Primera Unidad. e. Las células Th y Tc reconocen antígeno procesado y presentado con una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad.

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1 Universidad Central de Venezuela Facultad de Medicina Escuela de Medicina Dr. José María Vargas Cátedra de Inmunología Primera Unidad Seminario Nº 1: ANTÍGENO/ ANTICUERPOS; REACCIONES ANTÍGENO-ANTICUERPO; COMPLEMENTO Introducción: Las sesiones seminariales tienen por objeto estimular la discusión de los conceptos clave de la asignatura, antes de la realización de los exámenes parciales. Recomendamos a los estudiantes reunirse en grupos de estudio en los días previos al seminario, con la finalidad de aclarar dudas referentes a las clases respectivas. Para facilitar la discusión, se propone el siguiente guión, el cual debe ser respondido en su totalidad por cada estudiante antes del día del seminario. 1. Indique si cada una de las afirmaciones siguientes es verdadera o falsa. Si piensa que una afirmación es falsa, explique por qué. a. Casi todos los antígenos inducen una respuesta policlonal b. Por lo general, un antígeno proteico grande puede combinarse con muchas moléculas de anticuerpo diferentes. c. La inmunofluorescencia indirecta es una técnica más sensible que la inmunofluorescencia directa. d. Un hapteno puede estimular la formación de anticuerpo pero no combinarse con sus moléculas. e. Las células Th y Tc reconocen antígeno procesado y presentado con una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad. f. El Western Blot y las pruebas de inmunoprecipitación son valoraciones cuantitativas útiles para medir las concentraciones de proteínas en células y tejidos g. Es necesario inmunizar con un complejo de hapteno y portador a fin de obtener anticuerpos dirigidos contra el hapteno. h. Los anticuerpos pueden unir compuestos hidrófilos o hidrófobos, pero los receptores de célula T sólo pueden unir complejos de péptido y complejo mayor de histocompatibilidad. i. Todas las moléculas de inmunoglobulina en la superficie de una célula B determinada tienen el mismo idiotipo. j. Todas las moléculas de inmunoglobulina en la superficie de una célula B determinada tienen el mismo isotipo. k. La IgG funciona con mayor efectividad que la IgM en la aglutinación bacteriana. l. Aunque a menudo se prefieren anticuerpos monoclonales para investigación y con fines diagnósticos, tanto los anticuerpos monoclonales como los policlonales pueden ser muy específicos.

2 2. Para cada par de antígenos que se menciona a continuación, indique cuál es probable que sea más inmunógeno. Explique su respuesta. a. Albúmina sérica bovina (ASB) natural. ASB desnaturalizada por calor. b. Lisozima de clara de huevo de gallina. Colágeno de gallina. c. Una proteína con un peso molecular de Una proteína con un peso molecular de d. ASB en adyuvante completo de Freund. ASB en adyuvante incompleto de Freund. 3. En la preparación de una demostración para su clase de inmunología, una instructora purificó anticuerpos de IgG a glóbulos rojos de ovejas (GRO) y llevó a cabo la digestión de algunos de los anticuerpos en fragmentos Fab, Fc, y F(ab ) 2. Colocó cada preparación en un tubo separado, marcó los tubos con un marcador hidrosoluble y los dejó en una cubeta con hielo. Cuando la instructora regresó para su periodo de clases descubrió que las etiquetas se habían manchado y no eran legibles. Determinada a salvar la demostración, marcó de nuevo los tubos 1, 2, 3 y 4, y prosiguió. Con base en los resultados de la prueba que se describen a continuación, indique qué preparación contenía cada tubo y explique cómo se identificó el contenido. a. La preparación del tubo 1 aglutinó GRO, pero no los lisó en presencia de complemento. b. La preparación del tubo 2 no aglutinó GRO, ni los lisó en presencia de complemento. Sin embargo, cuando esta preparación se añadió a GRO antes de la adición de anti-gro completo, previno la aglutinación de las células por el antisuero anti-gro completo. c. La preparación del tubo 3 aglutinó GRO y también lisó las células en presencia de complemento. d. La preparación del tubo 4 no aglutinó ni lisó GRO y no inhibió la aglutinación de GRO por antisuero anti-gro completo. 4. Aunque los cinco isotipos de inmunoglobulina comparten muchas características estructurales comunes, las diferencias en sus estructuras afectan sus actividades biológicas. a. Dibuje un diagrama esquemático de una molécula de IgG típica y marque cada una de las partes siguientes: cadenas H, cadenas L, enlaces disulfuro intercadena, enlaces disulfuro intracadena, dominios de bisagra, Fab, Fc y todos los restantes. Indique cuáles son los dominios que participan en la unión de antígeno. b. Cómo tendría que modificarse el diagrama de la IgG para mostrar una molécula de IgA aislada de la saliva? c. Cómo tendría que modificarse el diagrama de la IgG para mostrar IgM sérica? 5. Para cada isotipo de inmunoglobulina (A-E) elija la(s) descripción(es) que se indica abajo (1-12) que describe(n) ese isotipo. Cada descripción puede utilizarse una vez, más de una o ninguna; algunos isotipos puede aplicarse más de una descripción.

3 Isotipos: a. IgA c. IgE e. IgM b. IgD d. IgG Descripciones 1. La forma secretada es un pentámero de la unidad básica H 2 L Se une a receptores Fc en células cebadas (mastocitos). 3. Las formas multiméricas tienen una cadena J. 4. Se encuentra en la superficie de células B maduras, no cebadas. 5. El isotipo más abundante en suero 6. Principal anticuerpo en secreciones como saliva, lágrimas y leche materna. 7. Se encuentra en la superficie de células B inmaduras. 8. El primer anticuerpo sérico que se produce en una respuesta inmunitaria primaria. 9. Tiene un papel importante en la hipersensibilidad inmediata. 10. Tiene un papel primario en la protección contra patógenos que invaden a través de la mucosa intestinal o respiratoria 11. Las formas multiméricas pueden contener un componente secretor. 12. El isotipo menos abundante en suero. 6. Indique si cada una de las afirmaciones siguientes es verdadera o falsa. Si piensa que es falsa, explique por qué. a. Un conejo inmunizado con IgG3 humana elabora anticuerpos reacciona con todas las subclases de IgG en seres humanos b. Todas las moléculas de proteína de mieloma derivadas de una misma clona de mieloma tienen el mismo idiotipo y alotipo. c. Aunque la IgA es la principal especie de anticuerpo que lleva a cabo la transcitosis, la IgM polimérica, pero no la IgA monomérica, también puede someterse a transcitosis. d. Las regiones hipervariables hacen contacto considerable con el epítopo. e. En condiciones normales, todos los isotipos se encuentran en cada individuo de una especie. f. La región variable de cadena pesada (V H ) tiene el doble de largo que la región variable de cadena ligera (V L ). 7. Un enérgico estudiante de inmunología aísla una proteína X, que tal vez sea un nuevo isotipo de la inmunoglobulina humana.

4 a. Qué características estructurales debe tener la proteína X para clasificarse como inmunoglobulina? b. Se preparan antisueros de conejo para la IgG humana completa y las cadenas humanas kappa y gamma. Si se asume que la proteína X es en realidad un nuevo isotipo de inmunoglobulina, a cuáles de estos antisueros se uniría? Por qué? c. Diseñe un procedimiento experimental para preparar un antisuero específico para proteína X. 8. Un investigador deseaba obtener un antisuero de conejo específico para IgG de ratón. Inyectó a un conejo IgG de ratón purificada y obtuvo un antisuero que reaccionó de forma intensa con IgG de ratón. Sin embargo, para su desaliento, el antisuero también reaccionó con cada uno de los otros isotipos de ratón. Explique por qué obtuvo este resultado. De qué forma el antisuero de ratón sería específico para IgG de ratón? 9. En dónde se localizan las regiones CDR en una molécula de anticuerpo y cuáles son sus funciones? 10. Explique la diferencia entre especificidad de anticuerpo, afinidad de anticuerpo y avidez de anticuerpo. Cuál de estas propiedades de un anticuerpo indica mejor su habilidad para contribuir a la respuesta inmunitaria humoral contra bacterias invasoras? 11. Para cada antígeno o anticuerpo que se menciona en seguida, indique un método de valoración apropiado y los reactivos necesarios para la prueba. Tenga en mente la sensibilidad de la prueba y la concentración esperada de cada proteína. a. IgG en suero b. Insulina en suero c. IgE en suero d. Componente C3 del complemento en membrana basal glomerular e. Anticuerpos anti-a a antígeno de grupo sanguíneo A en suero f. Contaminación de una hamburguesa con carne de caballo g. Espiroqueta de sífilis en frotis de un chancro 12. Cuáles son las diferencias entre el método de ELISA y el de Western-Blot en relación con su sensibilidad y especificidad? Qué cualidades harían que se prefiera uno u otro método para el diagnóstico de enfermedades? 13. Para los procedimientos de ELISA y Western-Blot son necesarios algunos reactivos de uso común. Defina y diga el uso que se le da a los siguientes, especificando además en cuál de las dos pruebas se utiliza: PBS-Tween Dodecil sulfato de Sodio Gel de apilamiento Gel de separación Gel de corrida Suero fetal bovino Leche descremada Azul de Coomasie

5 Anticuerpo IgG anti-humano Anticuerpo conjugado Papel de Nitrocelulosa Peroxidasa Fosfatasa Patrón de corrida Ácido Sulfúrico 14. Indique con cuál de las pruebas siguientes es posible determinar la concentración de una cantidad pequeña (250 ng/ml) de hapteno: a) ELISA indirecta, b) RIA, c) Citometría de flujo, d) Inmunoprecipitación, e) ELISA directa. 15. Explique las diferencias entre las tres vías de activación del complemento (clásica, alterna y de la lectina) en lo que se refiere a cómo son activadas. Qué vía o vías se consideran parte de las respuestas inmunitarias adquirida? 16. Explique por qué la IgM no puede por sí misma activar el complemento. 17. Se han descrito pacientes con deficiencias genéticas de todos los componentes del complemento. Las consecuencias de la deficiencia de C3 son especialmente graves. Explique las implicaciones de la ausencia de C3 en la depuración de inmunocomplejos y en fagocitosis de bacterias Gram negativas. 18. Explique las funciones de C5a Los virus envueltos no pueden ser lisados por complemento? Explique.

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