BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

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1 BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO ÁREA ESPECÍFICA DE: MICROBIOLOGÍA NOMBRE DE LA ASIGNATURA: CÓDIGO: LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA I FAR 331L FECHA DE ELABORACIÓN: MARZO 2001 NIVEL EN EL MAPA CURRICULAR: TIPO DE ASIGNATURA: FORMATIVO DISCIPLINARIA PROFESORES QUE PARTICIPARON EN SU ELABORACIÓN: MSP CARLOS CABRERA MALDONADO MSP JESÚS LUZURIAGA GALICIA MC. GLORIA LEÓN TELLO MSP JUAN MANUEL ALVAREZ LOPEZ MC CARLOS TÉLLEZ OSORIO QFB MARÍA SUSANA PÉREZ FERNANDEZ HORAS DE TEORÍA: 4 HORAS PRÁCTICA: 3 CRÉDITOS: 11 1

2 REGLAMENTO DEL LABORATORIO 1. La asistencia al laboratorio deberá ser del 100 % 2. La hora de entrada tiene 10 minutos de tolerancia, después de ese tiempo, se tomará como retardo, cada retardo equivale a medio punto menos en la calificación final del laboratorio. 3. En el laboratorio se deberá portar la bata limpia y abotonada. 4. Las mochilas no se deberán colocar sobre la mesa de trabajo. 5. Lavarse las manos antes y después de iniciar la sesión práctica. 6. No comer ni fumar en el laboratorio, ni introducir ningún objeto en la boca. 7. Limpiar y desinfectar el área de trabajo antes y después de trabajar. 8. No pasear entre las mesas del laboratorio, el trabajo debe realizarse sentado. 9. Hablar solo lo necesario con los compañeros. 10. Antes de iniciar la práctica, leer cuidadosamente las instrucciones y si no entiende pregunte al profesor. 11. Se tendrá que traer algún material necesario para poder llevar a cabo las prácticas como: asa, guantes, cinta adhesiva, algodón, así como material para limpieza como jabón y benzal. 12. El asa utilizada para el cultivo de microorganismos, se deberá esterilizarse en la flama del mechero antes y después de su uso. 13. Informe al profesor de cualquier accidente que ocurra. 14. Todo el material que se va a incubar o desechar, deberá colocarse en el sitio indicado por el profesor. 15. Ser cuidadoso con el material y equipo que se le proporcione, el material de desecho no contaminado depositarlo en los botes de basura, el material contaminado no lavarlo y depositarlo donde le indique el profesor sin etiquetas. 16. Etiquetar todo el material que se va a incubar 17. Para tener derecho a la calificación del laboratorio se deberá cumplir con el 100% de asistencia, tener el manual al corriente y aprobar el examen final que corresponderá al 20% de la calificación final de la teoría. 2

3 INDICE Fac. Cs. Qs. Dpto. De MICROBIOLOGÍA NÚMERO DE LA PRÁCTICA Practica 1 Practica 2 Practica 3 Practica 4 Practica 5 Practica 6 Práctica 7 Practica 8 Practica 9 Practica 10 Practica 11 Practica 12 Practica 13 Practica 14 Practica 15 Practica 16 TITULO DE LA PRÁCTICA INTRODUCCIÓN AL TRABAJO DE LABORATORIO EN BACTERIOLOGÍA APLICACIÓN DE LOS CRITERIOS DE COWAN Y STEEL PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS NO FERMENTADORAS CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Haemophilus Y Brucella CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Neisseria Y Moraxella CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS: COLIFORMES Y Proteus CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS DE LOS GÉNEROS Salmonella Y Shigella CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Campylobacter Y Helicobacter CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Streptococcus Y ENTEROCOCCUS CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DEL GÉNERO Staphylococcus CARACTERIZACIÓN DE BACILOS GRAM POSITIVOS: Bacillus Y Gardnerella CARACTERIZACIÓN DE BACILOS ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTES (BAAR) CARACTERIZACIÓN DE CLAMYDIAS CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS SIN PARED CELULAR CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS ANAEROBIAS EVALUACIÓN DEL LABORATORIO PÁGINA

4 PRACTICA 1 INTRODUCCIÓN AL TRABAJO DE LABORATORIO EN BACTERIOLOGÍA OBJETIVO: Valorar los recursos actuales del laboratorio de microbiología para poder realizar la identificación de bacterias. INTRODUCCIÓN: El laboratorio bacteriológico es el espacio físico donde se efectúa gran diversidad de procedimientos médicos, científicos, técnicos, etc. Que en conjunto representan un valioso recurso de la clínica al documentar el estado de salud (medicina preventiva) o de enfermedad (medicina curativa). La razón por la que el médico envía al paciente al laboratorio es sólo una: necesita información para tomar decisiones adecuadas. Los estudios microbiológicos tienen la característica de ser eminentemente etiológicos, lo cual permite brindar al paciente el tratamiento específico, generando un impacto significativo en la humanidad. El laboratorio bacteriológico ha tenido una evolución de varios siglos, desde el surgimiento del microscopio hasta el advenimiento de la biología molecular, la cual se ha ido ampliando gradualmente. DESARROLLO: Mostrar cada uno de los medios con que cuenta el laboratorio de para la identificación de las bacterias, explicar su funcionamiento, así como reafirmar el reglamento del laboratorio para evitar cualquier accidente. CUESTIONARIO: 1.- Cuál es la importancia de cumplir un reglamento dentro de un laboratorio práctico? 4

5 PRACTICA 2 APLICACIÓN DE LOS CRITERIOS DE COWAN Y STEEL PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS OBJETIVO: Realizar tomando como base los criterios establecidos por Cowan y Steel, las pruebas bioquímicas fundamentales, que permiten la identificación presuntiva de las bacterias de interés médico. INTRODUCCIÓN: La identificación de una bacteria es su asignación a un taxón según una clasificación dada y consiste en la determinación de las características fenotípicas y/o genotípicas y la comparación de estas características con los diferentes taxones de la clasificación considerada. Las características a determinar y su número depende principalmente del tipo de bacteria y del fin que se persigue en la identificación. Cowan y Steel establecen un grupo de pruebas, denominadas pruebas primarias, con las cuales se puede determinar el género, grupo de géneros o en algún caso familia a la que pertenece un aislamiento. Dichas pruebas son: 1.- Tinción de gram 2.- Tinción de Shaeffer-Fulton (sólo en caso de tener BGP) 3.- Tinción de Zielh-Nelssen (sólo en caso de tener BGP) 4.- Metabolismo (O/F/I) 5.- Producción de catalasa 6.- Producción de oxidasa 7.- Movilidad 8.- Requerimientos de aerobiosis 9.- Requerimientos de anaerobiosis 10.- Producción de ácido a partir de glucosa También se pueden incluir pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a especie. Estas dependerán del género o familia determinado. (ej: producción de pigmentos, producción de indol a partir de triptofano, producción de coagulasa, de fenilalanina deaminasa, etc.) DESARROLLO: Tomar una cepa problema a la cual se le realizará lo siguiente: 1.- Tinción de gram 2.- Tinción de Shaeffer-Fulton (sólo en caso de tener BGP) 3.- Tinción de Zielh-Nelssen (sólo en caso de tener BGP) 4.- Inocular por estría cruzada una placa de agar 5.- Inocular por picadura el medio O/F 6.- Inocular por picadura el medio MIO 7.- Inocular por picadura una base de CTA con un carbohidrato 8.- Incubar todos los medios a 37 C por 24 horas 9.- Leer morfología colonial de la placa 10.- Del crecimiento en placa realizar las pruebas de oxidasa y catalasa 11.- Leer bioquímicas 12.- Comparar los resultados en tablas 13.- Identificar familia o género CUESTIONARIO: 1.- Cuál es la importancia de los criterios de Cowan y Steel? 2.- Cómo se realiza la tinción de Gram y cuál es su fundamento? 3.- Para que sirve la tinción de Zielh-Nelseen y cuál es su fundamento? 5

6 4.- Cuál es el fundamento de la prueba de oxidasa y cómo se realiza en el laboratorio? 5.- En que medios se puede realizar la prueba de movilidad y cómo se interpreta? 6.- Cuál es el fundamento de la prueba de catalasa? 7.- De cada uno de los criterios de Cowan y Steel efectuados a la cepa de estudio durante la práctica, realiza dibujos y menciona tus resultados. 6

7 PRACTICA 3 CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS NO FERMENTADORAS OBJETIVO: Comprobar por medio de análisis de laboratorio, el comportamiento característico de cepas bacterianas no fermentadoras de carbohidratos. INTRODUCCIÓN: Este grupo abarca microorganismos aerobios, no esporulados, que no utilizan a los carbohidratos como fuente de energía o los utilizan a través de vías metabólicas diferentes a la fermentación. La importancia de estas bacterias radica fundamentalmente en su capacidad para infectar hospederos inmunocomprometidos, por lo que cobran especial interés a nivel intrahospitalario, donde además es común la presencia de cepas con marcadas características de resistencia a los antimicrobianos de uso convencional. Dentro de este grupo se encuentran los siguientes géneros: Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella, AlcalígenesFlavobacterium, Agrobacterium, entre otros. Algunos de los indicios tempranos para detecta al un microorgnismo no fermentador serían los siguientes: 1.- Falta de evidencias de fermentación de la glucosa 2.- Positiva de la prueba de oxidasa 3.- Carencia de desarrollo en el agar de Mac Conkey En la rutina bacteriológica es necesario rapidez y bajo costo en la identificación de este grupo de bacterias, por lo que se sugiere se sigua el esquema de King-Weaver para su identificación, el cual se basa en 4 pruebas (ver tabla): 1.- Utilización de glucosa (fermentador (F), oxidador (O) o no sacarolítico (NS)) 2.- Capacidad de crecer en Mac Conkey 3.- Producción de citocromo oxidasa 4.- Movilidad Características de algunos géneros gramnegativos no fermentadores CREC GÉNERO METABOLISMO MOVILIDAD OXIDASA MAC CONKEY Pseudomonas O + flagelos polares + + OTRAS CARACTERÍSTICAS Desnitrifican nitratos a N 2 Acinetobacter O ó NS Parecen diplococos Flavobacterium O V algunos presentan flagelos perítricos Bordetella O V + Moraxella O ó NS Escaso o negativo Escaso o negativo Escaso o negativo Requieren complejo B Requiere factores de crecimiento Cocobacilar, difícil de crecer 7

8 Xanthomonas Alcaligenes O O ó NS + un solo flagelo + flagelos perítricos V - Requiere factores de crecimiento. Patógeno de plantas + - Aerobio estricto DESARROLLO: 1.- Sembrar por estría cruzada los medios en placa, procurando perforar el medio en la parte del estriado masivo, en el caso del agar sangre carnero. 2.- Sembrar por picadura los medios O/F y MIO 3.- Incubar 24 horas a 37 C 4.- Leer morfología colonial 5.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción de gram 6.- Leer pruebas bioquímicas CUESTIONARIO: 1.- Por qué es importante identificar a los BGNnF? 2.- Qué géneros conforman el grupo de los BGNnF? 3.- Cuáles son las pruebas claves para sospechar de un BGNnF? 4.- Mencione un esquema diferente al de King-Weaver para identificar a los BGNnF 5.- De los BGNnF que géneros dan la prueba de oxidasa negativa, quiénes movilidad negativa y quiénes son capaces de crecer en Mac Conkey? 6.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos: a) Morfología colonial b) Tinción de Gram c) Pruebas de catalasa y oxidasa d) Pruebas bioquímicas e) Establecer si la cepa pertenece al grupo de BGNnF 8

9 PRÁCTICA 4 CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Haemophilus Y Brucella OBJETIVO: Identificar los géneros Haemophilus y Brucella INTRODUCCIÓN: Los miembros del género Haemophilus son bacilos gramnegativos pequeños, inmóviles, que requieren de factores de crecimiento presentes en la sangre como el factor X, que son un grupo de compuestos tetrapirrólicos termoestables, como la hemina mientras que el factor V es el dinucleótido de nicotinamida adenina (NAD). Estos dos factores están contenidos en los eritrocitos, por lo tanto el agar chocolate es un buen medio para la recuperación de Haemophilus. Las especies de Haemophilus humanos, están vinculadas en su mayoría con infecciones del tracto respiratorio superior a excepción de H. ducreyi que es un patógeno de tracto genital. El género Brucella abarca un grupo de microorganismos que son cocobacilos diminutos de tinción débil y desarrollo lento en agar sangre. Son responsables de la brucelosis, la cual es difícil de diagnosticar, debido al amplio espectro de manifestaciones clínicas asociadas. DESARROLLO PARA Haemophilus: 1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar chocolate 2.- Incubar horas a 37 C 3.- Leer morfología colonial 4.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción de gram 5.- Realizar pruebas de identificación de especie en agar soya tripticasa con sensidiscos impregnados de los factores V y X DESARROLLO PARA Brucella 1.- Sembrar en botellas para hemocultivo 2.- Incubar a 35 C durante 4-6 semanas 3.- Hacer subcultivos en agar sangre y chocolate 4.- Identificar especies, mediante pruebas bioquímicas como necesidad de CO 2, producción de ureasa y sensibilidad a los colorantes fucsina básica, tionina y azul de tionina. CUESTIONARIO 1.- Cuál es la importancia clínica de Haemophilus? 2.- Existe algún agar comercial para el aislamiento de Haemophilus? 3.- Menciona la(s) especies de Haemophilus que requieran el factor V, la(s) que requiera el factor X y la(s) que requiera ambos factores. 4.- Cuál es la importancia clínica del género Brucella? 5.- Qué especies de Brucilla requieren C0 2 para crecer, cuales producen H 2 S y cuales ureasa? 9

10 PRÁCTICA 5 CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Neisseria Y Moraxella OBJETIVO: Identificar los géneros Neisseria y Moraxella INTRODUCCIÓN: Los miembros del género Neisseria son microorganismos gramnegativos cocoides o baciliares que pueden encontrarse en pares o en cadenas cortas. Son inmóviles, no forman esporas y producen ácido a partir de carbohidrato lo que permite identificar especies. Antes llamada Neisseria catarrhalis ahora conocida como Moraxella catarrhalis, puede ser responsable de infecciones respiratorias principalmente en niños y ancianos, crece en agar chocolate y agar nutritivo, no produce ácido a partir de glucosa, maltosa, fructosa, sacarosa no lactosa. DESARROLLO PARA Neisseria: 1.- Sembrar una placa de Tayer Martin en forma de Z y luego estriar 2.- Incubar horas a 37 C 3.- Leer morfología colonial 4.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción de gram 5.- Realizar pruebas de identificación de especie en bases de CTA con diferentes carbohidratos DESARROLLO PARA Moraxella 1.- Sembrar en agar chocolate y agar nutritivo 2.- Incubar horas a 37 C 3.- Leer morfología colonial 4.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa, tinción de gram y DNasa CUESTIONARIO 1.- Cuál es la importancia clínica de Neisseria gonorrhoeae? 2.- Que tipo de medio es el Tayer Martin y porque? 3.- Menciona las especies de Neisseria y su comportamiento frente a los diferentes carbohidrato 4.- Cuál es la importancia clínica de Moraxella catarrhalis? 10

11 PRÁCTICA 6 y 7 CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS: COLIFORMES Y Proteus NOTA: Estas prácticas se realizarán en dos sesiones diferentes. OBJETIVO: Determinar por medio de ensayos de laboratorio las características bioquímicas que definen a la familia Enterobacteriaceae INTRODUCCIÓN: La familia Enterobacteriaceae está conformada por un número importante de especies, que incluyen bacilos gramnegativos, con metabolismo fermentador, anaerobios facultativos, catalasa positivos, oxidasa negativos, la mayoría son móviles, reducen los nitratos a nitritos, y no presentan condiciones nutritivas exigentes, crecen muy bien en agar Mac Conkey. Tienen como nicho ecológico el tracto intestinal de gran variedad de seres vivos, incluyendo al hombre, lo cual facilita su presencia prácticamente en todo lugar. Solamente un número reducido de géneros son considerados patógenos primarios como es el caso de Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia spp. y algunas cepas de E. coli. Las demás son parte importante de la microbiota intestinal, comportándose como patógenos solo en el caso de pacientes inmunocomprometidos (patógenos oportunistas). Con el objeto de facilitar la caracterización de esta familia se ha dividido con base a la capacidad de fermentar lactosa en dos grupos: lactosa (+), los que la fermentan y los lactosa (-) los que no poseen el sistema enzimático que les permite llevar a cabo el proceso. También es necesario el empleo de pruebas bioquímicas y fisiológicas para establecer el grupo bacteriano. DESARROLLO: 1.- Sembrar por estría cruzada placas de Mac Conkey y SS 2.- Inocular pruebas bioquímicas 3.- Inocular galerías 4.- Incubar 5.- Leer morfología colonial, pruebas bioquímicas, realizar tinción de gram, catalasa, oxidasa 6.- Comparar resultados con tablas y establecer género y especie. CUESTIONARIO 1.- Cuál es la importancia de las enterobacterias? 2.- Qué géneros se encuentran en la familia Enteobacteriaceae? 3.- Las enterobacterias se han clasificado en dos grupos: lactosas (+) y lactosas (-), que géneros se encuentran en cada uno de estos grupos? 4.- Menciona a las enterobacterias inmóviles y a las que son capaces de producir H 2 S? 5.- Cuáles son las pruebas bioquímicas que permiten identificar a las enterobacterias y menciona el fundamento de cada una de ellas? 6.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos: a) Morfología colonial b) Tinción de Gram c) Pruebas de catalasa y oxidasa d) Pruebas bioquímicas e) Establecer género y especie de la cepa problema 11

12 PRÁCTICA 8 CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Campylobacter Y Helicobacter OBJETIVO: Identificar a los microorganismos que pertenecen a los géneros Campylobacter y Helicobacter Los microorganismos del género Campylobacter son bacilos curvos gramnegativos, con metabolismo inerte, catalasa y oxidasa positiva, movilidad positiva por la presencia de 1 a 2 flagelos en cada polo crecen en condiciones de microaerofilia. Algunas especies que se conocen de este género son C. jejuni, C. fetos y C. coli. Este género se relaciona con problemas gastrointestinales. Helicobacter también es un bacilo curvo gramnegativo, de metabolismo inerte, catalasa y oxidasa positivas, movilidad positiva por la presencia de 4-8 flagelos polares. El género lo comprenden más de 24 especies pero Helicobacter pylori es la especie tipo y se ha aislado de mucosa gástrica intestinal. DESARROLLO: 1.- Sembrar medios selectivos para estos géneros como: Skirrow o Campy-Bap 5.- Leer morfología colonial, pruebas bioquímicas, realizar tinción de gram, catalasa, oxidasa 6.- Comparar resultados con tablas y establecer género y especie. CUESTIONARIO 1.- Menciona la importancia clínica de estos dos géneros 2.- Dibuja tus observaciones de la tinción de gram 3.- Indica el resultado de tus pruebas bioquímicas y establece género y especie 12

13 PRÁCTICA 9 CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Streptococcus Y Enterococcus OBJETIVO: Caracterizar bioquímicamente a las especies más importantes del género INTRODUCCIÓN: Los miembros de este género se caracterizan por ser cocos grampositivos agrupados en pares o cadenas, generalmente inmóviles, catalasa negativos en general, no esporulados, aerobios y anaerobios facultativos con metabolismo fermentativo en el que producen ácido láctico, fórmico, etanol y CO 2, crecen óptimamente a 37 C. Es el género de mayor interés médico. Algunas especies forman parte de la flora normal del hombre y otras están relacionadas con cuadros clínicos de amigdalitis, celulitis, erisipela, faringitis, rinitis, Hypoderma, fiebre escarlatina, sepsis puerperal, neumonía, endocarditis bacteriana, caries, meningitis, infecciones en vías urinarias y heridas, fiebre reumática, glomérulo nefritis y conjuntivitis purulenta. METODOLOGÍA PARA LA IDENTIFICACIÓN DE Streptococcus HEMÓLISIS ALFA BETA NO HEMÓLISIS (GAMA) Crece en 6.5% NaCl Soluble en bilis Sensible a bacitracina: S. pyogenes Ennegrece la bilis-esculina Sensible a optoquina CAMP + Hidrólisis del hipurato +: S. agalactiae S. pneumoniae Grupo D DESARROLLO: 1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar sangre carnero 2.- Realizar pruebas de CAMP 3.- Realizar pruebas de sensibilidad a bacitracina 4.- Realizar pruebas de sensibilidad a optoquina 5.- Realizar tinción de gram y observar al microscopio 6.-Incubar 7.- Leer morfología colonial 8.- Interpretar resultados 13

14 CUESTIONARIO 1.- Cuál es la definición del género Streptococcus? 2.- Cuál es el fundamento de la prueba de CAMP? 3.- Para que se utiliza la prueba de sensibilidad a bacitracina y optoquina? 4.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos: a) Morfología colonial b) Tinción de Gram c) Pruebas de catalasa y oxidasa d) Otras pruebas e) Establecer si la cepa en estudio pertenece al género de Streptococcus, de ser positiva la respuesta, menciona la especie 14

15 PRÁCTICA 10 CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DEL GÉNERO Staphylococcus OBJETIVO: Observar las características más relevantes del género, resaltando aquellas que permiten su diferenciación con otros cocos grampositivos de cercana filiación. INTRODUCCIÓN: Este género está constituido por cocos grampositivos, agrupados en racimos, catalasa positiva con metabolismo fermentativo. Son responsables principalmente de infecciones supurativas de la piel y tejidos blandos. Así como de infecciones oportunistas. Se reconocen 3 especies: Sta. aureus, Sta. epidermidis, Sta. saprophyticus. DIFERENCIACION DE LAS ESPECIES DE Staphylococcus PRUEBAS DE S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus LABORATORIO Color de las colonias Amarilloblanco Blanco Blanco Hemólisis en agar sangre + +/- - Crecimiento anaerobio + + +/- Coagulasa Fermentación de la glucosa Fermentación del manitol Novobiocina Sensible Sensible Resistente DESARROLLO: 1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar sangre y una de Sal y manitol 2.- Incubar 3.- Leer morfología colonial y microscópica 4.- Realizar pruebas de identificación de especie 5.- Interpretar resultados CUESTIONARIO: 1.- Cuál es la definición del género de Staphylococcus? 2.- Qué prueba permite diferenciar entre el género de Streptococcus y Staphylococcus? 3.- Cuál es el fundamento de la prueba de coagulasa y cómo se realiza en el laboratorio? 4.- Cuáles son los ingredientes del agar de sal y manitol y por qué es importante utilizarlo para la identificación de este género y no de otros? 5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos: a) Morfología colonial b) Tinción de Gram c) Pruebas de catalasa y oxidasa d) Otras pruebas e) Establecer si la cepa en estudio pertenece al género de Staphylococcus, de ser positiva la respuesta, menciona la especie. 15

16 PRÁCTICA 11 CARACTERIZACIÓN DE BACILOS GRAM POSITIVOS: Bacillus Y Gardnerella OBJETIVO: Identificar por pruebas de laboratorio a los integrantes de estos dos géneros. INTRODUCCIÓN: Los microorganismos del género Bacillus son bacilos grampositivos, formadores de endosporas, catalasa positivos, son móviles excepto B. anthracis y β- hemolíticos excepto B. anthracis. Este género es ubicuo en la naturaleza ya que posee endosporas y éstas pueden permanecer en campos contaminados por periodos de 10 hasta 30 años. B. anthracis es el agente causal de ántrax en animales principalmente vacas y ovejas. Gardnerella vaginalis es un cocobacilo gram variable, fermentados catalasa, oxidasa y movilidad negativos, requiere de medios específicos para crecer como medios enriquecidos, en gelosa sangre humana produce β-hemólisis, fermentar a la glucosa, almidón y galactosa y es sensible al metronidazol. Esta involucrada con la vaginosis bacteriana. DESARROLLO PARA Bacillus e incubar a 37 C 1.- Inocular una placa de agar sangre carnero 2.- Inocular un tubo de caldo nutritivo e incubarlo a 42 C 3.- Inocular un tubo con gelatina e incubarlo a 4 C por 7 días 4.- Leer morfología colonial, buscar hemólisis, hacer tinción de gram y Shaeffer-Fulton 5.- Interpretar resultados DESARROLLO PARA Gardnerella 1.- Inocular una placa de agar chocolate 2.- Leer morfología colonial, realizar catalasa, oxidasa y tinción de gram 3.- Inocular la colonia sospechosa en agar sangre humana y buscar β-hemólisis 4.- Hacer pruebas de fermentación de carbohidratos 5.- Interpretar resultados CUESTIONARIO: 1.- Cuál es el fundamento de la tinción de Shaeffer-Fulton y cómo se realiza en el laboratorio? 2.- Menciona otras pruebas para diferenciar especies de Bacillus 3.- Cuál es la importancia clínica de Gardnerella vaginalis? 5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos: a) Morfología colonial b) Tinción de Gram c) Pruebas de catalasa y oxidasa d) Otras pruebas 16

17 PRÁCTICA 12 CARACTERIZACIÓN DE BACILOS ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTES (BAAR) OBJETIVO: Conocer la forma de trabajo de los Bacilos ácido alcohol resistentes en el laboratorio mediante un seminario debido a no contar con las medidas de seguridad. INTRODUCCIÓN: Este género incluye parásitos obligados, saprófitos y formas intermedias que se diferencian por sus requerimientos nutricionales. Las cepas saprofítas crecen en sus sustratos que son muy simples, otras requieren de medios complejos o suplementos para su crecimiento; y otras que no han sido cultivadas in vitro Las especies difieren en su actividad de amidasa, catalasa y otras actividades enzimáticas; todas son aerobias aunque algunas especies crecen únicamente por debajo de la superficie del medio de cultivo. El contenido de lípidos de las células es alto, especialmente en la pared celular, los pigmentos difusibles son raros. Las micobacterias que más frecuentemente causan tuberculosis en el humano son M. tuberculosis y M. Boris, además existen otras micobacterias como M. kansasii, M. marinum, M. scrofulaceum, M. xenopi, M. avium, M. intracellulare y M. fortuitum. CUESTIONARIO: 1.- Cuál es la importancia clínica de las Mycobacterias? 2.- Cómo han sido clasificadas? 3.- Cómo se realiza y para que sirve la baciloscopia? 3.-Menciona al menos 5 pruebas de laboratorio para diferenciar especies así como su fundamento. 17

18 PRÁCTICA 13,14 Y 15 CARACTERIZACIÓN DE CLAMYDIAS CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS SIN PARED CELULAR CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS ANAEROBIAS OBJETIVO: Conocer las pruebas de laboratorio que se realizan para estos microorganismos mediante un seminario debido a no contar con los medios necesarios. CUESTIONARIO: 1.- Menciona las nuevas técnicas para la identificación de las Clamidias 2.- Cuál es la importancia clínica de las bacterias sin pared celular y cómo se diagnostican en el laboratorio? 3.- Cómo se pueden generar las condiciones de anaerobiosis en el laboratorio? 4.-Menciona algún género anaerobio estricto y su importancia clínica. 18

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