MANUAL DE LABORATORIO ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD BACTERICIDA COLOIDE DE PLATA ESTABILIZADO 3.2.

Transcripción

1 MANUAL DE LABORATORIO ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD BACTERICIDA COLOIDE DE PLATA ESTABILIZADO

2 Este Coloide se absorbe fuertemente a cualquier superficie libre de gases y aceites y siempre y cuando no sea metálica. Este factor es de considerable importancia para evaluar la eficacia de su acción microbicida en pruebas de laboratorio. Una vez que el Coloide ha sido absorbido en paredes o superficies se vuelven auto-esterilizantes y por consecuencia inadecuadas para el cultivo de microorganismos posteriores a menos que dichas superficies sean DESACTIVADAS dejándolas por toda una noche sumergidas en una solución de Potasio Thiosulfato. El Coloide fue desarrollado para activar en medio contaminando con los microorganismos de la prueba. Cuando se desea diluir las soluciones del Coloide, sugerimos el siguiente esquema para minimizar la pérdida de la actividad por absorción en las paredes del recipiente. Como se puede ver sólo se requieren tres frascos de dilución para diluir el Coloide en 0 millones de partes de agua. ESQUEMA. COLOIDE 3.2 % 9. 1/ / / / / Suspensión Bacteriana 1 / Suspensión Bacteriana 1 / Suspensión Bacteriana 1 / Suspensión Bacteriana 1 /

3 SUGERENCIAS ACERCA DE LAS PRUEBAS CON EL COLOIDE GENERALIDADES 1 El Coloide es un estabilizado complejo sistema coloidal y debe esperarse un comportamiento típico coloidal. 2 El Coloide se adhiere fuertemente a cualquier superficie, (excepto metálica sin recubrimiento), con la cual entra en contacto. Esta superficie así cubierta con una o varias capas, es entonces esterilizante y esta actividad persiste por algún tiempo. APLICACIONES BIOLÓGICAS 3 De acuerdo con el párrafo (2), los cristales que entran en contacto con el Coloide, quedan imposibilitados para posteriores cultivos de microorganismos, algas, levaduras, mohos y hongos, a menos que se quieran matar estos organismos. 4 Cuando se deseen técnicas de electro galvanización, no se debe poner el COLOIDE directamente al agar nutriente y entonces se aumentan organismos para probar los efectos de eliminación de estos. No hay que olvidar que el COLOIDE fue hecho para operar en medio líquido y tales técnicas arrojarían datos completamente erróneos: Debe permitirse que la bacteria que se trata de probar, entre en contacto con el COLOIDE en medio líquido, (agua, etc...), por un tiempo o periodo de contacto apropiado, (1 hora o más), luego pasa una alícuota a un plato de Petri estéril y agréguese agar nutriente. ACTIVACION DE RECIPIENTES EN LABORATORIOS CON ESTE COLOIDE 1 Se denomina ACTIVACION al efecto residual que adquieren las superficies de materiales no metálicos al entrar en contacto con ciertos coloides de plata, como ocurre con este COLOIDE. 3

4 2 Una superficie activada con este COLOIDE tiene la propiedad de ejercer una acción bactericida sobre los líquidos contaminados que entran en contacto con esas superficies. Este efecto perdura por largo tiempo; un año como mínimo. 3 Los recipientes de laboratorio se activan al entrar en contacto con este COLOIDE, por lo tanto cualquier artefacto de vidrio queda activado al humedecerse con el COLOIDE. 4 Si se vierte algún líquido contaminado en un recipiente activado se observará la paulatina eliminación de las bacterias y gérmenes patógenos contenidos en el líquido. El tiempo de contacto es proporcional a la eliminación de las bacterias y gérmenes patógenos. 5 El laboratorista deberá determinar la reducción o eliminación de las bacterias y gérmenes patógenos, efectuando análisis sucesivos del líquido contenido en el recipiente activado y comparándolo con el Testigo analizado antes del tratamiento. Los tiempos recomendados para análisis deberán ser cada media hora, para trazar la curva de eliminación progresiva hasta la total eliminación de las bacterias y gérmenes patógenos. NOTA: Cuando se trate de una prueba de agua contaminada, deberá previamente filtrarse dicha muestra, simplemente utilizando papel filtro. Esta precaución es necesaria para evitar la absorción de la Plata por la materia orgánica que pudiera encontrarse en suspensión en la muestra de agua sujeta a prueba. ANÁLISIS BACTERIOLÓGICO CUANTITATIVO DEL AGUA ANÁLISIS PRELIMINAR La muestra del agua que se ha de analizar se recoge en un frasco de 0., limpio y esterilizado con tapón de vidrio o cápsula de rosca. El cuello y la embocadura del frasco se cubren con papel pergamino y éste se ata con un trozo de bramante. Luego se esteriliza el frasco en una estufa de aire caliente a 170º C., durante una hora, por lo menos. 4

5 La cubierta de papel pergamino sirve para proteger el contenido del frasco contra cualquier contaminación. Al tomar una muestra de una fuente o un grifo, debe dejarse correr el agua durante cinco minutos por lo menos, para que arrastre cualquier germen presente alrededor de la salida, además en tuberías pequeñas pueden producirse cambios en el número de bacterias; pues unas tienden a morir y otras a multiplicarse. Se coge la botella con la mano derecha y con la izquierda se quita el tapón, sujetándolo con el papel, cuidando de evitar cualquier contaminación y se ata el papel con bramante. Los dedos no han de tomar la embocadura ni el tapón, pues así podría infectarse el contenido y el examen daría un resultado erróneo. Cuando se toma una muestra tranquila, se quita primero el tapón con la mano izquierda, se sumerge la botella boca abajo unos 30 cm., se invierte y una vez llena, se saca del agua y se tapa. Si hay alguna corriente, la boca de la botella debe dirigirse hacia ella, para evitar que se produzcan bacterias precedentes de los dedos. Recogida y conservada la muestra se produce un cambio rápido en su contenido bacteriano. Generalmente, el número de microorganismos muestra un notable aumento gradual unas veces y apresurado otras; esto obedece a la multiplicación de los bacilos típicamente acuáticos; pues los patógenos y otros gérmenes que suelen albergarse en el intestino del hombre y de los animales, tienden a morir muy pronto. INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA Una subida de temperatura acelera mucho el aumento del número de bacterias como el agua embotellada, aunque se guarda a temperaturas no mayores de º C., pueden producirse rápidos cambios bacterianos, deben examinarse todas las muestras lo antes posible. ANÁLISIS CUANTITATIVO El método de recuento macroscópico bacteriano, consiste en poner una cantidad medida de la muestra de agua en un platillo de Petri y mezclarla con Agar fundido esterilizado. Cuando se ha solicitado el agua, la placa se incuba a 37º C., durante 24 horas, se cuentan las 5

6 colonias y se anota el número de las desarrolladas por milímetro de agua. El número de bacterias contenido en una muestra no debe exceder de 300 por milímetro. Si hay más deben prepararse diluciones. FACTORES QUE INFLUYEN EN EL ANÁLISIS 1 Composición y reacción del medio. 2 Temperatura. 3 Periodo de Incubación. 4 Presencia de abundante oxígeno y humedad. Para identificar el E-Coli se aplica el método universal de precipitar la lactosa en medio del agua, aunque otras bacterias también los precipitan (Aeróbacter y Aerógenes), pero estos últimos son de poca o nula importancia sanitaria. Se diferencia el E-Coli y estos dos últimos en la forma y coloración de precipitarse la lactosa. El E-Coli precipita el caldo lactoso en medio de Agar como un anillo de coloración rojo intenso con vis-metálico y el Aeróbacter o Aerógenes solamente forman un anillo verde sin vis-metálico. ENFERMEDADES PRODUCIDAS POR EL AGUA 1 LA DISENTERIA LA QUE PREDOMINA. 2 EL COLERA. 3 LA FIEBRE TIFOIDEIA. Las tres enfermedades son afecciones intestinales, por lo tanto, sus agentes causales se encuentran en el contenido intestinal. Loe gérmenes que producen estas enfermedades mueren a los pocos días (una o dos semanas), y si el agua esta FRIA, o contiene ABUNDANTE MATERIA ORGANICA, mueren a los pocos días. ENSAYO PRELIMINAR La primera fase de los análisis de agua, es la prueba preliminar o de tanteo, que consiste en poner cantidades medidas de agua en una 6

7 serie de tubos de fermentación de lactosa, con dos veces más medio nutritivo que agua por lo menos. Generalmente se emplean cinco tubos de fermentación cada uno con mililitros de agua, otro con 1 mililitro y otro con 0.1 mililitro de agua; los tubos se incuban 48 horas a 37º C. La formación de gases en la ampolleta invertida dentro del tubo de fermentación al cabo de 24 horas a 37º C., constituye una prueba preliminar positiva, pues señala como posible, la presencia de gérmenes coliformes. Si no se desprenden gases en 24 horas, los tubos se incuban durante 46 horas. Si hubo gases es una prueba Positiva Dudosa, entonces deben determinarse si hay grupo Coliformes. Cuando no se forman entonces la prueba es negativa (No hay necesidad de determinar grupo coliformes). PREPARACIÓN DEL MEDIO MEDIO DE AGAR CON EOSINA Y AZUL DE METILILENO. Este medio de prepara añadiendo cantidades dadas de los dos colorantes el Agar Lactosado Fundido y vertiendo unos 15 mililitros en cada platillo Petri. Cuando se trazan estrías típicas de E-Coli sobre la superficie de este medio y se incuban las placas a 37º C., durante 24 horas, las colonias presentan Obscura la zona central de un Viso o Brillo Metálico Verdoso, característicos. En cambio las colonias típicas de Aerobacter Aerógenes muestran Pardo el centro y rara vez brillo metálico. TÉCNICA EMPLEADA PARA DETERMINAR EL PODER BACTERICIDA DE LOS COLOIDES DE PLATA, UTILIZANDO AGUA DE ALBAÑIL DILUIDA 1:1,000. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Tomar 0., de agua de albañal recientemente obtenida y filtrarla por gasa. 1. Tómese 2., del filtrado y agréguese a 2,000., de agua destilada que se ha ajustado previamente el ph a 7.2 con agua reguladora de fosfatos. Agítese. 7

8 2. Tomar., de Coloide de Plata y agregarlo a un tubo con 9., de agua destilada, agítese obteniendo así una dilución de 1:. 3. De la dilución (2), tomar., y agregar 9., de agua destilada. Agitar. Se obtiene una dilución 1: De la dilución (3), tomar., más 9., de agua destilada. Agitar. Se obtiene una dilución 1:1,000. TÉCNICA 5. A un litro de la dilución del agua de albañal (1), agregar 1., de la dilución (4), 1:1,000 del Coloide de Plata. Agitar y tomar el tiempo. Se obtiene una parte por millón del Coloide. 6. Prepárese por cada muestra, una serie de 3 tubos de 18 x 175 mm., conteniendo 20., de medio concentrado (1.5 veces su fórmula), de caldo lactosado verde brillante bilis (Difco), con tubo de Kahn invertido en el interior del primero, utilizado como campana para ver producción de gas series de tubos 16 x 150 mm., contenido., de caldo lactosado verde brillante bilis (Difco), a la concentración normal (1.0 vez su fórmula), con su respectiva campana cajas de Petri estériles tubos con 9., de agua reguladora de fosfatos de ph 7.2 (estéril), cada uno.. 1 pipeta de., estéril pipetas de., estériles caja con medio de Agar Eosina Azul de Metileno (Difco), por cada tubo que fermente tubos con 20., de medio Agar Triptona glucosado, que fundido se coloca en un baño maría a 45º C. 14. Transcurridas 3 horas después de la preparación de la dilución (5), inocúlese simultáneamente se ésta y de la dilución (1) en la 8

9 serie de tubos indicada en (6),., de cada dilución por tubo,., de cada dilución por tubo en una de las series indicada en (7), y 0.1 de., cada dilución por tubo en la otra serie indicada en (7). Incubar a 35 º C + 0.5º C., por 48 horas. 15. Hacer diluciones de cada muestra (1) y (5) 1:0, 1:1,000, 1:,000, 1:1,000,000 con los tubos indicados en (9), utilizando 1 pipeta estéril para cada dilución y agitando perfectamente. 16. De cada dilución obtenida (15), tomar., y colocarlo en cada una de las cajas de Petri indicada en (8). Agregar inmediatamente el medio de Agar Triptona contenido en los tubos que se indican en (13), mezclar por rotación y dejar solidificar. Incubar a 35º C º C., por 48 horas. 17. Transcurridas 48 horas observar: a) Todos los tubos que han fermentado, se resiembran, para aislar colonias, en cada caja de Agar Eosina Azul de Metileno. b) Contar el número de colonias en las cajas inoculadas con las diluciones de las muestras. Solo tomar en cuenta aquellas que contienen entre 30 y horas después de inoculadas las cajas de Eosina Azul de Metileno, observar si hay colonias aisladas típicas de Escherichia-Coli. 19. Informar el número de colonias en Agar Triptona glucosado a 37º C., por., informar el número más probable de Organismos Coliformes por 0. La muestra (1) corresponde al testigo. 20. La técnica bacteriológica utilizada en este proceso se basa en la determinación del número de bacterias y organismos coliformes para aguas potables y aguas negras que utiliza la Secretaría de Salubridad y Asistencia. 9

10 ESQUEMA DE DILUCIÓN PARA LA PRUEBA DEL: COLOIDE DE PLATA ESTABILIZADO 3.2. TABLAS Nº. 1 y 2 Págs. (siguientes)

11 Nº. 1 PLATA COLOIDAL ESTABILIZADA 0. AGUA DE DILUCIÓN: BUFFERED. - A - - B - - C - - D - C T - S CONTROL I S - 2 II S - 4 III S - 6 IV S - 8 V S - VI S - 11 C T - S CONTROL M I S -2 M II S -4 M III S -6 M IV S -8 M V S - M VI S

12 Nº. 2 PLATA COLOIDAL ESTABILIZADA 0. AGUA NATURAL DE MANANTIAL - A - - B - - C - - D - C T - Z CONTROL I Z - 2 II Z - 4 III Z - 6 IV Z - 8 V Z - VI Z - 11 C T - Z CONTROL M I Z -2 M II Z -4 M III Z -6 M IV Z -8 M V Z - M VI Z