UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR PROGRAMA DE INGENIERIA AMBIENTAL Y SANITARIA BIOLOGIA II CARBOHIDRATOS.

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1 UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR PROGRAMA DE INGENIERIA AMBIENTAL Y SANITARIA BIOLOGIA II CARBOHIDRATOS. OBJETIVOS: Identificar por métodos colorimétricos y cualitativos los principales monosacáridos, disacáridos y polisacáridos. Identificar azucares reductores y no reductores CONOCIMIENTOS PRE VIOS Identifique las clases de carbohidratos que se encuentran en las vías metabolicas Glicolisis, ciclo de Krebs y Glucogenesis. MATERIAL QUE DEBE TRAER EL ESTUDIANTE Fosfóros Azucar(una cucharada) Hielo (termo pequeño) Laminas portaobjetos Pipetas de pasteur I. FUNDAMENTO TEORICO. La palabra carbohidrato proviene de que la formula molecular de estos compuestos puede expresarse como hidratos de carbono. Definiendo los carbohidratos con mayor presición en términos de su estructura orgánica, son polihidroxialdehidos, polihidroxicetonas o sustancias que, por hidrólisis forman dichos productos. La química de los carbohidratos es, principalmente, la combinación de la química de dos grupos funcionales: el grupo hidroxilo y el grupo carbonilo. Los carbohidratos están distribuidos ampliamente en vegetales y animales en los cuales tiene participación estructural, funcional y metabólica.

2 En general los carbohidratos se clasifican, de acuerdo con su estructura, en monosacáridos, oligosacaridos y polisacáridos. Los monosacáridos se clasifican de acuerdo con el número de átomos de carbono presente en (triosas, tertrosas, pentosas, hexosas, etc.) y depende también de que el grupo carbonilo presente se halle como un aldehído (aldosas) o como una cetona (cetosas). 5 Los carbohidratos que no pueden hidrolizarse se llaman monosacáridos o azucares simples. Su formula empírica es (CH2O)n. En el grupo de los monosacáridos, quizás los más importantes son los que poseen seis átomos de carbono en su molécula. Existen dieciséis aldohexosas (monosacáridos de seis carbonos y un grupo funcional aldehído) sin embargo, las de mayor importancia son la D-Glucosa, D-Galactosa y D-Manosa. Dentro de las cetohexosas (con seis carbonos y grupo funcional cetona), el más importante es la D-Fructosa o Levulosa. Los polisacáridos contienen muchos monosacáridos unidos entre si y varian en la longitud de la cadena y peso molecular. La hidrólisis completa de la mayoria de los polisacaridos producen monosacáridos. Los polisacáridos son abundantes y representan para el hombre la principal fuente de energía metabólica de fácil aprovechamiento, el almidón (un producto vegetal), constituido por solo moléculas de glucosa la base alimenticia del globo terrestre, especialmente en la población de bajos recursos. El glucógeno (producto animal) y la celulosa (fibra vegetal).

3 II. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS EQUIPOS Tubos de ensayo Gradilla Espátula Propipeta Pipetas graduadas de 1, 5 y 10 ml Pisetas Pinzas para tubos de ensayo Molish Barfoed Bial Seliwanoff Lugol Benedict Fenilhidrazina Glucosa Galactosa Maltosa Lactosa Almidón Resorcina Agitador de tubos de ensayo Campana de extracción. Baño de maría Microscopio o Lupa

4 III. PARTE EXPERIMENTAL PRUEBA MOLISH. Carbohidratos BARFOED monosacáridos BIAL pentosas de de de PROCEDIMIENTO VOLUMEN En un tubo de ensayo por separado colocar: 1 ml α- Naftol 2 gotas c/tubo Agitar. Luego cuidadosamente dejar caer por las paredes del tubo Acido sulfúrico concentrado. La formación de un anillo 0,5 ml color violeta en la interfase indica la presencia de carbohidratos (Ver Figura Nº 34.3) 1 ml Reactivo de Barfoed 2,5 ml Mezclar y calentar en baño hirviente, contando los minutos y sacar del baño cada tubo inmediatamente después que haya aparecido el precipitado rojo ladrillo de oxido cuprico. Anotar el tiempo que corresponde a cada carbohidrato. La aparición de un precipitado antes de los 6 minutos indica la presencia de un monosacárido, un escaso precipitado rojo a los 9 y 12 minutos indica la presencia de Lactosa o Maltosa. Arabinosa 1% 1 ml Reactivo de Bial 1,5 ml Llevar a baño hirviente durante 3 minutos. La aparición de un color verde azuloso y totalmente transparente, indica la presencia de una Pentosa.

5 CONTINUACION PRUEBA SELIWANOFF de Cetosas o azucares no reductores LUGOL polisacáridos de PROCEDIMIENTO: En un tubo de ensayo por separado colocar: Sacarosa 1% Fructosa 1% Reactivo de Seliwanoff Llevar a baño de maría a 90ºC durante 10 min. La aparición de un color rojo cereza, indica la presencia de un azúcar no reductor (Ver figura Nº 35.3) Almidón 1% Reactivo de Lugol Mezclar y observar. La aparición de una coloración azul indica la presencia del almidón y una coloración roja, indica el Glucógeno, si el color no cambia el carbohidrato es un Mono o Disacárido (Ver figura Nº 36.3) VOLUMEN 1 ml 2 ml 2 ml 1 gota BENEDICT Reductor. de Azúcar Sustancia problema 0,5 ml Reactivo de Benediet 2 ml Llevar a baño de maría a 90ºC durante 5 min. La aparición de un precipitado, verde, amarillo o rojo indica la presencia de un azúcar reductor.

6 CONTINUACION PRUEBA FENILHIDRAZINA de Osazonas. PROCEDIMIENTO En un tubo de ensayo por separado colocar: Sustancia problema Reactivo de Fenilhidrazina Mezclar bien. Colocar los tubos en baño de maría hirviente durante10 min. Al final del periodo enfríe los tubos con agua de chorro. Dejar en reposo durante 5 min. Luego observar al microscopio las osazonas, colocando una gota en el portaobjeto y cubrir con el cubreobjeto evitando dañar los cristales con movimientos bruscos o exceso de muestra. (Ver figura Nº 37.3) VOLUMEN 2 ml 0,5 ml

7 IV. MARCHA ANALITICA SUSTANCIA DESCONOCIDA P. MOLISH (-) INCOLORA No es carbohidrato (+) ANILLO ROJO O VIOLETA Carbohidrato P.BARFOED (+) P.P ROJO antes de 6 min. Monosacárido (+) P.P ROJO de 9 a 12 min. Di o Polisacárido P.BIAL P.SELIWANOFF (-) OTRO COLOR HEXOSA (+) ROJO FRUCTOSA (-) INCOLORO O LEVE COLORACION GLUCOSA O GALACTOSA (+) VERDE PENTOSA P.BENEDICT (+) ROJO O AMARILLO OSCURO GLUCOGENO (+) AZUL ALMIDON (-) AMARILLO Disacárido (+) CRISTALES EN FORMA DE ESTRELLA (Galactosazona) GALACTOSA (+) CRISTALES EN FORMA DE PALMA (Glucosazona) GLUCOSA P. FENILHIDRAZINA (+) P.P ROJO Reductor (+) CRISTALES EN FORMA DE NIDO (Lactosazona) LACTOSA (-) NO CAMBIA No es Reductor SACAROSA P.FENILHIDRAZINA (+) CRISTALES EN FORMA DE FLOR (Maltosazona) MALTOSA Figura Nº 2.5. Marcha analítica para identificar carbohidratos

8 Glucosazona (Agujas o plumas) (Cristales en forma de palma) Glucosazona (Agujas o plumas) (Cristales en forma de palma) Arabinosazona. Agujas agrupadas en bolas no muy densas Lactosazona. Cristales en forma de nido.(agujas finas agrupadas en bolas muy densas) Maltosazona (Agujas aplanadas) forma de flor) Xilosazonas (Agujas largas y finas) (Cristales en Figura Nº 2.4. Apariencia cristalina de las osazonas vistas al microscopio