ACTUALIZACION TOMA DE MUESTRAS VIROLOGICAS Abril 2014

Transcripción

1 ACTUALIZACION TOMA DE MUESTRAS VIROLOGICAS Abril 2014 MV. Judith Mora R. Jefe Subdepto. Enfermedades Virales ISP

2 METODOS DE DIAGNOSTICO VIRAL A. DETECCION DE VIRUS Aislamiento viral en cultivos celulares. Inoculación en animales de laboratorio Inoculación en huevos embrionados B. DETECCIÓN INDIRECTA O PRODUCTOS VIRALES. Inmunofluorescencia (IFD). Inmunoensayo enzimático (ELISA) C. DETERMINACION DE ANTICUERPOS Métodos serológicos (sueros pareados o muestra única) ELISA (IgM IgG) Inmunofluorescencia (IFI). D. DETECCION DE MATERIAL GENETICO VIRAL Reacción de polimerasa en cadena (PCR)

3 CONSIDERACIONES PARA TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA ESTUDIO VIROLOGICO PERIODO OPTIMO DE RECOLECCION Ej: Aislamiento viral en fase aguda TIPO DE MUESTRA Ej: Sangre c/edta SITIO DE OBTENCION Ej: Deposición TECNICA DE OBTENCIÓN DE LA MUESTRA ANF vs Tórula faríngea RECOLECCION DE LAS MUESTRAS Envase estéril, cierre hermético, etc TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Temperatura, medio transporte, etc

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5 1º Tº 2º: protege el embalaje/envase secundario de los daños físicos durante el transporte. 3º identificar al remitente y al destinatario. Incluir formularios de datos relativos a la muestra

6 Organigrama Subdepartamento Enfermedades Virales R.R.H.H: Profesionales 26 Técnicos, Auxiliares, Administrativos 24 Total 50 Laboratorio Nacional de Referencia y cumple acciones de vigilancia establecidas en el Reglamento sobre Notificación de Enf. Transmisibles de Declaración Obligatoria muestras Exámenes por Algoritmos Diagnósticos

7 Virus Entéricos Vigilancia PFA Apoyo a erradicación del virus Polio Último caso en América 1991 (Perú) Meningitis Viral Estudio brotes Diarreas agudas con diferentes etiologías: Vigilancia Rotavirus Hospitales centinelas (V, VIII, RM) MINSAL-OPS Vigilancia Gastroenteritis virales (Norovirus, ADV, Astrovirus, Rotavirus): Centinelas ambulatorios Estudio Brotes

8 Nombre exámen / Prestación Volumen de Método Tipo de muestra Requisitos previos muestra Transporte y conservación Plazo de respuesta en días hábiles Aislamiento de Enterovirus Aislamiento en cultivos celulares Deposición: envase estéril, tapa rosca. sin medio de transporte LCR: envase estéril, tapa rosca. Liq.pericárdico: envase estéril tapa rosca 0-5 días de evolución Deposición: Congelar (-18º 1 cuch. de té a -20ºC) o LCR o Líq refrigerar (2º a Pericard: 1 8ºC) con envio ml ped inmediato 2 ml adulto 15 Vigilancia Aislamiento Poliovirus en cultivos (sospechos celulares os PFA) Vigilancia de Virus Gastroenteri cos: Adenovirus entéricos, Astrovirus, Norovirus y otros Inmunoquím ica y RT-PCR Deposición sin medio de transporte en envase estéril tapa rosca 0-14 días de evolución * Deposición sin * 0-3 días de medio de transporte en evolución en envase esteril tapa niños menores 5 rosca. años : **5 a 10 muestras por Centinelas Brotetificado) ambulatorios 10 grs. (1 cuch. de té) 10 grs. (1 cuch. de té) Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC.. Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC Técnicas Vigilancia Serológicas Rotavirus Inmunoenzi (Centros máticas Centinelas) ytipificación Deposición sin medio de transporte, envase esteril tapa rosca 0-5 días de evolución en niños, hasta 5 años de edad, hospitalizados 10 grms. (1 cuch. de té) Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC.. 21

9 Virus Respiratorios Vigilancia Virus Respiratorios : ADV, VRS, PI, Metapneumovirus) e Influenza A y B IRAG complicación frecuente de la Influenza Red Lab. Hosp. Centinelas IFI Red Lab. Regionales PCR Centro Nacional Influenza para OMS Aislamientos Recepción hasta 12:00 hrs por tipo procesamiento

10 Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos previos Volumen de muestra Transporte y conservación Plazo de respuesta en días hábiles Aislamiento de Influenza A y B Aislamiento en cultivos celulares a) Gargarismo b) Aspirado ANF c) Tórula con secreción NF d) Biopsia tejidos Máximo 3 días de evolución Medio transporte viral Hanks s 0,5% gelatina +antibiótico en frío c/refrigerante s T 2 8 C 15 Aislamiento Virus Respiratorio Sincicial, Adenovirus, Parainfluenza Aislamiento en cultivos celulares a) ANF b) Tórula secreción NF c) Biopsia tejidos d )ADV: Tórula secreción conjuntival Hasta 5 días de evolución Medio transporte viral Hanks s 0,5% gelatina +antibiótico en frío c/refrigerante s T 2 8 C 15 Inmunofluorescencia Indirecta para Virus Influenza A, B Inmunofluore scencia Frotis fijado Aspirado NF Hasta 3 días de evolución Otros VR :Hasta 5 días de evolución En frío con refrigerantes. T 2-8 C 3 PCR para Influenza A, B PCR Aspirado nasofaríngeo o tórula secreción nasofaríngea o biopsia pulmón Hasta 3 días desde inicio de los síntomas Medio transporte viral Hanks s 0,5% gelatina c/antibiótico c/refrigerante s T 2-8 C 5

11 Virus Exantemáticos Vigilancia Integrada Sarampión-Rubéola: Pacientes con exantema macular que puede ser acompañado de fiebre, conjuntivitis, artralgia, linfoadenopatías, etc SRC malformaciones congénitas (1er trimestre embarazo) Recomendaciones: Muestra para aislamiento ideal Aspirado En su defecto, orina: mínimo 50 ml, enviar siempre junto a la muestra de suero. Otras: CMV, Herpes

12 Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos previos Volumen Volumen de de muestra muestra adulto pediátrica Transporte y conservación Plazo de respue sta en días hábile s Vigilancia Sarampión Rubeola ELISA, IF, aislamiento, RT-PCR (según algoritmo ISP) Suero extraído en forma estéril Enviar enviar en tubo estéril tapa rosca. En casos seleccionados ANF (Orina a solicitud) muestras con formulario de vigilancia con la totalidad de los antecedentes solicitados 1 ml suero. ANF en medio de transport e viral o 50 ml orina 2 ml suero. ANF en medio de transporte viral o 50 ml orina Aspirado con medio de transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con unidades refrigerantes Tº 2-8ºC. 4 Estudio Inmunidad Sarampión Vigilancia Síndrome Rubeola Congénita. Suero extraído Inmunofluoren forma estéril escencia enviar en tubo (IF) (IgG) estéril tapa rosca ELISA IgM (algoritmo ISP) Serología IgG RubéolaELISA IgG Suero en tubo estéril tapa rosca. Suero, en tubo estéril tapa rosca. No tiene 1 ml 2 ml Recién nacidos < 1 año 1 ml de suero 1 ml de suero 3 ml suero En frío Tº 2-8ºC. Con unidades refrigerantes En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes

13 Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos previos Suero en tubo Serología IgG CITOMEGALOVIRUS ELISA estéril tapa rosca. Serología IgM Citomegalovirus Aislamiento de Citomegalovirus ELISA Aislamiento en cultivos celulares suero, en tubo estéril tapa rosca. Orina,Recolecciò n: segundo chorro. Envase estéril, tapa hermética Estudio transplante IgM recién nacidos < 3 meses con Síndrome de TORCH 24 horas de evolución Volumen de muestra pediátric a 1 ml de suero 1 ml de suero 3 ml 3 ml Volumen de muestra adulto 3 ml suero Transporte y conservación En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes Refrigerar sin medio de transporte viral Plazo de respu esta en días hábile s Aislamiento Herpes Simplex Aislamiento en cultivos celulares a) LCR en tubo estéril tapa rosca o de goma b) Contenido vesicular (Líquido de lesión) c) Tórula Secreción Vaginal De 0-2 días LCR: 1 ml LCR: 1 ml Con medio de transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con refrigerantes T 2 8 C 7 Aislamiento de Virus Varicela Zoster Aislamiento Tórula de lesión en cultivos vesicular celulares Hasta 3 días En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes 15

14 SIDA Enfermedad causada por VIH: Confirmación de muestras reactivas al tamizaje en el país Verificar clave en CI Diagnostico SIDA pediátrico (< 2 años) Recepción lu a Ju por tipo procesamiento Estudios Genotipificación, FRVIH

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16 NOMBRE DE LA PRESTACIÓN ENSAYOS TIPO DE MUESTRA REQUISITOS PREVIOS VOLUMEN MUESTRA CRITERIO DE ACEPTACION, ALMACENAMIENTO- TRANSPORTE PLAZO DE RESPUESTA (DIAS HABILES) DOCUMENTO REQUERIDO VIH ADULTO CONFIRMACION Determinación de Ag HIV Ac IgG anti HIV Ácidos nucleicos: provirus y RNA de HIV * Suero o plasma (Técnicas Muestra serológicas) doblemente * Sangre con reactiva al anticoagulante tamizaje de VIH EDTA (téc. moleculares) con unidades Técnicas refrigerantes. serológic as: 1 ml Sangre con Técnicas molecula res: 4 ml Suero o plasma: En frío Tº 2-8ºC. Enviar anticoagulante: Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más de 48 hrs desde la extracción. 12 días, 90,6% año 2013) Formulario de envío de muestra para Confirmación de VIH VIH PEDIATRICO CONFIRMACION Detección de Antígenoanticuerpo virus Sangre con anticoagulante VIH, Ag P24, EDTA virus VIH (PCR, RNA) En > 2 años a solicitud. En <2 años, hijos de madres VIH (+), protocolo 4 ml diagnóstico de sida pediátrico (Resolución Minsal). Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más de 48 horas desde la extracción. 14 Formulario de envío de muestra para Confirmación de VIH pediátrico

17 Virus Hepáticos Detección hepatitis virales: HBsAg, VHC: Hepatitis que pueden evolucionar a cronicidad, cirrosis y carcinoma hepático. Confirmación Muestras reactivas al tamizaje o/formularioexterno.aspx Estudio de brotes Hepatitis A: (3 a 5 casos). Hepatitis de transmisión entérica, no desarrollan infección crónica.

18 Nombre exámen / Prestación Volumen Método Tipo de muestra de Requisitos previos muestra pediátrica Volume n de Transporte y muestra conservación adulto Plazo de respuest a en días hábiles ConfirmaciónELISA, Muestra con Suero en tubo Antígeno de neutralización tamizaje estéril tapa rosca o Superficie (según doblemente de goma Hepatitis B algoritmo ISP) reactivo a HBsAg 1 ml 3 ml En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes 15 ELISA, RT- ConfirmaciónPCR, de Virus Inmunoblot Hepatitis C (según Algoritmo) Plasma con anticoagulante (EDTA) o Sangre con EDTA (enviar dentro de 24 hrs. ). En tubo estéril tapa rosca o de goma 3 ml de Muestra sangre Doblemente reactiva a Ac-VHC. ml de plasma 5 ml sangre de 24 hrs. (EDTA) y 1 (EDTA) y 3 ml plasma En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes. Sangre no más desde la extracción hasta la recepción en el laboratorio 15 Vigilancia brotes de Hepatitis A ELISA (IgM) Suero en tubo 0-10 días desde estéril tapa rosca. inicio los síntomas 1 ml de suero 3 ml suero En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes 7

19 Virus Enf. Emergentes: Hantavirus Enf. Febril que puede producir SCPH compromiso respiratorio y evolucionar a shock y muerte. Transmitido por O. longicaudatus (*) Recepción 24 horas Virus Dengue : Enf febril aguda con cefalea, mialgias, erupción, etc transmitida por Aedes aegypti Vigilancia y casos importados Virus Nilo Occidental Enf febril con manifestaciones neurológicas como cefalea a encefalitis. El vector mosquitos (Culex pipiens), se mantiene en la naturaleza mediante un ciclo de transmisión mosquito-ave-mosquito

20 Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos previos Volumen de muestra pediátrica Volumen de muestra adulto Transporte y conservación Plazo respues ta ds hábiles Vigilancia Infección por Hantavirus ELISA, RT- PCR (según algoritmo del ISP) a)sangre con EDTA (tubo tapa lila) y Sangre sin anticoagulante (tubo tapa roja) b)tejido de pulmón en tubo estéril tapa rosca, sin presevantes. (punción cardiaca) Caso sospechoso 3 ml de sangre 5 ml sangre En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes 3 Vigilancia Dengue / Fiebre Amarilla * ELISA *Aislamient Suero extraído en o/ PCR forma estéril. En tubo (según estéril tapa rosca. algoritmo del ISP) Con 6 o más días de evolución. Identificaciòn Brote muestra dentro de los 3 primeros días de evolución 2 ml 3 ml En frío con refrigerantes. T 2-8 C 10 Vigilancia Virus del Nilo Occidental Técnicas Serológicas ELISA LCR y Suero en tubo estéril tapa rosca. > a 8 días de evolución. 1 ml suero y 1 ml de LCR En frío de ml suero ºC con y 2 ml de unidades LCR refrigerantes 10

21 Virus Oncogénicos, otros Vigilancia HTLV I/II (Virus linfotrópico de células T humano) Confirmar muestras reactivas tamizaje país y casos sospecha de Leucemia Linfotrópica y Paraparesia Espástica ularioexterno.aspx Diagnóstico y estudios Virus Papiloma Humano : El VPH puede causar verrugas genitales y ciertos cánceres (CaCu). Estudio brotes Parotiditis : infección aguda con aumento volumen glándula parótida. HTLV-I gp46 CELLULAR RECEPTOR 9 5 k d Tax (p40), Rex (p27,p21) HTLV-I p14

22 Nombre exámen / Prestación Confirmación HTLV I/II Estudio de Brotes de Parotiditis Método ELISA, IF, PCR (según algoritmo) Serología, PCR Tipo de muestra Requisitos previos Muestra Doblemente reactiva y Sangre con casos de anticoagulante sospecha de (EDTA o citrato) Leucemia Linfotrópica y Paraparesia Espástica Suero o plasma Sólo estudio de y Orina en tubo brote según estéril circular MINSAL Volumen de Volumen Transporte y muestra de muestra conservación pediátricadulto a 3ml 1 ml suero y 3 ml de orina 5 ml 3 ml suero y 3 ml de orina En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes. No más de 4 ds. desde extracción a la recepción en laboratorio En frío de 2 a 8 ºC con unidades refrigerantes. No más de 4 ds. desde extracción a la recepción en laboratorio Plazo de respu esta en días hábil es 15 7 Virus Papiloma Humano (VPH) PCR Tórula de lesión o raspado de zona sospechosa de infección genital / Biopsias de tejidos / condiloma ; tubo estéril tapa rosca con medio de transporte. En frío de 2 a 8 ºC con unidades refrigerantes. No más de 4 ds. desde extracción a la recepción en laboratorio 10

23 RABIA Sd neurológico agudo (encefalitis ) que progresa a coma, insuficiencia respiratoria y muerte. Pacientes con antecedentes contacto con animal sospechoso. Estudio de inmunidad en mascotas. Vigilancia virus Rábico: Animales sospechosos: murciélagos, perros, gatos (*) Recepción 24 horas Caracterización antigénica para determinar variantes virales circulantes Recomendaciones: Cumplir normas de transporte, bioseguridad Diagnóstico de Rabia en humanos

24 NOMBRE DE LA PRESTACIÓN TIPO DE MUESTRA REQUISITOS PREVIOS VOLUMEN MUESTRA ADULTO PEDIATRICO PLAZO DE ALMACENAMIENTOTRAN RESPUESTA SPORTE (DIAS HABILES) DESCRIPCION DE PRESTACION INMUNIDA D PARA RABIA ESTUDIO Sangre s/anticoagulante, o suero en un tubo plástico estéril con tapa rosca o tapón de goma. En caso de sospecha de rabia humana (*) 30 días después de 2 ml de la sangre o 1 vacunación ml suero antirrábica. <8ºC. Enviar con unidades refrigerantes. 12 Detección de Ac antirrábicos neutralizantes por la tecnica de inhibición de focos fluorescentes (RIFFT) VIRUS RABICO VIGILANCI A Animal En caso de sospecha de rabia humana (*) Sospecha de rabia. No Aplica <8ºC. Enviar con unidades refrigerantes. 5 Detección de Ag rábico por la técnica de inmunofluorescenci a directa * Ver siguiente tabla

25 Muestras para diagnóstico en caso sospecha de encefalitis rábica en humanos Muestras antemortem (anticuerpos, antígeno y ácidos nucleícos) Muestra Condiciones de envío Técnica Detección Frecuencia Suero (3 ml) 4ºC /-20ºC RIFFT Anticuerpos LCR 4ºC /-20ºC RIFFT Anticuerpos (1 a 2 ml) RT-PCR Nested Ácidos nucleicos Muestras postmorten (antígeno y ácidos nucleícos) Biopsia: cerebro: Corteza cerebral, Cuerpo calloso, Cerebelo, Médula espinal 2 veces por semana 2 veces por semana Saliva (1-2ml) Congelada-20ºC RT-PCR Nested Ácidos nucleicos Diariamente Biopsia nuca, Folículo piloso Congelada-20ºC IFD RT-PCR Nested Antígeno Ácidos nucleicos 2 veces por semana

26 Factores a revisar: Demora en envío de las muestras desde laboratorio Cumplir indicaciones de envío (BS, envase, Tº). Muestras sin refrigerantes recibidas fuera de rango Tº indicado causal de rechazo Identificación correcta del paciente Formulario indicado y vigente Completar antecedentes del formulario: Fecha obtención muestra Inicio síntomas (ds evolución) Resultados exámenes solicitados (Ej. Absorbancias) Vacunas (Ej: Polio) de responsable envío Etc. Diferencias entre el código del tubo y del antecedente. Volumen de muestra solicitado Estafeta Acreditado: El retiro de resultado no siempre es periódico

27 Gracias