Monitoreo de peces. Universidad Nacional de La Plata. Diversos Contaminantes Determinados en la misma

Transcripción

1 Evaluación de la Sensibilidad de Diferentes Especies Acuáticas, Presentes en la Cuenca Matanza Riachuelo, Expuestas a Diversos Contaminantes Determinados en la misma Monitoreo de peces Universidad Nacional de La Plata Quinto Informe de Avance Trimestre V Diciembre de 2012

2 Contenido 1. PRESENTACIÓN ESTACIONES DE MUESTREO... 5 Estación Estación Estación Estación Estación Estación Estación Estación Estación Estación ESTACIONES ANEXAS Estación Estación Estación Estación Estación Estación Estación Estación Estación Estación Estación Estación Estación CONCLUSIONES Anexo fotográfico de peces BIOENSAYOS ENSAYOS DE TOXICIDAD CON EXPOSICIÓN AGUDA SOBRE OSTRÁCODOS Introducción Principio de los ensayos agudos con ostrácodos Procedimiento de ensayo Condiciones del ensayo Procesamiento de datos y expresión de resultados Resultados ENSAYOS DE TOXICIDAD CON EXPOSICIÓN AGUDA SOBRE LENTEJAS DE AGUA (Lemna gibba) Introducción Principio de los ensayos agudos con lenteja de agua... 41

3 Procedimiento de ensayo Condiciones del ensayo Procesamiento de los datos y expresión de los resultados Resultados ENSAYOS DE TOXICIDAD CON EXPOSICIÓN AGUDA SOBRE ANFIBIOS Introducción Principio de los ensayos agudos Procedimiento de ensayo Condiciones del ensayo Procesamiento de los datos y expresión de los resultados Resultados ENSAYO AGUDO CON EL CLADÓCERO DAPHNIA MAGNA (MICROCRUSTÁCEO) Introducción Principio del ensayo Procedimiento de ensayo Condiciones del ensayo Procesamiento de los datos y expresión de los resultados Resultados Conclusiones / 50

4 1. PRESENTACIÓN La ejecución del proyecto para la evaluación de la sensibilidad de especies de animales y vegetales acuáticos, característicos de la Cuenca Matanza Riachuelo, expuestos a diferentes contaminantes, pretende lograr una caracterización ambiental mediante el monitoreo de biota, agua y sedimentos de fondo de cauce en la cuenca del río Matanza - Riachuelo. El presente documento corresponde al quinto informe de avance sobre el monitoreo ambiental de la cuenca, efectuado durante el cuarto trimestre del año 2012, en el período comprendido del 15 de noviembre al 2 de diciembre de En dicho lapso, se procedió con la ejecución de la campaña de muestreo, la cual estuvo a cargo del Licenciado Gustavo Bulus y el Licenciado Federico Argemi de la Universidad Nacional de La Plata (UNLP). Las operaciones de muestreo fueron llevadas a cabo por un equipo técnico de la UNLP, siendo los responsables de colectar muestras de peces empleando, metodologías estandarizadas para tal fin y de acuerdo con lo que indican las reglas del arte. La selección de los puntos estación (PE) para la toma de muestras atiende a criterios desarrollados por la autoridad de cuenca, y pretenden ser representativos para manifestar la alteración de calidad del agua superficial con énfasis en las consecuencias de la actividad antrópica desarrollada en la cuenca. Los resultados obtenidos brindan la información actualizada necesaria para caracterizar la calidad de agua del río y, conjuntamente, evaluar la calidad de los sedimentos de su lecho. 4 / 50

5 2. ESTACIONES DE MUESTREO En las figuras que se presentan a continuación se puede observar la distribución de las estaciones de muestreo Figura 2.1. Muestra las 39 estaciones originales. En verde se indican las estaciones en las que realizaron capturas. 5 / 50

6 Figura 2.2. Muestra las estaciones anexas. En violeta se indican las estaciones en las que realizaron capturas. En verde se indican los sitios involucrados en el muestreo que no registraron capturas o a los que no se pudo acceder. En rojo el resto de los sitios. 6 / 50

7 Estación 1 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 1 MatyRut3 Puente Ruta Nacional N 3 (Km 52,5) Río Matanza- Riachuelo 34 55'21.36"S 58 43'17.04"O Marcos Paz Peces: Se lograron capturar 2 especies. La primera de ellas, Corydoras sp. con una longitud estándar media (Lst) de 20,5 mm y la restante fue Cnesterodon sp. con una longitud media de 19,8 mm. Imagen 1.1. Río Aguas abajo, con baja profundidad, media a baja velocidad de corriente, con gran depósito sedimentario y vegetación arraigada. 7 / 50

8 Estación 2 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 2 Mplanes Río Matanza, cruce con calle Planes Río Matanza- Riachuelo 34 53'35.16"S 58 39'13.68"O Límite entre Cañuelas y La Matanza Peces: Se capturaron 3 especies, siendo las mismas, Corydoras sp con 26,8 mm de LSt media, Cnesterodon sp con 22,4 mm de LSt media y Cheirodon sp con una LSt media de 35,8 mm. Imagen 2.1. Sitio de muestreo, baja velocidad de corriente y escasa profundidad. 8 / 50

9 Estación 3 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 3 ArroCanu Puente Autopista Ezeiza-Cañuelas Arroyo Cañuelas 34 54'55.08"S 58 37'56.64"O Límite entre Cañuelas y Ezeiza Peces: Se capturaron solo ejemplares de Cnesterodon sp con una talla media de 22,9 mm. Imagen 3.1 Ambiente con escasa corriente y caudal, profundidad media. 9 / 50

10 Estación 4 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 4 ArroChac Arroyo Chacón, cruce con calle Planes Arroyo Chacón 34 52'54.48"S 58 40'4.08"O La Matanza Peces: Abundante presencia de Cnesterodon sp. los cuales presentaron una talla media de 23,7 mm de longitud estándar promedio, mientras que se capturaron un número reducido de Cheirodon sp. con un talla media de 28,5 mm. Imagen 4.1. Se observa presencia de cauce invadido con vegetación flotante arraigada con abundante cantidad de peces. 10 / 50

11 Estación 5 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 5 Mherrera Río Matanza, cruce con calle Máximo Herrera Río Matanza- Riachuelo 34 51'49.68"S 58 38'22.92"O Límite entre Ezeiza y La Matanza Peces: No se registraron capturas, tampoco se observó la presencia de peces en el sitio de muestreo. Imagen 5.1. Sitio de muestreo con muy baja velocidad de corriente. 11 / 50

12 Estación 8 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 8 ArroMora Arroyo Morales, cruce con calle Manuel Costilla Hidalgo Arroyo Morales 34 47'49.56"S 58 38'10.68"O La Matanza Peces: No se registraron capturas. Imagen 8.1. Sitio de muestreo con moderada velocidad de corriente y abundante vegetación. 12 / 50

13 Estación 33 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 33 ArroCanu2 Arroyo Cañuelas, puente Ruta Nacional Nº 205 Arroyo Cañuelas 34 55'31.44"S 58 36'37.44"O Cañuelas Peces: Se lograron capturar 3 especies las cuales se listan en la siguiente tabla. Especie Lst media en mm Corydoras sp. 28,96 Cnesterodon sp. 18,95 Cheirodon sp. 25,5 Imagen Sitio de muestreo con velocidad de corriente media. Se observa abundante presencia de algas filamentosas. 13 / 50

14 Estación 36 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 36 ArroChac3 Arroyo Chacón, cruce con calle Pumacahua Arroyo Chacón 34 53'9.60"S 58 40'44.04"O La Matanza Peces: Se registraron capturas de Cnesterondon sp. con una talla media de 24,56 mm. Imagen Sitio rectificado con poca profundidad. Se observa vegetación ingresando en el curso y algas filamentosas en el mismo. 14 / 50

15 Estación 37 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 37 ArroMora1 Puente sobre calle de acceso al penal de Marcos Paz Arroyo Morales 34 50'19.32"S 58 49'59.52"O General Las Heras Peces: No se registraron capturas. Imagen Sitio correntoso con poca profundidad. 15 / 50

16 Estación 38 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 38 ArroRod Arroyo Rodríguez, aguas abajo de la confluencia con el Arroyo Los Pozos Arroyo Rodríguez 34 59'9.24"S 58 53'3.12"O General Las Heras Peces: No fue posible ingresar al sitio para efectuar el muestreo. Imagen Sitio de muestreo con gran profundidad y velocidad media de corriente. 16 / 50

17 3. ESTACIONES ANEXAS Sitio de Muestreo Capturas 40 Cnesterodon sp y Jennynsia sp. 41 Imposible acceso Sitio de Muestreo Capturas 54 No se registraron capturas Cnesterodon sp. 42 Imposible acceso Cnesterdon sp. 55 Cheirodon sp. Corydoras sp. 43 Cheirodon sp. Corydoras sp. 56 No se registraron capturas. Cnesterdon sp. Cnesterdon sp. 58 Cheirodon sp. 44 Cheirodon sp. Corydoras sp. Corydoras sp. 59 Imposible acceso 45 Cnesterodon sp. 46 Imposible acceso 48 Imposible acceso 49 Sitio canalizado No se registraron capturas 53 No se registraron capturas 62 No se capturaron peces 64 Presencia de Anfibios pero no Peces 65 No se capturaron peces 66 Imposible acceso 68 Imposible acceso 69 Imposible acceso 17 / 50

18 Estación 40 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 40 ArroCeb1 Aº Cebey aguas arriba del Lewin SA Aº Cebey 35 3'46.69"S 58 47'10.62"O Cañuelas Peces: Se capturaron dos especies de peces, Cnesterodon sp. Lst. 22,4 mm y Jennynsia sp. Lst 19,5 mm. Imagen Se observa abundante vegetación palustre sobre las márgenes. La corriente es baja y el curso tiene poca profundidad. 18 / 50

19 Estación 43 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 43 ArroRodRuta6 Aº Rodríguez y Ruta 6 Aº Rodríguez 34 58'5.81"S 58 49'6.11"O Las Heras Peces: Se capturaron ejemplares de 3 especies, las cuales se informan en la siguiente tabla: Especie Lst media en mm Corydoras sp. 23 Cnesterodon sp. 21,55 Cheirodon sp. 23,5 Imagen Se observa abundante vegetación riparia. El curso presenta sectores protegidos de la corriente del cauce principal. 19 / 50

20 Estación 44 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 44 ArroMora2 A Morales y Ruta 6 A Morales 34 52'22.48"S 58 52'14.42"O Las Heras Peces: Se capturaron ejemplares de 3 especies, las cuales se informan en la siguiente tabla: Especie Lst media en mm Corydoras sp. 34 Cnesterodon sp. 24 Cheirodon sp. 26,29 Imagen El sitio presenta abundante vegetación sobre sus márgenes. El caudal es medio y la profundidad es importante. 20 / 50

21 Estación 45 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 45 ArroPaj A La Paja y Ruta 200 A La Paja 34 49'24.09"S 58 51'57.19"O Marcos Paz Peces: Se capturaron ejemplares de una sola especie: Cnesterodon sp. Especie Lst media en mm Cnesterodon sp. 18,54 Imagen Sitio de muestreo, con presencia de abundante vegetación y con presencia de basura en el curso de agua. La corriente es media a alta con importantes cambios en la profundidad. 21 / 50

22 Estación 49 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 49 TribRod1 Tributario del A Rodríguez Aguas abajo de PDLC General las Heras Tributario del A Rodríguez 34 56'59.30"S 58 55'13.77"O Las Heras Peces: No se capturaron ejemplares de peces. Imagen Sitio de muestreo rectificado. 22 / 50

23 Estación 50 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 50 ArroPanta1 A Pantanoso Aguas arriba de la PDLC A Pantanoso 34 45'38.17"S 58 49'10.64"O Marcos Paz Peces: No se capturaron ejemplares de peces. Imagen Sitio de muestreo en ubicación urbana. El curso de agua en este sector se encuentra rectificado y presenta desniveles en su cauce producto de la construcción del puente. 23 / 50

24 Estación 53 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 53 ArroCanuPel A La Montañeta y calle Pellegrini (aguas abajo de industria Frigorífico Cañuelas SRL) A La Montañeta 35 3'37.43"S 58 44'24.30"O Cañuelas Peces: No se capturaron ejemplares de peces. Imagen El cauce es angosto con vegetación herbácea en sus márgenes. 24 / 50

25 Estación 54 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 54 ArroCanuRuta6 A La Montañeta y Ruta 6 A La Montañeta 35 2'34.24"S 58 42'45.38"O Cañuelas Peces: No se capturaron ejemplares de peces.. Imagen Curso de agua angosto con gran cantidad de vegetación herbácea sobre sus márgenes que en algunos sectores ingresa hacia el interior del curso. 25 / 50

26 Estación 55 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 55 ArroCanu205 A Cañuelas y Ruta 205 A Cañuelas 34 58'4.48"S 58 39'24.74"O Cañuelas Peces: Se capturaron ejemplares de 3 especies, las cuales se informan en la siguiente tabla: Especie Lst media en mm Cnesterodon sp. 19,3 Corydoras sp. 25,8 Cheirodon sp. 25,7 Imagen Sitio de muestreo con cauce amplio y muy bajo caudal. Se observan gran cantidad de algas filamentosas y vegetación semisumergida. 26 / 50

27 Estación 56 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 56 ArroCanuSuiza A Cañuelas y calle Suiza (aguas abajo de Frigoríficos Coop de trabajo obrera Máximo Paz y Coop de trabajo Frigo Carne) A Cañuelas 34 56'14.45"S 58 37'24.95"O Cañuelas Peces: No se capturaron ejemplares. Imagen Se observa vegetación sumergida y palustre. La corriente es baja al igual que la profundidad. 27 / 50

28 Estación 58 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 58 ArroCast A De Castro. Aguas arriba la confluencia con el A Cebey A De Castro 34 59'56.98"S 58 46'45.05"O Cañuelas Peces: Se capturaron ejemplares de 3 especies, las cuales se informan en la siguiente tabla: Especie Lst media en mm Cnesterodon sp. 20,46 Corydoras sp. 24,44 Cheirodon sp. 26,11 Imagen Sitio de muestreo con profundidad variable y velocidad media de corriente. La vegetación acuática y de las márgenes ingresa en algunos sectores reduciendo la sección efectiva del curso. 28 / 50

29 Estación 62 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 62 ArroCanuHipico A Cañuelas y Acceso al Club Hípico A Cañuelas 34 58'39.63"S 58 39'46.19"O Cañuelas Peces: No se capturaron ejemplares. Imagen Sitio de muestreo con baja profundidad y velocidad media de corriente. El bajo caudal deja al descubierto las márgenes desnudas en algunos sectores. 29 / 50

30 Estación 64 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 64 TribRod2 Tributario del A Rodríguez Aguas abajo de descarga de Lácteos Barraza A Rodríguez 34 56'39.64"S 59 2'28.27"O General Las Heras Peces: No se capturaron ejemplares. Imagen Sitio de muestreo con baja profundidad y nula corriente. La vegetación presente sugiere que ha pasado un largo período seco o con escaso caudal. 30 / 50

31 Estación 65 Estación Código Ubicación Nombre del curso Latitud Longitud Partido 65 TribMora Canal Industrial (Aguas abajo de Compañía Alimenticia los Andes) Tributario del Aº Morales 34 55'2.02"S 58 57'28.58"O General Las Heras Peces: No se capturaron ejemplares. Imagen Sitio de muestreo con gran profundidad y velocidad baja de corriente que ha sido rectificado. Se observa gran cobertura vegetal de hidrófilas flotantes y algunas arraigadas. 31 / 50

32 4. CONCLUSIONES En la siguiente tabla se representan los puntos estación en los que se capturaron peces durante los muestreos correspondientes a los trimestres segundo, tercero, cuarto y quinto. La presencia de individuos durante uno u otro muestreo puede deberse a distintos factores, entre ellos, el alto dinamismo de las especies capturadas, el caudal variable debido a las precipitaciones, etc. Nota: Las celdas sombreadas indican las estaciones donde se registraron capturas de peces durante el trimestre. Las celdas en blanco indican estaciones donde no se registraron capturas de peces. En parte esta gran variabilidad en las capturas efectuadas puede modificarse incrementando el esfuerzo de muestreo y/o modificando las artes de pesca. Del análisis comparativo de los relevamientos se pueden observar ciertas tendencias en algunos arroyos. Por ejemplo el arroyo cañuelas en su cuenca alta en las cercanías de la ciudad de Cañuelas (estaciones 52, 53 y 54) no han presentado capturas en ninguna de las campañas, mientras que aguas abajo los puntos 32, 62, 55, 56, 33 y 3 han presentado capturas en dos o tres de los trimestres analizados. El arroyo Chacón presenta un comportamiento similar con ausencia de capturas en su cuenca alta (estaciones 34 y 35) y capturas en dos trimestres en el sitio 36 y en los cuatro trimestres en el sitio 4. El sitio 66 que se ubica cerca de la desembocadura en el río Matanza no pudo ser muestreado en ninguna de las campañas, aunque es probable que cuando se pueda acceder se registren capturas. En el caso del arroyo Rodríguez, los muestreos realizados han encontrado peces en las estaciones 42, 38, 43, 1 y 2. La estación aguas arriba número 64 es un curso 32 / 50

33 intermitente, razón que puede explicar la ausencia de peces. La estación 68 solo ha podido ser muestreada una vez por cuestiones operativas asociadas a la accesibilidad del sitio. El arroyo Cebey posee seis puntos de muestreo sobre el cauce (40, 63, 61, 39, 59 y 41) y uno en un afluente, el arroyo De Castro (punto 58). En este caso se han efectuado capturas en el sitio 40 aguas arriba del resto de los puntos. Los puntos 63, 61 y 59 nunca han sido muestreados por problemas de accesibilidad y los puntos 39 y 41 no han presentado capturas aunque cabe aclara que el punto 39 solo ha sido muestreado una vez. El punto 58 ha presentado capturas en las tres campañas en la que se lo muestreo. El arroyo Morales tiene seis puntos de muestreo sobre su cauce (65, 44, 37, 46, 67 y 8 y dos tributarios (47 y 48). De estos puntos solo el 44 y el 37 han presentado capturas. El 65 solo ha sido muestreado una vez, y los sitios 46, 47, 48 y 67 no han podido ser muestreados por problemas de accesibilidad. El punto 8 fue muestreado en dos ocasiones y solo presentó capturas en una de ellas. Las estaciones 61, 63, 66, 67, 69 y 70 nunca han podido ser muestreadas por problemas de accesibilidad. Respecto del relevamiento del quinto trimestre del convenio, en la siguiente figura se puede observar las frecuencias de las capturas para cada una de las especies recolectadas. De los 12 sitios en los cuales se registraron capturas de peces, la especie Cnesterodon sp. fue la que presentó mayor cantidad de presencias, seguidas por Cheirodon sp. y Corydoras sp., mientras que Jenynsia sp. tan solo fue capturada en un solo sitio. Asimismo la siguiente figura muestra la abundancia relativa del número de organismos capturados. En la misma se observa que la presencia de Cnesterodon sp. fue además de la más encontrada, la que se capturo en mayor número de ejemplares. 33 / 50

34 Por otra parte cabe destacar la abundancia relativa de Cheirodon sp., que fue la segunda especie en abundancia relativa de organismos. Vale destacar que esta última especie resulta ser de aguas más oxigenadas, lo cual sugiere una mejoría de calidad de agua de los sitios evaluados que podría deberse a diferentes causas entre las que se pueden destacar las abundante lluvias ocurridas en los meses previos al muestreo o a una reducción en el ingreso de contaminantes orgánicos al sistema. Como anexo de esta sección se pueden ver imágenes de las especies encontradas durante el relevamiento. 34 / 50

35 5. Anexo fotográfico de peces Imagen 5.1. de ejemplares de Cheirodon sp. capturados durante el muestreo. 35 / 50

36 Imagen 5.2. de ejemplares de Cheirodon sp. capturados durante el muestreo. 36 / 50

37 Imagen 5.3. Ejemplar de Corydoras sp. capturado durante el muestreo. Imagen 5.4. Ejemplar de Jenynsia sp. capturado durante el muestreo. 37 / 50

38 Imagen 5.5. Ejemplares de Cnesterodon sp. capturados durante el muestreo. 38 / 50

39 6. BIOENSAYOS 6.1. ENSAYOS DE TOXICIDAD CON EXPOSICIÓN AGUDA SOBRE OSTRÁCODOS Introducción Durante el quinto trimestre del convenio se realizaron baterías de ensayos de toxicidad de exposición aguda a plaguicidas. Estos se practicaron sobre una especie de ostrácodo (Cypridopsis vidua). Al costado del párrafo se puede observar una imagen del mismo Principio de los ensayos agudos con ostrácodos El ensayo consiste en la exposición de individuos adultos de la especie de ostrácodo seleccionada frente a distintas concentraciones del tóxico analizado. Luego de un tiempo de exposición de 96 horas se contabiliza el número total de individuos inmóviles / muertos / disgregados Procedimiento de ensayo Los bioensayos se realizaron en dos etapas, la primera consistió en un ensayo preliminar, con el cual se acotó el intervalo de diluciones sobre el cual era esperable una inmovilidad parcial de los organismos expuestos. A continuación, como segunda etapa, se realizó el ensayo definitivo, cuyos resultados se informan en el presente documento. Tanto el ensayo preliminar como el definitivo, se implementaron preparando una serie de diluciones de concentración decreciente a partir de una solución madre, utilizando para ello agua dulce de red, declorinada, con una dureza igual a 178 mg CaCO 3 /l Condiciones del ensayo Se ensayaron las diluciones de la solución madre de cada tóxico en las condiciones detalladas en las Tabla 1 y Tabla 2. Parámetro Grupo estudiado Tipo de recipiente Tabla 1: Tipo de ensayo Condición Ostrácodos Plástico Agua de dilución Agua de red declorinada dureza 178 mg CaCO 3 /l Medio de cultivo Agua de red declorinada dureza 178 mg CaCO 3 /l Volumen de la solución de prueba Número de réplicas 3 Duración del ensayo Tipo de ensayo Método de Evaluación 500 ml 96 horas Estático con renovación de medio Conteo directo de organismos muertos 39 / 50

40 Aceptabilidad de los resultados Blanco con mortalidad inferior a 10% Tabla 2: Condiciones de ensayo Parámetro Condición ph 7,8 ± 0,2 Temperatura 20 ± 2 ºC Alimentación Sin alimentación Calidad de luz Fluorescente, Blanco-frío Intensidad luminosa lux Fotoperíodo 16:8 (luz:oscuridad) Resultado final CE 50 /CL 50 (Concentrac. Efectiva 50 / Concentrac. Letal 50) Procesamiento de datos y expresión de resultados Luego de finalizado el período de exposición del bioensayo, se procede a calcular la proporción de mortalidad para cada dilución, en base al número total de organismos inmóviles / muertos / disgregados, versus el número de individuos expuestos al tóxico. Analizando la curva concentración-respuesta se cuantifica la relación entre la proporción de individuos muertos y la concentración del tóxico. Este procedimiento se efectúa mediante el cálculo de una regresión lineal. A fin de realizar las estimaciones correspondientes a los parámetros de la recta y, en virtud de la relación curvilínea de las variables en juego, se procede previo al análisis de la mismas, a su transformación aplicando logaritmos en base 10 sobre el porcentaje de dilución, y unidades probabilísticas normales (unidades Probit) a la proporción de organismos inmóviles. La última transformación se efectúa utilizando una tabla de probabilidades de la distribución Normal, en la que se busca el valor correspondiente a la proporción de mortalidad, como si fuese una probabilidad. Una vez encontrado el valor, se transforma reemplazando el mismo por el correspondiente valor de Z (variable normal estandarizada), al cual se le suman 5 unidades, a fin de evitar la ocurrencia de valores negativos. Las variables así transformadas, a fin de estimar los parámetros de la recta, son entonces analizadas utilizando programas generales de cálculo estadístico (tipo Excel) o específicos para este tipo de análisis, como el PROBIT de la USEPA. Una vez realizado este procedimiento, se utiliza la ecuación de la recta para estimar las concentraciones que causan distintas proporciones de efecto, asignando valores a la variable dependiente, y obteniendo valores del logaritmo de la concentración, que luego se convierten a sus unidades originales. La más común de estas concentraciones se conoce como concentración efectiva 50 (CE 50 ) y se refiere a la concentración a la cual se ven afectados el 50% de los organismos expuestos. Esta concentración se obtiene asignando el valor 5 a la variable dependiente en la ecuación de la recta, este valor corresponde a un efecto en el 50% de los organismos expuestos. Obteniendo así el valor del logaritmo de la concentración, sobre el cual se calcula su antilogaritmo. 40 / 50

41 De manera semejante la concentración efectiva 10 (CE 10 ) se refiere a la concentración que afecta el 10% de los organismos expuestos. Si el efecto evaluado es la mortalidad se habla de concentración letal 50 (CL 50 ). Una vez estimada la CL 50 u otro punto final, se calculan los correspondientes límites de confianza de la estimación puntual, para el 95% de confianza (95 de cada 100 veces que se efectúe esta medición el verdadero valor caerá dentro del intervalo). Este procedimiento estadístico se realiza por estimación inversa, es decir, se calcula los límites de confianza de la manera clásica para la estimación del 50% de efecto, y luego utilizando la recta estimada se calcula los logaritmos de las concentraciones asociadas a esos efectos. Finalmente se calcula sus antilogaritmos para obtener los límites de confianza finales Resultados A continuación se presentan los resultados obtenidos para la especie y compuestos ensayados. Tabla 3: Concentración letal 50 (CL 50 ) expresada el mg/l del metal obtenida para cada compuesto ensayado con Cypridopsis vidua Metal CL 50 Límite inferior 95% Límite superior 95% Unidades Método de estimación Cipermetrina 0,009 0,003 0,0042 mg/l Probit Clorpirifos 0,008 0,004 0,018 mg/l Probit Endosulfan 0,196 0,076 2,202 mg/l Probit Glifosato > mg/l Probit 6.2. ENSAYOS DE TOXICIDAD CON EXPOSICIÓN AGUDA SOBRE LENTEJAS DE AGUA (Lemna gibba) Introducción Durante el quinto trimestre del convenio se realizaron baterías de ensayos de toxicidad de exposición aguda a metales pesados, estos se practicaron sobre una especie de lenteja de agua (Lemna gibba) Principio de los ensayos agudos con lenteja de agua El bioensayo de toxicidad con lenteja de agua (Lemna gibba) es una prueba estática de toxicidad aguda. Esto significa que se realiza sin renovación de la muestra o dilución ensayada durante los 7 días de exposición y la exposición de los vegetales involucra solo una pequeña fracción de su ciclo de vida. 41 / 50

42 En este bioensayo se puede evaluar efectos fitotóxicos de los compuestos puros o de muestras ambientales, durante el proceso de desarrollo de frondes. Las variables utilizadas en la evaluación de los efectos fitotóxicos son la inhibición en la cantidad de frondes producidas comparadas contra un control negativo Procedimiento de ensayo Los ensayos se realizan en dos etapas, la primera consiste en un ensayo preliminar en el cual se acota el intervalo de diluciones donde es esperable una inhibición parcial del crecimiento de los vegetales expuestos. A continuación, como segunda etapa, se realiza el ensayo definitivo que es que se informa en el presente documento. Tanto el ensayo preliminar como el definitivo, se implementan preparando una serie de diluciones de concentración decreciente a partir de la solución madre de tóxico, utilizando como agua para la dilución medio de cultivo Condiciones del ensayo Se ensayaron distintas diluciones de la solución madre en las condiciones detalladas en la Tabla 4. Especie Tabla 4: Tipo de ensayo y condiciones Parámetro Tipo de recipiente Volumen de la solución de prueba Agua de dilución Número de réplicas 4 Número de frondes por réplica 8 Tipo de ensayo Duración del ensayo Protocolo Método de Evaluación Lemna gibba Potes de 500 ml 250 ml Medio de cultivo Condición Estático sin renovación de medio 7 días Temperatura 22 ± 2ºC Fotoperiodo OPPTS EPA712 C Inhibición en el crecimiento 24 horas de luz Resultado final CI50 (Concentración inhibitoria 50) Procesamiento de los datos y expresión de los resultados Se analizan la concentración del tóxico como variable independiente y la inhibición del crecimiento como variable dependiente, los mismos se pueden analizar mediante métodos de regresión lineal o ANOVA. A fin de aplicar los correspondientes métodos de regresión lineal, y teniendo en cuenta que la relación entre las dos variables no es rectilínea, la concentración se transforma aplicando logaritmos, para lograr una distribución de tipo normal en las respuestas para una concentración dada. 42 / 50

43 La variable respuesta puede o no transformarse, dependiendo de la distribución de los puntos en un gráfico bivariable, pero se expresa como el porcentaje de la diferencia con respecto al control negativo (Blanco o concentración 0). Para efectuar la regresión en cuestión se aplican las técnicas de regresión básicas de estadística. Entre los modelos más utilizados para este tipo de variables se encuentra el Logístico, que puede ser trasformado fácilmente en una recta o se puede analizar por procedimientos de regresión no lineal, que se encuentran disponibles en la mayoría de los software estadísticos. Las variables así transformadas son entonces analizadas y una vez estimados los parámetros de la recta se utiliza la misma para determinar las concentraciones que causan distintas proporciones de inhibición. La más común de estas concentraciones se conoce como concentración inhibitoria 50 (CI50) y se refiere a la concentración a la cual la elongación de la raíz se reduce/exalta al 50% con respecto al control. De manera semejante, la concentración inhibitoria 10 (CI10) se refiere a la concentración que reduce/exalta al 10% la elongación de la raíz con respecto al control para determinar la NOEC o la LOEC e implica pruebas de hipótesis. El método clásico para este tipo de análisis es el ANOVA seguido a posteriori por la prueba de Dunnet. Para este tipo de análisis se requiere que se verifiquen los supuestos de un ANOVA (varianzas homogéneas, independencia de los errores, distribución normal de los residuos, entre los más importantes), que el número de replicados por tratamiento sea igual o mayor a tres y que todos los tratamientos tengan el mismo número de replicados. Si hay menos de tres replicados no se debería proceder con una prueba de hipótesis, y si el número de replicados varía entre los tratamientos, se debería utilizar en lugar de la prueba de Dunnet, la prueba de t con el ajuste de Bonferroni. La homogeneidad de varianzas se puede evaluar con la prueba de Bartlett y la distribución normal de los residuos con la prueba de Shapiro Wilk. Es importante destacar que de no verificarse los supuestos del ANOVA será necesario proceder a la transformación de la variable dependiente (respuesta), hasta obtener una que verifique dichos supuestos, o aplicar métodos no paramétricos como la prueba de Kruskal-Wallis, seguido del método de Fiedman para la comparación a posteriori, o la prueba de rangos de Steel Many o la prueba de suma de rangos de Wilcoxon con el ajuste de Bonferroni Resultados A continuación se presenta los resultados obtenidos para la especie y compuestos ensayados. Solo se presenta los resultados de inhibición del crecimiento por análisis del número de frondes. Tabla 5: Concentración inhibitoria 50 (CI 50 ) expresada en mg/l del metal para la germinación correspondiente a cada compuesto ensayado con Lemna gibba sp. Metal CI 50 Límite inferior 95% Límite superior 95% Unidades Método de estimación Cadmio 0,218 0,029 0,741 mg/l Probit 43 / 50

44 Cobre 0,226 0,177 0,310 mg/l Probit Cromo 0,117 0,069 0,639 mg/l Probit Mercurio 0,396 0,257 0,499 mg/l Probit Níquel 0,121 0,066 0,310 mg/l Probit Zinc 0,494 0,381 0,763 mg/l Probit 6.3. ENSAYOS DE TOXICIDAD CON EXPOSICIÓN AGUDA SOBRE ANFIBIOS Introducción Durante el quinto trimestre del convenio se realizaron de ensayos de toxicidad de exposición aguda a plaguicidas y metales pesados, estas se practicaron sobre dos larvas de especies de anfibios nativos de la cuenca Matanza-Riachuelo (Physalaemus fernandezae y Rhinella arenarum) Principio de los ensayos agudos El ensayo consiste en la exposición de crías o larvas de las especies seleccionadas a distintas concentraciones del tóxico analizado. Luego de 96 horas de tiempo de exposición se contabiliza el número total de animales muertos. Physalaemus fernandezae (ranita silbadora enana). Foto: Darío Podestá. 44 / 50

45 Rhinella arenarum (sapo común, sapo grande o sapo). Foto: Darío Podestá Procedimiento de ensayo Los ensayos se realizan en dos etapas, la primera consiste en un ensayo preliminar, en el cual se acota el intervalo de diluciones sobre el cual es esperable una inmovilidad parcial de los organismos expuestos. A continuación, como segunda etapa, se realiza el ensayo definitivo el cual se informa en el presente documento. Tanto el ensayo preliminar como el definitivo, se implementan preparando una serie de diluciones de concentración decreciente a partir de una solución madre, utilizando para ello agua de red declorinada con una dureza igual a 178 mg CaCO 3 /l Condiciones del ensayo Se ensayaron las diluciones de la solución madre de cada tóxico en las condiciones detalladas en la Tabla 1. Tabla 6: Condiciones de ensayo Parámetro Grupo estudiado Condición Anfibios Medio de cultivo Agua de red declorinada dureza 178 mg CaCO 3 /l Duración del ensayo Alimentación Método de Evaluación 96 horas Sin alimentación Conteo directo de organismos muertos Temperatura 20 ± 2 ºC Calidad de luz Intensidad luminosa Fluorescente, Blanco-frío lux 45 / 50

46 Fotoperíodo Tipo de recipiente Volumen de la solución de prueba 16:8 (luz:oscuridad) Plástico 500 ml Número de réplicas 3 Agua de dilución Agua de red declorinada dureza 178 mg CaCO 3 /l ph 7,8 ± 0,2 Tipo de ensayo Estático con renovación de medio Resultado final CE 50 /CL 50 (Concentrac. Efectiva 50 / Concentrac. Letal 50) Aceptabilidad de los resultados Blanco con mortalidad inferior a 10% Procesamiento de los datos y expresión de los resultados Se procede a calcular la proporción de mortalidad para cada dilución en base al número total de organismos inmóviles/muertos/disgregados y el número de expuestos al tóxico. Analizando la curva concentración-respuesta se cuantifica la relación entre la proporción de muertos y la concentración del tóxico. Este procedimiento se efectúa mediante el cálculo de una regresión lineal. A fin de realizar las estimaciones correspondientes a los parámetros de la recta y, en virtud de la relación curvilínea de las variables en juego, se procede previo al análisis de la mismas, a su transformación aplicando logaritmos en base 10 sobre el porcentaje de dilución, y unidades probabilísticas normales (unidades Probit) a la proporción de inmóviles. La última transformación se efectúa utilizando una tabla de probabilidades de la distribución Normal, en la que se busca el valor correspondiente a la proporción de mortalidad como si fuese una probabilidad. Una vez encontrado el valor, se transforma reemplazando el mismo por el correspondiente valor de Z (variable normal estandarizada), al cual se le suman 5 unidades a fin de evitar la ocurrencia de valores negativos. Las variables así transformadas son entonces analizadas utilizando programas generales de cálculo estadístico (tipo Excel) o específicos para este tipo de análisis, como el PROBIT de la USEPA, a fin de estimar los parámetros de la recta. Una vez realizado este procedimiento, se utiliza la ecuación de la recta para estimar las concentraciones que causan distintas proporciones de efecto, asignando valores a la variable dependiente, y obteniendo valores del logaritmo de la concentración, que luego se convierten a sus unidades originales. La más común de estas concentraciones se conoce como concentración efectiva 50 (CE 50 ) y se refiere a la concentración a la cual se ven afectados el 50% de los organismos expuestos. Esta se obtiene asignando a la variable dependiente en la ecuación de la recta el valor 5 (este valor corresponde a un efecto en el 50% de los organismos expuestos), obteniendo así el valor del logaritmo de la concentración, sobre el cual se calcula su antilogaritmo. De manera semejante la concentración efectiva 10 (CE 10 ) se refiere a la concentración que afecta el 10% de los organismos expuestos. Si el efecto evaluado es la mortalidad se habla de concentración letal 50 (CL 50 ). Una vez estimada la CL 50 u otro punto final, se calculan los correspondientes límites de confianza de la estimación puntual para un 95% de confianza (95 de cada 100 veces que se efectúe esta medición el verdadero valor caerá dentro del intervalo). Este procedimiento estadístico se realiza por estimación inversa, es decir que se calculan los límites de confianza de la manera clásica para la estimación del 50% de efecto, y luego utilizando la recta 46 / 50

47 estimada se calculan los logaritmos de las concentraciones asociadas a esos efectos. Finalmente se calculan sus antilogaritmos para obtener los límites de confianza finales Resultados A continuación se presentan los resultados obtenidos para cada compuesto ensayado. Tabla 7: Concentración letal 50 obtenida para cada compuesto ensayado con Physalaemus fernandezae. Metal CL 50 Límite inferior 95% Límite superior 95% Unidades Método de estimación Cromo 51,892 48,654 55,553 mg/l Probit Mercurio 0,058 0,053 0,063 mg/l Probit Níquel 7,598 5,715 10,254 mg/l Probit Endosulfan 0,043 0,034 0,052 mg/l Probit Glifosato superior a mg/l Tabla 8: Concentración letal 50 (CL 50 ) obtenida para cada compuesto ensayado con Rhinella arenarum Metal CL 50 Límite inferior 95% Límite superior 95% Unidades Método de estimación Clorpirifos 1,099 0,735 2,173 mg/l Probit Glifosato > mg/l Cipermetrina 0,058 0,024 0,114 mg/l Probit Mercurio 0,054 0,050 0,060 mg/l Probit 6.4. ENSAYO AGUDO CON EL CLADÓCERO DAPHNIA MAGNA (MICROCRUSTÁCEO) Introducción Durante el quinto trimestre del convenio se realizaron de ensayos de toxicidad de exposición aguda a plaguicidas con el cladócero Daphnia magna Principio del ensayo El ensayo consiste en la exposición de crías de menos de 24 h de edad del cladócero Daphnia magna a diluciones del lixiviado, considerando como 100% el 47 / 50

48 lixiviado obtenido por el procedimiento antes descripto. Luego de 24 horas de exposición se cuentan el número total de animales inmóviles Procedimiento de ensayo Los ensayos se realizan en dos etapas, la primera consiste en un ensayo preliminar en el cual se acota el intervalo de diluciones en el cual es esperable una inmovilidad parcial de los organismos expuestos. A continuación, como segunda etapa, se realiza el ensayo definitivo que es que se informa en el presente documento. Tanto el ensayo preliminar como el definitivo, se implementan preparando una serie de diluciones de concentración decreciente a partir del lixiviado, utilizando como agua para la dilución al medio de cultivo Condiciones del ensayo Se ensayaron las diluciones de la solución madre de cada tóxico en las condiciones detalladas en la Tabla 1. Tabla 9: Condiciones del ensayo Parámetro Especie Protocolo Medio de cultivo Duración del ensayo Alimentación Método de Evaluación Condición Daphnia magna OPPTS EPA 712 C Agua de rede declorinada. Dureza 178 mg/l CaCO3 24 horas Sin alimentación Conteo directo de organismos inmóviles** Temperatura 20 ± 2ºC Calidad de luz Intensidad Luminosa Fotoperiodo Volumen del recipiente Volumen de la solución de prueba Fluorescente, Blanco-frío lux 16:8 luz:oscuridad Recipientes de vidrio de 25 ml 20 ml Número de réplicas 3 Agua de dilución Agua de cultivo ph 7,8 ± 0,2 Tipo de ensayo Estático sin renovación de medio Resultado final CE50/CL50 (Concentración efectiva 50/concentración letal 50) **Se considera que la inmovilidad es un indicador directo de la mortalidad ya que desde el punto de vista ecológico, un organismo inmóvil es un organismo muerto o que morirá en el corto plazo. 48 / 50

49 Procesamiento de los datos y expresión de los resultados Con el número total de organismos inmóviles y el número de expuestos, se calcula la proporción de inmovilidad para cada dilución. A continuación se cuantifica la relación entre la proporción de inmóviles y la dilución del lixiviado analizando la curva dilución-respuesta. Este procedimiento se realiza mediante regresión lineal. A fin de realizar las estimaciones correspondientes a los parámetros de la recta y en virtud de la relación curvilínea de las variables en juego se procede, previo al análisis de la mismas, a su transformación aplicando logaritmos en base 10 al porcentaje de dilución y unidades probabilísticas normales (unidades Probit) a la proporción de inmóviles. La última transformación se efectúa utilizando una tabla de probabilidades de la distribución Normal en la que se busca en el cuerpo de la tabla el valor correspondiente a la proporción de mortalidad como si fuera una probabilidad. Una vez encontrado el valor, se transforma reemplazando el mismo por el correspondiente valor de Z (variable normal estandarizada) al cual se le suman 5 unidades a fin de evitar la ocurrencia de valores negativos. Las variables así transformadas son entonces analizadas utilizando programas generales de cálculo estadística como el excel o específicos para este tipo de análisis como el PROBIT de la USEPA a fin de estimar los parámetros de la recta. Una vez realizado este paso, se utiliza la ecuación de la recta para estimar las concentraciones que causan distintas proporciones de efecto, asignando valores a la variable dependiente y obteniendo valores del logaritmo de la concentración que luego se convierten a sus unidades originales. La más común de estas concentraciones se conoce como concentración efectiva 50 (CE 50 ) y se refiere a la concentración a la cual se ven inmovilizados el 50% de los organismos expuestos. Esta se obtiene asignando a la variable dependiente en la ecuación de la recta el valor 5 (este valor corresponde a un efecto en el 50% de los organismos expuestos) obteniendo el valor del logaritmo de la concentración, sobre el cual se calcula su antilogaritmo. De manera semejante la concentración efectiva 10 (CE 10 ) se refiere a la concentración que inmoviliza el 10% de los organismos expuestos Resultados A continuación se presentan los resultados obtenidos para cada compuesto ensayado. 49 / 50

50 Tabla 10: Concentración letal 50 (CL 50 ) obtenida para cada plaguicida ensayado con Daphnia magna Metal CL 50 Límite inferior 95% Límite superior 95% Unidades Método de estimación Clorpirifos 0,182 0,150 0,219 microg/l Probit Glifosato 14,871 11,523 19,559 mg/l Probit Cipermetrina 1,000 0,787 1,269 Endosulfan 2,439 1,610 3,626 microg/l microg/l Probit Probit 6.5. Conclusiones Los resultados obtenidos para el crustáceo Cypridopsis vidua muestran una sensibilidad a los tóxicos dentro de la observada para otras especies de crustáceos como los cladóceros y los anfípodos, ubicándose en este caso, en el sector superior de la distribución de sensibilidades de los crustáceos. El plaguicida que presentó mayor toxicidad fue el clorpirifos y el de menor toxicidad el glifosato. Respecto del orden de las toxicidades (clorpirifos > cipermetrina > endosulfan > glifosato) es el observado para otras especies de crustáceos. En el caso de la Lemna gibba los valores obtenidos se encuentran dentro de los intervalos de sensibilidad informados para esta especie. El metal con mayor toxicidad fue el cromo y el de menor toxicidad el cinc. Respecto del orden de las toxicidades este es Cr(IV) > Ni(II) >Cd(II) > Cu(II) >Hg(II) > Zn(II). En el caso de los anfibios Physalaemus fernandezae presentó una sensibilidad a los metales similar al informado para Rhinella arenarum. Una situación similar se observó para el caso de los plaguicidas. Daphnia magna presentó la misma relación de sensibilidad a los plaguicidas observada para los ostrácodos, aunque las LC50 resultaron al menos un orden de magnitud inferiores a los de las otras especies ensayadas. 50 / 50