RESOLUCIÓN OIV-OENO MÉTODO DE DETECCIÓN DE FTALATOS EN LAS BEBIDAS ESPIRITUOSAS POR CROMATOGRAFÍA DE GASES/ESPECTROMETRÍA DE MASAS
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- Pedro Ayala Flores
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1 RESOLUCIÓN OIV-OENO MÉTODO DE DETECCIÓN DE FTALATOS EN LAS BEBIDAS ESPIRITUOSAS POR CROMATOGRAFÍA DE GASES/ESPECTROMETRÍA DE MASAS LA ASAMBLEA GENERAL, Visto el artículo 2 párrafo 2 iv del acuerdo del 3 de abril de 2001 por el que se crea la Organización Internacional de la Viña y el Vino, Por propuesta de la Subcomisión Métodos de Análisis, DECIDE, por propuesta de la Comisión II Enología, introducir el método de tipo IV que se expone a continuación en el Compendio de los métodos internacionales de análisis de las bebidas espirituosas de origen vitivinícola. MÉTODO DE DETECCIÓN Y ANÁLISIS DE FTALATOS EN LAS BEBIDAS ESPIRITUOSAS POR CROMATOGRAFÍA DE GASES/ESPECTROMETRÍA DE MASAS Método de tipo IV 1. ÁMBITO DE APLICACIÓN Este método se aplica a la detección y análisis de algunos ftalatos en las bebidas espirituosas. 2. FUNDAMENTO La muestra se extrae con un disolvente apolar. El extracto se analiza por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC/MS) con patrón interno. También se puede realizar el análisis directamente pero con límites de detección más elevados. En este caso, se añade directamente el patrón interno antes de la inyección en el GC/MS. 3. REACTIVOS Y PRODUCTOS Salvo especificación en contra, todos los reactivos utilizados son de calidad analítica reconocida: 3.1. DBP (Dibutilftalato) [Núm. CAS: ]; 3.2. DEHP (Di(2-etilhexil) ftalato) [Núm. CAS: ]; 3.3. BBP (Butilbenzilftalato) [Núm. CAS ]; 3.4. DIBP (Diisobutil ftalato) [Núm. CAS: ]; 3.5. otros ftalatos en caso de ser necesario (nota: el diisodecil y el diisononil ftalato son, cada uno de ellos, una mezcla de compuestos, algunos de los cuales son comunes a ambos); 3.6. patrón interno (por ejemplo: dipentil ftalato o ftalato deuterado) [Núm. CAS : ]; 3.7. etanol absoluto; 3.8. agua milliq; 3.9. disolvente de extracción apolar sin ftalatos, por ejemplo, el tolueno. 1
2 Soluciones patrón Las concentraciones dadas en este método son únicamente a modo de ejemplo: Solución madre de patrón interno 500 mg/l en etanol Solución de trabajo de patrón interno 50 mg/l en etanol Solución madre de ftalatos Los diferentes ftalatos de 500 mg/l en etanol: - Diisobutil ftalato, - Dibutil ftalato, - Dietil hexil ftalato, - Butil benzil ftalato, Otros en caso necesario Solución de trabajo de ftalatos La solución se prepara diluyendo a 1/5 la solución madre en el etanol Curva de calibrado Preparar una solución hidroalcohólica al 40 % vol.: verter 80 ml de etanol en un matraz de 200 ml y enrasar con agua. Se deberá trazar una curva multipunto según la Tabla 1: Tabla 1 Preparación de los patrones Solución hidroalcohólica al 40 % vol. (ml) Nivel de concentración Volumen de solución de trabajo (µl) [3.13.] Concentración de la solución de trabajo 25 0 (blanco) , , , , , , MATERIALES - Materiales de vidrio y volumétrico de laboratorio - Balanza analítica - Sistema de GC-MS 5. PROCEDIMIENTO 5.1. Precauciones Debido a la presencia de ftalatos en el medio ambiente, el análisis de estos compuestos requiere de ciertas precauciones a lo largo de todo el procedimiento: - evitar todo contacto con materiales plásticos - comprobar los disolventes utilizados - utilizar material de vidrio aclarado con un disolvente adecuado - evitar las contaminaciones a partir de los septum de los viales de inyección 2
3 5.2. Preparación de las muestras La extracción se realiza en muestras de grado alcohólico volumétrico del 40 % vol. o llevadas al 40 % vol. (+/- 5% vol.). Extracción: en un tubo de vidrio - 25 ml de muestra o de solución de calibrado - 50 µl de solución de patrón interno - 2 ml de disolvente apolar Extraer tres minutos con el agitador vórtex. Recuperar la fase orgánica y pasar a los viales del inyector automático. Preparar un blanco de la misma manera, sin introducir la muestra Condiciones cromatográficas (a título de ejemplo) - columna de tipo apolar (DB5 MS: 30 m x 0,25 mm x 0,25 µm), - inyector a 250 ºC, - inyección en modo splitless, - en el caso de análisis directo, elegir el modo split con una relación 1/10, - programación de la temperatura del horno (ejemplo): 80 C (0,7 min) a 20 C/min hasta 110 C (isoterma 5 min), después 6 C/min hasta 245 C (isoterma 30 min) - Helio: 1 ml/min - Volumen de inyección: 1 µl. Condiciones EM: Ionización en modo EI Modo SIM en el ion 149 o modo SIM/SCAN Cantidad Abundanc e T IC: D \ data.ms DIBP DBP SI DEHP BBP Tiempo T ime--> Figura 1-Cromatograma GC/MS de una solución de ftalatos y de patrón interno Secuencia de inyección Comenzar la secuencia con el análisis del blanco e inyectar las soluciones de calibrado y las muestras más tarde. Se recomienda inyectar los bancos de forma regular. 3
4 5.5. Expresión de los resultados La identificación se realiza por el tiempo de retención. Los resultados se expresan en µg/l o en mg/l. Aplicar el factor de multiplicación correspondiente a la dilución elaborada para llevar la muestra al 40 % vol. Los resultados de los blancos (media y dispersión) deben tenerse en cuenta con o sin la corrección del blanco para evaluar: - Los límites de cuantificación y detección, - La incertidumbre de la medida. La media de los blancos así como la dispersión de los mismos deben estimarse en las repeticiones efectuadas con diferentes calibraciones. Se deberá verificar la coherencia de los resultados de los blancos con tales referencias. 6. CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO Las características del método van en relación con el procedimiento descrito según la extracción líquido-líquido Linealidad La linealidad (Tabla 2) se evaluó en función de 7 niveles diferentes (véase la Tabla 1). Se obtuvo una curva con los niveles de concentración superiores. Tabla 2: Linealidad Compuesto Ámbito de trabajo R 2 lineal DIBP 0,0-2,5 1,000 DBP 0,0-2,5 1,000 BBP 0,0-2,5 1,000 DEHP 0,0-3,5 1, Recuperaciones En la Tabla 3 se recogen las recuperaciones observadas. Tabla 3: Recuperaciones DIBP DBP BBP DEHP Recuperación media (%) 91 % 93 % 101 % 98 % Recuperación mín. (%) 86 % 85 % 96 % 91 % Recuperación máx. (%) 95 % 101 % 104 % 101 % 6.3. Repetibilidad y precisión intermedia (intralaboratorio) Para determinar la repetibilidad y la precisión intermedia, se llevaron a cabo una serie de análisis sobre una muestra enriquecida (Tablas 4 y 5). La precisión intermedia se realizo durante dos meses de resultados relativos a la muestra utilizada como autocontrol. 4
5 Tabla 4: Repetibilidad Núm. de Nivel Desviación CV (%) grados de libertad estándar DIBP 9 0,3135 0,0026 0,8 % DBP 9 0,3290 0,0024 0,7 % BBP 9 0,5141 0,0034 0,7 % DEHP 9 1,4887 0,0159 1,1 % Tabla 5: Precision intermedia Núm. de Nivel Desviación CV (%) grados de libertad estándar DIBP 28 0,3075 0,0088 2,8 % DBP 28 0,3230 0,0076 2,3 % BBP 28 0,5211 0,0111 2,1 % DEHP 28 1,5213 0,0663 4,4 % 6.4. Límites de detección y cuantificación La Tabla 6 recoge los límites de detección y cuantificación evaluados. Tabla 6: Límites de detección y cuantificación Inyección Extracción directa Límite de Límite de detección detección calculado* calculado* DIBP 0,019 <0,001 0,010 DBP 0,059 <0,001 0,010 BBP 0,100 <0,001 0,010 DEHP 0,033 <0,001 0,050 Extracción Límite de cuantificación ** * Según un cálculo basado en la relación señal/ruido (S/R) ** Límite de cuantificación teniendo en cuenta los blancos 7. BIBLIOGRAFÍA WENZL T. (2009) Methods for the determination of phthalates in food. Outcome of a survey conducted among European food control laboratories. EUR EN
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