3M Food Safety Boletín Técnico

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1 Resumen de desempeño de la 3M Petrifilm Aqua para recuento de Mohos y Levaduras Las placas 3M Petrifilm Aqua para Recuento de Mohos y Levaduras (AQYM) son placas con medios de cultivo listas para la toma de muestras que se utilizan en la prueba microbiana del agua embotellada. Cada placa contiene un agente gelificante soluble en agua, nutrientes e indicadores en un formato seco de larga conservación. Este boletín técnico resume los datos recolectados por 3M Food Safety durante la prueba de desempeño de las placas 3M Petrifilm Aqua AQYM. Tabla de contenido 3M Petrifilm Aqua para Recuento de Mohos y Levaduras Resultados del estudio comparativo del método p. 2 Resultados del estudio de sensibilidad/especificidad p. 4

2 Datos de desempeño de la placa 3M Petrifilm Aqua para Recuento de Mohos y Levaduras (AQYM) Estudio comparativo del método Se realizó un estudio comparativo del método en un laboratorio 1 externo de referencia para comparar los resultados del método de la placa 3M Petrifilm Aqua AQYM con un método de referencia, agar rosa de bengala 2 con clorotetraciclina (CRB) y con otro agar, agar papa dextrosa acidificado (apda), para la recuperación de moho y levadura en agua embotellada. Matrices: Se realizaron pruebas en quince marcas de agua, dos lotes por marca para igualar un total de 30 muestras. Tabla 1: Marcas de agua embotellada examinadas Tipo de agua Purificada Regional de manantial Natural de manantial Marca y país de fabricación: Nestle Pure Life, Estados Unidos Purificada, Aquafina, Estados Unidos Dasani, Estados Unidos Trauth Dairy, Estados Unidos Ice Mountain, Estados Unidos, Kroger, Estados Unidos Evian, Francia Jana, Croacia, Fiji, Islas Fiji, Ty Nant, Gales Voss Flat, Noruega Natural de manantial (con gas) Voss Sparkling, Noruega Gerolsteiner, Alemania, Apollinaris, Alemania Perrier, Francia Organismos Se lavaron e inocularon cultivos en caldo de toda una noche en muestras de agua embotellada a un nivel de inóculo bajo/medio (con el objetivo de obtener 25 unidades formadoras de colonias [cfu] por muestra) y a un nivel de inóculo medio/alto (con el objetivo de obtener 75 cfu por muestra). Además, se preparó un control no inoculado para cada muestra de agua. Los siguientes tres organismos se asignaron de forma aleatoria a los 30 tipos diferentes de agua: PeniciIlium sp. ATCC N , Paecilomyces sp. ATCC N. 1114, y Candida albicans ATCC N El agua inoculada se dejó en la oscuridad a temperatura ambiente toda la noche para que se equilibre antes del proceso de filtrado. ¹ Estudio de Q Laboratories, Inc., Cincinnati, OH, de los Estados Unidos que compara el desempeño de la placa 3M Petrifilm Aqua con los métodos de referencia. El estudio se presentó en la Asociación Internacional de Protección Alimentaria (IAFP) ² Método 9610D 2a de los Métodos Estándar para el Análisis de Agua y Agua Residual (SMEWW) -Técnica de filtro de membrana para la detección de hongos, edición 20,

3 Datos de desempeño de la placa 3M Petrifilm Aqua para Recuento de Mohos y Levaduras (AQYM) Estudio comparativo del método (continuación) Comparación del método Se compararon los siguientes métodos para el Recuento de Mohos y Levaduras: s 3M Petrifilm Aqua AQYM frente agar rosa de bengala con clorotetraciclina [CRB] (se filtraron 100 ml; SMEWW). Las placas se incubaron a 20 ± 1 C y se realizó un recuento a los 3 y 5 días. s 3M Petrifilm Aqua AQYM frente a agar papa dextrosa acidificado [apda] (se filtraron 100 ml; método del cliente). Las placas se incubaron a 25 ± 1 C y se realizó un recuento a los 3 y 5 días. Se utilizó un filtro de éster mixto de celulosa para la comparación del método. Las muestras se colocaron en placas por duplicado para cada nivel de inóculo. Después de la incubación en las condiciones mencionadas arriba, se realizó un recuento de todas las colonias en todas las placas. Análisis estadístico Los recuentos se transformaron en recuentos log 10. Se utilizó una prueba T pareada por nivel de inoculación para comparar las diferencias en los recuentos entre el método de la placa 3M Petrifilm Aqua AQYM y los métodos comparativos. Se tomó un valor P <0,05 para indicar una diferencia significativa. 3

4 Resultados Graph 1: Comparaciones de los recuentos de moho y levadura: Recuentos promedio expresados en log Recuentos expresados en log Recuentos promedio expresados en log Comparaciones de los recuentos de mohos y levaduras Agar PDA acidificado Bajo Agar PDA acidificado Agar PDA acidificado N = 30 por nivel (recuentos a los 3 y 5 días: las mismas muestras) Agar PDA acidificado Agar PDA acidificado Agar PDA acidificado Agar PDA acidificado Alto Bajo Alto Bajo Alto Bajo 3 días 5 días 3 días 5 días 20 C (SMEWW) 25 C (apda) Statist. different: AQYM>aPDA Alto 4

5 Comparación del método SMEWW Los recuentos de mohos y levaduras del log de la media no fueron considerablemente diferentes entre el método de la placa 3M Petrifilm Aqua AQYM y el método de agar CRB al nivel de inoculación bajo en el día 3 (valor P = 0,745) o al nivel de inoculación alto en el día 3 (valor P = 0,063). Los recuentos de mohos y levaduras del log de la media no fueron considerablemente diferentes entre el método de la placa 3M Petrifilm Aqua AQYM y el método de agar CRB al nivel de inoculación bajo en el día 5 (valor P = 0,121) o al nivel de inoculación alto en el día 5 (valor P = 0,052). Comparación del método del cliente Los recuentos de mohos y levaduras del log de la media no fueron considerablemente diferentes entre el método de la placa 3M Petrifilm Aqua AQYM y el método de apda al nivel de inoculación bajo en el día 3 (valor P = 0,844) o al nivel de inoculación alto en el día 3 (valor P = 0,723). Los recuentos de moho y levadura del log de la media no fueron considerablemente diferentes entre el método de la placa 3M Petrifilm Aqua AQYM y el método de apda al nivel de inoculación bajo en el día 5 (valor P = 0,506). En el nivel de inoculación alto en el día 5, los recuentos de moho y levadura del log de la media por filtro fueron considerablemente diferentes entre el método de la placa 3M Petrifilm Aqua AQYM y el método de apda (P = 0,036), con recuentos expresados en log por filtro para el método de la placa 3M Petrifilm Aqua AQYM, en promedio, mayores en valor que los del método de apda. 5

6 Datos de desempeño de la placa 3M Petrifilm Aqua para Recuento de Mohos y Levaduras (AQYM) Estudio de exclusividad/inclusividad Los estudios de inclusividad y exclusividad se realizaron con cultivos puros de 20 cepas de hongos y 21 cepas sin hongos. Las cepas se obtuvieron de la Colección Americana de Cultivos Tipo (EE. UU.) o de la colección de cultivos de 3M. Los organismos fúngicos se diluyeron y se inocularon en agua embotellada con el objetivo de obtener entre 25 y 50 cfu por filtro; y las cepas no fúngicas se diluyeron y se inocularon con el objetivo de obtener aproximadamente 1x105 cfu por filtro. Las muestras inoculadas se filtraron con un filtro de éster mixto de celulosa y se colocaron sobre las placas 3M Petrifilm Aqua AQYM, agar rosa de bengala con clorotetraciclina (CRB) o agar papa dextrosa acidificado (apda). 1. Se incubaron un grupo de placas 3M Petrifilm Aqua AQYM y las placas CRB a 20 ± 1 C por 5 días, con lecturas a los 3 y 5 días. 2. Se incubaron un segundo grupo de placas 3M Petrifilm Aqua AQYM y las placas apda a 25 ± 1 C por 5 días, con lecturas a los 3 y 5 días. 3. Además, se filtraron cepas no fúngicas, se colocaron sobre el medio agar para el recuento en placa y se incubaron a 35 ± 1 C por 48 ± 2 h como un control positivo. Cepas para sensibilidad Alternaria alternaria ATCC 6663 Aspergillus brasiliensis ATCC Aspergillus niger M6 (3M) Candida albicans ATCC Candida albicans ATCC Candida glabrata ATCC Candida guilliermondii ATCC 6260 Chaetomium globosum ATCC 6205 Cladosporium cladosporioides ATCC Hansenula (Pichia) anomala ATCC 2349 Cepas para Especificidad Acinetobacter baumanii ATCC Aeromonas hydrophila ATCC Bacillus atrophaeus ATCC Bacillus cereus ATCC Bacillus pumilis ATCC Citrobacter brakii ATCC Enterobacter aerogenes ATCC Enterococcus faecalis ATCC Escherichia coli ATCC Enterococcus faecalis ATCC Paecilomyces variotii ATCC 1114 Penicillium corylophilum ATCC Pityrosporum ovale ATCC Rhizopus stolonifer (+) ATCC 6227b Rhodotorula mucilaginosa ATCC 9449 Saccharomyces cerevisiae ATCC Saccharomyces cerevisiae ATCC 7754 Saccaromyces cerevisiae ATCC 2601 Trichosporon mucoides ATCC Escherichia coli ATCC Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis ATCC 4797 Micrococcus luteus ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC Pseudomonas fluorescens ATCC Salmonella enterididis typhimurium ATCC Salmonella enterica ATCC Sphingomonas paucimobilus ATCC Staphylococcus aureus ATCC Yersinia enterocolitica ATCC

7 Resultados: Comparación con el Método SMEWW 20 C Inclusividad 3 días s 3M Petrifilm Aqua AQYM Agar CRB 16 de 20 cepas (80%) tuvieron un crecimiento 16 de 20 cepas (80%) tuvieron un crecimiento Alternaria alternaria ATCC 6663 Chaetomium globosum ATCC 6205 Cladosporium cladosporiodes ATCC Alternaria alternaria ATCC 6663 Chaetomium globosum ATCC 6205 Cladosporium cladosporiodes ATCC días 20 de 20 cepas (100%) tuvieron un crecimiento 20 de 20 cepas (100%) tuvieron un crecimiento Exclusividad 5 días s 3M Petrifilm Aqua AQYM Agar CRB 4 de 21 cepas (19%) tuvieron un crecimiento 1 de 21 cepas (4,9%) tuvieron un crecimiento Cepas con crecimiento visible: Acinetobacter baumanii ATCC (1 colonia) Enterobacter aerogenes ATCC (1 colonia) Enterococcus faecalis ATCC (1 colonia) Cepas con crecimiento visible: 7

8 Resultados: Comparación con el Método del cliente 25 C Inclusividad 3 días 5 días s 3M Petrifilm Aqua AQYM Agar apda 16 de 20 cepas (80%) tuvieron un crecimiento 16 de 20 cepas (80%) tuvieron un crecimiento Alternaria alternaria ATCC 6663 Chaetomium globosum ATCC 6205 Cladosporium cladosporiodes ATCC Alternaria alternaria ATCC 6663 Chaetomium globosum ATCC 6205 Cladosporium cladosporiodes ATCC de 20 cepas (100%) tuvieron un crecimiento 19 de 20 cepas (95%) tuvieron un crecimiento Exclusividad 5 días s 3M Petrifilm Aqua AQYM Agar apda 4 de 21 cepas (19%) tuvieron un crecimiento 1 de 21 cepas (4.8%) tuvieron un crecimiento Cepas con crecimiento visible: Cepas con crecimiento visible: Bacillus atrophaeus ATCC (1 colonia) Bacillus cereus ATCC (1 colonia) Salmonella enterididis ATCC (1 colonia)

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