INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA LA REALIZACION DE PERFIL LIPIDICO POE PL16-01

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1 1 INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA LA REALIZACION DE PERFIL LIPIDICO POE PL16-01

2 2 - Histórico de modificaciones - Objeto/Propósito - Alcance/Campo de aplicación - Responsables - Definiciones - Desarrollo del procedimiento - Muestra requerida - Reactivos, materiales y equipos. - Fundamento (Col T., Tg., HDL Col.) - Fundamento (VLDL Col, LDL Col.) - Especificaciones - Instrucciones detalladas - Tener en cuenta - Formularios y registros - Referencias - Lista de distribución - Anexos INDICE

3 3 ED Nº HISTORICO DE MODIFICACIONES FECHA APARTADOS PAG CAUSAS DE LA MODIFICACION RECUALIFICACION NECESARIA SI/NO (1) 1) Objeto/Propósito: Describir el proceso desde la toma de muestras de pacientes que concurren a urgencias del IMT así como de pacientes ambulatorios, internados y de terapia intensiva, así como las condiciones requeridas para su obtención, transporte y procesamiento. 2) Alcance/Campo de aplicación: El alcance abarca a la muestra con su pedido médico, al área de toma de muestras, enfermería de urgencias, internados y laboratorio. 3) Responsables: Enfermerías, médicos, técnicos y bioquímicos de turno.

4 4 4) Definiciones: - H.D.L: Lipoproteínas de alta densidad. - L.D.L: Lipoproteínas de baja densidad. 5) Desarrollo del procedimiento: a- Muestra requerida: preferentemente sangre total (suero), remitida en recipientes adecuados y bien identificados, sin hemólisis ni lipemia intensa. b- Reactivos, Materiales y Equipos: jeringas, tubos, centrifuga, pipeta automática, reactivos, fotocolorímetro, reactivos, baño maría, timer. c- Fundamento: basado en la determinación de analitos que en conjunto comprende un perfil lipídico, a saber: Colesterol total, Triglicéridos, HDL-Colesterol, LDL-Colesterol y VLDL. c- 1. Colesterol Total: se trabajara exclusivamente con suero, la metodología utilizada es Colorimétrica-Enzimática, en el cual se utiliza 10 ul de muestra con 1ml. de reactivo de trabajo y se incuba a 37ºC en baño maría por 10 min., después del cual se realiza la lectura a 505 nm; se recurre a un factor de calculo mediante un standard de valor conocido (200 mg/dl). Factor (f) = concentración del standard/ absorbancia del estandard, el factor así calculado se multiplica por la absorbancia de la muestra, y el valor se expresa en mg/dl. Valor de Referencia = inferior a 200 mg/dl. c- 2. Triglicéridos: Método: Colorimétrico-Enzimático de punto final con Standard, se trabaja exclusivamente con suero 10 ul más 1 ml. de reactivo de trabajo y se incuba 10 min. a 37ºC. en baño maría, después se realiza la lectura fotométrica a 505 nm., la absorbancia de la muestra se multiplica por un factor que se obtiene mediante el uso de un standard de concentración conocida ( 200 mg/dl.) y es igual a F = concentración del standard/absorbancia del standard, el valor así obtenido se expresa en mg/dl. Valor de Referencia: hasta 150 mg/dl. c- 3. HDL-Colesterol: Método: Colorimétrico-Enzimático. se utiliza suero libre de hemólisis y lipemia intensa; mediante el uso de un reactivo precipitante en proporción de 4 a 2 en relación al suero, se separa mediante centrifugación la fracción de HDL que queda en el sobrenadante, de ahí se usa 20 ul. de sobrenadante más 1 ml. de reactivo de colesterol y se incuba a 37ºC. por 10 min. en baño maría, luego se realiza la lectura de la absorbancia a 505 nm. y el valor se multiplica por el factor y el resultado se expresa en mg/dl.valor de Referencia = hombres: inferior a 55 mg/dl., mujeres: inferior a 65 mg/dl. c- 4. VLDL-Colesterol : Método: de cálculo. A partir del valor de triglicéridos calculado se deduce el valor de VLDL, considerando como la quinta parte del valor de triglicéridos (Triglicéridos/ 5), y también se expresa en mg/dl. Valor de Referencia: inferior a 35 mg/dl. c- 5. LDL-Colesterol: Método: de cálculo. Como la suma de todas las fracciones del colesterol corresponden al valor del colesterol total, la suma de VLDL y HDL menos el Colesterol total equivale al LDL-Colesterol y también se expresa en mg/dl.valor de Referencia: inferior a 130 mg/dl. Especificaciones: es importante la acotación de las condiciones físicas de las muestras procesadas como ser la ictericia, la hemólisis así como la lipemia sobre todo si son muy acentuadas, de manera a comprender ciertos valores obtenidos al procesar este tipo de muestras, todas aquellas muestras con hemólisis, ictericia y lipemia intensa deberán ser descartadas y solicitar nueva muestra. Instrucciones detalladas: Las muestras serán remitidas al laboratorio desde el punto de toma de muestra por personal habilitado para el efecto en ningún caso por familiares o por el propio paciente; y serán recepcionadas por personal del laboratorio y según los criterios serán admitidas o rechazadas, hay que recordar que el perfil lipídico se halla limitado al turno mañana y de lunes a viernes, debido

5 principalmente al requerimiento de horas de ayuno así como su carácter de análisis de rutina y no de urgencia. Tener en cuenta: - Turno y días de toma de muestra. - Horas de ayuno requerido. - Condiciones físicas de la muestra. - Carácter rutinario del análisis. 2) Formularios y registros: Los resultados serán anotados en cuadernos habilitados para el efecto, corroborando cualquier resultado u observación discordante, antes de su informe en el formato adecuado. El profesional competente deberá corroborar y confirmar el informe para firmar y sellar la misma para darle validez al resultado. 3) Referencias: Manual de Gestión de Calidad para laboratorios ISO 9000 de la OPS. 4) Lista de distribución: El informe final será archivado en la carpeta habilitada para el efecto, hasta el momento de su entrega ya sea a los mismos, médicos, enfermeras o personal de blanco involucrado o bien remitido a Urgencias para evaluación del paciente. ANEXOS 5 HOJA PARA INFORME DE RESULTADOS

6 6 INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA LA REALIZACION DE HEPATOGRAMA POE HEP17-01

7 7 - Histórico de modificaciones - Objeto/Propósito - Alcance/Campo de aplicación - Responsables - Definiciones - Desarrollo del procedimiento - Muestra requerida - Reactivos, materiales y equipos. - Fundamento - Especificaciones - Instrucciones detalladas - Tener en cuenta - Formularios y registros - Referencias - Lista de distribución - Anexos INDICE

8 8 ED Nº HISTORICO DE MODIFICACIONES FECHA APARTADOS PAG CAUSAS DE LA MODIFICACION RECUALIFICACION NECESARIA SI/NO (1) 1) Objeto/Propósito: Describir el proceso desde la toma de muestras de pacientes que concurren a urgencias del IMT así como de pacientes internados y de terapia intensiva, así como las condiciones requeridas para su obtención, transporte y procesamiento. 2) Alcance/Campo de aplicación: El alcance abarca a la muestra con su pedido médico, al área de toma de muestras, enfermería de urgencias, internados y laboratorio. 3) Responsables: Enfermerías, médicos, técnicos y bioquímicos de guardia.

9 9 4) Definiciones: - G.O.T: Aspartato amino transferasa. - G.P.T: Alanina amino transferasa. 5) Desarrollo del procedimiento: a- Muestra requerida: preferentemente sangre total (suero) o en su defecto con anticoagulante heparina de manera excepcional (plasma), remitida en recipientes adecuados y bien identificados. b- Reactivos, Materiales y Equipos: jeringas, tubos, anticoagulante (heparina), centrifuga, pipeta automática, reactivos, fotocolorímetro, reactivos, baño maría, timer. c- Fundamento: basado en la determinación de analitos que en conjunto comprende un hepatograma o perfil hepático, a saber: transaminasas (GOT y GPT), Fosfatasa alcalina y las Bilirrubinas (Total, Directa e Indirecta). c- 1. GOT y GPT : se trabajara exclusivamente con suero solo en casos excepcionales se recurrirá al uso de plasma ( heparina ), la metodología utilizada es válida para ambos analitos que recure a un método cinético con un factor preestablecido, se debe preparar el reactivo de trabajo a partir de los provistos por cada kit en una proporción según se requiera, por ejemplo: para cada muestra, se realiza una mezcla de 0.8 ml de R ml de R2 que nos da el reactivo de trabajo (Rt ), de ahí 1ml de de Rt ul de muestra ( suero ) y se realiza la lectura en una localidad dada en el fotocolorímetro ( L1 ) midiéndose la variación de absorbancia en periodos de tiempos iguales ( cuatro lecturas cada 60 seg ) cuyo promedio se multiplica por el factor obteniéndose un resultado expresado en U/l. Valor de referencia : GOT: hasta 30 U/l, GPT: hasta 31 U/l. c- 2. Fosfatasa Alcalina: Método: colorimétrico de punto final con Standard optimizada, se preincuba 1 min. el sustrato a 37 C. en baño maría después se le agrega 50 ul. de suero muestra y se continua la incubación por 10 min. luego se le agrega 2.5 ml del reactivo color ( liofilizado y disuelto a 500 ml.), el color de la solución es proporcional a la concentración de la enzima en suero. Valor del St. 200 U/l. Factor = concentración St./ lectura del St, valor de enzima en suero= factor x lectura de muestra. Valor de referencia: Adultos= U/l. Niños= U/l. c- 3. Bilirrubinas: Total, Directa e Indirecta: Método: Colorímetrico. Se recure a un calibrador para la realización de una curva, a partir del cual se obtiene un factor ( 18,3 mg/dl.) que se utiliza para el calculo de las bilirrubinas total y directa, de la diferencia de ambas se obtiene la indirecta expresados en mg/dl. La técnica a seguir es: en tres tubos marcados blanco( B), directa (D), y total (T), se agregan 200 ul de muestra ( suero o plasma heparinizado), al B y a la D se agrega 2.5 ml de agua y a la T 2.5 ml de desarrollador, al B 200 ul de reactivo sulfanílico y a la D y T 200 ul de reactivo diazo preparado recientemente( 1.5 ml. de sulfanílico más una gota de nitrito de sodio), se incuba 5 min. a T ambiente y se lee la directa, la total se debe leer antes de los 15 min., en el caso de utilizarse volúmenes como 50 ul o 20 ul según ictericia se deberá usar factores de 3.79 y 9.38 respectivamente. Valor de referencia: BT= hasta 1.0 mg/dl. BD= hasta 0.2 mg/dl. BI= hasta 0.8 mg/dl. Especificaciones: es importante la preservación de la muestra al abrigo de la luz directa de manera a preservar sobre todo el valor de las bilirrubinas, así también es importante que la muestra no este hemolizada, la utilización proporcional de la muestra de acuerdo a la ictericia es importante para obtener valores reales, aquellos valores elevados de GOT y GPT deberán diluirse y volver a dosar para tener un valor más exacto. Instrucciones detalladas: Las muestras serán remitidas al laboratorio desde el punto de toma de muestra por personal habilitado para el efecto en ningún caso por familiares o por el propio paciente; y serán recepcionadas por personal del laboratorio y según los criterios serán admitidas o rechazadas, hay

10 que recordar que el perfil hepático se halla limitado a pacientes de urgencias, internados y terapia; en ningún caso para ambulatorios o externos ni remitidos. Tener en cuenta: - Tipo de pacientes. - Conservación de muestras. - Muestras ictéricas y hemolizadas. - Muestras: suero o plasma heparinazado. - Microtécnica. 6) Formularios y registros: Los resultados serán anotados en cuadernos habilitados para el efecto, corroborando cualquier resultado u observación discordante, antes de su informe en el formato adecuado. El profesional competente deberá corroborar y confirmar el informe para firmar y sellar la misma para darle validez al resultado. 7) Referencias: Manual de Gestión de Calidad para laboratorios ISO 9000 de la OPS. 8) Lista de distribución: El informe final será archivado en la carpeta habilitada para el efecto, hasta el momento de su entrega ya sea a los mismos, médicos, enfermeras o personal de blanco involucrado o bien remitido a Urgencias para evaluación del paciente. ANEXOS 10 HOJA PARA INFORME DE RESULTADOS

11 11 INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA LA REALIZACION DE PROTEINAS POE P18-01

12 12 - Histórico de modificaciones - Objeto/Propósito - Alcance/Campo de aplicación - Responsables - Definiciones - Desarrollo del procedimiento - Muestra requerida - Reactivos, materiales y equipos. - Fundamento - Proteínas totales - Albúmina -Globulina - Relación Alb/Glob - Especificaciones - Instrucciones detalladas - Tener en cuenta - Formularios y registros - Referencias - Listas de distribución - Anexos INDICE

13 13 ED Nº HISTORICO DE MODIFICACIONES FECHA APARTADOS PAG CAUSAS DE LA MODIFICACION RECUALIFICACION NECESARIA SI/NO (1) 5) Objeto/Propósito: Describir el proceso desde la toma de muestras de pacientes que concurren a urgencias del IMT, externos, pacientes internados y de terapia intensiva así como las condiciones requeridas para su obtención y procesamiento. 6) Alcance/Campo de aplicación: El alcance abarca a la muestra con su pedido médico, al área de toma de muestras, enfermerías, terapia intensiva, laboratorio. 7) Responsables: Perceptoría, enfermerías, médicos y laboratorio.

14 14 8) Definiciones: - Std: Standard. 9) Desarrollo del procedimiento: a- Muestra requerida: sangre venosa obtenida de manera usual (suero), o arterial según necesidad, también se puede utilizar muestras remitidas con anticoagulante heparina en éste caso se procesa en forma directa como plasma; también se utiliza el reactivo de Proteínas totales para dosar en líquidos de punción que no sea LCR, como ser Pleural, Ascítico, Peritoneal, etc. b- Reactivos, Materiales y Equipos: Tubos, frascos estériles de vidrio o tubos de plástico, centrifuga, pipetas automáticas, baño maría, timer, fotocolorímetro. c- Fundamento: la determinación está basado en el dosaje en muestras de suero, o líquidos de punción que no sea LCR. (específicamente para proteínas totales). Básicamente el análisis de Proteínas comprende: Proteínas totales, Albúmina, y los cálculos de Globulina y la relación de Albúmina / Globulina. c- 1. Proteínas Totales: Método: Colorimétrico de punto final con Standard. Se utiliza un Standard de concentración conocida como suero patrón (5.4 g/dl.) de manera a obtener un factor; se mide 50 ul. de suero, plasma, o líquido en un tubo de reacción, a la par se tiene un tubo como blanco y otro con 50 ul. de Standard, a los tres tubos se agrega 3.5 ml.de reactivo de trabajo y se incuba por 15 min. a 37 C. en baño maría luego se realiza las lecturas de las absorbancias, se realiza el cálculo del factor, que es igual a concentración del Std. / abs. del Std. y la absorbancia de la muestra menos el blanco se multiplica por el factor; el resultado aí abtenido se expresa en g/l. Valor de Referencia: g/dl. c- 2. Albúmina: Método: Colorimétrico de punto final con Standard. Se utiliza un Standard de concentración conocida como suero patrón (3.4 g/dl.) de manera a obtener un factor para el cálculo de la concentración de Albúmina en suero; se toma tres tubos marcados como blanco, Standard y muestra, se mide 10 ul. de Std. y 10 ul. de muestra en sus respectivos tubos y se agrega 3.5 ml. de reactivo de trabajo en los tres tubos y se incuba a T ambiente por 10 min., luego se realiza las lecturas de absorbancia se halla el factor = concentración del Std./ Abs. del Std., y se multiplica por la absorbancia de la muestra, el resultado obtenido se expresa en g/dl. Valor de referencia: g/dl. c- 3. Globulina: Método: calculo. A partir de los valores de Proteínas totales y Albúmina se obtiene el valor de la globulina; Globulina = Proteínas totales - Albúmina c- 4. Relación Albúmina/Globulina: Método: calculo. Relación Alb. / Glob.= Albúmina/Globulina. Valor de referencia: 1,2 2,2 d- Especificaciones: tanto la concentración de proteínas y albúmina en el suero no se ven afectados por hemólisis ligera, de manera que los resultados pueden ser considerados. El mismo suero patrón posee concentraciones determinadas para proteínas y albúmina que serán utilizadas para el cálculo de los respectivos factores. Cabe recordar que tanto en suero como en líquidos de punción que no sea LCR el volumen de muestra es la misma, o sea 50 ul. y los cálculos similares y los valores expresados en g/dl. Instrucciones detalladas: Las muestras serán remitidas al laboratorio desde el punto de toma de muestra por personal habilitado para el efecto en ningún caso por familiares o por el propio paciente; y serán recepcionadas por personal del laboratorio y según los criterios serán admitidas o rechazadas. Las

15 muestras de sangre serán centrifugadas y los sueros obtenidos así serán procesadas toda vez que sean aptas. Tener en cuenta: a. Volumen de muestra adecuada. b. Tipo de muestra suero o líquido de punción. c. Presencia de hemólisis y lipemia visibles. d. Confirmación de valores obtenidos. 15 e- Formularios y registros: Los resultados serán anotados en cuadernos habilitados para el efecto, corroborando cualquier resultado u observación discordante, antes de su informe en el formato adecuado. El profesional competente deberá corroborar y confirmar el informe para firmar y sellar la misma para darle validez al resultado. f- Referencias: Manual de Gestión de Calidad para laboratorios ISO 9000 de la OPS. g- Lista de distribución: El informe final será archivado en la carpeta habilitada para el efecto, hasta el momento de su entrega ya sea a médicos, enfermeras o personal de blanco (internados y urgencias), o de ser posible remitido a terapia por personal del laboratorio si la urgencia así lo requiere. ANEXOS HOJA PARA INFORME DE RESULTADOS

16 16 INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA LA REALIZACION DE AMILASA POE A19-01

17 17 - Histórico de modificaciones - Objeto/Propósito - Alcance/Campo de aplicación - Responsables - Definiciones - Desarrollo del procedimiento - Muestra requerida - Reactivos, materiales y equipos. - Fundamento - Especificaciones - Instrucciones detalladas - Tener en cuenta - Formularios y registros - Referencias - Lista de distribución - Anexos INDICE

18 18 ED Nº HISTORICO DE MODIFICACIONES FECHA APARTADOS PAG CAUSAS DE LA MODIFICACION RECUALIFICACION NECESARIA SI/NO (1) 10) Objeto/Propósito: describir el proceso desde la toma de muestras de pacientes ambulatorios que concurren al IMT así como de pacientes internados y de terapia intensiva, como también las condiciones requeridas para su obtención y procesamiento. 11) Alcance/Campo de aplicación: El alcance abarca a la muestra con su pedido médico, al área de toma de muestras, enfermería, terapia intensiva, laboratorio.

19 19 12) Responsables: Enfermería, médicos, técnicos y bioquímicos de turno. 13) Definiciones: - E.D.T.A: Anticoagulante. 14) Desarrollo del procedimiento: a- Muestra requerida: sangre venosa obtenida de manera usual (suero), para análisis de rutina se trabajara principalmente con suero o líquidos de punción toda vez que sea requerido y si las condiciones de la muestra sean las adecuadas para su procesamiento. b- Reactivos, Materiales y Equipos: Tubos, frascos estériles de vidrio o tubos de plástico, centrifuga, baño maría, timer, pipeta automática, fotocolorímetro. c- Fundamento: la determinación está basado en el dosaje de amilasa en muestras de suero ó líquidos de punción según requerimiento médico. c-1. Método: Enzimático de tiempo fijo. En dos tubos marcados como Control (C), y muestra (M) se incuba 0.5 ml. de sustrato en baño maría a 37 C. por 1 o 2 min. luego con ayuda de una pipeta automática de 10 ul. se alícuota 10 ul. de muestra, suero ó líquido de punción y se sigue incubando por 7 min. 30 seg exactamente en baño maría, cumplido este tiempo se agrega el reactivo de yodo 0.5 ml. a los dos tubos se mezcla por agitación suave y se retira del baño y se le agrega 4 ml. de agua destilada se mezcla por inmersión y se procede a su lectura en fotocolorímetro a 640 nm. Calculo de los resultados Amilasa UA/dl.= C M/ C x 1000 C= control M= muestra Valor de referencia: Inferior a 120 UA/dl. 15) Especificaciones: hay que tener en cuenta que la presencia de anticoagulantes como citratos ( anticoagulante para crasis ) u oxalatos así como también el efecto de la amilasa de la saliva que generalmente se presenta al pipetear con la boca lo cual se debe evitar. El dosaje en líquidos es factible toda vez que las condiciones de la misma lo permitan como ser un sobrenadante límpido. Por protocolo no se procesara en orina. Otro hecho a tener en cuenta es que concentraciones elevadas de amilasa dan una solución final de reacción casi incolora que implica que se consumió todo el yodo, en este caso se deberá realizar dilución de la muestra para volver a dosar. Instrucciones detalladas: Las muestras serán remitidas al laboratorio desde el punto de toma de muestra por personal habilitado para el efecto en ningún caso por familiares o por el propio paciente; y serán recepcionadas por personal del laboratorio y según los criterios serán admitidas o rechazadas. Las muestras de sangre y líquidos de punción serán centrifugadas, los sueros y sobrenadantes obtenidos así serán procesados toda vez que sean aptos. Tener en cuenta: a. Muestra adecuada. b. Tipo de muestra suero o líquido de punción. c. Tipo de anticoagulante (EDTA) en el caso de líquidos.

20 20 d. Dilución de muestra con concentraciones altas. e. Confirmación de valores obtenidos. c- Formularios y registros: Los resultados serán anotados en cuadernos habilitados para el efecto, corroborando cualquier resultado u observación discordante, antes de su informe en el formato adecuado. El profesional competente deberá corroborar y confirmar el informe para firmar y sellar la misma para darle validez al resultado. d- Referencias: Manual de Gestión de Calidad para laboratorios ISO 9000 de la OPS. e- Lista de distribución: El informe final será archivado en la carpeta habilitada para el efecto, hasta el momento de su entrega ya sea a médicos, enfermeras o personal de blanco (internados y urgencias), o de ser posible remitido a terapia por personal del laboratorio si la urgencia así lo requiere. ANEXOS HOJA PARA INFORME DE RESULTADOS

21 21 INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA LA REALIZACION DE ELECTROLITOS POE E20-01

22 Histórico de modificaciones - Objeto/Propósito - Alcance/Campo de aplicación - Responsables - Definiciones - Desarrollo del procedimiento - Muestra requerida - Reactivos, materiales y equipos. - Fundamento - Especificaciones - Instrucciones detalladas - Dejar el equipo en Standby - Salir de Standby - Imprimir último resultado - Calibración - Cambio de reactivo - Verificar reactivo - Tener en cuenta - Formularios y registros - Referencias - Lista de distribución - Anexos INDICE

23 23 ED Nº HISTORICO DE MODIFICACIONES FECHA APARTADOS PAG CAUSAS DE LA MODIFICACION RECUALIFICACION NECESARIA SI/NO (1) 16) Objeto/Propósito: Describe el procedimiento operativo para la realización del examen de electrolitos (Na,K), en suero o muestras de sangre total heparinizadas. 17) Alcance/Campo de aplicación: A la muestra con sus pedidos de análisis, a los Bioquímicos de turno y a los técnicos encargados de separar el suero de la sangre total. 18) Responsables: Bioquímicos y técnicos de turno.

24 24 19) Definiciones: Na: Sodio, K: Potasio. AVL: equipo con el que se realiza las determinaciones de Na y K. 20) Desarrollo del procedimiento: a. Muestra requerida: sangre venosa obtenida de manera usual (suero), o arterial según necesidad, también se puede utilizar muestras remitidas con anticoagulante heparina en éste caso se procesa en forma directa como sangre total o bien como plasma. b. Reactivos, Materiales y Equipos: Tubos al vacío, frascos estériles de vidrio o tubos de plástico, centrifuga, equipo para dosaje ión selectivo (AVL). Fundamento: la determinación está basado en el dosaje en muestras de suero, plasma o sangre total de iones Na y K, mediante captura selectiva de los mismos por electrodos. c. Especificaciones: La concentración de iones que se miden a través del equipo automático AVL poseen su especificidad y limites dados por el equipo que deberán ser controlados y corregidos mediante la utilización de soluciones de limpieza y de acondicionamiento así como controles( alto, normal y bajo) proveídos para el equipo. Instrucciones detalladas: Las muestras serán remitidas al laboratorio desde el punto de toma de muestra por personal habilitado para el efecto en ningún caso por familiares o por el propio paciente; y serán recepcionadas por personal del laboratorio y según los criterios serán admitidas o rechazadas. Las muestras de sangre serán centrifugadas y los sueros obtenidos así serán procesadas toda vez que sean aptas (libre de hemólisis, hiperlipemia.). Las muestras remitidas de terapia en jeringas utilizando heparina como anticoagulante serán transvasadas en recipientes adecuados para su determinación ya sea en forma directa como sangre total o centrifugadas para utilizar plasma preferentemente; las mismas serán trasvasadas a recipientes adecuados en un volumen no menor a 200ul que es el mínimo requerido para el dosaje. Para dejar el equipo en standby: El equipo sin uso siempre debe permanecer en estado de standby, para lo cual se debe llegar a funciones del operador apretando sucesivamente la tecla no una vez que aparezca en pantalla dicha función se opta con la tecla si, luego ir a chequear cambio de reactivo se aprieta no y aparece en pantalla la opción permanecer en standby y elegir con si. Para salir de standby y proceder a dosar muestras: se procederá a realizar mantenimiento diario para tal efecto se pulsa no y aparece en pantalla salir de standby y se elige con si, el equipo pregunta realizar mantenimiento diario? se elige con si, aparece realizar limpieza se elige si y se pasa el líquido de limpieza luego aparece realizar acondicionamiento se elige si y se pasa el líquido acondicionador, luego aparece mantener mantenimiento diario se elige no y el equipo entra en calibración después del cual aparece LISTO lo que indica que ya se puede dosar las muestras. Para imprimir último resultado: Los resultados de las muestras permanecen en pantalla por 15 seg., si no se copio y se quiere recuperar los datos, con la tecla no se llega a funciones de impresor se elige con si aparece en pantalla imprimir último resultado se elige si y aparece en pantalla los datos de la última muestra dosada. Calibración: Se podrá realizar calibración en cualquier momento toda vez que se requiera pulsando la tecla no hasta llegar a la opción calibración y pulsar si. Para cambio de reactivo o fluid pack: ir hasta funciones del operador pulsando repetidas veces la tecla no se elige si aparece en pantalla chequear cambio de reactivo se pulsa si aparece

25 instalar nuevo pack de reactivo elegir si vuelve a preguntar esta Ud. seguro y se elige si, con lo cual se habilita el nuevo pack a utilizar con un 100% de llenado. Para verificar la cantidad de reactivo restante: Se debe ir hasta funciones del operador elegir con si aparece en pantalla chequear cambio de reactivo elegir si y aparece el porcentaje de reactivo restante, a la vez el equipo pregunta instalar nuevo pack de reactivo? se pulsa no las veces que sea necesario para salir de dicha función. Tener en cuenta: d. Volumen de muestra adecuada. e. Tipo de muestra suero o plasma. f. Tipo de anticoagulante (heparina). g. Presencia de hemólisis y lipemia visibles. h. Limpieza y acondicionamiento diario del equipo. i. Confirmación de valores obtenidos. 21) Formularios y registros: Los resultados serán anotados en cuadernos habilitados para el efecto, corroborando cualquier resultado u observación discordante, antes de su informe en el formato adecuado. El profesional competente deberá corroborar y confirmar el informe para firmar y sellar la misma para darle validez al resultado. 22) Referencias: Manual de Gestión de Calidad para laboratorios ISO 9000 de la OPS. 23) Lista de distribución: El informe final será archivado en la carpeta habilitada para el efecto, hasta el momento de su entrega ya sea a médicos, enfermeras o personal de blanco (internados y urgencias), o de ser posible remitido a terapia por personal del laboratorio si la urgencia así lo requiere. ANEXOS 25

26 26 HOJA PARA INFORME DE RESULTADOS INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA LA REALIZACION DE GASES ARTERIALES POE GA21-01

27 Histórico de modificaciones - Objeto/Propósito - Alcance/Campo de aplicación - Responsables - Definiciones - Desarrollo del procedimiento - Muestra requerida - Reactivos, materiales y equipos. - Fundamento - Especificaciones - Instrucciones detalladas - Reactivos - Análisis de muestra - Calibración - Mantenimiento - Tener en cuenta - Formularios y registros - Referencias - Lista de distribución - Anexos INDICE

28 28 ED Nº HISTORICO DE MODIFICACIONES FECHA APARTADOS PAG CAUSAS DE LA MODIFICACION RECUALIFICACION NECESARIA SI/NO (1) 24) Objeto/Propósito: Describir el proceso desde la toma de muestras de pacientes que concurren a urgencias del IMT así como de pacientes internados y de terapia intensiva así como las condiciones requeridas para su obtención, transporte y procesamiento. 25) Alcance/Campo de aplicación: El alcance abarca a la muestra con el pedido médico, al área de toma de muestras, enfermería de urgencias, internados y de terapia, laboratorio. 26) Responsables: Enfermería, médicos, técnicos y bioquímicos de turno.

29 29 27) Definiciones: Anticoagulantes (heparina), transporte refrigerado de la muestra, dosaje directo con jeringa, dosaje con capilar. 28) Desarrollo del procedimiento: a. Muestra requerida: sangre arterial o venosa según requerimiento médico, obtenida de forma aséptica por punción arterial o venosa. b. Reactivos, Materiales y Equipos: jeringas, anticoagulante (heparina), Gasómetro, balón de gas, calibradores, capilares. Fundamento: basados en la medición de presiones parciales de O2 y CO2 y del ph de la sangre así como valores calculados a partir de los medidos tales como bicarbonato, exceso de bases y saturación de oxigeno mediante el uso de electrodos selectivos para po2, pco2 y ph. c. Especificaciones: Los parámetros que se miden a través del gasómetro poseen su especificidad y limites dados por el equipo que deberán ser controlados y corregidos mediante la utilización del calibrador especifico para el equipo, así también es de vital importancia la provisión del balón de gas para la realización de la medición. Instrucciones detalladas: Las muestras serán remitidas al laboratorio desde el punto de toma de muestra por personal habilitado para el efecto en ningún caso por familiares o por el propio paciente; y serán recepcionadas por personal del laboratorio y según los criterios serán admitidas o rechazadas. Las muestras serán remitidas en jeringas utilizando heparina como anticoagulante y en forma refrigerada, procesadas lo antes posible así también el informe deberá ser remitida o devuelta con la mayor brevedad posible sobre todo para pacientes de terapia intensiva y de urgencias internadas en sala. Procedimiento para procesamiento de muestras: Reactivos: básicamente cuenta con un balón de gas, un buffer, ph de referencia, un líquido de lavado que se prepara agregando una ampolla de un 1ml. en un recipiente que se lleva a volumen con agua destilada, y un recipiente waste para los desechos líquidos, ampollas calibrador de 1.5 ml. que se utiliza para la calibración del equipo, también es importante contar con el papel térmico para la impresora y el clot catcher. Análisis de muestra: Antes de proceder al análisis en si se deberá verificar que el equipo este en estado LISTO, verificando que todos los reactivos se encuentren en un volumen adecuado que el desechero no este lleno y la impresora tenga papel; a continuación según la cantidad de muestra se podrá analizar directamente de la jeringa o bien con la ayuda de un capilar de hematocrito sobre todo si la muestra es escasa, se deberá homogeneizar perfectamente la muestra antes de realizar el análisis, se levanta el flap y se presiona la punta de la jeringa sin aguja sobre la zona de aspiración y se inyecta lentamente la muestra hasta escuchar la señal acústica y ver en pantalla el aviso de retirar la jeringa y se cierra el flap; en el caso de proceder con un capilar de hematocrito se seguirá los mismos pasos hasta levantar el flap, se coloca uno de los extremos del capilar en la zona de aspiración de la muestra y se pulsa la tecla si para que la muestra sea aspirada se procede a retirar el capilar cuando se escucha la señal acústica y se lea en pantalla retirar capilar y cerrar flap ; luego se espera de 30 a 39 seg. para que el equipo imprima los resultados. Calibración: Toda vez que el equipo lo requiera se deberá realizar utilizando una ampolla calibrador nueva, para lo cual se deberá ingresar a la opción Calibración pulsando la tecla no hasta llegar a la misma y se elige con si, se inyecta el calibrador como una muestra y se retira cuando el equipo lo pide se

30 cierra el flap y se espera un segundo pedido de calibrador por parte del equipo procediendo de la misma manera que la primera vez, se cierra el flap y se espera el informe de calibración; si no se calibra todos los parámetros se deberá repetir otro ciclo de calibración de la misma manera. Mantenimiento: Generalmente se recurre a este item cuando sea necesario una limpieza de la cámara de muestra o sea necesario vaciar la misma; se debe ingresar hasta la opción de mantenimiento pulsando la tecla no hasta llegar a la misma y se elige con la tecla si luego con la tecla no se busca las opciones lavado intensivo o limpieza al vacío y se elige con la tecla si ; se podrá realizar toda vez que sea necesario. Tener en cuenta: d. Sangre arterial e. Presencia o no de coágulos. f. Tipo de anticoagulante ( heparina ) g. Calibración del gasómetro. h. Calibrador, BG calibrador. i. Balón de gas. 29) Formularios y registros: Los resultados serán anotados en cuadernos habilitados para el efecto, corroborando cualquier resultado u observación discordante, antes de su informe en el formato adecuado. El profesional competente deberá corroborar y confirmar el informe para firmar y sellar la misma para darle validez al resultado. 30) Referencias: Manual de Gestión de Calidad para laboratorios ISO 9000 de la OPS. 31) Lista de distribución: El informe final será archivado en la carpeta habilitada para el efecto, hasta el momento de su entrega ya sea a los mismos, médicos, enfermeras o personal de blanco (internados y urgencias). Para los pacientes de terapia intensiva se dará prioridad tanto para el procesamiento como para la entrega de resultados. ANEXOS EQUIPO UTILIZADO 30 GASOMETRO AVL

31 31 INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA LA REALIZACION DE CONTROL DE CALIDAD POE CC22-01

32 32 ÍNDICE - Histórico de modificaciones - Objeto/Propósito - Alcance/Campo de aplicación - Responsables - Definiciones - Desarrollo del procedimiento - Muestra requerida - Reactivos, materiales y equipos. - Fundamento - Especificaciones e Instrucciones detalladas - Tener en cuenta - Formularios y registros - Anexos

33 33 ED Nº HISTORICO DE MODIFICACIONES FECHA APARTADOS PAG CAUSAS DE LA MODIFICACION RECUALIFICACION NECESARIA SI/NO (1) 1) Objeto/Propósito: Describir el proceso por el cual se realizan los Controles de Calidad Interno y Externo en procesos analíticos para asegurar la confiabilidad de cada determinación química, para de ésta forma asegurar que los productos finales sean suficientemente fiables y adecuados a la finalidad que perseguimos. Estas operaciones están sujetas a cierto grado de imprecisión y a cierta probabilidad de error.

34 32) Alcance/Campo de aplicación: El alcance abarca al suero control utilizado para la calibración y a todo el personal del laboratorio, bioquímicos, técnicos, administrativos que sean consientes de las causas de las imprecisiones analíticas y de las técnicas de que se dispone para su detección, corrección y control. 33) Responsables: Administración, Técnico o Bioquímico de turno. 34) Definiciones: - Control N: Control normal. - Control P: Control patológico. - Suero liofilizado enviado por el Laboratorio Central. 35) Desarrollo del procedimiento: a- Muestra requerida: Sueros o Plasmas controles. f- Reactivos, Materiales y Equipos: Tubos estériles. Pipeta volumétrica, con doble aforo. Pipetas automáticas, con sus picos. Baño maría. Timer. Equipos de lectura (Coagulímetro, Fotómetro, etc.). c- Fundamento: Sus especificaciones en particular brindan un fundamento apropiado sobre el cual establecer un sistema de control de calidad de rutina. Los controles deberían usarse según la reglamentación nacional o al menos una vez al día, o lo que sería mejor, una vez por jornada o con cada serie. Los datos obtenidos diariamente son registrados para luego realizar los promedios, la desviación estandar y sus alertas positiva y negativa, para ser llevados al gráfico y ver los valores para ser utilizados más adelante para así obtener los datos a ser utilizados el mes siguiente. 36) Especificaciones e Instrucciones detalladas. Los sueros controles deben diluirse con agua destilada midiendo 5 cc en pipeta volumétrica, cerrar el frasco con el tapón y la tapa. Se debe rotar el frasco y dejar reposar durante aproximadamente 30 min. lejos de la luz directa, remover intermitentemente durante ese tiempo para que el liofilizado no se adhiera a las paredes del frasco. Después de 30 minutos invertir el frasco y mezclar cuidadosamente asegurándose que no queden restos de material seco sin disolver antes de sacar el líquido para ser usado. Tener en cuenta - Que el agua utilizada sea destilada o desionizada. - Respetar las indicaciones para la reconstitución de los sueros controles. - Es estable durante 7 días a una temperatura de 2-8 ºC, y de un mes a 20ºC. 37) Formularios y registros. Los resultados se van anotando día a día en un cuaderno para luego introducir los datos en la computadora para realizar los gráficos correspondientes a cada determinación. 34

35 35 INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA LA REALIZACION DE ANTIESTREPTOLISINA O POE AST23-01

36 36 INDICE - Histórico de modificaciones - Objeto/Propósito - Alcance/Campo de aplicación - Responsables - Definiciones - Desarrollo del procedimiento - Muestra requerida - Reactivos, materiales y equipos. - Fundamento - Especificaciones - Instrucciones detalladas - Tener en cuenta - Formularios y registros - Referencias - Listas de distribución - Anexos HISTORICO DE MODIFICACIONES

37 37 ED Nº FECHA APARTADOS PAG CAUSAS DE LA MODIFICACION RECUALIFICACION NECESARIA SI/NO (1) 38) Objeto/Propósito: describir el proceso desde la toma de muestras de pacientes ambulatorios que concurren al IMT así como de pacientes internados y de terapia intensiva, como también las condiciones requeridas para su obtención y procesamiento. 39) Alcance/Campo de aplicación: Abarca a la muestra con su pedido de análisis, al área de toma de muestras, enfermería, terapia intensiva, laboratorio. 40) Responsables: Enfermería, médicos y personal del laboratorio.

38 38 41) Definiciones: - ASTO: Antiestreptolisina O. 42) Desarrollo del procedimiento: a- Muestra requerida: sangre venosa obtenida de manera usual y recogida sin anticoagulante; para que se tenga una buena reacción se trabajará exclusivamente con suero, en ningún caso con plasma. g- Reactivos, Materiales y Equipos: Tubos, láminas o placas de reacción, frascos estériles de vidrio o tubos de plástico, solución fisiológica, centrifuga, baño maría, timer, pipeta automática, palillos. h- Fundamento: Los anticuerpos antiestreptolisina O se detectan en suero por su reacción con la estreptolisina O adsorbida sobre soporte inerte de látex. Los anticuerpos antiestreptolisina reaccionan con la estreptolisina produciendo una aglutinación visible macroscópicamente. Especificaciones: hay que tener en cuenta que la prueba se deberá realizar exclusivamente en suero, así como también el aspecto del suero a ser utilizado teniendo en cuenta que los sueros marcadamente lipémicos o contaminados pueden dar resultados falsamente positivos; es importante la utilización de placas de reacción de fondo oscuro de manera a apreciar claramente la reacción. Instrucciones detalladas: Las muestras serán remitidas al laboratorio desde el punto de toma de muestra por personal habilitado para el efecto en ningún caso por familiares o por el propio paciente; y serán recepcionadas por personal del laboratorio y según los criterios serán admitidas o rechazadas. Toda vez que se empieza a usar una caja nueva de reactivo se deberá testar tanto el control positivo como el control negativo conjuntamente con la muestra de manera a controlar la reactividad del reactivo. En una placa de fondo oscuro se dispondrá de una gota (50ul) de suero en cuestión, una gota de control positivo y una gota de control negativo y se les agregara 1 gota de látex (50ul) del mismo gotero, se mezclara con la ayuda de palillos y se balanceara la placa por el lapso de 2 min. después se evalúa la reacción observando macroscópicamente la formación o no de aglutinación que indica que la prueba es positiva o no. Los sueros con resultados negativos se informará inferior a 200 UI/ml., y los sueros que den positivos a la reacción deberán cuantificarse. Cuantificación: en placa de fondo oscuro se dispondrá 20 ul de suero fisiológico más 20 ul de suero en cuestión que se mezcla y a partir de la misma se realizara tantas diluciones como sean necesarias hasta encontrar el titulo final que corresponde a la concentración de ASTO en el suero, se procede de la misma manera que la primera dilución transfiriendo 20 ul. de dilución con 20 ul. de solución fisiológica y a partir de esta a la siguiente y así sucesivamente, los títulos de las diluciones son: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y así sucesivamente, el titulo de la última dilución que presente aglutinación se deberá multiplicar por la sensibilidad del reactivo ( en este caso 200 UI/ml..), por ej. Titulo 1:16 en este caso es 8 x 200 = 1600 UI/ml. Tener en cuenta: a. Muestra adecuada (suero). b. No usar anticoagulante. c. Cuantificación. d. Tiempo considerado para interpretación de resultado.

39 39 i- Formularios y registros: Los resultados serán anotados en cuadernos habilitados para el efecto, corroborando cualquier resultado u observación discordante, antes de su informe en el formato adecuado. El profesional competente deberá corroborar y confirmar el informe para firmar y sellar la misma para darle validez al resultado. j- Referencias: Manual de Gestión de Calidad para laboratorios ISO 9000 de la OPS. k- Lista de distribución: El informe final será archivado en la carpeta habilitada para el efecto, hasta el momento de su entrega ya sea a médicos, enfermeras o personal de blanco (internados y urgencias), o de ser posible remitido a terapia por personal del laboratorio si la urgencia así lo requiere. ANEXOS HOJA PARA INFORME DE RESULTADOS

40 40 INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA LA REALIZACION DE FACTOR REUMATOIDEO POE FR24-01

41 41 INDICE - Histórico de modificaciones - Objeto/Propósito - Alcance/Campo de aplicación - Responsables - Definiciones - Desarrollo del procedimiento - Muestra requerida - Reactivos, materiales y equipos. - Fundamento - Especificaciones - Instrucciones detalladas - Tener en cuenta - Formularios y registros - Referencias - Listas de distribución - Anexos

42 42 ED Nº HISTORICO DE MODIFICACIONES FECHA APARTADOS PAG CAUSAS DE LA MODIFICACION RECUALIFICACION NECESARIA SI/NO (1) 43) Objeto/Propósito: describir el proceso desde la toma de muestras de pacientes ambulatorios que concurren al IMT así como de pacientes internados y de terapia intensiva, como también las condiciones requeridas para su obtención y procesamiento. 44) Alcance/Campo de aplicación: El alcance abarca a la muestra con su pedido médico, al área de toma de muestras, enfermería, terapia intensiva, laboratorio. 45) Responsables: Enfermería, médicos y personal del laboratorio.

43 43 46) Definiciones: - F.R: Factor reumatoideo. 47) Desarrollo del procedimiento: a- Muestra requerida: sangre venosa obtenida de manera usual y recogida sin anticoagulante; para que se tenga una buena reacción se trabajará exclusivamente con suero, en ningún caso con plasma. l- Reactivos, Materiales y Equipos: Tubos, láminas o placas de reacción, frascos estériles de vidrio o tubos de plástico, solución fisiológica, centrifuga, baño maría, timer, pipeta automática, palillos. m- Fundamento: El factor reumatoideo de tipo IgM se detecta en presencia de gammainmunoglobulina o factor II de Cohn( que en este caso es el antígeno) adsorbida sobre un soporte inerte de látex-poliestireno. Este antígeno se une a los FR (anti-igg) produciendo una aglutinación de las partículas de látex-poliestireno, visible macroscópicamente. Especificaciones: hay que tener en cuenta que la prueba se deberá realizar exclusivamente en suero, así como también el aspecto del suero a ser utilizado teniendo en cuenta que los sueros con hemólisis o contaminados pueden dar resultados falsamente positivos; es importante la utilización de placas de reacción de fondo oscuro de manera a apreciar claramente la reacción. Instrucciones detalladas: Las muestras serán remitidas al laboratorio desde el punto de toma de muestra por personal habilitado para el efecto en ningún caso por familiares o por el propio paciente; y serán recepcionadas por personal del laboratorio y según los criterios serán admitidas o rechazadas. Toda vez que se empieza a usar una caja nueva de reactivo se deberá testar tanto el control positivo como el control negativo conjuntamente con la muestra de manera a controlar la reactividad del reactivo. En una placa de fondo oscuro se dispondrá de una gota (50ul) de suero diluido 1:20 con buffer glicina ( 50 ul. de suero + 1 ml. de buffer), una gota de control positivo y una gota de control negativo y se les agregara 1 gota de látex (50ul) del mismo gotero, se mezclara con la ayuda de palillos y se balanceara la placa por el lapso de 2 min. después se evalúa la reacción observando macroscópicamente la formación o no de aglutinación que indica que la prueba es positiva o no. Los sueros con resultados negativos se informaran como negativos, y los sueros que den positivos a la reacción deberán cuantificarse. Cuantificación: en placa de fondo oscuro se dispondrá 50 ul de buffer glicina más 50 ul de suero en cuestión que se mezcla y a partir de la misma se realizara tantas diluciones como sean necesarias hasta encontrar el titulo final que corresponde a la concentración de FR en el suero, se procede de la misma manera que la primera dilución transfiriendo 50 ul. de dilución con 50 ul. de buffer glicina y a partir de esta a la siguiente y así sucesivamente, los títulos de las diluciones son: 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, etc. y así sucesivamente, el titulo de la última dilución que presente aglutinación se deberá multiplicar por la sensibilidad del reactivo ( en este caso 1 UI/ml..), por ej. Titulo 1:40 en este caso es 40 x 1 = 40 UI/ml. Valor de referencia: UI/ml. Tener en cuenta: a. Muestra adecuada (suero).

44 44 b. No usar anticoagulante. c. Cuantificación. d. Tiempo considerado para interpretación de resultado. n- Formularios y registros: Los resultados serán anotados en cuadernos habilitados para el efecto, corroborando cualquier resultado u observación discordante, antes de su informe en el formato adecuado. El profesional competente deberá corroborar y confirmar el informe para firmar y sellar la misma para darle validez al resultado. o- Referencias: Manual de Gestión de Calidad para laboratorios ISO 9000 de la OPS. p- Lista de distribución: El informe final será archivado en la carpeta habilitada para el efecto, hasta el momento de su entrega ya sea a médicos, enfermeras o personal de blanco (internados y urgencias), o de ser posible remitido a terapia por personal del laboratorio si la urgencia así lo requiere. ANEXOS HOJA PARA INFORME DE RESULTADOS

45 45 INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR PARA LA REALIZACION DE PROTEINA C REACTIVA POE PCR25-01

46 46 INDICE - Histórico de modificaciones - Objeto/Propósito - Alcance/Campo de aplicación - Responsables - Definiciones - Desarrollo del procedimiento - Muestra requerida - Reactivos, materiales y equipos. - Fundamento - Especificaciones - Instrucciones detalladas - Tener en cuenta - Formularios y registros - Referencias - Listas de distribución - Anexos

47 47 ED Nº HISTORICO DE MODIFICACIONES FECHA APARTADOS PAG CAUSAS DE LA MODIFICACION RECUALIFICACION NECESARIA SI/NO (1) 48) Objeto/Propósito: describir el proceso desde la toma de muestras de pacientes ambulatorios que concurren al IMT así como de pacientes internados y de terapia intensiva, como también las condiciones requeridas para su obtención y procesamiento. 49) Alcance/Campo de aplicación: El alcance abarca a la muestra con su pedido médico, al área de toma de muestras, enfermería, terapia intensiva y laboratorio. 50) Responsables: Enfermería, médicos, técnicos y bioquímicos de turno.

48 48 51) Definiciones: - P.C.R: Proteína C Reactiva. - 52) Desarrollo del procedimiento: a- Muestra requerida: sangre venosa obtenida de manera usual y recogida sin anticoagulante; para que se tenga una buena reacción se trabajará exclusivamente con suero, en ningún caso con plasma. q- Reactivos, Materiales y Equipos: Tubos, láminas o placas de reacción, frascos estériles de vidrio o tubos de plástico, solución fisiológica, centrifuga, baño maría, timer, pipeta automática, palillos. r- Fundamento: La PCR se detecta en suero por reacción con un anticuerpo específico adsorbido sobre un soporte inerte de látex. La PCR se une a los anticuerpos adsorbidos produciendo la aglutinación de las partículas de látex. Especificaciones: hay que tener en cuenta que la prueba se deberá realizar exclusivamente en suero, así como también el aspecto del suero a ser utilizado teniendo en cuenta que los sueros marcadamente lipémicos o contaminados pueden dar resultados falsamente positivos; es importante la utilización de placas de reacción de fondo oscuro de manera a apreciar claramente la reacción. Instrucciones detalladas: Las muestras serán remitidas al laboratorio desde el punto de toma de muestra por personal habilitado para el efecto en ningún caso por familiares o por el propio paciente; y serán recepcionadas por personal del laboratorio y según los criterios serán admitidas o rechazadas. Toda vez que se empieza a usar una caja nueva de reactivo se deberá testar tanto el control positivo como el control negativo conjuntamente con la muestra de manera a controlar la reactividad del reactivo. En una placa de fondo oscuro se dispondrá de una gota (50ul) de suero en cuestión, una gota de control positivo y una gota de control negativo y se les agregara 1 gota de látex (50ul) del mismo gotero, se mezclara con la ayuda de palillos y se balanceara la placa por el lapso de 2 min. después se evalúa la reacción observando macroscópicamente la formación o no de aglutinación que indica que la prueba es positiva o no. Los sueros que sean positivas se deberán cuantificar si se trata de pacientes internados o informar de manera cualitativa si son pacientes ambulatorios. Cuantificación: en placa de fondo oscuro se dispondrá 20 ul de suero fisiológico más 20 ul de suero en cuestión que se mezcla y a partir de la misma se realizara tantas diluciones como sean necesarias hasta encontrar el titulo final que corresponde a la concentración de PCR en el suero, se procede de la misma manera que la primera dilución transfiriendo 20 ul. de dilución con 20 ul. de solución fisiológica y a partir de esta a la siguiente y así sucesivamente, los títulos de las diluciones son: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y así sucesivamente, el titulo de la última dilución que presente aglutinación se deberá multiplicar por la sensibilidad del reactivo ( en este caso 6 mg/l.), por ej. Titulo 1:16 en este caso es 16x6= 96 mg/l. Tener en cuenta: a. Muestra adecuada (suero). b. No usar anticoagulante. c. Cuantificación solo para internados. d. Tiempo considerado para interpretación de resultado. s- Formularios y registros: Los resultados serán anotados en cuadernos habilitados para el efecto, corroborando cualquier resultado u observación discordante, antes de