Analizar muestras biológicas para análisis microbiológicos en las condiciones adecuadas para su procesamiento analítico.

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1 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 1 de OBJETIVO Analizar muestras biológicas para análisis microbiológicos en las condiciones adecuadas para su procesamiento analítico. 2.- ALCANCE Aplica a todas las muestras biológicas para análisis microbiológicos, según la orden médica de los usuarios que acuden al Laboratorio de Análisis Clínicos de la Facultad de Química, San José Tecoh, Coordinación General de Salud y módulo Fénix. 3.- DESCRIPCIÓN DE LA OPERACIÓN Es importante el uso de guantes, bata, cubrebocas y lentes de seguridad en el momento de la toma y procesamiento de las muestras. Se realizarán la toma según el instructivo para la toma de muestras biológicas en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC-01. Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con códigof-fqui-lac-87, además se mantendrá al día la bitácora de lector automático cristal con código F-FQUI-LAC-83, la bitácora de mantenimiento y uso diario del lector automático bbl cristal con código FQUI-LAC-94, la bitácora de Microbiología con código F-FQUI-LAC-49, se transcribirán los resultados al formato de cultivos con código FQUI-LAC-11 y luego se entregará a recepción la bitácora de relación de los estudios entregados por el área de microbiología con código F-FQUI-LAC-82, se llevará la hoja estadística de estudios con código F-FQUI-LAC-48, la bitácora de uso de autoclave con código F-FQUI-LAC-61 y el formato para el registro de temperatura de las estufas con código F-FQUI-LAC-19. Las muestras son aceptadas si cumplen las condiciones que se describen en cada estudio y las tomadas con hisopos estériles deben estar en medio de transporte. Si las muestras no cumplieran con las condiciones deben ser rechazadas. Una vez sembradas las muestras que están en medios de transporte serán guardadas en el refrigerador hasta que los resultados sean reportados. Las muestras de heces fecales y orina serán desechadas el mismo día que se siembren. Mensualmente se correrá un control externo de PACAL para el área de Bacteriología. Se llena el formato F-FQUI-LAC-52 control y preservación de Reactivos y cada día 15 se envía al responsable de su seguimiento.

2 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 2 de 58 EXUDADO FARINGEO Se utiliza para el diagnóstico de faringitis MATERIAL NECESARIO - Abatelenguas - Hisopo estéril - Medio de transporte - Medios de cultivo - Asas bacteriológicas CONDICIONES PREVIAS El usuario deberá acudir en ayunas y sin aseo bucal. No deberá ingerir antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de la toma de muestra. TÉCNICA 1.-Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC Realizar la toma del exudado faríngeo, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC Una vez hecha la toma se realiza la siembra en los medios de cultivo: Agar Sangre, Agar Mac Conkey, Agar de Sal y Manitol. 4.-Incubar los medios a 37ºC y observar el crecimiento a las 24 horas. 5.-Realizar la identificación de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 6.-Luego de haber transcurrido las 24hrs se procede a identificar los microorganismos presentes en la muestra según los esquemas de identificación. Una vez realizada las pruebas correspondientes, se incuban a 37 ºC por 24 hrs. 7.-Se leen las pruebas realizadas y se identifica a las bacterias. 8.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato CULTIVOS (F- FQUI-LAC-11). OBSERVACIONES Se investigará rutinariamente la presencia de Streptococcus beta-hemolítico del grupo A (S.pyogenes), Staphylococcus aureus, Streptococcus beta hemolítico no del grupo A y no del grupo B, microorganismos gramnegativos, entre otros. EXUDADO NASAL Esta muestra se utiliza para buscar portadores de S.aureus entre otros. MATERIAL NECESARIO - Hisopo estéril - Medios de cultivo

3 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 3 de 58 - Medio de transporte - Asas bacteriológicas CONDICIONES PREVIAS El usuario deberá acudir al laboratorio, sin haber ingerido antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de la toma y no haberse colocado gotas o espray en las fosas nasales. TÉCNICA. 1.-Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC Realizar la toma del exudado nasal, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC Una vez hecha la toma se realiza la siembra en los medios de cultivo: Agar Sangre, Agar Mac Conkey, Agar Thayer Martin, Agar de Sal y Manitol. 4.-Incubar los medios a 37ºC y observar el crecimiento a las 24 horas. 5.-Realizar la identificación de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 6.-Luego de haber transcurrido las 24hrs se procede a identificar los microorganismos presentes en la muestra según los esquemas de identificación. Una vez realizada las pruebas correspondientes, se incuban a 37 ºC por 24 hrs. 7.-Se leen las pruebas realizadas y se identifica a las bacterias. 8.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato CULTIVOS (F- FQUI-LAC-11). EXUDADO VAGINAL Esta muestra se utiliza para conocer la etiología en casos de vaginosis bacteriana, candidiasis vaginal, Trichomonas vaginales entre otros. Puede utilizarse para búsqueda de portadoras de Streptococcus del grupo B en embarazadas. MATERIAL NECESARIO - Camilla ginecológica - Espéculo estéril. - Hisopos estériles. - Medio de transporte - Tubo con 4 ml de solución salina. - Tubos estériles. - Portaobjetos. - Medios de cultivo - Asas bacteriológicas CONDICIONES PREVIAS El usuario no debe tener aseo genital, no haber ingerido antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de la toma de muestra, no haber tenido relaciones 3 días antes, no haberse colocado ninguna

4 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 4 de 58 crema u óvulos y no estar menstruando. En usuarios que nunca han tenido relaciones sexuales o en niñas la toma sólo se realiza en el exterior de los genitales. TÉCNICA 1.-Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC Realizar la toma del exudado vaginal, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC El examen en fresco se realiza con el tubo con solución salina, se le quita el hisopo y se centrifuga a 1,650 r.p.m., luego se elimina el sobrenadante para colocar el sedimento en un portaobjetos y observar al microscopio con el objetivo de 40X. Se observa varios campos para buscar Trichomonas vaginalis, si no se encuentra se reporta como: no se observaron parásitos. 4.-Al frotis se le realiza la tinción de Gram y una vez seca la muestra, se coloca una gota de inmersión y se observa al microscopio con el objetivo de 100X para buscar células claves. 5.-Sembrar en medios de cultivo: Agar Sangre, Agar Mac Conkey, Agar Chocolate, Agar Thayer Martin, Agar Dextrosa de Sabouraud, Agar de Sal y Manitol. 6.- Incubar los medios a 37ºC y observar el crecimiento a las 24 horas. 7.-Realizar la identificación de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 8.-Luego de haber transcurrido las 24hrs se procede a identificar los microorganismos presentes en la muestra según los esquemas de identificación. Una vez realizada las pruebas correspondientes, se incuban a 37 ºC por 24 hrs. 9.-Se leen las pruebas realizadas y se identifica a las bacterias. 10.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). EXUDADO URETRAL Se utiliza para el diagnóstico etiológico de uretritis y La principal bacteria a investigar es N. gonorrhoeae. MATERIAL NECESARIO - Hisopos uretrales de alginato cálcico o dracón. - Hisopos estériles. - Medio de transporte. - Tubo con 5 ml de solución fisiológica. - Portaobjetos. - Medios de cultivo. - Asas bacteriológicas. CONDICIONES PREVIAS El usuario no debe tener aseo genital, no haber ingerido antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de la toma de muestra, no haber tenido relaciones 3 días antes y no haberse colocado ninguna crema.

5 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 5 de 58 TÉCNICA 1.-Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC Realizar la toma del exudado uretral, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC El examen en fresco se realiza con el tubo con solución salina, se le quita el hisopo y se centrifuga a 2500 r.p.m., luego se elimina el sobrenadante para colocar el sedimento en un portaobjetos y observar al microscopio con el objetivo de 40X. Se observa varios campos para buscar Trichomonas vaginalis, si no se encuentra se reporta como: no se observaron parásitos. 4.-Al frotis se le realiza la tinción de Gram y una vez seca la muestra, se coloca una gota de inmersión y se observa al microscopio con el objetivo de 100X para buscar polimorfonucleares con bacterias diplococos gramnegativos. 5.-Sembrar en medios de cultivo: Agar Sangre, Agar Mac Conkey, Agar Chocolate, Agar Thayer Martin, Agar Dextrosa de Sabouraud, Agar de Sal y Manitol. 6.-Incubar los medios a 37ºC y observar el crecimiento a las 24 horas. 7.- Realizar la identificación de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 8.-Luego de haber transcurrido las 24hrs se procede a identificar los microorganismos presentes en la muestra según los esquemas de identificación. Una vez realizada las pruebas correspondientes, se incuban a 37 ºC por 24 hrs. 9.-Se leen las pruebas realizadas y se identifica a las bacterias. 10.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). UROCULTIVO (Orina obtenida por Chorro medio ) La prueba se realiza para determina si existe una infección en las vías urinarias. Se investiga la presencia de bacterias u hongos. La muestra idónea es la primera micción de la mañana, ya que permite la multiplicación de bacterias durante la noche. CONDICIONES PREVIAS Se requiere que el usuario no esté tomando antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de la toma, la primera orina de la mañana, aseo de genitales y recolectar en un recipiente o bolsa estéril el chorro medio de la orina. MATERIAL NECESARIO - Medios de cultivo - Recipiente de boca ancha con tapa de rosca hermética y estéril. - Asa calibrada de platino color negro de 0.01mL o asa calibrada de platino color rojo de 0.001mL ( Anexo 1).

6 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 6 de 58 OBTENCIÓN DE LA MUESTRA Los pacientes recolectarán la muestra por la técnica del chorro medio. TÉCNICA 1.-La muestra debe ser sembrada máximo 2 horas después de su recolección. 2.-Utilizar asa calibrada de platino color negra de 0.01mL (1 colonia = 100 UFC/mL) o asa calibrada de platino color rojo 0.001mL (1 colonia = 1,000 UFC/mL). 3.-Homogenizar bien la orina. 4.-Sembrar las muestras en Agar Sangre y un medio general o de baja selectividad (CHROMagar Orientador o Agar Mac Conkey). 5.-Esterilizar el asa de platino y enfriarla. Para enfriar el asa se sumerge verticalmente y se retira asegurándose llevar una gota de orina para luego desecharla, esto se realiza 3 veces y la cuarta se utiliza para sembrar en los medios de cultivo. 6.-Extender la orina contenida en el asa a lo largo de un diámetro de la placa. Extender el inóculo con la misma asa en estrías muy apretadas perpendicularmente a la primera estría y luego perpendicularmente a la segunda con múltiples pasadas del asa, que se superpongan, hasta cubrir toda la placa. 7.-Incubar las placas en posición invertida 24 hrs a 37 C, si no hay crecimiento a las 24hrs dejar incubar 24 hrs más. 8.- Realizar la identificación de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 9.-Luego de haber transcurrido las 24hrs se procede a identificar los microorganismos presentes en la muestra según los esquemas de identificación. Una vez realizada las pruebas correspondientes, se incuban a 37 ºC por 24 hrs. 10.-Se leen las pruebas realizadas y se identifica a las bacterias. 11.-Estimar el número de colonias y multiplicarlo por el factor de dilución según el asa utilizada, para obtener el número de bacterias por ml de orina. 12.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). OBSERVACIONES Un recuento de más de 100,000 UFC/mL es indicativo de infección (el número no se correlaciona con la gravedad de la misma). Un recuento de menos de 10,000 UFC/mL hace sospechar una contaminación de la muestra, especialmente si hay varios tipos distintos de colonias, pues las infecciones urinarias son casi siempre debidas a un sólo microorganismo. Las cifras intermedias son dudosas, y requieren la consulta al médico y la repetición del análisis. Hay que tener presente que las muestras obtenidas por punción suprapúbica o cateterismo aséptico no llevan contaminación, y debe considerarse positivo cualquier recuento.

7 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 7 de 58 COPROCULTIVO La familia Enterobacteriaceae está formada por bacilos gramnegativos aerobios y anaeróbios facultativos que fermentan la glucosa, son oxidasa negativa y crecen en medios usuales. Habitan como comensales en el tubo digestivo del hombre y de otros animales de sangre caliente. En algunos géneros como Salmonella, Shigella y Yersinia hay especies o bioserotipos patógenos, y otros como Escherichia (excepto 4 subespecies), Citrobacter, Klebsiella y Proteus forman parte de la biota normal del tubo digestivo y pueden actuar como oportunistas. MATERIAL NECESARIO -Medios de cultivo -Caldo de tetrationato -Asas bacteriológicas -Recipiente de boca ancha con tapa de rosca hermética y estéril. CONDICIONES PREVIAS Se requiere que el usuario no esté tomando antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de recolectar su muestra, colocarla en un recipiente estéril, se recomienda que las heces fecales sean del día y remitirlas al laboratorio a la mayor brevedad. TÉCNICA 1.-Se realiza una siembra directa de la muestra fecal en Agar Salmonella- Shigella, Agar Mac Conkey y en caldo de Tetrationato. Se incuban los medios durante 24 horas a 37 C. Nota: el caldo tetrationato sele agrega 200µL de yodo para activarlo. 2.-Realizar Bioquímicas de las colonias que crecieron en los Agares e incubar durante 24 horas a 37 C. 3.-Resembrar la muestra del caldo de tetrationato en Agar Salmonella-Shigella, Agar Mac Conkey y dejar incubar durante 24 horas a 37 C. 4.- Realizar la identificación de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 5.-Realizar Bioquímicas de las colonias que crecieron de la resiembra e incubar durante 24 horas a 37 C. 6.-Identificar las bioquímicas según las tablas de identificación. 7.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). LESION (HERIDA) MATERIAL NECESARIO -Portaobjetos -Hisopo estéril -Medio de transporte -Medios de cultivos

8 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 8 de 58 -Asas bacteriológicas CONDICIONES PREVIAS El usuario no debe asearse el área de lesión y no haber ingerido antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de la toma de muestra. TÉCNICA 1.-Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC Realizar la toma de lesión, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC Sembrar en medios de cultivo: Agar Sangre, Agar Mac Conkey, Agar Chocolate, Agar Thayer Martin, Agar Dextrosa de Sabouraud, Agar de Sal y Manitol. 4.-Incubar los medios a 37ºC y observar resultados en 24 horas. 5.-Realizar la identificación de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 6.-Luego de haber transcurrido las 24hrs se procede a identificar los microorganismos presentes en la muestra según los esquemas de identificación. Una vez realizada las pruebas correspondientes, se incuban a 37 ºC por 24 hrs. 7.-Se leen las pruebas realizadas y se identifica a las bacterias. 8.-Identificar los microorganismos presentes en la muestra según esquemas de identificación 9.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). HEMOCULTIVO El hemocultivo es una prueba que se utiliza para diagnosticar bacteriemias y fungemias, que consiste en el cultivo de una muestra de sangre en medios adecuados para recuperar las bacterias y los hongos. MATERIAL NECESARIO -Jeringas desechables -Yodo povidona -Torundas del algodón con alcohol etílico al 70% -Frascos de Hemocultivo -Asas bacteriológicas -Medios de cultivo CONDICIONES PREVIAS Se requiere que el usuario no esté tomando antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de recolectar la muestra y tener ayuno de 10 a 12hrs.

9 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 9 de 58 TÉCNICA 1.-Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC Realizar la toma del hemocultivo, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC Inyectar inmediatamente la sangre en el frasco de hemocultivo. 4.-Mezclar la sangre con el medio líquido para evitar la formación de coágulos. 5.-Incubar el frasco de cultivo a 37 C durante 8 días 6.-La sangre con el medio líquido deberá bañar 1 a 2 veces la superficie del medio de cultivo, está maniobra se repite por lo menos cada 12 horas durante el tiempo de incubación. 7.-Hacer siembras directas a las 24, 48, 72 horas en medios de cultivo: Agar Sangre, Agar Mac Conkey, Agar Chocolate, Agar Thayer Martin, Agar Dextrosa de Sabouraud, Agar de Sal y Manitol. 8.-Incubar los medios a 37 C hasta esperar los 8 días desde que se recepcionó la muestra. 9.-Si hay crecimiento en los agares se procede a identificar los microorganismos de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 10.-En el momento que se observe crecimiento se procede a identificar los microorganismos presentes en la muestra según los esquemas de identificación. Una vez realizada las pruebas correspondientes, se incuban a 37 ºC por 24 hrs. 11.-Se leen las pruebas realizadas y se identifica a las bacterias. 12.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). CULTIVO DE ESPERMA MATERIAL NECESARIO -Medios de cultivos -Asas bacteriológicas CONDICIONES PREVIAS El paciente puede recolectar su muestra en su casa o en el LACSC por la técnica de masturbación, con previo aseo de genitales y manos, sin haber orinado, no haber ingerido antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de la recolección, con abstinencia sexual de 3 días y colocar la muestra en un recipiente estéril. TÉCNICA 1.- Sembrar en medios de cultivo: Agar Sangre, Agar Mac Conkey, Agar Chocolate, Agar Thayer Martin, Agar Dextrosa de Sabouraud, Agar de Sal y Manitol. 2.-Incubar los medios a 37ºC y observar resultados en 24 horas. 3.-Realizar la identificación de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 4.-Luego de haber transcurrido las 24hrs se procede a identificar los microorganismos presentes en la muestra según los esquemas de identificación. Una vez realizada las pruebas correspondientes, se incuban a 37 ºC por 24 hrs.

10 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 10 de Se leen las pruebas realizadas y se identifica a las bacterias. 6.-Identificar los microorganismos presentes en la muestra según esquemas de identificación 7.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). CULTIVO DE EXPECTORACIÓN MATERIAL NECESARIO -Medios de cultivos -Asas bacteriológicas CONDICIONES PREVIAS El usuario puede recolectar su esputo en su casa o en el LACSC por la técnica de expectoración y no debe haber ingerido antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de la recolección. TÉCNICA 1.-Sembrar en medios de cultivo: Agar Sangre, Agar Mac Conkey, Agar Chocolate, Agar Thayer Martin, Agar Dextrosa de Sabouraud, Agar de Sal y Manitol. 2.-Incubar los medios a 37ºC y observar resultados en 24 horas. 3.- Realizar la identificación de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 4.-Luego de haber transcurrido las 24hrs se procede a identificar los microorganismos presentes en la muestra según los esquemas de identificación. Una vez realizada las pruebas correspondientes, se incuban a 37 ºC por 24 hrs. 5.-Se leen las pruebas realizadas y se identifica a las bacterias. 6.-Identificar los microorganismos presentes en la muestra según esquemas de identificación 7.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). CULTIVO OFTÁLMICO(LAGRIMAL) Los agentes infecciosos pueden atacar cualquier parte del ojo, tanto desde afuera como desde adentro. La conjuntivitis (inflamación) produce enrojecimiento (ojos rosados), picazón y secreción, que puede ser mucosa o purulenta.los patógenos bacterianos más comunes son Staphylococcus aureus, Haemophilus influenza, Streptococcus pneumoniae y Pseudomonas aeruginosa. La conjuntivitis aguda también puede ser causada por dos patógenos de transmisión sexual, Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae. MATERIAL NECESARIO -Hisopo estéril -Medio de transporte

11 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 11 de 58 -Medios de cultivos -Asas bacteriológicas CONDICIONES PREVIAS Se requiere que el usuario no esté tomando antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de recolectar la muestra y no asearse el ojo. TÉCNICA 1.-Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC Realizar la toma del cultivo oftálmico, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC Sembrar en medios de cultivo: Agar Sangre, Agar Mac Conkey, Agar Chocolate, Agar Thayer Martin, Agar Dextrosa de Sabouraud, Agar de Sal y Manitol. 4.-Incubar los medios a 37ºC y observar resultados en 24 horas. 5.- Realizar la identificación de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 6.-Luego de haber transcurrido las 24hrs se procede a identificar los microorganismos presentes en la muestra según los esquemas de identificación. Una vez realizada las pruebas correspondientes, se incuban a 37 ºC por 24 hrs. 7.-Se leen las pruebas realizadas y se identifica a las bacterias. 8.-Identificar los microorganismos presentes en la muestra según esquemas de identificación 9.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). CULTIVO OTICO MATERIAL NECESARIO -Hisopo estéril -Medio de transporte -Medios de cultivos -Asas bacteriológicas CONDICIONES PREVIAS Se requiere que el usuario no esté tomando antibióticos y/o antifúngicos, ni haberse colocado gotas de 3 a 5 días antes de recolectar la muestra. TÉCNICA 1.-Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC Realizar la toma del cultivo otico, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC Sembrar en medios de cultivo: Agar Sangre, Agar Mac Conkey, Agar Chocolate, Agar Thayer Martin, Agar Dextrosa de Sabouraud, Agar de Sal y Manitol. 4.-Incubar los medios a 37ºC y observar resultados en 24 horas.

12 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 12 de Realizar la identificación de manera manual y si hubiera alguna duda se realizaría la identificación con el sistema de identificación bacteriológica en miniatura BD BBL TM Crystal TM. 6.-Luego de haber transcurrido las 24hrs se procede a identificar los microorganismos presentes en la muestra según los esquemas de identificación. Una vez realizada las pruebas correspondientes, se incuban a 37 ºC por 24 hrs. 7.-Se leen las pruebas realizadas y se identifica a las bacterias. 8.-Identificar los microorganismos presentes en la muestra según esquemas de identificación 9.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). CULTIVOS MICOLÓGICOS La micosis presente, así como el estudio micológico y la selección de la muestra a examinar, estará guiada por la forma de presentación clínica. Clásicamente según su localización anatómica, las micosis se pueden dividir en: superficiales, dermohipodérmicas, profundas localizadas y sistémicas. Según el grado de patogenicidad del hongo se pueden dividir en: micosis causadas por agentes oportunistas, por patógenos primarios con comportamiento oportunista o por patógenos primarios. Actualmente no debe olvidarse que hongos que no se consideraban patógenos o se encontraban limitado a un solo órgano pueden causar enfermedad diseminada en el inmunodeprimnido. En este contexto se debe tener en cuenta que el aislamiento de algunos hongos en piel, mucosas u otros sectores, puede no significar una afección localizada, sino que por el contrario ser la manifestación de una micosis sistémica diseminada. CONCEPTOS GENERALES El tipo de muestra recogida dependerá de la micosis sospechada y de su localización anatómica. Los tubos, viales, frascos (vidrio o plástico) donde se recolecten las muestras deben ser estériles y con tapón hermético y correctamente identificadas. MUESTRAS PARA ESTUDIO DE MICOSIS SUPERFICIALES. Este examen se solicita habitualmente para el diagnóstico de micosis superficiales tales como: dermatofitosis, candidiasis, pitiriasis versicolor, dermatitis seborreica, entre otras. Las dermatofitosis corresponden al parasitismo de la piel y sus anexos causada por un grupo de hongos queratinofílicos y queratinolíticos denominados dermatofitos. Las candidiasis superficiales corresponden a las afecciones de piel y mucosas causadas por especies de levaduras del género Candida. La pitiriasis versicolor es una afección de la piel causada por levaduras del género Malassezia (clásicamentre Malassezia furfur), que se caracteriza por la aparición de máculas hipohiperpigmentadascon descamación furfurácea en dicho sector.

13 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 13 de 58 PIEL MATERIAL NECESARIO -Caja de Petri estéril -Hoja de bisturí -Porta objetos -Cinta adhesiva CONDICIONES PREVIAS El usuario no debe asearse el área un día antes, no haber ingerir antifúngicos de 3 a 5 días antes de la toma y no colocarse ninguna crema. TÉCNICA 1.-Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC Realizar la toma del cultivo micológico de piel, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC La muestra que se coloca en el portaobjetos se clarifica con el KOH y buscar estructuras microscópicas de hongos. 4.-Las escamas de piel recolectadas, se colocarán en Agar Dextrosa Sabouraud. 5.-Se deja incubar por 15 días a temperatura ambiente. 6.-Identificar el hongo según su morfología y tablas de identificación. 7.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). OBSERVACIONES Se deberá tener en cuenta que la sensibilidad del estudio micológico está directamente relacionado con la cantidad de material obtenido; por lo cual la muestra a estudiar debe ser abundante. UÑAS MATERIAL NECESARIO -Cajas de Petri estéril -Hoja de bisturí CONDICIONES PREVIAS El usuario no debe asearse el área un día antes, no haber ingerir antifungicos de 3 a 5 días antes de la toma y no colocarse ninguna crema. TECNICA 1.-Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC-87.

14 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 14 de Realizar la toma del cultivo micológico de uña, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC Las escamas de la uña recolectadas, se colocarán en Agar Dextrosa Sabouraud. 4.-Se deja incubar por 15 días a temperatura ambiente. 5.-Identificar el hongo según su morfología y tablas de identificación. 6.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). OBSERVACIONES Se deberá tener en cuenta que la sensibilidad del estudio micológico está directamente relacionado con la cantidad de material obtenido; por lo cual la muestra a estudiar debe ser abundante. CABELLO MATERIAL NECESARIO -Cajas de Petri estéril -Pinzas CONDICIONES PREVIAS El usuario no debe lavarse la cabeza un día antes, no haber ingerir antifúngicos de 3 a 5 días antes de la toma y no colocarse ninguna crema. TÉCNICA 1.- Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC Realizar la toma del cultivo micológico de cabello, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC El pelo se colocará en Agar Dextrosa Sabouraud. 4.-Se deja incubar por 15 días a temperatura ambiente. 5.-Identificar el hongo según su morfología y tablas de identificación. 6.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). LESION (HERIDA) MATERIAL NECESARIO: -Hisopo estéril -Medio de transporte CONDICIONES PREVIAS El usuario no debe asearse el área de lesión y no haber ingerido antifúngicos de 3 a 5 días antes de la toma de muestra.

15 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 15 de 58 TÉCNICA 1.- Se realizará un cuestionario de toma de muestra para cultivos con código F-FQUI-LAC Realizar la toma de lesión, según el instructivo para la toma de muestra biológica en el laboratorio de análisis clínicos con código I-FQUI-LAC El exudado se colocará en Agar Dextrosa Sabouraud. 4.-Se deja incubar por 15 días a temperatura ambiente. 5.-Identificar el hongo según su morfología y tablas de identificación. 6.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). BACTERIOSCOPIA MATERIAL NECESARIO -Hisopo estéril -Portaobjeto CONDICIONES PREVIAS El usuario no debe asearse el área donde se va a realizar la toma un día antes y que no esté tomando antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de recolectar la muestra. La bacterioscopía es una técnica fundamental para él análisis de la morfología y tinción de las bacterias por Gram. 1.-Se realiza la toma con un hisopo estéril del área afectada. 2.-Se hace un extendido de la muestra sobre un portaobjetos. 3.-Se fija con la flama del mechero. 4.-Se realiza la tinción de Gram: a)se cubre la placa con cristal violeta durante un minuto y luego se lava. b)se cubre la placa con Lugol durante un minuto y luego se lava. c)se decolora la muestra con alcohol-cetona durante un minuto y luego se lava. d)se cubre la placa con safranina durante un minuto y luego se lava. e)se deja secar. f)una vez seca la muestra, se coloca una gota de inmersión y se observa al microscopio con el objetivo de 100X. 5.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). BACILOSCOPIA La baciloscopía, es la técnica fundamental en toda investigación bacteriológica de la tuberculosis, en la detección de casos y control de tratamiento. Con un costo bajo y de rápida ejecución, la baciloscopía es una técnica que permite identificar al 70-80% de los casos pulmonares positivos.

16 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 16 de 58 MATERIAL NECESARIO -Hisopo estéril -Portaobjeto CONDICIONES PREVIAS El usuario puede recolectar su esputo en su casa o en el LACSC por la técnica de expectoración y no debe haber ingerido antibióticos y/o antifúngicos de 3 a 5 días antes de la recolección. TÉCNICA 1.-Con lápiz diamante se numera en uno de los extremos los portaobjetos nuevos. 2.-Con el mechero encendido se procede a destapar la muestra que se coloca junto al portaobjetos que le corresponde. Una vez seleccionada la parte de la muestra, que en el caso de los diversos líquidos obtenidos por punción es el sedimento obtenido por centrifugación por 15 minutos a r.p.m., de aquí se toma para el frotis. 3.-Se coloca la muestra en el portaobjetos con la ayuda de pipetas Pasteur estériles y se procede a extenderla con aplicadores de madera, con movimientos circulares y finalmente de vaivén hasta formar una película lo más uniforme posible, se dejará secar a temperatura ambiente. 4.-La tinción se puede realizar por la técnica de Ziehl-Neelsen o Kinyou. a) La tinción de Ziehl-Neelsen se realiza de la siguiente forma: se fija la baciloscopía con alcohol al 70% y se cubre con fucsina. Se calientan los frotis flameándolos con una pinza provista en un extremo con torunda embebida en alcohol, hasta que empiece la emisión de vapores se deja de calentar y repite la operación cuantas veces sea necesario en un lapso de 5 minutos. Se elimina el colorante con agua. Se agrega alcohol-ácido hasta decolorar el frotis. Se enjuaga con agua y se aplica el colorante de contraste que es el azul de metileno por espacio de 1.5 minutos. Se enjuaga con agua corriente y se deja escurrir en forma vertical sobre papel absorbente hasta que se seque. b) La tinción de Kinyou se realiza de la siguiente forma: se fija la baciloscopía con alcohol al 70% y se cubre con fucsina durante 5 minutos. Se elimina el colorante con agua. Se agrega alcohol-ácido hasta decolorar el frotis. Se enjuaga con agua y se aplica el colorante de contraste que es el azul de metileno por espacio de 1.5 minutos. Se enjuaga con agua corriente y se deja escurrir en forma vertical sobre papel absorbente hasta que se seque. 5.-La observación debe establecer en primer término si se encuentran BAAR en el extendido y si los hay, el número aproximado de ellos por campo microscópico. Los bacilos aparecen como bastoncillos delgados de color rojo y con gránulos en su interior, aislados, en pares o agrupados sobre un fondo azul claro de la tinción de contraste. La contabilidad debe seguir una pauta uniforme de observación leyendo de izquierda a derecha del extendido un mínimo de 100 campos útiles distribuidos en el total del extendido. 6.-El informe del resultado se realizará de la siguiente forma: Negativo: no se observan BAAR. Positivo +: se observan menos de un bacilo por campo en promedio en 100 campos observados. Positivo ++: se observan de 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados. Positivo +++: Se observan más de 10 bacilos por campo en promedio en 20 campos observados. 7.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11).

17 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 17 de 58 EXAMÉN MICROSCÓPICO PARA HONGOS Está técnica se utiliza para ver las estructuras microscópicas de los hongos. 1.-Si la muestra es de piel se recolecta con una cinta adhesiva pegándola en la piel y luego se coloca en un portaojetos. Si es cabello, se utiliza un pelo con la raíz y de lesiones se recolecta con un hisopo estéril. 2.-Se coloca sobre la muestra 2 gotas de KOH al 10% y se deja 1min. 3.-Se observa al microscopio con el objetivo de 40X. 4.-Reportar los resultados en la bitácora (F-FQUI-LAC-49) y transcribirlos en el formato de CULTIVOS (F-FQUI-LAC-11). TINCIÓN DE GRAM 1.-.-Tomar una colonia bacteriana y disolverla con una gota de solución salina en un portaobjetos. 2.-Una vez seca la placa se fija con la flama del mechero. 4.-Se realiza la tinción de Gram: a)se cubre la placa con cristal violeta durante un minuto y luego se lava. b)se cubre la placa con Lugol durante un minuto y luego se lava. c)se decolora la muestra con alcohol-cetona durante un minuto y luego se lava. d)se cubre la placa con safranina durante un minuto y luego se lava. e)se deja secar. f)una vez seca la muestra, se coloca una gota de inmersión y se observa al microscopio con el objetivo de 100X. MEDIOS DE CULTIVO Debido a que la mayoría de las muestras enviadas al laboratorio de microbiología contienen varias especies de bacterias, mezcladas a menudo con otros microorganismos, se debe utilizar un medio selectivo para aislar aquellas especies que pueden ser de importancia clínica. Es importante conocer la composición de los medios y el propósito y concentración relativa de cada compuesto o reactivo incluido. Las fórmulas son algo complejas e incluyen componentes que sólo inhiben el desarrollo de ciertas especies bacterianas, sino que también detectan una variedad de características bioquímicas de importancia en la identificación preliminar de los microorganismos seleccionados. Tipos generales de sustancias y compuestos usados en los medios selectivos. Hidrolizados de proteínas (peptona, infusión de carne, triptonas, caseína). Hidratos de carbono. Buffers. Enriquecimientos. Inhibidores. Indicadores de ph Otros indicadores. Otros compuestos y sustancias.

18 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 18 de 58 AGAR MAC CONKEY (MC) Fórmula Peptona 17.0 g Polipeptona 3.0 g Lactosa 10.0 g Sales Biliares 1.5 g Cloruro de sodio 5.0 g Agar 13.5 g Rojo neutro 0.3 g Cristal violeta g Agua destilada csp. 1.0 L ph final 7.1 PROPÓSITO Y COMPONENTES DIFERENCIALES. Medio diferencial para la selección y recuperación de Enterobacterias y bacilos Gram negativos entéricos relacionados. Las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivos y de algunas Gram negativas exigentes. La lactosa es el único hidrato de carbono. Las bacterias fermentadoras de lactosa forman colonias de diferentes tonos de rojo debido al viraje del indicador rojo neutro (rojo a ph menor de 6,8) por la producción de ácidos mixtos. Las colonias no fermentadoras de lactosa aparecen incoloras o transparentes. Método de preparación de Agar Mac Conkey marca Bioxon (Anexo II). Disolver 50gr del medio en un litro de agua destilada o deionizada, hidratar entre 10 a 15 minutos y calentar a ebullición agitando continuamente, hervir durante 1 minuto. Esterilizar en autoclave a 121 C durante 15 minutos, enfriar a C y vaciar en cajas Petri 20mL por placa. Método de preparación de Agar Mac Conkey marca MCD (Anexo III). Suspender 50 g del medio en 1 litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta completa disolución del polvo y hervir durante 1 minuto. Esterilizar en autoclave a 121 C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Enfriar a una temperatura entre C y vaciar en placas de Petri estériles. Una vez gelificado el Agar de Mac Conkey se meterá a prueba de esterilidad en la estufa bacteriológica por 24 hrs a 37 C. Transcurridos las 24 hrs sacarlos de la estufa y revisar si no están contaminados. Las cajas se etiquetaran con la abreviatura del medio, número de lote, fecha de elaboración y fecha de caducidad. Se recomienda probar el desarrollo microbiológico con cepas control. REACCIONES E INTERPRETACIÓN. Los típicos fermentadores fuertes de lactosa, tales, como las especies de Escherichia, Klebsiella y Enterobacter, forman colonias rojas rodeadas de una zona de bilis precipitada. Los fermentadores débiles o lentos de lactosa, tales como Citrobacter, Providencia, Serratia y Hafnia, pueden formar colonias incoloras en 24 h o ligeramente rosadas en 24 a 48h.

19 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 19 de 58 Las colonias de Proteus, Edwardsiella, Salmonella y Shigella, con raras excepciones, son incoloras o transparentes. AGAR DE SAL Y MANITOL (MSA) Fórmula Digerido Péptico de Tejido 5.0 g Animal Cloruro de Sodio 75.0 g Digerido Pancreático de 5.0 g Caseína D-Manitol 10.0 g Extracto de Carne 1.0 g Rojo de Fenol g Agar Bacteriológico 15.0 g ph 7.4 ± 0.2 El Agar Sal y Manitol es utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos a partir de muestras clínicas y diversos materiales. PROPÓSITO Y COMPONENTES DIFERENCIALES El Agar Sal y Manitol fue formulado por Chapman para obtener el aislamiento de estafilococos, inhibiendo el crecimiento de otras bacterias al utilizar una alta concentración de sal. Al adicionar cloruro de sodio al 7.5% al Agar Rojo de Fenol y Manitol, se obtiene un abundante crecimiento de cepas patógenas de estafilococos (coagulasa positivos) que forman colonias y halos amarillos a diferencia de las cepas no patógenas que dan colonias pequeñas de color rojo y sin cambio en el color del medio. Asimismo, esta alta concentración de cloruro de sodio inhibe el crecimiento de flora acompañante. Las peptonas y el extracto de carne proporcionan la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales. El D-manitol es el carbohidrato. El rojo de fenol actúa como indicador de ph. El agar es adicionado como agente solidificante. Método de preparación de Agar de Sal y Manitol marca Bioxon (Anexo IV). Disolver 111 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada y remojar unos 15 minutos. Mezclar bien y calentar a ebullición durante 1 minuto, esterilizar en autoclave a 121 C durante 15 minutos. Método de preparación de Agar de Sal y Manitol marca MCD (Anexo V). Suspender 111 g del medio en 1 litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta completa disolución del polvo y hervir durante 1 minuto. Esterilizar en autoclave a 121 C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Enfriar a temperatura de C y vaciar en placas de Petri estériles. Una vez gelificado el Agar de Sal y Manitol se meterá a prueba de esterilidad en la estufa bacteriológica por 24 hrs a 37 C. Transcurridos las 24 hrs sacarlos de la estufa y revisar si no están contaminados.

20 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 20 de 58 Las cajas se etiquetaran con la abreviatura del medio, número de lote, fecha de elaboración y fecha de caducidad. Se recomienda probar el desarrollo microbiológico con cepas control. REACCIONES E INTERPRETACIÓN Colonias pequeñas a medianas con zonas amarillas alrededor; S. aureus. Colonias grandes de color naranja a blanco; Micrococos. Otros estafilococos colonias pequeñas de color rojo sin cambio en el color del medio. Bacterias Gram negativas; inhibidas o muy poco desarrollo. Estreptococos sin crecimiento. AGAR MUELLER HINTON (MH) FÓRMULA Infusión de Carne Almidón. 1.5 Peptona de Caseína H 17.5 Agar Bacteriológico 17.0 ph 7.4 ± 0.2 PROPÓSITO Y COMPONENTES DIFERENCIALES El Agar Mueller Hinton es un medio utilizado para realizar las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana en microorganismos aeróbicos por el método de Kirby-Bauer. Este medio también es conocido como Agar M-H. Bauer, Kirby, Sherris y Tuck recomendaron el Agar de Mueler Hinton para llevar a cabo las pruebas de susceptibilidad a antibióticos, utilizando un solo disco impregnado con una alta concentración de un antimicrobiano. El Agar Mueller Hinton cumple con los requerimientos de la Organización Mundial de la Salud y está especificado en la FDA. Este medio es el seleccionado por la NCCLS (National Commitee for Clinical Laboratory Standards) para realizar las pruebas de susceptibilidad, por su alta reproducibilidad, su bajo contenido de substancias inhibidoras y el crecimiento satisfactorio que presentan la mayoría de los patógenos no fastidiosos. Con este medio se han llevado a cabo una gran cantidad de estudios sobre susceptibilidad antimicrobiana. En este medio, la infusión de carne y la peptona de caseína proveen la fuente de nitrógeno, vitaminas, carbón y aminoácidos. El almidón es agregado para absorber cualquier metabolito tóxico y el agar es adicionado como agente solidificante. Método de preparación de Agar Muller Hinton marca Bioxon (Anexo VIII). Suspender 38 g del polvo en un litro de agua purificada. Mezclar perfectamente, calentar con agitación frecuente y hervir durante un minuto hasta disolución completa. Esterilizar a 121 C durante 15 minutos. Enfriar a C y si se desea pueden prepararse placas o tubos de Agar Chocolate agregar sangre estéril. La mezcla con Sangre debe achocolatarse calentándose a 80 C durante 10 minutos. No sobrecalentar. Método de preparación de Agar Muller Hinton marca MCD (Anexo IX).

21 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 21 de 58 Suspender 38 g del medio en 1 litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta completa disolución del polvo y hervir durante 1 minuto. Esterilizar en autoclave a 121 C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Para obtener desarrollo de Neiserias enfriar a una temperatura entre C y agregar sangre debe achocolatarse calentando a 80 C durante 10 minutos. No sobrecalentar. Vaciar en placas de Petri estériles. Una vez gelificado el Agar Mueller Hinton se meterá a prueba de esterilidad en la estufa bacteriológica por 24 hrs a 37 C. Transcurridos las 24 hrs sacarlos de la estufa y revisar si no están contaminados. Las cajas se etiquetaran con la abreviatura del medio, número de lote, fecha de elaboración y fecha de caducidad. Se recomienda probar el desarrollo microbiológico con cepas control. REACCIONES E INTERPRETACIÓN Crecimiento de colonias pequeñas o grandes y se observa la pigmentación de bacterias de Pseudomonas aeruginosa y Serratia marcences. AGAR DEXTROSA SABOURAUD (ADexS) Fórmula Dextrosa 40.0 g Peptona de Caseína 5.0 g Digerido Pancreático de 5.0 g Tejido Animal Agar Bacteriológico 15.0 g ph 5.6 ± 0.2 PROPÓSITOS Y COMPONENTES DIFERENCIALES Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patógenos, particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel. La alta concentración de dextrosa y la acidez del ph hacen a éste un medio selectivo para hongos. Con la adición de cicloheximida, estreptomicina y penicilina, se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el crecimiento de los microorganismos, la dextrosa actúa como fuente de energía y el agar es agregado como agente solidificante. Preparar el medio según instrucciones del fabricante (Anexo VI y Anexo VII). REACCIONES E INTERPRETACIÓN En las muestras positivas se observa el crecimiento de hongos y levaduras con su morfología colonial típica o confluencia de colonias. Método de preparación de Agar Dextrosa Sabouraud marca Bioxon (Anexo VI). Disolver 65 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada, remojar de 10 a 15 minutos, mezclar bien hasta que se obtenga una suspensión uniforme. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar a C durante 15 minutos. Método de preparación de Agar Dextrosa Sabouraud marca MCD (Anexo VII).

22 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 22 de 58 Suspender 65 g del medio en 1 litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta completa disolución del polvo y hervir durante 1 minuto. Evitar el sobrecalentamiento. Esterilizar en autoclave a 121 C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Enfriar a una temperatura entre C y vaciar en placas de Petri estériles. Una vez gelificado el Agar Dextrosa Sabouraud se meterá a prueba de esterilidad en la estufa bacteriológica por 24 hrs a 37 C. Transcurridos las 24 hrs sacarlos de la estufa y revisar si no están contaminados. Las cajas se etiquetaran con la abreviatura del medio, número de lote, fecha de elaboración y fecha de caducidad. Una vez gelificado el Agar de Sal y Manitol se meterá a prueba de esterilidad en la estufa bacteriológica por 24 hrs a C. Transcurridos las 24 hrs sacarlos de la estufa y revisar si no están contaminados. Las cajas se etiquetaran con la abreviatura del medio, número de lote, fecha de elaboración y fecha de caducidad. Se recomienda probar el desarrollo microbiológico con cepas control. SISTEMA DE IDENTIFICACIÓN BACTERIOLÓGICA EN MINIATURA BD BBL TM CRYSTAL TM Purificar las cepa sospechosa de ser patógena según el tracto que sea analizado.- En el medio donde este la cepa sospechosa de ser patógena, tocar con una asa recta una sola colonia y hacer un tapete, luego incubar a C durante 24hrs. 1.- Saque las tapas de la bolsa. Deseche el secante. Una vez sacadas de la bolsa, las tapas cubiertas deben utilizarse en el plazo de 1 hora. No utilice el panel si no hay secante en la bolsa. Vea la Fig. A. 2.- Tome un tubo de inoculo y etiquételo con el número de muestra del paciente. Utilizando una técnica aséptica, con la punta de una torunda estéril de algodón (no utilice una torunda de poliéster) o una varilla con aplicador de madera o un asa de cultivo estéril de plástico. Para los patógenos entéricos/no fermentadores suspender una colonia grande bien aislada (con un diámetro de 2 a 3 mm o mayor) o de 4 a 5 colonias más pequeñas de la misma morfología de una placa de sangre. El uso de una placa Agar Mac Conkey es también aceptable.

23 Código: I-FQUI-LAC-07 Revisión: 12 Página: 23 de 58 Para los patógenos positivos suspender las colonias en un tubo BBL cristal RGP hasta tener una turbidez de estándar No 2 de McFarland. Si se pasa la concentración del inoculo del No 2 de McFarland se recomienda lo siguiente: a.- Preparar una nueva suspensión del inoculo equivalente al estándar No 2 de MacFarland. b.- Si se tiene colonias disponibles, diluir el inoculo con un volumen mínimo (no exceder a 1 ml) con solución salina estéril al 8.5% hasta el estándar 2 de McFarland. 3.-Suspenda las colonias en un tubo de fluido de inóculo BBL Crystalpara organismos entéricos/heces. 4.- Vuelva a tapar el tubo y agítelo durante aproximadamente s. 5.- Tome una base y marque el número de muestra del paciente en la pared lateral. 6.- Vierta todo el contenido del fluido de inoculo en el área objetivo de la base. Vea la Fig. B. 7.- Sostenga la base con ambas manos y mueva el inoculo suavemente de un lado para otro a lo largo de las pistas hasta que se hayan llenado todos los pocillos. Haga retroceder cualquier líquido sobrante del área objetivo. Vea la Fig. C. 8.- Alinee la tapa de forma que el extremo marcado de la tapa esté en la parte superior del área objetivo de la base. Vea la Fig. D.