ScanGel COOMBS + NEUTRAL Tarjetas Tarjetas
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- Domingo Quintana Moya
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1 ScanGel COOMBS + NEUTRAL Tarjetas Tarjetas GELES FORMULADOS CON UNA ANTIGLOBULINA POLIESPECÍFICA (FRACCIONES POLICLONAL Y MONOCLONAL MÚRIDO) Y GEL NEUTRO Screening de Ac irregulares IVD Todos los productos fabricados y comercializados por la sociedad Bio-Rad se hallan bajo un sistema de garantía de calidad desde la recepción de las materias primas hasta la comercialización de los productos finales. Cada lote de producto final se somete a un control de calidad y sólo se comercializa si está en conformidad con los criterios de aceptación. El fabricante conserva la documentación referente a la producción y al control de cada lote. 15
2 I - UTILIZACIÓN Y PRINCIPIO DE LA PRUEBA Esta tarjeta está estrictamente reservada para uso profesional e in vitro. Designada para detección de los anticuerpos irregulares antieritrocitarios, el test combina los principios de aglutinación y filtración en gel. La reacción se obtiene y se lee tras la centrifugación de unos microtubos especialmente diseñados, rellenos de gel impregnado del reactivo antiglobulina para la técnica indirecta de la antiglobulina (Coombs Indirecta), o de gel neutro para la técnica enzimática. La suspensión de glóbulos rojos-test tratados o sin tratar con papaína, según se trate de la técnica enzimática o de la técnica indirecta de la antiglobulina (Coombs Indirecta), y el suero o el plasma a ensayar se depositan en el pocillo de los microtubos que se centrifugan tras un periodo de incubación. Los glóbulos rojos no aglutinados se depositan en el fondo del microtubo, mientras que los aglutinados se retienen por todo el gel en función de su tamaño. Su posición en el gel determina la intensidad de la reacción La capacidad del gel para separar los glóbulos rojos del suero o del plasma elimina la fase de lavado obligatoria en las técnicas convencionales. II - CARACTERÍSTICAS DE LOS REACTIVOS Los tres primeros microtubos de la tarjeta Scangel COOMBS + NEUTRAL contienen uno un gel impregnado con un reactivo antiglobulina poliespecífica (AHG). La fracción anti-igg se prepara con sueros de cabras hiperinmunizadas. La fracción anticomplemento se prepara con una mezcla de sueros de cabras hiperinmunizadas y un anticuerpo monoclonal múrido de especificidad anti-c3d producido a partir del clon 053A714. El cuarto, quinto y sexto microtubos contienen gel neutro (Neutr.) Este reactivo contiene azida sódica (< 0,1 %) como conservante. El código del producto y el número de paneles por caja se indican en la etiqueta de la caja. III - CADUCIDAD Y CONSERVACIÓN La fecha de caducidad y las condiciones de almacenamiento se indican en la caja. Las tajetas deben conservarse a temperatura ambiente, de +15 C a +25 C. Las tarjetas deben almacenarse verticalmente, protegidas de las fuentes de calor, en un local con escasas variaciones de temperatura e higrométricas. 16
3 IV - PRECAUCIONES La calidad de los resultados depende del respeto de las buenas prácticas de laboratorio siguientes : No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No utilizar tarjetas que muestren signos de desecación o burbujas, o si la lengüeta de sellado muestra signos de deterioro o está parcialente retirada. Como los reactivos contenidos en los microtubos tienen una naturaleza diferente, es indispensable tomar las precauciones necesarias para no provocar contaminaciones inter-microtubos, especialmente cuando se retira la lengüeta de aluminio y en las etapas de distribución. Utilizar una punta de pipeta para cada muestra y para cada glóbulos rojos-test. Comprobar la precisión y el correcto funcionamiento de las pipetas y de los otros equipos. Llevar guantes y gafas de protección durante la manipulación de los reactivos y de las muestras. No pipetear directamente con la boca. Evitar las salpicaduras. En caso de salpicaduras, limpiar las superficies manchadas con lejía de 12º Cl diluida al 10% y secar con papel absorbente. El material utilizado para la limpieza deberá ser desechado en un contenedor especial para residuos contaminados. Producto y fungible que hayan estado en contacto con muestras o reactivos que contenga material de origen humano deben ser descartados una vez descontaminados. Las fichas de seguridad están disponibles bajo petición. V - RECOGIDA Y TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS La sangre debe obtenerse en condiciones de asepsia en un tubo sin o con anticoagulante (EDTA). Tras la obtención, la prueba debe realizarse lo antes posible. Las muestras que no puedan analizarse rápidamente deberán conservarse entre +2 C y +8 C para ser sometidas a prueba en las 48 horas siguientes. En ningún caso debe observarse hemólisis. No calentar las muestras. VI - TÉCNICAS Material suministrado Tarjetas Scangel COOMBS + NEUTRAL Material necesario pero no suministrado ScanCell : glóbulos rojos test listos para usar, para la detección de los anticuerpos irregulares antieritrocitarios (prueba indirecta de antiglobulina) ScanCell 3 x 10 ml 17
4 ScanCell P : glóbulos rojos test listos para usar, para la detección de los anticuerpos irregulares antieritrocitarios (técnica enzimática) ScanCell P 3 x 10 ml IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos IH QC 4 x 6 ml Incubador : Scangel Incubator Centrifuga : Scangel Centrifuge Pipetas automáticas o semiautomáticas Puntas de pipetas Tubos de un solo uso Contenedor especial para residuos con riesgo biológico Lejía Guantes de látex Papel absorbente Gafas de protección Controles Controles positivo (suero conocido que contiene al menos un anticuerpo) y negativo (suero conocido que no contiene ningún anticuerpo) para cada una de las 2 técnicas (técnica indirecta de la antiglobulina y técnica enzimática). IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos. Procedimiento Seguir estrictamente el protocolo propuesto. Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente. Por centrifugación (2000 g x 2 minutos), separar el suero o el plasma de los glóbulos rojos de la muestra a probar. Cuando la obtención se sangre se realiza en tubo seco, el suero se debe volver a centrifugar a 1500 g durante 10 minutos. Técnica 1. Identificar la tarjeta con el nombre o el número de muestra correspondiente. Retirar la lengüeta de aluminio de las tajetas con cuidado para evitar las contaminaciones interpocillos. Resuspender los hematíes antes de usar. 2. Distribuir 50 μl de cada suspensión de ScanCell en el pocillo de los tres primeros microtubos de la tarjeta (I en el 1º microtubo, II en el 2º microtubo e III en el 3º microtubo) e 50 μl de cada suspensión de ScanCell P en el pocillo de los tres últimos microtubos (IP en el 4º microtubo, IIP en el 5º microtubo e IIIP en el 6º microtubo). 3. Añadir inmediatamente 25 μl de plasma o de suero a ensayar en el pocillo de cada microtubo. En ningún caso el periodo de tiempo entre la distribución de los glóbulos rojos y la del plasma o suero debe exceder los 10 minutos. 18
5 4. Incubar 15 minutos a +37 C en el Scangel Incubator. 5. Centrifugar 10 minutos en Scangel Centrifuge. 6. Leer las reacciones. VII - INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS La presencia de aglutinados (en la superficie o dispersos en el gel) o de hemólisis en un microtubo corresponde a un resultado positivo. Un sedimento de glóbulos rojos y la ausencia de hemólisis en el fondo del microtubo corresponde a un resultado negativo. Los resultados sólo son válidos si los controles positivo y negativo dan los resultados esperados. a) Interpretación de los microtubos AHG Un resultado negativo (ausencia de aglutinación y de hemólisis) en todos los microtubos AHG utilizados significa que la muestra ensayada no contiene anticuerpos, correspondientes a los antígenos presentes en los glóbulos rojos test, que se detecten con la técnica utilizada. Un resultado positivo (aglutinación o hemólisis) en al menos uno de los microtubos AHG utilizados prueba, por el contrario, la presencia de uno o varios anticuerpos en la muestra ensayada. Entonces se debe realizar la identificación de ese o esos anticuerpos. Sólo pueden detectarse los anticuerpos correspondientes a los antígenos presentes en los glóbulos rojos test. b) Interpretación de los microtubos Neutr. Un resultado negativo (ausencia de aglutinación y de hemólisis) en todos los microtubos Neutr. utilizados significa que la muestra ensayada no contiene anticuerpos, correspondientes a los antígenos presentes en los glóbulos rojos test, que se detecten con la técnica utilizada. Un resultado positivo (aglutinación o hemólisis) en al menos uno de los microtubos Neutr. utilizados prueba, por el contrario, la presencia de uno o varios anticuerpos en el suero o en el plasma. Entonces se debe realizar la identificación de ese o esos anticuerpos. Sólo pueden detectarse los anticuerpos correspondientes a los antígenos presentes en los glóbulos rojos test. VIII - COMPORTAMIENTO a) Comportamiento especifico del reactivo antiglobulina poliespecífica (AHG) La evaluación de las especificaciones realizada con 2516 muestras (1782 pacientes y 734 donantes) ha demostrado una reacción equilibrada entre sensibilidad y especificidad. 19
6 La aplicación hace posible la detección de anti-rh1(d) humano en una concentración igual a 20ng/ml. La especificidad sobre un muestreo de pacientes sin seleccionar es del 99,8%. Se ha ensayado la reproducibilidad de la aplicación y ha demostrado unas buenas especificaciones tanto intra como interensayo. b) Comportamiento especifico del reactivo neutro (Neutr.) La evaluación de las especificaciones realizada con 2517 muestras (1783 pacientes y 734 donantes) ha demostrado una reacción equilibrada entre sensibilidad y especificidad. El porcentaje de pacientes sin seleccionar que resultan positivos en el estudio de anticuerpos irregulares (detecciones positivas que desembocan en la identificación de uno o varios alo y/o auto-anticuerpos) es del 3,8%. La especificidad sobre un muestreo de pacientes sin seleccionar es del 98,8%. Ciertos antígenos como MNS1(M), MNS2(N), MNS3(S), FY1(Fya), FY2(Fyb) et XG1(Xga) se destruyen o se alteran cuando los glóbulos rojos se tratan con enzimas proteolíticas, por tanto, la técnica enzimática no puede utilizarse como única técnica para el estudio de anticuerpos irregulares antieritrocitarios. Se ha ensayado la reproducibilidad de la aplicación y ha demostrado unas buenas especificaciones tanto intra como interensayo. LÍMITES Los resultados anormales pueden ser consecuencia de : una contaminación bacteriana o química del suero, del plasma, de los glóbulos rojos o del material. una medicación o un estado patológico del paciente que provoque una reacción cruzada. una resuspensión incompleta de los glóbulos rojos. una hemólisis de las muestras o de los glóbulos rojos problema. la presencia de fibrina (imagen de un sedimento celular compacto en el fondo de un microtubo acompañado de una fina banda rosada en la zona superior del gel correspondiente a los glóbulos rojos retenidos por los residuos de fibrina). contaminación entre microtubos. uso de otro procedimeinto del descrito anteriormente. Con la licencia de DIAMED, S.A., 1785 Cressier-sur-Morat, Suiza. 20
7 IX - LITERATURE 1. Löw B, Messeter L. Antiglobulin test in low-ionic strength salt solution for rapid antibody screening and cross-matching. Vox Sang. 1974;26: Kankura T, Kurashina S, Nakao M. A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974;83: Rouger Ph, Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson Issitt PD. Applied blood group serology. 3rd ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, ISBT/ICSH Working Party : International Reference Polyspecific AntiHuman Globulin Reagents. Engelfriet CP, Voak D. Vox Sang.1987;53: Engelfriet C.P., Overbeeke MAM, Voak D : the antiglobulin test (Coombs test) and the red cell; In Cash, Progress in Transfusion Medecine. Churchill Livingstone. 1987; vol 2: Voak D.: Coordinated report of studies on monoclonal antibodies to complement. Rev. Fr. Transf. Immunhematolol. 1988;XXXI, Voak D, Downie D.N. : Serological characterisation of monoclonal antibodies to complement components of C3 and C4. Rev. Fr. Transf. Immunohematol. 1988;XXXI, Lapierre Y, Rigal D, Adam J et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30: Proceedings of the second international workshop and symposium on monoclonal antibodies against human red blood cells and related antigens. IgG/Complement. Lund. 1990; Bromilov IM, Adams KE, Hope J, Eggington JA and Duguid JKM. Evaluation of the ID-gel test for antibody screening and identification. Transfusion Medecine 1991;1: Salmon Ch, Cartron JP, Rouger Ph.: Les groupes sanguins chez l'homme. 2é ed. Masson Pottier C, Quillet P, Baufine-Ducroq H.: Gel-test : Interpretation and value of a new technique for the detection of irregular antibodies. Ann Bio Clin 1992;50: Deffune E, Le Pennec P.Y., Lascaux J.M., Rouger Ph.: Méthode d'étude des réactifs anti-complément : utilisation d'hématies sensibilisées congelées/décongelées. Rev. Fr. Transfu. Hémobiol. 1992;35: Burin des Rosiers N, Nasr O.: Recherche des anticorps irréguliers érythrocytaires par la méthode du gel-test. Analyse de échantillons. Rev. Fr. Transfus. Hemobiol., 1993;36: International Forum. What is the best technique for the detection of red cell alloantibodies. Vox Sang 1995;69:
8 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2007 Fax.: Code:
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