%) NA 8.68% 3.70% 0.76% The results obtained during these reproducibility studies were conformed to those expected LIMITS OF THE TEST The MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY test is strictly limited to the confirmation of the presence of the hepatitis B surface antigen (HBs Ag) in human serum and plasma. Samples which repeatedly test weakly positive (ratio less than 2) with the MONOLISA HBs Ag ULTRA test and which are determined not reactive for an undiluted sample with the MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY test (reactivity ratio less than 0.8) must be interpreted with precaution. It is recommended to re-test these patients with another method or with a second sample taken later LITERATURE Refer to French package insert. 9

10 10

11 MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 25 tests TEST POUR LA CONFIRMATION DE LA PRÉSENCE DE L Ag DE SURFACE DU VIRUS DE L HÉPATITE B DANS LE SÉRUM OU LE PLASMA HUMAIN IVD Contrôle de qualité du fabriquant Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la réception des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot du produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à la production et au contrôle de chaque lot est conservée par notre société. 11

12 SOMMAIRE 1. BUT DU DOSAGE 2. PRINCIPE DU TEST MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 3. COMPOSITION DE LA TROUSSE 4. PRÉCAUTIONS 5. CONSIGNES D'HYGIÈNE ET DE SÉCURITÉ 6. MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI 7. CONSERVATION - VALIDITÉ 8. ÉCHANTILLONS 9. MODE OPÉRATOIRE 10. CALCUL ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS 11. PERFORMANCES 12. LIMITES DU TEST 13. RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES 12

13 1 - BUT DU DOSAGE Le test MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY est utilisé pour confirmer la présence de l Ag de surface du virus de l hépatite B (Ag HBs) dans les échantillons sériques ou plasmatiques humains trouvés réactifs par le test de screening MONOLISA HBs Ag ULTRA codes 72346/ PRINCIPE DU TEST MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY Le test MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY utilise le principe de la neutralisation par un excès d'anticorps anti-hbs (diluant anti-hbs; réactif de neutralisation) de l'ag HBs présent dans les échantillons sériques ou plasmatiques. Il est conseillé de tester les échantillons trouvés positifs répétables en test de screening MONOLISA HBs Ag ULTRA avec les réactifs de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. Dans le cas d un échantillon positif en antigène HBs, les anticorps anti-hbs du réactif de neutralisation saturent les déterminants antigéniques HBs de l échantillon qui ne pourront plus se lier à l'anticorps immobilisé sur la phase solide. Une réduction de la densité optique sera observée lors de la comparaison avec le même échantillon où le réactif de neutralisation est remplacé par un contrôle diluant négatif ne contenant pas d'anticorps anti-hbs. Plusieurs dilutions de l'échantillon seront éventuellement contrôlées pour prendre en compte les variations de concentration en Ag HBs de l échantillon. L'essai comprend les étapes réactionnelles suivantes : 1) Incubation des contrôles ou des échantillons positifs en Ag HBs avec le réactif de neutralisation et le conjugué en présence d'anticorps anti-hbs immobilisés sur la phase solide. Pour chaque échantillon, des cupules témoins sont réalisées en remplaçant le réactif de neutralisation par un contrôle diluant négatif. La suite de la procédure est identique au protocole de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA : 2) Lavage puis révélation de l'activité enzymatique liée à la phase solide par addition du substrat. 3) Arrêt de la révélation puis lecture des densités optiques à 450/ nm et interprétation des résultats. 3 - COMPOSITION DE LA TROUSSE ETIQUETAGE NATURE DES RÉACTIFS PRÉSENTATION RA Réactif de neutralisation Tampon Tris NaCl ph flacon contenant du sérum de mouton et du sérum humain négatif en antigène HBs, en anticorps anti-vhc et anti-vih1/2, 0,7 ml additionné d anticorps anti- HBs. Réactif prêt-à-l emploi Conservateur : ProClin 300 (0.25%) RB Contrôle diluant négatif 1 flacon Tampon Tris NaCl ph 8.0 contenant du sérum de mouton et du sérum humain négatif en antigène HBs, 0,7 ml en anticorps anti-vhc et anti-vih1/2. Réactif prêt-à-l emploi Conservateur : ProClin 300 (0.25%) RC Diluant échantillon 1 flacon Eau physiologique à 0.85%. Réactif prêt-à-l emploi 27 ml Conservateur : ProClin 300 (0.1%) 13

14 4 - PRÉCAUTIONS La qualité des résultats dépend du respect des bonnes pratiques de laboratoire suivantes : Ne pas utiliser des réactifs dont la validité est expirée. Ne pas mélanger, ni associer des réactifs provenant de trousses MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY portant des numéros de lots différents au cours d'une même manipulation. Avant utilisation, attendre 30 minutes que les réactifs s'équilibrent à la température ambiante (18-30 C). Utiliser une verrerie parfaitement lavée et rincée à l'eau distillée ou de préférence du matériel à usage unique. Se reporter également à la notice de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA. 5 - CONSIGNES D'HYGIÈNE ET DE SÉCURITÉ Tous les réactifs de la trousse sont destinés à l'usage du diagnostic in vitro. Le matériel d'origine humaine utilisé pour la préparation des réactifs RA et RB a été testé et trouvé négatif en antigène HBs, en anticorps anti-vih1, anti-vih 2 et anti-vhc. Du fait qu aucune méthode ne peut garantir de façon absolue l'absence des virus VIH, VHB, VHC ou d'autres agents infectieux, considérer ces réactifs, ainsi que les échantillons de patients, comme potentiellement infectieux et les manipuler avec les précautions d'usage. Pour les consignes d'hygiène et de sécurité usuelles, se reporter à la notice de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA. Certains réactifs contiennent du ProClin 300 (0.04%, 0,1 % et/ou 0,5%) Xi Irritant R43 : peut entraîner une sensibilisation par contact avec la peau S28-37 : Après contact avec la peau, se laver immédiatement et abondamment avec de l'eau et du savon. Porter des gants appropriés. 6 - MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI Se reporter à la notice de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA. 7 - CONSERVATION - VALIDITÉ Conserver la trousse à C avant utilisation. Après ouverture tous les réactifs sont utilisables jusqu'à la date de péremption indiquée sur le coffret, si conservés à 2-8 C. 8 - ÉCHANTILLONS Se reporter à la notice de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA. Certains échantillons ayant une concentration très élevée en Ag HBs peuvent ne pas être neutralisés par le réactif de neutralisation s'ils sont testés non dilués. Se reporter au chapitre 10 «CALCUL ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS», sous-chapitre : «Conditions de validation du test». NB : les échantillons ayant une concentration très élevée en Ag HBs, densité optique supérieure à avec le test MONOLISA HBs Ag Ultra, peuvent être testés directement dilués au 1/100 dans le diluant échantillon. 9 - MODE OPÉRATOIRE Procéder de la façon suivante en utilisant les réactifs de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA. 1. Préparer la solution de lavage R2 et la solution de conjugué reconstituée (R6+R7) : se reporter au chapitre 8 «PREPARATION DES REACTIFS», sous-chapitre «réactifs à reconstituer» de la notice de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA. 2. Sortir de l'emballage protecteur le cadre support et le nombre de barrettes nécessaires (Réactif R1). 3. Distribuer dans les cupules dans l'ordre suivant : Cupules A1, A2 : 100 µl de contrôle négatif R3 de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA. Cupules B1, B2 : 100 µl de contrôle positif R4 de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA. Cupules C1, C2, D1, D2 : 100 µl du premier échantillon à confirmer. 14

15 Cupules E1, E2, F1, F2 : 100 µl du deuxième échantillon à confirmer Cupules G1, G2, H1, H2 : 100 µl du troisième échantillon à confirmer, etc En fonction du système utilisé, il est possible de modifier la position ou l ordre de distribution des témoins. 4. Rajouter 20 µl de contrôle diluant négatif RB dans les cupules A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1, H1 et 20 µl de réactif de neutralisation RA pour les cupules A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, H2 etc Distribuer 50 µl de la solution de conjugué reconstitué (R6 + R7) dans toutes les cupules. Homogénéiser par 3 aspirations/refoulements au minimum. 6. Poursuivre avec l étape 7 et les étapes suivantes du chapitre 11 «MODE OPERATOIRE» de la notice de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA CALCUL ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS 1) Ratio de réactivité des contrôles et des échantillons 1. Pour les contrôles positif R4 et négatif R3 de la trousse MONOLISA HBs Ag ULTRA, calculer : DO contrôles avec RB Le ratio de réactivité = [(DO R3 avec RB + DO R3 avec RA)/2] Pour chaque échantillon, calculer : Moyenne DO échantillon avec RB Le ratio de réactivité = [(DO R3 avec RB + DO R3 avec RA)/2] ) Pourcentage d Inhibition 1. Calculer les pourcentages d inhibition des densités optiques enregistrées pour les contrôles positif R4 et négatif R3 traités par le réactif de neutralisation RA et le contrôle diluant négatif RB. (DO contrôles avec RB) - (DO contrôles avec RA) Pourcentage d Inhibition = X 100 (DO contrôles avec RB) 2. Calculer les pourcentages d inhibition des densités optiques enregistrées pour les échantillons traités par le réactif de neutralisation RA et le contrôle diluant négatif RB. (moyenne DO échantillons avec RB) - (moyenne DO échantillons avec RA) Pourcentage d Inhibition = X 100 (moyenne DO échantillons avec RB) 3) Conditions de validation du test 1. Les valeurs du contrôle négatif (R3) additionné de contrôle diluant négatif (RB) ou de réactif de neutralisation (RA) doivent être inférieures ou égales à 0,080 unité de densité optique. Pour ce même contrôle négatif (R3), le ratio de réactivité doit être inférieur à 0.8 Pour le contrôle positif (R4) additionné de contrôle diluant négatif (RB), la densité optique enregistrée doit être supérieure à Pour ce même contrôle positif (R4), le pourcentage d Inhibition doit être supérieur ou égal à 50%. 2. Pour les échantillons avec un pourcentage d Inhibition < 50% et avec un ratio de réactivité 0.8, il est nécessaire de retester cet échantillon dilué dans le diluant échantillon (1/100, 1/10 000, 1/ , dilution de facteur 100) pour obtenir un ratio de réactivité < 0,8 (échantillon non confirmé dans ce cas) ou la confirmation de la neutralisation de l'échantillon testé (Pourcentage d Inhibition 50%). 4) Interprétation des résultats Un échantillon sera confirmé positif pour l'ag HBs si le ratio de réactivité est supérieur ou égal à 0.8 et le pourcentage d Inhibition est supérieur ou égal à 50%. Ratio de réactivité des échantillons Pourcentage d Inhibition Interprétation % Confirmé 0.8 < 50% Non confirmé à diluer < 0.8 Quelque soit le résultat Non réactif* * Non confirmé pour les échantillons testés en dilution 15

16 Exemples : Test Valeurs de DO Valeurs de DO Ratio de Pourcentage avec RA avec RB réactivité d Inhibition Interprétation des échantillons Contrôle positif % Confirmé (R4) Contrôle négatif % Non réactif (R3) Echantillon % Non réactif Echantillon % Non confirmé à diluer Echantillon % Confirmé Dil.1/100 Echantillon % Non confirmé à diluer Echantillon % Non confirmé Dil. 1/ PERFORMANCES Les performances du test MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY associé au test MONOLISA HBs Ag ULTRA ont été déterminées à l aide d échantillons de patients atteints d Hépatite B aiguë et chronique ou atteints d infections sans relation avec l Hépatite B ainsi que sur des échantillons provenant de panels commerciaux et de séroconversions commerciales. La limite de sensibilité a été étudiée à l aide du panel HB EFS français ainsi que du second étalon international OMS 2004 ref (NIBSC 00/588) Sensibilité analytique Toutes les concentrations du panel HB EFS de 0.06 ng/ml à 2.2ng /ml ainsi que les concentrations du standard OMS de UI /ml à 1 UI /ml trouvées positives avec le test Monolisa HBs Ag Ultra ont été confirmées à l aide du test MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. Une concentration supérieure à 10 mg / ml d Ag HBs a été neutralisée après dilution de cet échantillon. Sensibilité L étude de sensibilité a été réalisée sur 337 échantillons positifs provenant de suivis d Hépatite B chronique ou aiguë de patients infectés. Tous les échantillons positifs ont été confirmés à l aide du test MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. 15 séroconversions VHB commerciales bien documentées (45 échantillons) ont été étudiées : tous les échantillons positifs ont été neutralisés. Spécificité et Réactions Croisées Un panel interne de 16 échantillons trouvés faux positifs avec le test Monolisa HBs Ag ULTRA ont été testés et trouvés non confirmés avec le test MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. 102 échantillons provenant de patients avec différentes pathologies ou statut immunitaire sans relation avec l Hépatite B (femmes enceintes, facteurs rhumatoïdes, anticorps anti nucléaires, anticorps anti souris ou autres infections virales et bactériennes) ont été testés avec le test MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY et sont confirmés négatifs. De plus 37 échantillons positifs à la fois en Ag HBs et pour d autres marqueurs (facteurs rhumatoïdes, anticorps anti nucléaires, anticorps anti souris ou autres infections virales et bactériennes) ont été testés avec le test MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY et confirmés avec celui ci. 16

17 De plus, 23 échantillons provenant du panel de coinfection BBI PCA 201 ( coinfections VHB/VIH/ VHC /VHTL) positifs en Monolisa HBS Ag Ultra ont été confirmés purs ou après dilution. Etudes de Reproductibilité La reproductibilité du test MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY a été déterminée à l aide de 4 échantillons : 1 échantillon négatif (échantillon 1), 2 échantillons positifs (échantillons 2 et 3 ) et 1 échantillon positif fort (échantillon 4). L étude intra essai a été réalisée en testant ces 4 échantillons 30 fois lors du même essai ; L étude inter essai a été réalisée en testant ces 4 échantillons en duplicats à raison de 2 essais différents par jour et pendant une période de 20 jours. Les résultats exprimés en moyenne, écart type et CV sont présentés dans les tableaux suivants Tableau 1 : Reproductibilité Intra essai n = 30 Echantillon 1 Echantillon 2 Echantillon 3 Echantillon 4 (ratio 0.37) (ratio =1.32) (ratio =3.39) (ratio =18.39) Moyenne du % d inhibition Ecart type (ET) CV (%) NA 1,86% 0,69% 0,22% Tableau 2 : Reproductibilité Inter essai n = 40 Echantillon 1 Echantillon 2 Echantillon 3 Echantillon 4 (ratio 0.37) (ratio =1.32) (ratio =3.39) (ratio =18.39) Moyenne 3,74 81,46 92,76 98,08 du % d inhibition Ecart type (ET)) 15,84 7,07 3,43 0,75 CV (%) NA 8,68% 3,70% 0,76% Les résultats obtenus durant ces études sont conformes à ceux attendus LIMITES DU TEST Le test MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY est strictement limité à la confirmation de la présence de l antigène de surface du virus de l hépatite B (Ag HBs) dans le sérum et le plasma humain. Les échantillons réactifs répétables faiblement positifs (ratio inférieur à 2) avec le test MONOLISA HBs Ag ULTRA et obtenus non réactifs sur l'échantillon non dilué dans le test MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY (ratio de réactivité inférieur à 0.8), doivent être interprétés avec précaution. Il est conseillé de retester ce patient avec une autre méthode ou avec un deuxième échantillon prélevé ultérieurement BIBLIOGRAPHIE 1. COUROUCE A.M., LEE H., DROUET J., CANAVAGGIO M. and SOULIER J.P. (1983) - Monoclonal antibodies to HBs Ag : a study of their specificities for eight different HBs subtypes. Developments in Biological Standardization, 54, COUROUCE A.M., PLANCON A. and SOULIER J.P. (1983) - Distribution of HBs Ag subtypes in the world. Vox Sang. 44, DAVID G.S., PRESENT W., MARTINIS J., WANG R., BATHOLOMEW R., DESMOND W. and SEVIER E.D., (1981) - Monoclonal antibodies in the detection of hepatitis infection. Medical Laboratory Sciences, 38, DROUET J., COUROUCE A.M., KALIL J., LEE H., and FELLOUS M. (1981) - Monoclonal antibodies to HBs Ag produced by murine hybridomas. In viral hepatitis, edited by Szmuness W. Alter H.J., Maynard J.E. The Franklin Institute Press,

18 18 5. FIELDS H.A., DAVID C.L., BRADLEY D.W. and MAYNARD J.E. (1983) - Experimental conditions affecting the sensitivity of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of hepatitis B surface antigen (HBs Ag) - Bulletin of the World Health Organization, 61, 1, LEE H.H., COUROUCE A.M., PERE M., CANAVAGGIO M., DROUET J. and SOULIER J.P. (1983) - Monoclonal antibodies to HBs Ag; a study of their specificities against HBs Ag subtypes and their utilization in ELISA. International Association of Biological Standardization. International Symposium on Monoclonal Antibodies : Paris, France. 7. SOULIER J.P., COUROUCE A.M., LEE H. DROUET J., MULLER A. and CANAVAGGIO M. (1983) - Monoclonal antibodies against HBs antigen. Bulletin Biotest (vol. 4, ). 8. WANDS J.P., CARLSON R.L., SCHOEMAKER H., ISSELBACHER K.J. and ZURAWSKI V.R. (1981) - Immunodiagnosis of hepatitis B with high-affinity IgM monoclonal antibodies. Proc. Nat. Acad. Sci., 78, 2, M. CANAVAGGIO, A.M. COUROUCE, M. PERE, H. LEE - Spécificité d'anticorps monoclonaux dirigés contre le déterminant a de l'ag HBs (1985). Nouvelle Revue Française d'immunohématologie (Springer International), 27, 2, J. DROUET, G. CHARRIER, A.M. COUROUCE, M. PERE, J.F. DELAGNEAU, J. ROISIN (1985) - Nouveaux réactifs de dépistage de l'ag HBs et de dosage de l'anticorps anti-hbs. Nouvelle Revue Française d'immunohématologie (Springer International), 27, 2, 134

19 MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 25 tests PRUEBA PARA LA CONFIRMACIÓN DE LA PRESENCIA DEL ANTÍGENO DE SUPERFICIE DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B EN EL SUERO O EL PLASMA HUMANO IVD Control de calidad del fabricante Todos los productos fabricados y comercializados lo son bajo un sistema de calidad completo que se inicia en la recepción de las materias primas y se termina en la comercialización del producto. Cada parte se ve sometida a un control de calidad y sólo sale al mercado cuando está conforme a los criterios de aceptación. Los registros relacionados con la producción y el control de cada parte individual permanecen en nuestra empresa. 19

20 RESUMEN 1 - OBJETIVO DEL TEST 2 - PRINCIPIO DE LA PRUEBA MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 3 - COMPOSICIÓN DEL EQUIPO 4 - PRECAUCIONES 5 - NORMAS DE HIGIENE Y SEGURIDAD 6 - MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO 7 - CONSERVACIÓN Y CADUCIDAD 8 - MUESTRAS 9 - PROCEDIMIENTO 10 - CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS 11 - RENDIMIENTOS 12 - LÍMITES DE LA PRUEBA 13 - BIBLIOGRAFÍA 20

21 1 - OBJETIVO DEL TEST La prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY se emplea para confirmar la presencia del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (Ag HBs) en las muestras séricas o plasmáticas humanas que hayan resultado positivas en la prueba de screening MONOLISA HBs Ag ULTRA códigos 72346/ PRINCIPIO DE LA PRUEBA MONOLISA HBS AG ULTRA CONFIRMATORY La prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY utiliza el principio de la neutralización por exceso de anticuerpos anti-hbs (diluyente antihbs, reactivo de neutralización) del Ag HBs presente en las muestras séricas o plasmáticas. Se aconseja realizar la prueba a las muestras que hayan dado positivo dudoso en la prueba de screening MONOLISA HBs Ag ULTRA con los reactivos del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. En el caso de una muestra positiva en antígeno HBs, los anticuerpos anti-hbs del reactivo de neutralización saturan los determinantes antigénicos HBs de la muestra, que no se podrán unir al anticuerpo inmovilizado en la fase sólida. Se observará una reducción de la densidad óptica al compararlo con la misma muestra en la que se ha sustituido el reactivo de neutralización por un control diluyente negativo que no contenga anticuerpos anti-hbs. Se controlarán eventualmente varias diluciones de la muestra para tomar en cuenta las variaciones de concentración en Ag HBs de la muestra. El ensayo incluye las siguientes etapas reactivas: 1) Incubación de los controles o de las muestras positivas en Ag HBs con el reactivo de neutralización y el conjugado en presencia de anticuerpos antihbs inmovilizados en la fase sólida. Por cada muestra, los pocillos testigo se realizan sustituyendo el reactivo de neutralización por un control diluyente negativo. El procedimiento continúa de la misma forma que el protocolo del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA : 2) Lavado y posterior revelado de la actividad enzimática relacionada con la fase sólida por adición del sustrato. 3) Parada del revelado y posterior lectura de las densidades ópticas a 450/ mm e interpretación de los resultados. 3 - COMPOSICIÓN DEL EQUIPO ETIQUETADO TIPO DE REACTIVO PRESENTACIÓN RA Reactivo de neutralización 1 frasco Tampón Tris NaCl ph 8,0 con suero de cordero y suero humano negativo en antígeno HBs, 0,7 ml anticuerpos anti-vhc y antivih1/2, al que se han añadido anticuerpos anti-hbs. Reactivo listo para su uso Conservante : ProClin 300 (0,25%) RB Control diluyente negativo 1 frasco Tampón Tris NaCl ph 8,0 con suero de cordero y suero humano negativo en antígeno HBs, 0,7 ml anticuerpos anti-vhc y antivih1/2. Reactivo listo para su uso Conservante : ProClin 300 (0,25%) RC Diluyente para muestras 1 frasco Suero fisiológico al 0,85%. 27 ml Reactivo listo para su uso Conservante : ProClin 300 (0,1%) 21

22 4 - PRECAUCIONES La calidad de los resultados depende del seguimiento de las siguientes buenas prácticas de laboratorio : No utilizar reactivos caducados. No mezclar ni asociar durante una misma manipulación reactivos procedentes de equipos MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY con números de lote diferentes. Antes de su utilización, esperar 30 minutos para que los reactivos alcancen la temperatura ambiente (18-30ºC). Utilizar instrumental de cristal perfectamente lavado y aclarado con agua destilada, o, preferiblemente, material de un solo uso. Consultar también las instrucciones del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA. 5 - NORMAS DE HIGIENE Y SEGURIDAD Todos los reactivos del equipo están destinados al uso diagnóstico in vitro. El material de origen humano utilizado para la preparación de los reactivos RA y RB ha sido sometido a pruebas, resultando negativo en antígeno HBs y en anticuerpos anti-vih1, anti-vih2 y anti-vhc. Puesto que ningún método puede garantizar completamente la ausencia de los virus VIH, VHB, VHC o de otros agentes infecciosos, estos reactivos, así como las muestras de los pacientes, deberán considerarse como potencialmente infecciosos y deberán manipularse con precaución. Para las normas de higiene y seguridad habituales, consultar las instrucciones del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA. Algunos reactivos contienen ProClin 300 (0,04%, 0,1% y/o 0,5%) Xi Irritante R43 : puede provocar reacción alérgica por contacto con la piel S28-37 : En caso de contacto con la piel, lavarse inmediatamente con agua abundante y jabón. Llevar guantes adecuados. 6 - MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO Consultar las instrucciones del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA. 7 - CONSERVACIÓN Y CADUCIDAD Conservar el equipo a + 2-8ºC antes de su utilización. Una vez abierto, todos los reactivos pueden utilizarse hasta la fecha de caducidad indicada en el estuche si se han conservado a 2-8ºC. 8 - MUESTRAS Consultar las instrucciones del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA. Es posible que algunas muestras con una concentración muy elevada de Ag HBs no puedan ser neutralizadas por el reactivo de neutralización si no se diluyen antes. Consultar el capítulo 10 CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS, sección: Condiciones de validación de la prueba. NOTA : A las muestras con una concentración muy elevada de Ag HBs y densidad óptica superior a con la prueba MONOLISA HBs Ag Ultra se les puede hacer la prueba diluidas directamente al 1/100 en el diluyente para muestras. 9 - PROCEDIMIENTO Proceder de la siguiente forma cuando se utilicen los reactivos del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA. 1. Preparar la solución de lavado R2 y la solución de conjugado reconstituido (R6+R7): consultar el capítulo 8 PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS, sección Reactivos que se deben reconstituir de las instrucciones del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA. 2. Sacar del envoltorio protector el bastidor de soporte y el número de unidades necesarias (reactivo R1). 3. Distribuir en los pocillos en el orden siguiente: Pocillos A1 y A2: 100 µl de control negativo R3 del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA. 22

23 Pocillos B1 y B2: 100 µl de control positivo R4 del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA. Pocillos C1, C2, D1 y D2: 100 µl de la primera muestra que se desea confirmar. Pocillos E1, E2, F1 y F2: 100 µl de la segunda muestra que se desea confirmar. Pocillos G1, G2, H1 y H2: 100 µl de la tercera muestra que se desea confirmar, etc. En función del sistema utilizado, se puede modificar la posición o el orden de distribución de los controles. 4. Añadir 20 µl de control diluyente negativo RB en los pocillos A1, B1, C1, D1, E1, F1, G1, H1 y 20 µl de reactivo de neutralización RA en los pocillos A2, B2, C2, D2, E2, F2, G2, H2, etc. 5. Distribuir 50 µl de la solución de conjugado reconstituido (R6+R7) en todos los pocillos. Homogeneizar mediante 3 aspiraciones/dispensaciones como mínimo. 6. Proseguir con la etapa 7 y siguientes del capítulo 11 PROCEDIMIENTO de las instrucciones del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS 1) Relación entre reactividad de los controles y de las muestras 1. Para los controles positivo R4 y negativo R3 del equipo MONOLISA HBs Ag ULTRA, calcular : DO de controles con RB la relación de reactividad = [(DO de R3 con RB + DO de R3 con RA)/2] + 0, Para cada muestra, calcular : DO media de las muestras con RB la relación de reactividad = [(DO de R3 con RB + DO de R3 con RA)/2] + 0,050 2) Porcentaje de inhibición 1. Calcular los porcentajes de inhibición de las densidades ópticas registradas para los controles positivo R4 y negativo R3 tratados con el reactivo de neutralización RA y el control diluyente negativo RB. (DO de los controles con RB) - (DO de los controles con RA) Porcentaje de inhibición = X 100 (DO de los controles con RB) 2. Calcular los porcentajes de inhibición de las densidades ópticas registradas para las muestras tratadas con el reactivo de neutralización RA y el control diluyente negativo RB. (DO media de las muestras con RB) - (DO media de las muestras con RA) Porcentaje de inhibición = X 100 DO media de las muestras con RB 3) Condiciones de validación de la prueba 1. Los valores del control negativo (R3) al que se ha añadido control diluyente negativo (RB) o reactivo de neutralización (RA) deben ser iguales o inferiores a 0,080 unidades de densidad óptica. Para el propio control negativo (R3), la relación de reactividad debe ser inferior a 0,8. Para el control positivo (R4) al que se ha añadido control diluyente negativo (RB) la densidad óptica registrada debe ser superior a 0,800. Para el propio control positivo (R4), el porcentaje de inhibición debe ser igual o superior al 50%. 2. Para las muestras con un porcentaje de inhibición <50% y con una relación de reactividad 0,8, es necesario volver a probar la muestra diluida en el diluyente para muestras (1/100, 1/10.000, 1/ , dilución de factor 100) para obtener una relación de reactividad <0,8 (muestra no confirmada en este caso) o bien la confirmación de la neutralización de la muestra probada (porcentaje de inhibición 50%). 23

24 4) Interpretación de los resultados Una muestra se confirmará como positiva en Ag HBs si la relación de reactividad es igual o superior a 0,8 y el porcentaje de inhibición es igual o superior al 50%. Relación de reactividad Porcentaje de inhibición Interpretación de las muestras 0,8 50% Confirmado 0,8 < 50% No confirmado; diluir < 0,8 Sea cual sea el resultado No reactivo* * No confirmado para las muestras probadas en dilución Ejemplos : Prueba Valores Valores Relación de Porcentaje Interpretación de DO de DO reactividad de de inhibición con RA con RB las muestras Control positivo 0,095 2,025 32,66 95% Confirmado (R4) Control negativo 0,011 0,013 0,21 15% No reactivo (R3) Muestra 1 0,009 0,027 0,40 68% No reactivo 0,007 0,023 Muestra 2 2,585 3,906 63,00 34% No confirmado; 2,570 3,880 diluir Muestra 2 0,049 2,079 33,36 98% Confirmado Dil.1/100 0,045 2,058 Muestra 3 0,132 0,151 2,52 13% No confirmado; 0,140 0,161 diluir Muestra 3 0,032 0,036 0,55 12% No confirmado Dil. 1/100 0,028 0, RENDIMIENTOS Los rendimientos de la prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY asociada a la prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA se determinaron mediante muestras de pacientes afectados por hepatitis B aguda y crónica o afectados por infecciones sin relación con la hepatitis B, así como a partir de muestras procedentes de paneles comerciales y de seroconversiones comerciales. El límite de sensibilidad fue estudiado con ayuda del panel HB EFS francés, así como del segundo estándar internacional OMS 2004 (ref. NIBSC 00/588). Sensibilidad analítica Todas las concentraciones del panel HB EFS de 0,06 ng/ml a 2,2 ng/ml, así como las concentraciones del estándar OMS de 0,031 UI/ml a 1 UI/ml que resultaron positivas con la prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA fueron confirmadas con ayuda de la prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. Una concentración superior a 10 mg/ml de Ag HBs se neutralizó tras la dilución de esta muestra. Sensibilidad El estudio de sensibilidad se realizó sobre 337 muestras positivas procedentes de seguimientos de hepatitis B crónica o aguda de pacientes infectados. Todas las muestras positivas fueron confirmadas con ayuda de la prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. Se estudiaron 15 seroconversiones VHB comerciales bien documentadas (45 muestras). Todas las muestras positivas fueron neutralizadas. 24

25 Especificidad y reacciones cruzadas Un panel interno de 16 muestras que dieron falsos positivos con la prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA fue sometido a pruebas y resultaron no confirmadas con la prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY. Se sometieron a la prueba MONOLISAv HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 102 muestras procedentes de pacientes con diferentes patologías o estado inmunitario sin relación con la hepatitis B (mujeres embarazadas, factores reumatoides, anticuerpos antinucleares, anticuerpos antirratón u otras infecciones virales y bacterianas); confirmándose todas ellas como negativas. Además se sometieron a la prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 37 muestras positivas a la vez en Ag HBs y en otros marcadores (factores reumatoides, anticuerpos antinucleares, anticuerpos antirratón u otras infecciones virales y bacterianas), que fueron confirmadas con esta prueba. También se confirmaron como positivas con MONOLISA HBs Ag ULTRA 23 muestras, puras o después de dilución, procedentes del panel de coinfección BBI PCA 201 (coinfecciones VHB/VIH/VHC/VHTL). Estudios de reproductibilidad La reproductibilidad de la prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY quedó determinada con 4 muestras: 1 muestra negativa (muestra 1), 2 muestras positivas (muestras 2 y 3) y 1 muestra positiva fuerte (muestra 4). El estudio intraensayo se realizó sometiendo estas 4 muestras a la prueba 30 veces durante el mismo ensayo. El estudio intraensayo se realizó sometiendo estas 4 muestras por duplicado a la prueba, a razón de 2 ensayos diferentes al día durante un periodo de 20 días. Los resultados expresados en media, desviación típica y CV se presentan en las tablas siguientes : Tabla 1 : Reproductibilidad intraensayo n = 30 muestra 1 muestra 2 muestra 3 muestra 4 (relación 0,37) (relación = 1,32) (relación = 3,39) (relación = 18,39) Media del % 4 85,37 94,89 98,38 de inhibición Desviación típica 12,6 1,59 0,66 0,21 (DT) CV (%) NA 1,86% 0,69% 0,22% Tabla 2 : Reproductibilidad intraensayo n = 40 muestra 1 muestra 2 muestra 3 muestra 4 (relación 0,37) (relación = 1,32) (relación = 3,39) (relación = 18,39) Media del % 3,74 81,46 92,76 98,08 de inhibición Desviación típica 15,84 7,07 3,43 0,75 (DT) CV (%) NA 8,68% 3,70% 0,76% Los resultados obtenidos durante estos estudios se corresponden con los que se esperaban LÍMITES DE LA PRUEBA La prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY está limitada exclusivamente a la confirmación de la presencia del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (Ag HBs) en el suero y el plasma humano. Las muestras reactivas dudosas ligeramente positivas (relación inferior a 2) con la prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA y que hayan resultado no reactivas en la muestra no diluida de la prueba MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY (relación de reactividad inferior a 0,8), deben interpretarse con precaución. Se aconseja volver a realizar la prueba al paciente con otro método o con una segunda muestra extraída posteriormente BIBLIOGRAFÍA Véase la versión francesa. 25

26 26

27 MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY 25 tests TEST ZUR BESTÄTIGUNG VON HBs Ag IN HUMANSERUM ODER - PLASMA IVD Qualitätskontrolle des Herstellers Alle von der Firma Bio-Rad hergestellten und verkauften Produkte unterliegen einem umfassenden Qualitätssicherungssystem vom Rohstoffeingang bis zur Vermarktung der Fertigprodukte. Jede Charge unterliegt der Qualitätskontrolle und wird nur dann verkauft, wenn sie den Freigabekriterien entspricht. Die Aufzeichnungen zu Produktion und Qualitätskontrolle einer jeden Charge befinden sich in unserer Firma. 27

28 INHALT 1 - VERWENDUNGSZWECK 2 - PRINZIP DES MONOLISA HBS AG ULTRA BESTÄTIGUNGSTESTS 3 - ZUSAMMENSETZUNG DES KITS 4 - VORSICHTSMASSNAHMEN 5 - SICHERHEITSVORSCHRIFTEN 6 - ZUSÄTZLICH BENÖTIGTES MATERIAL 7 - HALTBARKEIT - STABILITÄT 8 - PROBENENTNAHME UND -AUFBEREITUNG 9 - TESTVERFAHREN 10 - BERECHNUNG UND INTERPRETATION DER ERGEBNISSE 11 - LEISTUNGSMERKMALE 12 - GRENZEN DES TESTS 13 - LITERATUR 28

29 1. VERWENDUNGSZWECK Der MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT dient der Bestätigung des Vorhandenseins von Hepatitis-B-Oberflächenantigen (HBs Ag) in Humanserum- oder Humanplasma-Proben, die im MONOLISA HBs Ag ULTRA Screening-Test reaktiv waren (Bestellnummer 72346/72348). 2 - PRINZIP DES MONOLISA HBS AG ULTRA BESTÄTIGUNGSTESTS Der MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT verwendet das Prinzip der Neutralisation durch überschüssige HBs-Antikörper (Anti-HBs-Verdünnungsmittel: Neutralisationsreagenz) von in Plasma- und Serumproben vorhandenem HBs Ag. Es empfiehlt sich, das Ergebnis von Proben, die im MONOLISA HBs Ag ULTRA Screeningtest wiederholt reaktiv waren, unter Verwendung der Reagenzien aus dem MONOLISA HBs Ag ULTRA CONFIRMATORY-KIT zu bestätigen. Wenn eine Probe HBs-Antigen enthält, sättigen die Anti-HBs- Antikörper im Neutralisationsreagenz die in der Probe vorhandenen HBs-Antigendeterminanten und verhindern somit deren Bindung an die Antikörper auf der Festphase. Bei dem Vergleich der selben reaktiven Probe, bei der das Neutralisationsreagenz durch eine Negativkontrolle ohne HBs- Antikörper ersetzt wurde, wird eine Abnahme der optischen Dichte beobachtet. Entsprechend der unterschiedlich hohen HBs Ag-Konzentration kann es erforderlich sein, die Probe mehrfach zu verdünnen. Das Testverfahren besteht aus folgenden Reaktionsschritten : 1) Inkubation des Kontrollserums und der HBs-Ag-positiven Proben mit Neutralisationsreagenz und Konjugat in Anwesenheit von Anti-HBs-Antikörpern auf der Festphase. Für jedes Serum werden durch Ersetzen des Neutralisationsreagenzes durch eine Negativkontrolle Kontrollvertiefungen mitgetestet. Die übrigen Testschritte sind identisch zu denen im Protokoll des MONOLISA HBs Ag ULTRA Kits : 2) Waschzyklus und anschließende Entwicklung der an die Festphase gebundenen Enzymaktivität durch Zugabe von Substrat. 3) Stoppen der Reaktion, anschließend Ablesen der optischen Dichte bei 450/ nm und Ergebnisauswertung. 3 - ZUSAMMENSETZUNG DES KITS ETIKETT ART DER REAGENZIEN DARREICHUNGSFORM RA Neutralisationsreagenz 1 Flasche Tris NaCl-Puffer (ph 8,0) mit Schafserum und Humanserum ohne HBs-Antigen und ohne Anti-HCV 0,7 ml und Anti-HIV1/2-Antikörper; mit zugefügten Anti-HBs-Antikörpern. Gebrauchsfertiges Reagenz. Konservierungsmittel : ProClin 300 (0,25%) RB Negativkontrolle/Verdünnungsmittel 1 Flasche Tris NaCl-Puffer (ph 8,0) mit Schafserum und Humanserum ohne HBs-Antigen und ohne 0,7 ml Anti- HCV - und Anti-HIV1/2-Antikörper. Gebrauchsfertiges Reagenz. Konservierungsmittel : ProClin 300 (0,25%) RC Probenverdünnungsmittel 1 Flasche 0,85% physiologische Kochsalzlösung. 27 ml Gebrauchsfertiges Reagenz. Konservierungsmittel : ProClin 300 (0,1%) 29