MEMORIA DE PRÁCTICAS DE EMPRESA LABORATORIO FC SERVICE. Melissa Zamora Celadilla

Transcripción

1 MEMORIA DE PRÁCTICAS DE EMPRESA LABORATORIO FC SERVICE Melissa Zamora Celadilla 1

2 1. INTRODUCCIÓN Las prácticas se realizaron en el LABORATORIO FOOD CONTROL SERVICE, durante el periodo del 29 de junio al 26 de julio de El contenido de las prácticas fueron análisis microbiológicos de aguas y productos alimenticios. También preparación de medios de cultivo, de los cuales también se realiza un control de calidad, y su posterior esterilización en autoclave. En el laboratorio de microbiología, todo análisis tiene que realizarse en condiciones estériles para no contaminar las muestras. Todas las muestras que llegan al laboratorio deben de ser registradas con todos los datos del cliente, asignándole a cada muestra una referencia interna. Una vez registrada la muestra, lo primero que se hará será proceder a realizar los análisis microbiológicos, porque la cantidad de microorganismos puede verse modificada en un espacio de tiempo corto. En el caso de que los análisis no se pudiesen llevar a cabo en cuanto se recibiese la muestra, la muestra se almacenaría en frío: Los productos alimentarios se congelarían mientras que las aguas se conservan en el frigorífico. Una vez realizados todos los análisis requeridos por el cliente, todos los resultados obtenidos experimentalmente se introducen en el ordenador donde, mediante unas aplicaciones matemáticas, se obtiene resultado final, que será el que pongamos en el informe que se entrega al cliente. 2. TOMA DE MUESTRAS DE AGUAS La muestra debe ser homogénea y representativa y no modificar las características fisicoquímicas o biológicas del agua. Para su recogida debe utilizarse frascos estériles y debe recolectarse cantidades comprendidas entre 500 y 1000 ml. Los tipos de envase a utilizar dependen del tipo de análisis a realizar. 2

3 En el caso de aguas cloradas o bromadas, el envase deberá contener tiosulfato sódico pentahidratado. Una vez obtenido la muestra se cerrará convenientemente, se precintará y rotulará o etiquetará para su perfecta identificación. Se procederá a su remisión al laboratorio en refrigeración lo antes posible. Su análisis debe comenzar antes de que hayan transcurrido 6 h desde el momento de la toma de muestras. En circunstancias excepcionales, las muestras pueden conservarse a una temperatura de 4ºC durante un periodo máximo de 24 h antes de su análisis. 3. TOMA DE MUESTRAS DE SUPERFICIES Y ALIMENTOS El muestreador debe utilizar mascarilla y gorro desechable y guantes, es de gran importancia, puesto que se debe mantener aislado todo lo que pueda contaminar las muestras. Se debe desinfectar las manos antes y después de colocarse los guantes. Las superficies que han de muestrearse son instalaciones, equipo y útiles de todo tipo: cuchillos, huecos, mesas, sierras, cintas transportadoras, contenedores, recipientes Las superficies a muestrear deber haber sido limpiadas y desinfectadas y estar secas; el muestreo debe realizarse antes de empezar la jornada de trabajo (esto es casi imposible). TOMA DE MUESTRAS CON HISOPOS: En las superficies de contacto, se pasan los hisopos dentro de los 102 seleccionados, primero en forma horizontal y luego vertical, e inmediatamente se coloca el hisopo en el tubo. 3

4 LAMINOCULTIVOS: 1.- Destapar la placa. Observar que no presentan contaminación o deshidratación. 2.- Sujetar por los extremos la placa y presionar sobre la superficie de análisis durante unos segundos. Evitar extender el medio sobre la superficie. 3.- Tapar la placa. 4.- Incubación. El tiempo y la temperatura de incubación dependerán del medio empleado. El medio que contienen es agar para el recuento en placa de aerobios y, en el otro, agar VRBG para enterobacterias. La frecuencia de muestreo y análisis bacteriológicos de las superficies de contacto (equipos, mesadas, tablas, utensilios, etc.) será de dos muestras por mes. 4. PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO Es una actividad sencilla. Cada bote con el medio liofilizado indica la cantidad a pesar para un determinado volumen de medio final. Con una espátula (la cual no debe contener restos de medios preparados anteriormente), se coge la cantidad determinada, se vierte agua destilada, y se pone a calentar. Cuando hierve se distribuye en el recipiente que corresponda: tubos de diferentes tamaños, placas petri siempre al lado del mechero. Todo se realiza de manera aséptica. Todos los medios preparados han de ser autoclavados (esterilización mediante calor húmedo). 4

5 5. ANALISIS DE AGUAS Método de filtración de membrana: Colocamos un filtro de membrana estéril sobre el soporte de filtración, se adapta el embudo y conectamos el matraz a una bomba eléctrica de vacío. Filtramos 100 ml de muestra. Se retira el embudo y mediante las pinzas esterilizadas, transferimos la membrana filtrante sobre el medio de cultivo contenido en una placa de Petri, de modo que la superficie de filtración quede hacia arriba. Se pone la placa a incubar a una temperatura determinada dependiendo del análisis durante un tiempo determinado. Coliformes: Se utiliza agar TTC y se incuban 24h a 37ºC para recuento de los totales y 44ºC para los fecales. Las colonias amarillas con un halo serón sospechosas, y para confirmarlas se sembrará en caldo lactosado; si a las 48h aparece turbidez y gas en la campana de Durham serán coliformes ya que fermentan lactosa. Enterococos fecales: Los enterococos pueden considerarse como indicadores de contaminación fecal. Sin embargo, algunos enterococos presentes en las aguas pueden proceder de otros hábitats. Se utiliza el medio de Slanetzy Bartley y se incuban las placas a 37ºC durante 48 h. Tras la incubación, se consideran como colonias típicas de enterococostodas las que muestren un color rojo, marrón o rosado. Si hay colonias típicas se realizaráun ensayo confirmativo. Para ello, con ayuda de unas pinzas estériles, se transfiere el filtro de membrana con las colonias, sin invertirla, sobre una placa con agarbilis-esculinaazida, precalentada a 44ºC. Se incuba a 44ºCdurante 2 h y se lee la placa inmediatamente. En este medio, los enterococoshidrolizan la esculinadando origen a esculetina(6,7-dihidrocumarina) que se combina con los iones Fe3+formando un compuesto de color marrón a negro. 5

6 Clostridium perfingens: está normalmente presente en heces. Se utiliza el medio m-cp y se incuban las placas a 44ºC durante 24 h en condiciones de anaerobiosis. Tras la incubación, se consideran como colonias típicas de C. perfringens todas las que muestren un color amarillo opaco, consecuencia de la acidificación del medio tras la fermentación de la sacarosa. Bacterias aerobias: son todas las bacterias heterótrofas, aerobias o anaerobias facultativas, mesófilas y psicotróficas capaces de crecer en un medio de agar nutritivo. Se emplean placas con medio agar extracto de levadura en las que se siembra un volumen conocido de agua, y la incubación se lleva a cabo a 22ºCdurante 72 horas. Pasado este tiempo se cuentan todas las colonias desarrolladas en cada placa. El resultado se expresará, como nºde bacterias totales en ml. Se estima utilizando aquellos filtros de membrana que tengan colonias de coliformes y no más de 200. Legionella pneumophyla: Se toma muestra en un tubo estéril y se calienta a 64ºC para matar a los demás microorganismos y con un asa se siembra en el medio legionella GVPC. Las colonias positivas son blancas con un halo alrededor. Staphylococcus aureus: el medio utilizado es BP y a está preparado en la nevera y solo hay que verter sobre la placa 0,1ml de muestra y extenderla con el asa de siembra. Se incuba a 37ºC durante 48h. Las colonias son presuntamente positivas si son negras con un halo transparente y han de confirmarse en DNAsa. Escherichia coli: se siembra 1ml de muestra en petrifilm y se incuba a 44ºC durante 24h. Las colinas positivas negras muy pequeñas con gas. Algas y parásitos: Ponemos el filtro en la placa con agua y lo observamos a microscopia. 6

7 6. ANALISIS DE SUPERFICIES Y ALIMENTOS Son necesarias condiciones de esterilidad durante todo el proceso. Si el análisis a realizar es el recuento de Listeria; el disolvente será Fraser, para los demás, Salmonella y otros microorganismos, se utiliza agua de peptona. Primero se enciende el mechero para mantener las condiciones de esterilidad. Cogemos bolsas stomacher (pueden ser con o sin filtro) y las colocamos en una pesa. Se pone a cero y pesamos la muestra (nos ayudamos de cucharas, cuchillos,... para echar la cantidad determinada). Tenemos que tomar una fracción de alimento representativo de la totalidad de la muestra. Dependiendo del posterior análisis y del tipo de alimento se pesará determinada cantidad. La cantidad mínima son 10 gramos. También se guarda una fracción como contramuestra, conservándola en congelación. Una vez pesado y distribuido el fraser o agua de peptona, se coloca en el homogeneizador o stomacher, que machaca la muestra para mezclar. Después lo cerramos y se coloca en el soporte para las muestras para el posterior análisis, que se realizará a partir de la dilución. Posteriormente se introduce en un sistema TEMPO: automatiza el recuento de microorganismos indicadores de calidad, incluyendo aerobios mesófilos, coliformes totales, E. coli y Enterobacteriaceae. Este método está basado en el método del Número Más Probable (MPN). Es un método más preciso, rápido y fiable. Este sistema no lo utilice demasiado, puesto que es un método nuevo y muy costoso. A parte de las técnicas descritas, he realizado las tareas habituales de un laboratorio como limpieza del material, preparación de reactivos, etc. adquiriendo soltura en el uso del instrumental del laboratorio y observando cuestiones que hasta el momento solo había visto en teoría. Para mi formación como estudiante y trabajadora fue muy beneficioso. Ya que me permitió conocer y realizar mayor número de análisis y ensayos, recogidas en esta memoria. 7