PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA (CURSO )

Transcripción

1 PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA (CURSO )

2 PRÁCTICAS A REALIZAR X-1 Observación de halos de hemólisis en las placas de Agar Sangre nº 1 y nº 2 ANÁLISIS CUALITATIVO MUCOSA FARÍNGEA X-2 X-3 Tinción de Gram de presuntos cocos Gram + crecidos en: placa de Agar Sangre nº 2 Observación de la placa de Agar Salino Manitol y tinción de Gram de colonias aisladas X-4 Siembra en Agar Sangre de cocos Gram + en sectores (placa nº 3)

3 ANÁLISIS CUALITATIVO DE FARINGE IDENTIFICACIÓN DE COCOS GRAM POSITIVOS SOBRE LA PLACA DE AGAR SANGRE Nº 2 METODOLOGÍA Se parte de la placa de agar sangre nº 2 (se puede utilizar también la de Agar Salino Manitol). Después de 48 horas de incubación, debe haber colonias aisladas con un crecimiento adecuado. a) Colocando la placa frontalmente a la luz, se observará la existencia de halos de hemólisis (α y β). b) Podrán existir colonias de cocos Gram positivos que no sean hemolíticas. c) Se considerará la relación tamaño de la colonia / tamaño del halo de hemólisis. d) Se realizará una tinción de Gram a cada tipo diferente de colonias aisladas.

4 OBSERVACIÓN DE HALOS DE HEMÓLISIS FUNDAMENTO Los microorganismos hemolíticos liberan enzimas (hemolisinas) al medio que destruyen los glóbulos rojos apareciendo halos de hemólisis. METODOLOGÍA Se trabajará con colonias aisladas y bien crecidas a las 48 horas. Observación de la hemólisis α-hemólisis β-hemólisis γ-hemólisis: no hay hemólisis

5 CARACTERÍSTICAS DE BETA Y ALFA HEMÓLISIS Beta hemólisis Lisis completa de los glóbulos rojos Halo transparente alrededor de la colonia Alfa hemólisis Lisis parcial de los glóbulos rojos Se abren poros en la membrana Salida de hemoglobina al medio Oxidación del grupo hemo Formación de biliverdina (color verdoso) Halo verdoso alrededor de la colonia

6 α β

7 β α γ

8 IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA DE COLONIAS EN AGAR SANGRE COCOS GRAM POSITIVOS Colonia grande/halo hemólisis pequeño Staphylococcus Colonia pequeña/halo hemólisis grande Streptococcus BACTERIA CATALASA HEMÓLISIS AGRUPACIÓN MICROSCÓPICA S. aureus + β Racimos S. epidermidis + NO Racimos S. saprophyticus + NO Racimos Streptococcus pyogenes - β Cadenas S. pneumoniae - α Aisladas Parejas Cadenitas S. agalactiae - β Cadenas

9 OBSERVACIÓN DE MICROBIOTA DE FARINGE Colonia Morfología celular Podría ser Grande Amarillenta- incolora Beta-hemolítica Pequeña Blanca-grisácea No hemolítica Grande Blanca-amarillenta Anaranjada No hemolítica Pequeña Grisácea-traslúcida Beta-hemolítica Células esféricas Racimos irregulares Células esféricas Racimos irregulares Células esféricas Racimos irregulares Células esféricas Células ovoides Aisladas-parejas Cadenas Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus Streptococcus pyogenes

10 OBSERVACIÓN DE MICROBIOTA DE FARINGE Colonia Morfología celular Podría ser Pequeña Grisácea-traslúcida Alfa-hemolítica Pequeña Gris Alfa-hemolítica No hemolítica Células esféricas Células ovoides Aisladas-parejas Cadenas Células esféricas Células ovoides Aisladas-parejas Cadenas Streptococcus pneumoniae Grupo Viridans Streptococcus mutans S. Salivarius S. Bovis S. mitis

11 ANÁLISIS CUALITATIVO DE LA MUCOSA FARÍNGEA Observación de la placa de Agar Salino Manitol

12 Microorganismos Fermentación manitol Colonia Staphylococcus aureus SI Halo amarillo S. epidermidis NO Incolora S. urealyticus SI Halo amarillo S. xylosus SI Halo amarillo S. lentus SI Halo amarillo S. simulans SI Halo amarillo S. saprophyticus Variable Halo amarillo o incoloro Enterococcus faecalis SI Halo amarillo E. faecium Variable Halo amarillo o incoloro E. avium SI Halo amarillo E. durans Variable Halo amarillo o incoloro

13 TINCIÓN DE GRAM DE COLONIAS AISLADAS (BÚSQUEDA DE COCOS GRAM POSITIVOS) Se realizará tinción de Gram de: 1. Colonias aisladas de la placa de Agar Sangre nº 2 (preferentemente) 2. Colonias aisladas de la placa de AgarSalino Manitol

14 Tinción de Gram 1. Extensión. 2. Desecación. 3. Fijación. 4. Colorante: Cristal violeta, 2 minutos. 5. Lavar con agua. 6. Mordiente: Lugol, 2 minutos. 7. Lavar abundantemente con agua. 8. Decoloración: Alcohol etílico 96%, 20 segundos. 9. Lavar abundantemente con agua. 10. Colorante de contraste: Safranina, 3-4 minutos. 11. Lavar abundantemente con agua. 12. Dejar secar a temperatura ambiente. 13. Observar al microscopio con objetivo de inmersión (100X).

15 Gram positiva Gram negativa Extender y fijar la preparación Cristal violeta Lugol Etanol Safranina

16 Staphylococcus Levaduras

17 Enterococcus faecalis Corynebacterium

18 Neisseria Fusobacterium Streptococcus

19 METODOLOGÍA ANÁLISIS CUALITATIVO DE FARINGE SIEMBRA POR SECTORES DE LA PLACA DE AGAR SANGRE Nº 3 a) Se sembrarán aquellas colonias identificadas como cocos Gram positivos. La siembra se hará por sectores en una placa de agar sangre que llamaremos nº 3. b) Cada alumno deberá sembrar, al menos, dos sectores de cocos Gram positivos.