Nuevas columnas CORTECS 2.7 µm: revisión de columnas de última generación

Transcripción

1 Nuevas columnas CORTECS 2.7 µm: revisión de columnas de última generación Presentadora: Olatz Mitxelena Chat: Bàrbara Bagó 19 Junio Waters Corporation 1

2 Agenda Introducción Columnas modernas HPLC y UPLC Haciendo máximas las prestaciones del HPLC con columnas XP 2.5 µm & CORTECS HPLC 2.7 µm NUEVAS! Resumen Recursos para contribuir al éxito 2014 Waters Corporation 2

3 Función columna: separación N α 1 k Rs = 4 α k + 1 Contribuciones Mecánicas Sistema ultra-baja dispersión Operar a velocidad lineal óptima Morfología partícula Partículas pequeñas Columnas bien empaquetadas Contribuciones Químico-Físicas Fases enlazadas complementarias Múltiples partículas base Poder utilizar ph alto Mayor retención 2014 Waters Corporation 3

4 Historia columnas Waters µbondapak Styragel Spherisorb DeltaPak PrepPak 1958 SymmetryShield XTerra Symmetry ACQUITY UPLC BEH SunFire Columns XTerraPrep XBridge ACQUITY UPLC BEH Amide ACQUITY UPLC BEH Glycan XBridge Amide XSelect HSS HPLC Columns ACQUITY UPLC HSS C 18 and HSS C 18 SB ACQUITY UPLC HSS Cyano & PFP columns XSelect TM HSS Cyano & PFP columns XP 2.5 µm Columns Nova-Pak ProteinPak TM Pico-Tag TM AccQTag TM Symmetry 300 Atlantis Atlantis HILIC Silica Prep OBD Intelligent Speed TM BioSuite NanoEase XBridge HILIC Atlantis T3 ACQUITY UPLC HSS T3 AccQTag TM Ultra BEH130 Columns BEH300 Columns ACQUITY UPLC BEH200 SEC XSelect CSH HPLC columns ACQUITY CSH Columns Viridis SFC Columns ProteinPak High Rs IEX ACQUITY UPLC BEH125 SEC ACQUITY UPC 2 Columns CORTECS Columns ACQUITY UPLC BEH450 SEC ACQUITY APC Columns CSH130 Columns 2014 Waters Corporation 4

5 Creación de columnas en Waters: registro cgmp Todas las plantas de fabricación Waters están registradas en la FDA y están certificadas en ISO 9001:2000, ISO Milford MA, USA: Hardware Manufacture Taunton, MA, USA: Particle Synthesis La regulación de los procesos de calidad GMP afectan a Gerencia y organización de departamento de Calidad Controles de Producción, Procesamiento, empaquetado y etiquetado Controles de documentación y registro Wexford, Ireland: Device Manufacturing Como parte del registro, la FDA puede inspeccionar las instalaciones cada 2 años para su cumplimiento 2014 Waters Corporation 5

6 Waters es Fabricante primario de dispositivos de cromatografía Enabling Expertise Primary Manufacturer Primary Manufacturing for Reproducibility Particle Creation Bonder Column Packer Distributor Bonding Bonding Column Packing Column Packing Column Packing Sales and Distribution Sales and Distribution Sales and Distribution Sales and Distribution Certificación cgmp, ISO 9001 e ISO Registrado FDA 2014 Waters Corporation 6

7 Creando columnas en Waters: Síntesis de partícula y funcionalización Proceso de síntesis de partícula y funcionalización requieren entre 4-6 meses Cada etapa del proceso tiene su propio sistema de calidad 2014 Waters Corporation 7

8 Agenda Introducción Columnas modernas HPLC y UPLC - Plataformas de partículas - Fases estacionarias - Tomando referencia del rendimiento del sistema Haciendo máximas las prestaciones del HPLC con columnas XP 2.5 µm & CORTECS HPLC 2.7 µm NUEVAS! Resumen Recursos para contribuir al éxito 2014 Waters Corporation 8

9 La selección más amplia de partículas únicas Tecnología BEH Tecnología HSS Tecnología CSH Tecnología CORTECS Solid-Core Estabilidad ph sin precedentes Máxima Retención Capacidad de carga excepcional Mayor eficacia y resolución Versatilidad fase móvil y temperatura Escalabilidad incomparable UPLC a HPLC Selectividad partícula y ligando Escalabilidad incomparable UPLC a HPLC Forma de pico superior para analitos básicos Escalabilidad incomparable UPLC a HPLC Productividad mejorada a resolución similar Mayor prestación a igual presión Waters es la ÚNICA compañía que ofrece columnas con partículas sub-2-µm tanto totalmente porosas como de núcleo sólido 2014 Waters Corporation 9

10 Constante crecimiento rango Selectividades ACQUITY UPLC HSS C18 SB XSelect HSS C18 SB ACQUITY HSS PFP XSelect HSS PFP ACQUITY UPLC HSS CN XSelect HSS CN ACQUITY UPLC CSH Fluoro-Phenyl XSelect CSH Fluoro-Phenyl ACQUITY BEH C8 XBridge C8 ACQUITY UPLC BEH Phenyl XBridge Phenyl ACQUITY UPLC CSH Phenyl-Hexyl XSelect CSH Phenyl-Hexyl ACQUITY UPLC BEH Shield RP18 XBridge Shield RP18 CORTECS C18+ ACQUITY UPLC HSS T3 XSelect HSS T3 ACQUITY UPLC BEH C18 XBridge C18 CORTECS C18 ACQUITY HSS C18 XSelect HSS C18 ACQUITY UPLC CSH C18 XSelect CSH C Waters Corporation 10

11 Denominación de las columnas HPLC UPLC 2.7 µm UPLC 2014 Waters Corporation 11

12 Plataformas de columnas: escalabilidad Diseñadas y optimizadas para estabilidad ph Diseñadas y optimizadas para selectividad Diseñadas y optimizadas para máxima eficacia C18 C18+ HILIC 1.6 µm[uplc] 2.7 µm 1.7 µm [UPLC] 2.5 XP, 3.5, 5 y 10 µm 1.7 [UPLC], 2.5 XP, 3.5, 5 y 10 µm CSH 1.8 [UPLC], 2.5, 3.5 y 5 µm HSS 2014 Waters Corporation 12

13 Familia XBridge/BEH Diseñada y optimizada para estabilidad ph Excelentes columnas HPLC y UPLC de uso general para moléculas pequeñas Rango más amplio de clases de compuestos Rango ph más amplio (1 12) Rango temperatura más amplio Sangrado MS ultra-mínimo Escalabilidad directa entre tecnología UPLC, HPLC analítico y HPLC preparativo 1.7 [UPLC], 2.5 XP, 3.5, 5 y 10 µm 2014 Waters Corporation 13

14 [BEH] Ethylene Bridged Hybrid U.S. Patent No. 6,686,035 B2 Puentes etano en la matriz sílica Anal. Chem. 2003, 75, Waters Corporation 14

15 Ethylene Bridged Hybrid [BEH] Funcionalizaciones Químicas de columnas Robustas, Reproducibles, totalmente escalables para separaciones de fase reversa e HILIC BEH C18: de primera elección, mayor rango ph, LC/MS BEH C8: para compuestos hidrofóbicos, mayor rango ph, LC/MS BEH Shield RP18: grupo carbamato embebido, selectividad alternativa BEH Phenyl: columna fenilo más estable, mayor rango ph BEH HILIC: no ligando, partícula robusta para separación HILIC de comnpuestos básicos muy polares BEH Amide: columna HILIC de uso genérico para compuestos muy polares como azúcares, sacáridos, carbohidratos, etc Waters Corporation 15

16 La importancia del ph en Fase Móvil: Rápido Desarrollo de Métodos Rango amplio ph en fase móvil es aproximación efectiva para cambios en selectividad Aumento selectividad: Ácidos (Verde/Azul) Bases (Rojo/Amarillo) Neutros (Pico 2) no afectados por ph 2014 Waters Corporation 16

17 Familia XSelect HSS y CSH Familia diseñada y optimizada para selectividad Variadas partículas para resolver múltiples problemas cromatográficos Mayor tolerancia presión; primera partícula en base sílica (1.8 μm) diseñada para aplicaciones UPLC Selectividades alternativas(vs. BEH & CSH) Retención incrementada 1.7 [UPLC], 2.5 XP, 3.5, 5 y 10 µm CSH 1.8 [UPLC], 2.5 XP, 3.5 y 5 µm HSS Diseñada para LC/MS Forma de pico mejorada para analitos básicos con fases móviles ácidas de baja fuerza iónica Reduce efecto sobrecarga Rápido equilibrado; previene cambios retención por cambios en ph 2014 Waters Corporation 17

18 Partículas Charged Surface Hybrid [CSH] Step 1 Step 2 Step 3 PROCESO CHARGED SURFACE HYBRID 2014 Waters Corporation 18

19 Beneficios de la tecnología CSH: Comparación de capacidad de carga ACQUITY UPLC CSH C x 50 mm, 1.7 µm Quetiapine (base) Propiophenone (neutral) AU AU Fully porous silica C x 50 mm, 1.8 µm Quetiapine (base) Propiophenone (neutral) 0.0 AU Competitive Core-Shell C x 50 mm, 1.7 µm Quetiapine (base) Propiophenone (neutral) Minutes 2014 Waters Corporation Comparative separations may not be representative of all applications 19

20 Químicas CSH y HSS CUATRO columnas C 18 para separaciones fase reversa ph bajo a neutro CSH C18: Cambio rápidos ph para desarrollo métodos HSS C18: Superior forma pico & estabilidad ácida HSS C18 SB: Selectividad alternativa (SB) para bases HSS T3: Retención sin precedentes para compuestos polares Fases estacionarias selectividad alternativa CSH Phenyl-Hexyl: alta prestación fenilo, para fases móviles aditivos, selectividad diferente vs BEH Phenyl CSH Fluoro-Phenyl: Selectividad diferenciada, óptimo para bajos ph, retención mejorada para compuestos ácidos HSS PFP: Selectividad excepcional y retención para isómeros posicionales, compuestos halogenados y bases polares HSS CN: Química CN Reproducible, Estable, compatible fase normal 2014 Waters Corporation 20

21 Gama Selectividades Derivados Ácido Cafeico ,4 5 5 BEH C 18 BEH C 8 BEH Shield RP18 BEH Phenyl 5 CSH Phenyl- Hexyl CSH Fluoro-Phenyl 5 CSH C 18 Conditions : Columns: 2.1 x 50 mm Mobile Phase A: 0.1% CF 3 COOH in H 2 O Mobile Phase B: 0.08% CF 3 COOH in ACN Flow Rate: 0.5 ml/min Gradient: Time Profile Curve (min) %A %B Injection Volume: 1.0 µl Sample Diluent: 50:50 H 2 O: MeOH with 0.05% CF 3 COOH Sample Conc.: 100 µg/ml Temperature: 40 o C Detection: 330 nm Sampling rate: 40 pts/sec Time Constant: 0.1 Instrument: Waters ACQUITY UPLC, with ACQUITY UPLC TUV HSS CN HSS PFP HSS T3 HSS C 18 HSS C 18 SB Compounds 1. Caftaric acid 2. Chlorogenic acid 3. Cynarin 4. Echinacoside 5. Cichoric acid Minutes 2014 Waters Corporation Comparative separations may not be representative of all applications 21

22 Tomando Referencia del Rendimiento del Sistema Principio de verificación comparativa: Uso de Materiales de Referencia de Control de Calidad (QCRM) para evaluar o testar parámetros cromatográficos clave y compararlos con datos generados cuando equipo funciona correctamente. Importancia de la verificación comparativa: El uso en rutina en el sistema analítico y el control de datos permite verificar rápidamente la fiabilidad de los resultados y permite determinar el origen del mal funcionamiento. Criterios típicos 1. Reproducibilidad tiempo retención 2. Reproducibilidad área picos 3. Tailing picos 4. Resolulción picos 5. Respuesta 6. Presión Sistema 2014 Waters Corporation 22

23 Materiales de Referencia de Control de Calidad (QCRM) Requisitos de producto QCRM Reproducible Lote to Lote Preciso Apropiado según tipo análisis (LCMS, LC-UV) La calidad del material de referencia es crítica para la evaluación de datos analíticos y funcionamiento del instrumento Waters dispone una extensa gama de QCRMs diseñados para permitir a los analistas determinar si el sistema está en buenas condiciones Neutrals QCRM: Compound Type Acetone (V 0) Void Marker Naphthalene Neutral Acenaphthene Neutral AU Acetone Naphthalene Acenaphthene Minutes 2014 Waters Corporation 23

24 Agenda Introducción Columnas modernas HPLC y UPLC Haciendo máximas las prestaciones del HPLC con columnas XP 2.5 µm & CORTECS HPLC 2.7 µm NUEVAS! Resumen Recursos para contribuir al éxito 2014 Waters Corporation 24

25 Maximizar prestaciones del HPLC Cada vez más, un creciente número de organizaciones se dan cuenta de las ventajas comerciales y científicas de la tecnología UPLC. Sin embargo, este cambio de tecnología ha llevado a compañías a evaluar cómo sacar el máximo partido de sus instrumentos HPLC disponibles mientras llega la transición a sistemas UPLC. Columnas Partículas menores ( µm) Cómo sacar el máximo partido a sistemas HPLC existentes mientras sucede la Transición a la Tecnología UPLC 2014 Waters Corporation 25

26 Columnas extended Performance 2.5 µm Empaquetadas en hardware ultra-baja dispersión para minimizar ensanchamiento banda Diseñadas para resistir alta presión 4.6 mm ID hasta 9,000 PSI 2.1 y 3.0 mm IDs compatible con presiones UPLC Flexibilidad en configuración 2.1, 3.0 y 4.6 mm ID (2.1 y 3.0mm incorporan tecnología ecord ) Longitudes 30, 50, 75, 100 y 150 mm 14 fases estacionarias escalables Partículas 2.5 µm XBridge [BEH] y XSelect [CSH y HSS] BEH C 18, Shield RP18, C 8, Phenyl, HILIC y Amide CSH C 18, Phenyl-Hexyl y Fluoro-Phenyl HSS C 18, T3, C 18 SB, Cyano y PFP 2014 Waters Corporation 26

27 Productividad mejorada AU Tolmetin Naproxen Fenoprofen Indomethacin Diclofenac XSelect CSH C x 100 mm, 3.5 µm HPLC System 3.5 µm Minutes AU XSelect CSH C 18 XP 4.6 x 75 mm, 2.5 µm HPLC System 2.5 µm XP X Faster than 3.5 µm HPLC Minutes AU ACQUITY UPLC CSH C x 50 mm, 1.7 µm UPLC System 1.7 µm X Faster than 3.5 µm HPLC 5X Faster than 2.5 µm HPLC Minutes Waters Corporation 27

28 Nuevas formas para Mejorar la Productividad y Eficacia con Nuevas Soluciones Innovativas de Waters 2014 Waters Corporation 28

29 Columnas CORTECS 2.7 µm Columnas para HPLC/UHPLC partículas 2.7 µm de núcleo sólido Beneficios fundamentales Alta eficacia a presiones reducidas o Resolución o Rapidez Escalabilidad desde/a UPLC 3 químicas: C 18 + C 18 CORTECS Solid-core d p = 1.6 µm HILIC d core = 1.12 µm 2014 Waters Corporation 29

30 CORTECS 2.7 µm Comparaciones de Presión Backpressure (psi) Columns: 2.1 x 50 mm Partículas CORTECS 2.7 µm: Mayor partícula que XBridge 2.5 µm XP o Genera menor presión Empaquetado menor densidad o Incluso menor presión 1 Partículas CORTECS 1.6 µm: Ligeramente menor que BEH 1.7 µm o Esperable mayores presiones Empaquetado menor densidad o Menor presión Resultado neto es presión similar 0 Conditions: 20% Acetonitrile in water; 600 µl/min; 40 o C 1 A. Daneyko, Anal. Chem. 2011, 83, Waters Corporation 30

31 Alta eficacia a presiones de HPLC AU Estradiol 2. Ethinyl estradiol 3. Estrone 4. Levonorgestrel Rs 4.9 Configuration: 4.6 x 150 mm 4 Fully Porous C 18, 5 µm Psi: 1900 N peak 4 : 10, AU Rs 6.3 Fully Porous C 18, 3.5 µm Psi: 2900 N peak 4 : 17, AU Rs 8.2 CORTECS C 18, 2.7 µm Psi: 3200 N peak 4 : 23, Minutes 2014 Waters Corporation 31

32 Columnas CORTECS 2.7 µm: Transferencia Transferencia método Proceso de síntesis para escalado adecuado entre diferentes tamaños de partícula UPLC HPLC 1.6 µm UPLC 2.7 µm HPLC/UHPLC 2014 Waters Corporation 32

33 Columnas CORTECS 2.7 µm: Escalabilidad dimensiones AU AU CORTECS UPLC C 18 +, 1.6 µm 2.1 x 50 mm ml/min 6271 psi Minutes CORTECS C 18 +, 2.7 µm 2.1 x 75 mm 0.3 ml/min 1824 psi Sulfathiazole 2. Sulfamerazine 3. Sulfamethazine 4. Sulfamethoxypyridazine 5. Sulfachloropyridazine 6. Sulfamethoxazole 7. Sulfasoxazole Minutes CORTECS C 18 +, 2.7 µm 4.6 x 150 mm AU ml/min 3273 psi ACQUITY UPLC H-Class, 30 C A: 0.1% formic acid (aq) B: 0.1% formic acid in acetonitrile Minutes 2014 Waters Corporation 33

34 Transferencia método a/desde UPLC AU Fully Porous C 18, 5 µm 4.6 x 150 mm 1.00 ml/min Alliance HPLC Initial Method AU CORTECS C 18, 2.7 µm 4.6 x 75 mm 1.85 ml/min Alliance HPLC Transfer to 2.7 µm 4X Faster Method 2X Less Solvent AU CORTECS C µm 4.6 x 75 mm 1.85 ml/min H-Class Compatible with HPLC, UHPLC, and UPLC Systems AU CORTECS C 18, 1.6 µm 2.1 x 50 mm 0.65 ml/min H-Class Transfer to 1.6 µm 9X Faster Method 15X Less Solvent Minutes 2014 Waters Corporation 34

35 Columnas CORTECS 2.7 µm: Estabilidad bajo ph Low ph Stability: 21 Hr Exposure to 0.5% TFA at 60 C CORTECS 2.7 µm C18 CORTECS 2.7 µm C18+ Competitor AH 2.7 µm Solid-Core C18 Competitor PK 2.6 µm Solid-Core C18 Competitor TA 2.6 µm Solid-Core C % Retention Loss for Methyl Paraben Comparative separations may not be representative in all applications Waters Corporation 35

36 Columnas CORTECS 2.7 µm: Reproducibilidad 2014 Waters Corporation 36

37 Aplicaciones prácticas: Uso de columnas CORTECS 2.7 µm Compuestos básicos con Ácido Fórmico y LC-MS Separaciones de alta resolución en columnas largas Separaciones rápidas en columnas cortas Matrices complejas y/o calidad muestra variable Separación analitos polares mediante HILIC Waters Corporation 37

38 Columnas CORTECS 2.7 µm: C 18 + Mejor columna núcleo sólido para análisis de compuestos básicos con ácido fórmico Mayor capacidad carga vs. otras columnas partícula núcleo sólido de la competencia Ideal para aplicaciones LC-MS Eliminación de modificadores supresión iónica Mejorado señal/ruido C Waters Corporation 38

39 Compuestos básicos con Ácido Fórmico y LC-MS 2014 Waters Corporation 39

40 Separaciones de Alta Resolución en Columnas Largas AU Sulfa Drugs 1. Sulfathiazole 2. Sulfamerazine 3. Sulfamethazine 4. Sulfamethoxypyridazine 5. Sulfachloropyridazine 6. Sulfamethoxazole 7. Sulfasoxazole 0.3 ml/min 1824 psi CORTECS C 18 +, 2.7 µm 2.1 x 75 mm Resolution 2.1 x 75 mm Peak 2,1 4.6 Peak 3, Peak 4,3 4.7 Peak 5, Peak 6,5 6.1 Peak 7, AU ml/min 3273 psi 4.6 x 150 mm Resolution 4.6 x 150 mm Peak 2,1 8.0 Peak 3, Peak 4,3 8.5 Peak 5, Peak 6, Peak 7, Minutes 2014 Waters Corporation 40

41 Columnas CORTECS 2.7 µm: C 18 Fase enlazada C 18 tradicional Retención Balanceada para ácidos, bases y neutros Forma de pico excepcional para analitos ácidos en fases móviles de rango ph bajo y medio C Waters Corporation 41

42 Separaciones rápidas con Columnas cortas AU Antibacterials 1. Carbadox 2. Oxolinic acid 3. Sulfaquinoxaline 4. Nalidixic acid Fully porous C 18, 5 µm 4.6 x 100 mm Flow Rate: 1 ml/min Peak Capacity: AU AU Mayor productividad CORTECS C µm 4.6 x 50 mm Flow Rate: 2 ml/min Peak Capacity: 55 CORTECS C 18, 2.7 µm 4.6 x 50 mm Flow Rate:1 ml/min Peak Capacity: 55 Mayor velocidad Minutes 2014 Waters Corporation 42

43 Matrices complejas y/o Calidad de Muestra variable Synthetic Cannabinoids Retention Time Peak Compound Initial Injection Injection RCS-4, M JWH-018,4-OH met AB Pressure Cann_50_140314_ ,10 7: MRM of 2 Channels ES+ TIC (AM2233) 4.99e ,10 % % Time Time , 12 13, , 12 13, % % Time 0 Time CORTECS C 18, 2.7 µm 2014 Waters Corporation 43

44 Columnas CORTECS 2.7 µm: HILIC HILIC Hydrophilic Interaction Chromatography Término establecido en 1990 para diferenciar de fase normal HILIC es una variante de la cromatografía de fase normal evitando las desventajas de usar solventes no miscibles con agua Cromatografía de Fase reversa-reversa o fase normal acuosa Fase estacionaria es material POLAR Sílica, híbrida, ciano, amino, diol, amida CORTECS HILIC es una partícula de sílica de núcleo duro sin funcionalizar HILIC 2014 Waters Corporation 44

45 Agenda Introducción Columnas modernas HPLC y UPLC Haciendo máximas las prestaciones del HPLC con columnas XP 2.5 µm & CORTECS HPLC 2.7 µm NUEVAS! Resumen Recursos para contribuir al éxito 2014 Waters Corporation 45

46 Resumen Waters asegura y cumple el compromiso de fabricación de consumibles de alta calidad para asegurar resultados reproducibles año tras año, lote a lote Referenciado Sistema con productos certificados QCRMs aseguran la confianza en los resultados analíticos Columnas XBridge BEH diseñadas para estabilidad a ph y flexibilidad de métodos Columnas XSelect HSS y CSH proveen máxima retención, selectividad y excelente forma de pico para analitos básicos Columnas 2.5 µm XP & 2.7 µm CORTECS establecen puente entre HPLC y UPLC Compatibles con plataformas instrumentales HPLC, UHPLC y UPLC Maximizan productividad de HPLC 2014 Waters Corporation 46

47 Agenda Introducción Columnas modernas HPLC y UPLC Haciendo máximas las prestaciones del HPLC con columnas XP 2.5 µm & CORTECS HPLC 2.7 µm NUEVAS! Resumen Recursos para contribuir al éxito 2014 Waters Corporation 47

48 Recursos para contribuir al éxito: Póster de pared de columnas LC Especificaciones y datos de rellenos basados en Tipo de ligando Rango ph de uso Límites de temperatura Carga de carbono Todas las configuraciones de columnas: HPLC y UPLC EN 2014 Waters Corporation 48

49 Recursos para contribuir al éxito: Catálogos de Columnas por familias XP Columns XBridge Columns XSelect Columns ACQUITY UPLC Columns CORTECS Columns EN EN EN EN EN 2014 Waters Corporation 49

50 Recursos para contribuir al éxito Selectores de Productos Aplicaciones Apple ipad: Waters Corporation 50

51 Recursos para contribuir al éxito Columns Selectivity Chart Comparación rápida de columnas basada en: Retención Selectividad Similitud Clasificación USP Mapa kit de desarrollo de métodos basado en: Waters MD kits Non-Waters columns También disponible en la web Waters Corporation 51

52 Recursos para contribuir al éxito: Waters Column Advisor Elección de la columna basada en: Requerimiento método Especificaciones columna Visit: Decisión basada en los criterios más importantes 2014 Waters Corporation 52

53 Recursos para contribuir al éxito: Technology Primers (guías iniciación) Guías didácticas de fácil lectura que cubren diversas temáticas: Waters Corporation 53

54 Recursos para contribuir al éxito: Oferta CORTECS 2.7 µm 2014 Waters Corporation 54

55 2014 Waters Corporation 55