UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS MEDICINA CARRERA DE LABORATORIO CLINICO E HISTOTECNOLOGICO

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1 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS MEDICINA CARRERA DE LABORATORIO CLINICO E HISTOTECNOLOGICO Comparación entre la prueba de detección de anticuerpos Igg anti treponema pallidum en microelisa frente a RPR y VDRL, pruebas de tamizaje de sifilis no treponémicas, realizadas a trabajadoras sexuales que acuden al centro de salud no.3 de la ciudad de Quito en el mes de julio 2015 Trabajo de fin de carrera presentado previo a la obtención del Título de Licenciada en Laboratorio Clínico e Histotecnológico. Navarrete Flores Alvaro David Tutor: Dr. Marcelo Hernán Chiriboga Urquizo Quito, julio 2016

2 DEDICATORIA Este trabajo está dedicado a Dios, por brindarme esa paciencia, fuerza y siempre esperanza en que podía realizarme como todo un profesional de mi rama. Además, dedico este logro a mis padres, que pese a todo, han estado ahí conmigo desde un inicio, mostrándome todo su apoyo y comprensión hasta que logre acabar la carrera que siempre me gusto, ya que me han formado como una persona de bien, y el terminar este trabajo de investigación es mi mejor paga para ellos. ii

3 AGRADECIMIENTO Agradezco a todas y cada una de las personas que me impulsaron, y dieron su apoyo, además inyectar ganas para cumplir con este último reto y poder cumplir mi meta de ser un profesional. iii

4 AUTORIZACIÓN DE LA PUBLICACION DEL TRABAJO DE TITULACION Yo, Álvaro David Navarrete Flores, en calidad de autor del trabajo de investigación o tesis realizada sobre: Comparación entre la prueba de detección de anticuerpos Igg anti treponema pallidum en microelisa frente a RPR y VDRL, pruebas de tamizaje de sifilis no treponémicas, realizadas a trabajadoras sexuales que acuden al centro de salud no.3 de la ciudad de Quito en el mes de julio 2015, por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, a hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen o de parte de los que contienen esta obra, con fines estrictamente académicos o de investigación. Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6, 8,19 y demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento. Quito, 29 de julio de Navarrete Flores Álvaro David C.C.: Telf.: Correo: alvarodavid1990@hotmail.com iv

5 APROBACIÓN DEL TUTOR En mi calidad de Tutor del Trabajo de Titulación, presentado por el señor Álvaro David Navarrete Flores para optar el título de Licenciado en Laboratorio Clínico e Histotecnológico, cuyo título es: Comparación entre la prueba de detección de anticuerpos Igg anti treponema pallidum en microelisa frente a RPR y VDRL, pruebas de tamizaje de sifilis no treponémicas, realizadas a trabajadoras sexuales que acuden al centro de salud no.3 de la ciudad de Quito en el mes de julio 2015, considero que dicho Trabajo reúne los requisitos y méritos suficientes para ser sometido a la presentación pública y evaluación por parte del jurado examinador que se designe. En la ciudad de Quito al día 08 del mes de julio del 2016 Firma v

6 APROBACIÓN DEL TRIBUNAL Los miembros del Tribunal Examinador aprueban el informe de titulación, Comparación entre la prueba de detección de anticuerpos Igg anti treponema pallidum en microelisa frente a RPR y VDRL, pruebas de tamizaje de sifilis no treponémicas, realizadas a trabajadoras sexuales que acuden al centro de salud no.3 de la ciudad de Quito en el mes de julio 2015, presentado por: Álvaro David Navarrete Flores Para constancia certifican, Lcda. Eliana Champutiz PRESIDENTE Msc. Bernardita Ulloa VOCAL Msc. Cristina Toscano VOCAL vi

7 ÍNDICE DE CONTENIDOS DEDICATORIA... ii AGRADECIMIENTO... iii AUTORIZACIÓN DE LA PUBLICACION DEL TRABAJO DE TITULACION... iv APROBACIÓN DEL TUTOR... v ÍNDICE DE CONTENIDOS... vii LISTA DE TABLAS... xi INDICE DE GRAFICOS... xii INDICE DE FIGURAS... xiii RESUMEN... xiv ABSTRACT... xv CAPITULO I EL PROBLEMA PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA FORMULACIÓN DEL PROBLEMA OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN Objetivo General Objetivos Específicos JUSTIFICACIÓN DEL TEMA... 3 CAPITULO II MARCO TEORICO... 4 vii

8 2.1 HISTORIA DE LA SÍFILIS ETIOLOGÍA TREPONEMA PALLIDUM TAXONOMÍA DE TREPONEMA PALLIDUM VIRULENCIA ETAPAS Fase primaria Fase secundaria Fase latente Latente precoz Latente tardía Fase terciaria DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO Pruebas no treponémicas VDRL RPR Pruebas Treponémicas FTA-abs TPHA Anti-Treponema pallidum IgG Inmunoblot TPI Anti-Treponema pallidum IgM MICROELISA viii

9 2.8 MICROELISA INDIRECTO OPERACIONALIZACION DE VARIABLES CAPÍTULO III METODOLGÍA TIPO DE ESTUDIO NIVEL DE INVESTIGACIÓN Fuentes Bibliográficas Fuentes Laboratorio TECNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACION UNIVERSO Y MUESTRA Universo Muestreo CRITERIOS DE INCLUSIÓN CRITERIOS DE EXCLUSIÓN INSUMOS Y REACTIVOS Reactivos Insumos TÉCNICA E INSTRUMENTACIÓN DE RECOLECCIÓN DE DATOS Técnica FORMAS DE CONTROL TIPOS DE ANALISIS ix

10 3.11 CONSIDERACIONES ÉTICAS CAPITULO IV ANÁLISIS DE RESULTADOS DISCUSIÓN CAPÍTULO V CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES CONCLUSIONES RECOMENDACIONES BIBLIOGRAFIA ANEXOS Anexo 1 Cronograma de Actividades Anexo 2 Materiales Anexo 3. Recursos Financieros x

11 LISTA DE TABLAS TABLA Nº 1 RESULTADOS DE FTA-ABS COMO PRUEBA DE ORO TABLA Nº 2 RESULTADOS DE VDRL TABLA Nº 3 RESULTADOS RPR TABLA Nº 4 RESULTADOS MICROELISA TABLA Nº 5 VDRL VS. MICROELISA TABLA Nº 6 RPR VS. MICROELISA TABLA Nº 7 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE VDRL TABLA Nº 8 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE RPR TABLA Nº 9 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE MICROELISA xi

12 INDICE DE GRAFICOS GRÁFICO Nº 1 RESULTADOS DE FTA- ABS COMO PRUEBA DE ORO GRÁFICO Nº 2 RESULTADOS DE VDRL GRÁFICO Nº 3 RESULTADOS RPR GRÁFICO Nº 4 RESULTADOS MICROELISA GRÁFICO Nº 5 SENSIBILIDAD COMPARADA GRÁFICO Nº 6 ESPECIFICIDAD COMPARADA xii

13 INDICE DE FIGURAS FIGURA N 1. FASES DE EVOLUCIÓN DE LA SÍFILIS NO TRATADA... 7 FIGURA N 2 ESTADIOS Y EVOLUCIÓN DE LA SIFILIS NO TRATADA FIGURA N 3 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE LAS PRUEBAS EN DIFERENTES ESTADIOS DE LA ENFERMEDAD FIGURA N 4 REACTIVO DE VDRL WIENER LAB FIGURA N 5 REACTIVO DE RPR CARBON KEWEI FIGURA N 6 TREPONEMA PALLIDUM IGG MICROELISA KIT CALBIOTECH FIGURA N 7 ESQUEMA PARA MICROELISA INDIRECTO xiii

14 TEMA: Comparación entre la prueba de detección de anticuerpos Igg anti treponema pallidum en microelisa frente a RPR y VDRL, pruebas de tamizaje de sifilis no treponémicas, realizadas a trabajadoras sexuales que acuden al centro de salud no.3 de la ciudad de Quito en el mes de julio 2015 Tutor: Dr. Marcelo Hernán Chiriboga Urquizo Autor: Navarrete Flores Álvaro David RESUMEN Antecedentes. El diagnóstico de sífilis mediante el uso de MICROELISA para la detección de anticuerpos anti Treponema pallidum IgG, tiene una eficacia mayor a las pruebas de tamizaje de sífilis no treponémicas, quienes revelan serología discordante en la que se probó en este estudio, determinando que la sensibilidad y especificidad de MICROELISA para Treponema pallidum IgG es mayor que la de RPR y VDRL frente a la prueba de oro FTA-abs. Método. Durante el mes de julio de 2015, las 86 muestras de suero de las trabajadoras sexuales que llegaron a realizarse exámenes en el laboratorio clínico del Centro de Salud No.3 de la ciudad de Quito fueron entregadas para una posterior realización de RPR, VDRL, anticuerpos anti Treponema pallidum IgG MICROELISA, y además se usó al FTA-abs como prueba de oro para lograr calcular la sensibilidad y especificidad de cada una de estas pruebas en las trabajadoras sexuales. Resultados. De las 86 muestras analizadas, 7(8,14%) resultaron FTA-abs positivo, de las cuales solo 4(57,14%) resultaron RPR y VDRL reactivo, en cambio para Ac. IgG TP-EIA positivo - FTA-abs positivo, los resultados fueron de 6(85,71%). Los falsos positivos de RPR y VDRL superan en cantidad a los de EIA, puesto que la Sensibilidad para RPR y VDRL fue de 28,57% mientras que para MICROELISA fue 85,71%, y la especificidad fue de 97,50% para las pruebas no treponémicas y la especificidad de MICROELISA fue de 100%. Con los resultados encontrados se puede establecer que la mejor prueba es MICROELISA ya que supera a las otras pruebas de tamizaje de sífilis tradicionales no treponémicas con una diferencia del 57,14% de Sensibilidad y un 2,50% en su Especificidad. PALABRAS CLAVE: MICROELISA / RPR / VDRL / SÍFILIS / TREPONEMA / PALLIDUM / TRABAJADORAS SEXUALES. xiv

15 SUBJECT: Comparison between the anti treponema pallidum igg antibody detection test by micromicroelisa before RPR and VDRL, intended to screen non-treponema syphilis, applied to sexual workers being attended at centro de salud no.3 of Quito city in july 2015 Author: Navarrete Flores Alvaro David Tutor: Dr. Marcelo Hernán Chiriboga Urquizo ABSTRACT Backgrounds. Syphilis was diagnosed by using MICROELISA for the detection of anti Treponema pallidum IgG antibodies, had a higher efficacy than non-treponema syphilis screening tests, who revealed a discordant serology, where it was found that MICROELISA sensitivity and specificity for Treponema pallidum IgG is higher than RPR and VDRL before the golden FTA- abs test. Method. During July 2015, 86 serum samples of sexual workers brought to clinical laboratory of the Centro de Salud No.3 of Quito city, were delivered for RPR, VDRL, MICROELISA anti Treponema pallidum IgG test, and additionally FTA-abs golden test was applied to calculate sensibility and specificity for each of the tests applied to sexual workers. Results. Out of 86 samples analyzed, 7(8.14%) were FTA-abs positive, out of which 4(57.14%) were RPR and VDRL reactive. Instead, for Ac. IgG TP-EIA positive - FTAabs positive, results were 6(85.71%). False positives for RPR and VDRL are higher than EIA, because sensitivity for RPR and VDRL was 28.57%, while for MICROELISA it was 85.71%, and specificity was 97.50% for non-treponema tests and specificity for MICROELISA was 100%. With referred results, it was found that the best test is MICROELISA, because it more efficient than traditional non-treponema screening with a difference of 57.14% sensitivity and 2.50% specificity. Keywords: MICROELISA/ RPR / VDRL / SYPHILIS / TREPONEMA PALLIDUM / SEXUAL WORKERS. xv

16 INTRODUCCIÓN La sífilis, infección de transmisión sexual, a pesar de poseer un tratamiento con el que se elimina, los síntomas pueden desaparecer al cabo de unas semanas de no recibir profilaxis, para lo que el diagnóstico mediante pruebas de laboratorio se encuentra dirigida a exámenes serológicos tradicionales no treponémicos como lo son el RPR/VDRL, que buscan reacciones con reaginas que aparecen como respuesta hipersensible a diferentes antígenos, teniendo como principal a la presencia de lipoproteínas, TROMPs(Treponema pallidum rare outter membrane proteins) en la membrana del agente causal de la sífilis, además del FTA-Abs, y la determinación de anticuerpos anti Treponema pallidum por MICROELISA (IgG - IgM). Las trabajadoras sexuales, pueden haber cursado esta infección, pero a pesar de esto, en las tres fases de la enfermedad, después de cursar la primera, que es el chancro, desaparecen los síntomas, pero la infección continúa con su curso, pudiendo llegar así a las alteraciones del sistema nervioso central en la última fase de la enfermedad. 1

17 CAPITULO I 1. EL PROBLEMA 1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA La sífilis es una enfermedad infecciosa aguda o crónica cuyo agente causal es Treponema pallidum. La enfermedad está clasificada como venérea y de declaración obligatoria. Actualmente la enfermedad es un problema de salud pública y la Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que se producen 12 millones de nuevos casos cada año. De los cuales, un 90% aparecen en los países en vías de desarrollo. La reactividad en pruebas serológicas no treponémicas de tamizaje de laboratorio para sífilis, puede deberse a varios factores muy lejanos de cursar una infección por Treponema pallidum, en una población como son las trabajadoras sexuales que están expuestas a varios factores de riesgo, es más común encontrar resultados positivos, que en pacientes de población general, por lo que en estos casos se prefiere la determinación de la presencia de anticuerpos IgG del microorganismo causal con MICROELISA. 1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA La sensibilidad de las pruebas treponémicas es más alta así como su especificidad ya que utiliza la detección de anticuerpo específicos para sífilis. 1.3 OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN Objetivo General Demostrar la eficacia de la técnica de MICROELISA para la detección de Treponema pallidum frente a las pruebas de VDRL y RPR en el tamizaje de sífilis en trabajadoras con la validación de la sensibilidad y especificidad. 2

18 1.3.2 Objetivos Específicos Analizar las muestras de las trabajadoras sexuales por las 3 técnicas de tamizaje de sífilis. Analizar las muestras de las trabajadoras sexuales por la prueba confirmatoria de sífilis FTA-abs. Determinar la sensibilidad y especificidad de las 3 pruebas de tamizaje usando al FTA-abs como prueba de oro. 1.4 JUSTIFICACIÓN DEL TEMA Debido a que la sífilis, es una enfermedad que después de su infección puede desaparecer sin tener el tratamiento específico, es un tipo de padecimiento que puede causar muchos daños al ser humano. (Ministerio de Salud Publica, 2012) La eficacia de una prueba es lograr el resultado sin basarse en la estimación de los recursos utilizados, para lo que se incurre en la determinación de anticuerpo IgG anti Treponema pallidum por MICROELISA para trabajadoras sexuales ya que pueden tener más factores de riesgo y fuentes de reacciones cruzadas ante las pruebas tradicionales no treponémicas para el rastreo de sífilis. (Morales, 2012) 3

19 CAPITULO II 2. MARCO TEORICO 2.1 HISTORIA DE LA SÍFILIS Aunque el origen es aún incierto, diferentes corrientes históricas lo sitúan en América previamente a los viajes de Colón, diseminándose en Europa por los marineros intervinientes en los distintos conflictos bélicos. La teoría evolucionista sugiere que es posible que la sífilis se haya desarrollado a partir de la frambesía entre los años 1500 y 3000 A.C. (CDC, 2014) El nombre que ha recibido este padecimiento se le concede al poeta Girolamo Francastoro que cuenta la historia de Syphilo, un pastor que sufre una enfermedad repugnante, provocada por el castigo del Dios Apolo. (Lopez & Frasquet, 2012) En la edad media, esta enfermedad causa devastaciones similares a la peste, por lo que también es conocida como LÚES, término latín que significa plaga o pestilencia. Después de los estragos causados en el 15% de la población europea del siglo XVI, fue considerada un azote para la humanidad. (Trejos & Zambrano, 2014) En el transcurso del siglo XX se realizan los principales avances científicos relacionados a la enfermedad, se descubre el agente causal gracias al dermatólogo E. Hoffmann y el zoólogo F. Schaudinn en 1905, Wassermann, Neisser y Bruck desarrollan la primera seroreacción para sífilis en 1906 y Fleming en 1928 descubre la penicilina. En 1941 se comienza a usar pruebas no treponémicas como gold standard, y en 1943 se introduce a la penicilina como tratamiento de la enfermedad. En 1962, con el uso de la inmunofluorescencia, se empieza a utilizar el FTA-abs(Fluorescent- Treponemal antibody absorbed) como prueba específica para la detección de sífilis, mientras que en la década de los 90 se empezaron los estudios para la detección del agente causal con PCR(Reacción en Cadena de la Polimerasa), por lo que a finales del siglo se termina la secuenciación completa del genoma del Treponema pallidum. (Trejos & Zambrano, 2014) 4

20 2.2 ETIOLOGÍA TREPONEMA PALLIDUM. Del latín trepo:giro; nema:hebra; hebra que gira, es una espiroqueta delgada que se enrolla en sí, que posee desde 6 a 14 espirales, y que se reproduce por fisión binaria. El nombre pallidum se debe a que es una bacteria que no se tiñe con las coloraciones convencionales, y presenta una ausencia de reacción con estos colorantes, y solo puede ser observada en microscopios de campo oscuro, marcado con colorantes fluorescentes. (Lopez & Frasquet, 2012) Se ha elegido a los conejos de laboratorio para realizar el cultivo de este microorganismo. Se conoce que es un anaerobio estricto, aunque últimos estudios han informados que esta espiroqueta utiliza la glucosa de una forma oxidativa. El agente causal de esta infección es la espiroqueta Treponema pallidum subespecie pallidum, bacterias de morfología enrollada y con movimientos rotatorios y ondulados, de vida parasitaria, cuyo reservorio ha sido estrictamente limitado y encontrado en el ser humano y no en animales. (Fuertes, 2014) 2.3 TAXONOMÍA DE TREPONEMA PALLIDUM. De las subespecies de Treponema pallidum que se han identificado, solo 4 son causantes de enfermedades al ser humano; T. pallidum pallidum (silfilis), T. pallidum pertenue (frambesia), T. pallidum endemicum (bejel) y T. pallidum carateum (pinta). Estos no son distinguibles entre sí, por lo que las pruebas para sífilis han sido utilizadas para diagnosticar las diferentes enfermedades causadas por los 4 subespecies de T. pallidum. (Trejos & Zambrano, 2014) 2.4 VIRULENCIA. La incapacidad del Treponema pallidum para crecer in vitro ha limitado la detección de los factores de virulencia específicos de este microorganismo. Sin embargo, varios investigadores han logrado clonar genes de T. pallidum en Escherichia coli y han aislado sus productos proteicos, varios productos génicos se han asociado de manera 5

21 específica a las cepas virulentas aunque aún no se ha definido su función en la patogenia. (Trejos & Zambrano, 2014) Las proteínas de la membrana externa intervienen en la adherencia a la superficie de las células del organismo anfitrión y las espiroquetas virulentas producen hialuronidasa, la cual facilita la infiltración perivascular. Las espiroquetas virulentas están recubiertas por fibronectina de la célula del organismo anfitrión, la cual puede protegerlas frente a la fagocitosis. (Lopez & Frasquet, 2012) Se reconocen cuatro grupos de antígenos a partir de anticuerpos formados en animales de experimentación y treponemas cultivables: 1. Cardiolipina.- es un componente importante de los antígenos treponémicos; es un fosfatil-glicerol presente en Treponemas, otras bacterias, plantas y tejidos animales, sobre todo en el músculo cardíaco. Las llamadas reaginas son verdaderos anticuerpos que se forman contra este hapteno. 2. Antígeno proteico específico de grupo: se localiza en los endoflagelos de los treponemas comensales y patógenos. 3. Antígenos proteicos específicos de grupo: intervienen en la respuesta celular con fenómenos de hipersensibilidad retardada que ocurren en el desarrollo y evolución de la sífilis. 4. Antígenos polisacáridos específicos: intervienen en las reacciones serológicas específicas para Treponema pallidum (inmunofluorescencia, hemoaglutinación) y son iguales en las tres especies. Treponema pallidum en el humano provoca la formación de dos anticuerpos de suma importancia en el diagnóstico serológico de la sífilis, y son: 6

22 1. Anticuerpos treponémicos o específicos: son aquellos que inmovilizan, mata, y producen la reacción de fijación del complemento e inmunofluorescencia positivas en presencia de Treponema pallidum vivos. 2. Reaginas o anticuerpos inespecíficos: dan aglutinación y fijación del complemento, en presencia de cardiolipina. La determinación de los dos tipos de anticuerpos se utiliza para el tamizaje y diagnóstico de sífilis. (Saez, Romero, Delgado, & Baez, 1997) 2.5 ETAPAS Esta infección está definida por 4 diferentes etapas de evolución que son: fase primaria, fase secundaria, fase latente y fase terciaria. Figura N 1. Fases de Evolución de la Sífilis no tratada FUENTE:

23 2.5.1 Fase primaria La bacteria ingresa al organismo por las mucosas con las que se tiene contacto, causando una pápula que se ulcera y evoluciona a una llaga indolora, llamado chancro, que son lesiones cutáneas que aparecen en el lugar de entrada del T. pallidum pallidum después de un promedio de 3 semanas. (Lopez & Frasquet, 2012) Estas lesiones en el hombre, se sitúan en el pene, dentro de los testículos y otras veces en el ano, mientras que en las mujeres es más común encontrarlos en el cuello uterino y en los labios mayores. En esta etapa las relaciones sin protección son la principal fuente de infección a otras personas ya que las secreciones producidas por los chancros contienen al agente infeccioso y el contacto con las mucosas provocara la infección. (CDC, 2014) La desaparición de los chancros sin haber recibido un tratamiento, se da al cabo de las 4 a 6 semanas, no por el hecho de estar superando la infección, sino por la evolución de la misma, a la siguiente etapa. (Lopez & Frasquet, 2012) Fase secundaria En esta etapa se muestran los síntomas de una infección ya diseminada, ya que el Treponema ha ingresado a través de los capilares que se rompen en la formación de los chancros, y se dirige al torrente sanguíneo, contagiando todos los órganos y líquidos corporales, provocándose, la aparición de la más común de las manifestaciones, el exantema. El exantema son placas eritematosas que pueden erosionar, provocando la evolución a condilomas planos que se presentarán en las membranas de las mucosas. Estos síntomas varían es su aparición, pudiendo ser desde las 5 a 8 semanas después de la aparición del chancro, el mismo que puede o no seguir presente. (Trejos & Zambrano, 2014) 8

24 2.5.3 Fase latente Es un período en el que las manifestaciones clínicas están ausentes, lo que no implica que no exista una evolución en la infección. El paciente en este caso sigue siendo contagioso, lo que lleva a ser solo detectable mediante pruebas serológicas anti treponémicas. A esta etapa se la puede separar en dos diferentes fases: Latente precoz y latente tardía. (Fuertes, 2014) Latente precoz Se trata de una etapa asintomática de la sífilis, aunque muchas veces puede estar acompañada de síntomas como los de la sífilis secundaria. Se la ubica tras haber pasado 1 a 2 años después del contacto con el infectante (CDC, 2014) Latente tardía Al cabo de 1 o 2 años de transcurrida la sífilis latente precoz, se habla de la etapa latente tardía, es totalmente asintomática, en la que todos los pacientes serán evaluados y examinados buscando encontrar signos de aortitis, neurosífilis o gomas (CDC, 2014) Fase terciaria Después de un tiempo variable, los pacientes no tratados, pueden alcanzar a desarrollar esta etapa de 3 maneras: sífilis benigna (gomas), neurosífilis y sífilis cardiovascular. De todos los pacientes no tratados, menos de la mitad van a cursar una neurosífilis asintomática, desconociendo la cantidad de los que presentan síntomas. Hay otros tipos de sífilis que pueden llegar a presentarse, que son la sífilis meningovascular que puede 9

25 aparecer al cabo de 5 a 10 años después de la infección primaria; mientras que la neurosífilis parenquimatosa se habla de décadas para presentar síntomas como lo es la parálisis general. (Trejos & Zambrano, 2014) Figura N 2 Estadios y Evolución de la Sifilis no tratada Fuente: DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO. En cuanto a las pruebas que se pueden realizar para determinar la presencia de sífilis, se habla de 2 tipos de pruebas: no treponémicas y treponémicas; de las cuales, se diferencian por el modo de acción para detectar la infección (Fuertes, 2014). 10

26 Figura N 3 Sensibilidad y Especificidad de las pruebas en diferentes estadios de la enfermedad Fuente: Pruebas no treponémicas Estas pruebas también se las conoce como reagínicas, y se fundamentan en el uso de Anticuerpos reagínicos, productos de la reacción entre el T. pallidum con un antígeno lipoideo. Entre las más utilizadas de estas pruebas están el VDRL y el RPR. (Fuertes, 2014) VDRL Por sus siglas Venereal Disease Research Laboratory(Rastreo de enfermedades venéreas en laboratorio) es una de las pruebas de tamizaje de sífilis en la que se enfrenta el suero inactivado a la reagina (cardiolipina-colesterol-lecitina) y se mide su capacidad de aglutinación formando complejos Antígeno-Anticuerpo. Esta prueba es utilizada para el diagnóstico de neurosífilis, realizada en LCR (CDC, 2014). 11

27 Figura N 4 Reactivo de VDRL WIENER LAB. Fuente: RPR Reagina plasmática rápida, es una prueba mucho más sencilla que la anterior descrita, ya que no necesita precalentar el suero a investigar, lo mismo que se hace interactuar con el reactivo de reagina para poder observar la capacidad de floculación en una tarjeta de lectura fondo blanco (Fuertes, 2014). A pesar de no tener una alta especificidad, y poder reaccionar en contra de otras enfermedades o situaciones patológicas, provocando falsos positivos, son las principales pruebas para el diagnóstico en la sífilis latente precoz y tardía. (CDC, 2014) Figura N 5 REACTIVO DE RPR CARBON KEWEI. Fuente: 12

28 2.6.2 Pruebas Treponémicas También llamadas pruebas antitreponémicas específicas, fundamentan su acción, a la interacción de los agentes antigénicos del T. pallidum, para ser marcados de una manera de establecer la infección actual, o que ya se haya dado en algún momento del pasado. (Trejos & Zambrano, 2014) Dentro de estas pruebas tenemos diferentes técnicas, como son: Inmunofluorescencia (FTA-Abs), Hemaglutinación (TPHA), Pruebas inmunoenzimáticas MICROELISA (Anti Treponema pallidum IgG-IgM), Inmunoblot (EIA membrana treponémica) y TPI (Prueba de inmovilización treponémica) (Morales, 2012) FTA-abs Es una técnica de referencia, gold standard, fundamentada en la inmunofluorescencia indirecta. Utiliza como antígeno treponemas obtenidos de testículos de conejo, lo que la hace costosa en la aplicación como prueba de tamizaje en población de poco riesgo, y se la utiliza para la confirmación de resultados positivos de pruebas no treponémicas. (CDC, 2014) TPHA A comparación con el FTA-abs., es más económica y fácil de realizar. Consiste en la hemaglutinación de hematíes sensibilizados con un extracto de Treponema pallidum. Es menos sensible en las etapas tempranas de la enfermedad (Fuertes, 2014) Anti-Treponema pallidum IgG Fundamenta su detección a EIA indirecto que utiliza como antígeno extracto de Treponema pallidum inactivados, e incluso han aparecido con antígenos recombinantes. Su ventaja radica en la capacidad para procesar cantidades de muestras grandes, y también en que la lectura se la realiza de manera automatizada (Lopez & Frasquet, 2012). 13

29 Figura N 6 Treponema Pallidum IgG MICROELISA KIT CALBIOTECH. FUENTE: MICROELISA/ Inmunoblot Su uso se lo limita para laboratorios de referencia, ya que son pruebas costosas y se las utiliza para sacar la duda cuando el FTA-abs es indeterminado (Park, Bolan, Stanley, Shieh, & Schapiro, 2011) TPI Es una prueba bactericida, costosa, que consta en la inmovilizaciín de Treponema pallidum vivos, observables por microscopia de campo oscuro. Esto determina la capacidad de los anticuerpos del paciente y del complemento, para inmovilizar células de Treponema pallidum (Fuertes, 2014) Anti-Treponema pallidum IgM Se relega la determinación de esta clase de anticuerpos para el diagnóstico de sífilis congénita. Se lo puede realizar por IFI, EIA y Western-Blot. (Fuertes, 2014) 14

30 2.7 MICROELISA Inmunoensayo ligado a enzimas, por sus siglas en ingles, (Enzyme linked immuno sorbent assay) es un fundamento que se basa en el uso de anticuerpos o antígenos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes posean actividad inmunológica y enzimática. (Trejos & Zambrano, 2014) Mientras el anticuerpo o antígeno que este marcado con la enzima, e insolubilizado en un soporte, la reacción antígeno-anticuerpo quedara inmovilizada, haciendo que la adición de un substrato específico produzca un color, que podrá ser cuantificado mediante un colorímetro o un espectrofotómetro. (Fuertes, 2014) Se diferencian tipos de MICROELISA a considerar: Anticuerpos marcados MICROELISA directo MICROELISA indirecto MICROELISA sándwich o MICROELISA sándwich doble o MICROELISA sandwich heterogéneo Antígeno marcado MICROELISA competitivo 2.8 MICROELISA INDIRECTO Esta es la técnica más utilizada de MICROELISA para la detección de Anticuerpos específicos, y consta de las siguientes etapas (Cultek, 2013): 15

31 Adición del suero problema en el soporte tapizado de antígenos específicos, de tal forma que los anticuerpos presentes, reaccionarán y formarán un complejo. Lavado que elimina los anticuerpos que no reaccionaron. Se añade una enzima en el que están presentes una serie de anti-anticuerpos conjugados que reaccionarán con los anticuerpos específicos del suero que se encuentran fijados al soporte solido tapizado. Lavado que elimina los anti-anticuerpos que no reaccionaron. Añadimiento de un substrato en el que pueda actuar la enzima marcadora. Reacción cromógena. Se puede detener la reacción con una solución de Ác. Sulfúrico. Lectura de la reacción de forma visual, o colorimétrica. Figura N 7 Esquema para Microelisa Indirecto Fuente: 16

32 2.9 OPERACIONALIZACION DE VARIABLES VARIABLES TIPO CONCEPTO DETERMINANTES INDICADORES ESCALA TRABAJADORAS INDEPENDIENTE MUJERES DE LA MUJERES NUMERO DE 0-86 SEXUALES CIUDAD DE MUJERES QUITO DEDICADAS AL TRABAJO SEXUAL MICROELISA DEPENDIENTE DETERMINACIÓN PRESENCIA DE ANTICUERPOS PRESENCIA INDIRECTO DE SIFILIS EN TRABAJADORAS ANTICUERPOS IgG ANTI TREPONEMA ANTI TREPONEMA AUSENCIA SEXUALES PALLIDUM PALLIDUM VDRL DEPENDIENTE DETERMINACIÓN PRESENCIA DE ANTICUERPOS PRESENCIA DE SIFILIS EN ANTICUERPOS ANTI 17

33 TRABAJADORAS ANTI TREPONEMA TREPONEMA AUSENCIA SEXUALES PALLIDUM PALLIDUM RPR DEPENDIENTE DETERMINACIÓN PRESENCIA DE ANTICUERPOS PRESENCIA DE SIFILIS EN TRABAJADORAS ANTICUERPOS ANTI TREPONEMA ANTI TREPONEMA AUSENCIA SEXUALES PALLIDUM PALLIDUM FTA-ABS DEPENDIENTE DETERMINACIÓN PRESENCIA DE ANTICUERPOS PRESENCIA DE SIFILIS EN TRABAJADORAS ANTICUERPOS ANTI TREPONEMA ANTI TREPONEMA AUSENCIA SEXUALES PALLIDUM PALLIDUM 18

34 CAPÍTULO III 3 METODOLGÍA 3.1 TIPO DE ESTUDIO El diseño de trabajo del proyecto de investigación citado, es observacional de corte transversal, el mismo que se realizó con la colaboración de 86 trabajadoras sexuales que residen en la ciudad de Quito. De parte del personal del laboratorio clínico del Área de Salud No. 3 de la ciudad de Quito, fueron provistas las alícuotas del suero de cada una de las 86 trabajadoras sexuales que recibieron atención en el mes de julio del año 2015, en el que se realizó las pruebas de RPR y VDRL, y además se investigó la presencia de anticuerpos anti-treponema pallidum de tipo IgG mediante la técnica de MICROELISA con lectura en los equipos lectores de micropocillos STATFAX 4700 y MINDRAY MR-96a. 3.2 NIVEL DE INVESTIGACIÓN Es una investigación descriptiva, ya que se emplea el acopio y registro de resultados obtenidos posterior al proceso de las muestras de cada prueba realizada a cada paciente, además de las encuestas realizadas a cada una. Se agrega la descripción de los métodos y técnicas que se utilizaron para cada prueba realizada en el laboratorio, sean para tamizaje de sífilis o determinación de anticuerpos anti-treponema pallidum Fuentes Bibliográficas Se recopiló la información base para este estudio de diferentes textos, artículos de revistas e informes de investigaciones previamente realizados. 19

35 3.2.2 Fuentes Laboratorio Está conformada por los resultados del estudio de laboratorio con la prueba de detección de anticuerpos anti-treponema pallidum IgG realizadas a trabajadoras sexuales que acudieron a la atención médica en el Centro de Salud No.3 de la ciudad de Quito. 3.3 TECNICAS E INSTRUMENTOS DE INVESTIGACION La técnica para la detección de anticuerpos anti-treponema pallidum se realizó aplicando normas Bioéticas, controles de calidad, calibraciones para determinar presencia de inmunoglobulinas de tipo IgG para T. pallidum en trabajadoras sexuales que recibieron atención en el Centro de Salud No. 3 de la ciudad de Quito. Para el posterior análisis estadístico se elaboró un libro de cálculo en Excel. 3.4 UNIVERSO Y MUESTRA Universo Para esta investigación se tomó como universo las muestras de todas las trabajadoras sexuales que recibieron atención en el Área de Salud No. 3 de la ciudad de Quito en el mes de julio Muestreo La muestra fue de 86 sueros de trabajadoras sexuales que recibieron atención preventiva en el Área de Salud No. 3 de la ciudad de Quito. 3.5 CRITERIOS DE INCLUSIÓN Sueros de trabajadoras sexuales que asistieron a la atención al Área de Salud No. 3 de la ciudad de Quito. 20

36 3.6 CRITERIOS DE EXCLUSIÓN Sueros que presenten resultados positivos para enfermedades virales crónicas. 3.7 INSUMOS Y REACTIVOS Reactivos RPR Carbon ELITECH VDRL Wiener CALBIOTECH Treponema pallidum IgG Agua Destilada Insumos Agujas para extracción BD Vacoutainer 21Gx1 Tubos al vacío Greiner Bio-one tapa roja de 9ml Alcohol SWAB Tubos eppendorf 1.5ml Puntas de pipeta descartables azules y amarillas 21

37 3.8 TÉCNICA E INSTRUMENTACIÓN DE RECOLECCIÓN DE DATOS Técnica PRINCIPIOS DE LA TÉCNICA El uso de las pruebas de tamizaje para la detección de sífilis, como son el RPR y VDRL, se basan en la reacción de reagina frente al suero problema, en el que se medirá su capacidad para formar complejos Ag-Ac, y así provocar una respuesta de aglutinación de partículas visibles a simple vista. Además de estas pruebas, se ha enfrentado los resultados negativos como positivos de las muestras tomadas, en una reacción mucho más específica, que es la detección de Anticuerpo anti Treponema pallidum IgG, mediante prueba de MICROELISA, para una más acertada determinación y diagnóstico de sífilis. PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS Debido al universo con el que se trataba, una de las condiciones del Centro de Salud No. 3 La Tola, fue que las muestras iban a ser tomadas por el personal del laboratorio en las instalaciones del mismo, y solo se iban a entregar alícuotas de las mismas. Para esto se entregó el material necesario para la recolección de las muestras, y al cabo de cada día de proceso, se entregaban por la tarde, llevadas con la respectiva cadena de frío, se las proceso. PROCESAMIENTO DE MUESTRAS Antes de iniciar el proceso, se dejó que tanto los reactivos como las muestras lleguen a tener la temperatura ambiente (15-25 C). 22

38 PROCESO DE LABORATORIO Cada uno de los eppendorf ya llegó con una numeración correspondiente a cada fecha en la que fue tomada. Se numeró las placas de vidrio y de fondo blanco para las reacciones de aglutinación. Se colocó 50ul de suero en cada pocillo. Para VDRL se colocó con el gotero que el reactivo provee, una gota bien homogenizada sobre cada pocillo con suero problema. Con un palillo de madera se homogenizó y esparció por todo el pocillo. Se llevó al agitador durante 4 minutos. Para RPR se colocó con la pipeta 16ul de reactivo bien homogenizado sobre cada espacio de la tarjeta de fondo blanco. Con un palillo de madera se homogenizó y esparció. Se llevó al agitador durante 3 minutos. La lectura de VDRL se la hizo llevando la placa de vidrio al microscopio, utilizando el lente de 10x, se revisó la reacción. La lectura de RPR se la hizo acercando la tarjeta fondo blanco a una fuente de luz blanca, y se agitó con movimientos circulares, imitando la función del agitador y se observó la reacción. Una vez procesadas las muestras para VDRL y RPR, se las pasó a congelar a -20 C para su conservación. Al final del mes de julio del 2015, se retiró de congelación las muestras para su proceso en MICROELISA. 23

39 Para la determinación de anticuerpos anti Treponema pallidum IgG, mediante MICROELISA se estabilizó a temperatura ambiente tanto las muestras como el reactivo y se procedió de la siguiente manera: Para la calibración del KIT, se necesitó establecer el punto de corte, cut-off, para saber que índice de absorbancia es el límite para determinar qué resultado es positivo o negativo. Preparación de la muestra: Esta tuvo q ser diluida 1:21 con el SAMPLE DILUENT que el kit nos provee, siendo así, se colocó 10ul de suero en un eppendorf y se añadió 200ul de diluyente, se agitó en vortex y se dejó reposar 10 minutos. Se dispensó 100ul del CALIBRATOR en la primera posición de la bandeja que contiene los pocillos para el ensayo. Se dispensó 100ul del NEGATIVE CTRL. en la segunda y tercera posición de la bandeja que contiene los pocillos para el ensayo. Se dispensó 100ul del POSITIVE CTRL. en la cuarta y quinta posición de la bandeja que contiene los pocillos para el ensayo. Se dispensó 100ul del suero previamente diluido en cada uno de los pocillos, se retiró las burbujas de aire con ligeros golpes en la bandeja. Se agitó la bandeja, cubrimos con cinta adhesiva y dejamos incubar en cámara oscura a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se decantó todo el líquido de los pocillos. Se añadió a los pocillos 300ul de WASH SOLUTION, se dejó actuar 10 segundos, y se decantó. Repetimos este paso un total de 3 veces. 24

40 Se volteó la bandeja con los pocillos en papel absorbente para eliminar el exceso de WASH SOLUTION. Se dispensó 100ul del ENZYME CONJUGATE a cada uno de los pocillos, se removió las burbujas de aire con ligeros golpes en la bandeja. Se agitó la bandeja, cubrir con cinta adhesiva y se incubó en cámara oscura a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se decantó todo el líquido de los pocillos. Repetimos los lavados. Se volteó la bandeja con los pocillos en papel absorbente para eliminar el exceso de WASH SOLUTION. Se dispensó 100ul de TMB SUBSTRATE, cubrir e incubar durante 10 minutos. Se añadió 100ul de STOP SOLUTION. Se realizó la lectura de los pocillos con el filtro de longitud de onda de 450nm. Filtro primario de 650nm, filtro secundario de 600nm. Para la determinación de FTA-abs, y poder calcular la sensibilidad y especificidad de cada una de estas pruebas, se remitió las muestras a un laboratorio de referencia para la elaboración y proceso. 25

41 MUESTRAS A SER PROCESADAS MUESTRAS PREPARADAS CON DILUYENTE 26

42 POCILLOS CON MUESTRA LAVADOS CON WASH SOLUTION 27

43 SECADO EN PAPEL ABSORBENTE AÑADIR ENZYME CONJUGATE 28

44 REACCION COLORIMETRICA DIRECTAMENTE PROPORCIONAL A LA REACCION Ag-Ac STOP SOLUTION: DETIENE LA REACCION Y CEDE EL COLOR PARA SER MEDIDO EN LAS LONGITUDES DE ONDA ESPECIFICADAS 29

45 3.9 FORMAS DE CONTROL VDRL Y RPR Cada uno de los kits provee un control positivo para la comparación de los resultados. Cada tarjeta fondo blanco de RPR que se procesaba tenía un control positivo. Cada placa de vidrio de VDRL que se procesaba, tenía un control positivo. TREPONEMA PALLIDUM IgG Para el control de calidad de las pruebas de microelisa, el kit nos provee tanto controles positivo como negativo, con el afán de funcionar como calibradores y controles de proceso TIPOS DE ANALISIS El análisis que se utilizó para el desarrollo de esta investigación, es de tipo cuantitativo ya que se elaboraron estadísticas descriptivas con gráficos, tablas y medidas de tendencia central CONSIDERACIONES ÉTICAS Se nos negó la información detallada de cada paciente que se entregó las muestras para el desarrollo de esta investigación, debido a la naturaleza de su profesión. 30

46 CAPITULO IV 4. ANÁLISIS DE RESULTADOS Se determinó que en un total de 86 sueros de las trabajadoras sexuales que se atendieron en el Centro de Salud No. 3 La Tola durante el mes de julio del año 2015: Tabla Nº 1 RESULTADOS DE FTA-abs COMO PRUEBA DE ORO TRABAJADORAS SEXUALES Frecuencia Porcentaje POSITIVO 7 8,14 FTA-abs NEGATIVO 79 91,86 Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 INTERPRETACION Y ANALISIS En las trabajadoras sexuales que se atendieron en el Área de Salud No.3 de Quito en el mes de julio del 2015 se obtuvo un total de 7(8,14%) de FTA-abs positivo mientras que una mayoría de 79(91,86%) revelaron resultados negativos para la prueba de oro FTA-abs 31

47 Tabla Nº 2 RESULTADOS DE VDRL RESULTADOS VDRL Porcentaje Porcentaje Frecuencia Porcentaje válido acumulado REACTIVO 4 4,7 4,7 4,7 NO REACTIVO 82 95,3 95,3 100,0 Total ,0 100,0 Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 INTERPRETACIÓN Y ANÁLISIS Según los resultados obtenidos en la realización de la prueba de VDRL, se aprecia que un 4,7% de las trabajadoras sexuales tuvieron un resultado REACTIVO para este test. 32

48 Tabla Nº 3 RESULTADOS RPR RESULTADOS RPR Porcentaje Porcentaje Frecuencia Porcentaje válido acumulado REACTIVO 4 4,7 4,7 4,7 NO REACTIVO 82 95,3 95,3 100,0 Total ,0 100,0 Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 INTERPRETACIÓN Y ANÁLISIS De acuerdo a los resultados obtenidos de la prueba de RPR, se aprecia que un 4,7% de las trabajadoras sexuales tuvieron un resultado REACTIVO para este test. 33

49 Tabla Nº 4 RESULTADOS MICROELISA RESULTADOS MICROELISA Porcentaje Porcentaje Frecuencia Porcentaje válido acumulado POSITIVO 6 6,98 6,98 6,98 NEGATIVO 80 93,02 93,02 100,0 Total ,0 100,0 Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 INTERPRETACIÓN Y ANÁLISIS Siguiendo los resultados de los anteriores resultados, para la detección de Anticuerpos anti Treponema pallidum IgG, realizada por el método de MICROELISA, se obtienen resultados de igual relación, siendo un 6.98% de la muestra un resultado POSITIVO. 34

50 Tabla Nº 5 VDRL VS. MICROELISA RESULTADOS MICROELISA POSITIVO > 1,22 NEGATIVO <1,22 Total REACTIVO 2 (2,33%) 2 (2,33%) 4 (4,66%) RESULTADOS VDRL NO REACTIVO 4 (4,65%) 78 (90,69%) 82 (95,34%) Total 6 (6,98%) 80 (93,02%) 86 (100,0%) Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 INTERPRETACIÓN Y ANÁLISIS Para ésta estadística cruzada se utilizó los resultados de VDRL frente a los resultados para el método de MICROELISA, en la que nos permite observar que el porcentaje de la relación positivo MICROELISA-reactivo VDRL es de 2,33%, mientras que la relación positivo MICROELISA-no reactivo VDRL es de 4,65%. Así, en la relación negativo MICROELISA-no reactivo VDRL, se observa un porcentaje mayoritario de 90,69%, dándonos a la final, 2,33% para la relación negativo MICROELISAreactivo VDRL. 35

51 Tabla Nº 6 RPR VS. MICROELISA RESULTADOS MICROELISA POSITIVO > 1,22 NEGATIVO <1,22 Total REACTIVO 2 (2,33%) 2 (2,33%) 4 (4,66%) RESULTADOS RPR NO REACTIVO 4(4,65%) 78 (90,69%) 82 (95,34%) Total 6 (6,98%) 80 (93,02%) 86 (100,0%) Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 INTERPRETACIÓN Y ANÁLISIS En esta estadística cruzada se tabuló y graficó los resultados de RPR frente a los resultados para el método de MICROELISA, permitiéndonos observar que la relación positivo MICROELISAreactivo RPR es de 2,33%, mientras que la relación positivo MICROELISA-no reactivo RPR es de 4,65%. La relación negativo MICROELISA-no reactivo RPR, se observa un porcentaje mayoritario de 90,69%, así, a la final, 2,33% para la relación negativo MICROELISA-reactivo RPR. 36

52 Tabla Nº 7 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE VDRL FT- abs (GOLD STANDARD) POSITIVO NEGATIVO POSITIVO 2 (VP) 2 (FP) VDRL NEGATIVO 5 (FN) 78 (VN) Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 Calculo Sensibilidad: S=(VP/VP+FN)*100 S=(2/2+5)*100 S=(2/7)*100 S=0,2857*100 E=(VN/VN+FP)*100 E=(78/78+2)*100 E=(78/80)*100 E=0.9750*100 E=97.50% S=28,57% Cálculo Especificidad Dónde: VP: Verdaderos Positivos VN: Verdaderos Negativos FN: Falsos Negativos VN: Verdaderos Negativos 37

53 Tabla Nº 8 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE RPR FT- abs (GOLD STANDARD) POSITIVO NEGATIVO POSITIVO 2 (VP) 2 (FP) RPR NEGATIVO 5 (FN) 78 (VN) Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 Calculo Sensibilidad: S=(VP/VP+FN)*100 S=(2/2+5)*100 S=(2/7)*100 S=0,2857*100 E=(VN/VN+FP)*100 E=(78/78+2)*100 E=(78/80)*100 E=0.9750*100 E=97.50% S=28,57% Cálculo Especificidad Dónde: VP: Verdaderos Positivos VN: Verdaderos Negativos FN: Falsos Negativos VN: Verdaderos Negativos 38

54 Tabla Nº 9 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE MICROELISA FT- abs (GOLD STANDARD) POSITIVO NEGATIVO POSITIVO 6 (VP) 0 (FP) MICROELISA NEGATIVO 1 (FN) 79 (VN) Calculo Sensibilidad: Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 S=(VP/VP+FN)*100 S=(6/6+1)*100 S=(6/7)*100 S=0,8571*100 S=85,71% Cálculo Especificidad E=(VN/VN+FP)*100 E=(79/79+0)*100 E=(79/79)*100 E=1*100 E=100% 39

55 Dónde: VP: Verdaderos Positivos VN: Verdaderos Negativos FN: Falsos Negativos VN: Verdaderos Negativos INTERPRETACIÓN Y ANÁLISIS Aplicando las fórmulas para el cálculo de la Sensibilidad y Especificidad de una prueba logramos llegar a la respuesta que se esperaba, encontrando que la técnica de MICROELISA para la detección de anticuerpos IgG anti Treponema pallidum obtiene mejores resultados en el diagnóstico de sífilis, revelando una Sensibilidad del 85,71% y una especificidad del 100%, aplicando esto para trabajadoras sexuales, en tanto que las pruebas de RPR y VDRL obtuvieron un 28,57% de sensibilidad cada una, y especificidad de 97,50%. 40

56 Gráfico Nº 1 RESULTADOS DE FTA- abs COMO PRUEBA DE ORO 100,00% 90,00% 80,00% 70,00% 60,00% 50,00% 40,00% 30,00% 20,00% 10,00% 0,00% FTA-abs POSITIVO 91,86% NEGATIVO 8,14% TRABAJADORAS SEXUALES Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 Gráfico Nº 2 RESULTADOS DE VDRL Elaborado por: Navarrete Álvaro

57 Gráfico Nº 3 RESULTADOS RPR Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 Gráfico Nº 4 RESULTADOS MICROELISA Elaborado por: Navarrete Álvaro

58 Gráfico Nº 5 SENSIBILIDAD COMPARADA 90,00% 80,00% 70,00% 60,00% 50,00% 40,00% 30,00% 20,00% 10,00% 0,00% SENSIBILIDAD COMPARADA 85,71% 28,57% 28,57% SENSIBILIDAD RPR VDRL MICROELISA Elaborado por: Navarrete Álvaro 2015 Gráfico Nº 6 ESPECIFICIDAD COMPARADA 100,50% 100,00% 99,50% 99,00% 98,50% 98,00% 97,50% 97,00% 96,50% 96,00% ESPECIFICIDAD COMPARADA 100,00% 97,50% 97,50% ESPECIFICIDAD RPR VDRL MICROELISA Elaborado por: Navarrete Álvaro

59 4.1 DISCUSIÓN Para el contagio de sífilis, es necesario mayormente el contacto sexual con una persona ya infectada, a menos de que sea sífilis congénita, que es una vía de transmisión parenteral. Li en 2015, enfrentó las técnicas de MICROELISA, TPPA (Treponema pallidum particle aglutination) y CLIA (ChemiLuminescence ImmunoAssay) para la detección de anticuerpos anti Treponema pallidum en muestras de pacientes con sospecha de sífilis, en el estudio que tuvo como resultado un 90,91% de concordancia de resultados entre CLIA y TPPA, contra una 41.67% entre MICROELISA y TPPA. De acuerdo con las cifras obtenidas en nuestro estudio, obtuvimos un 66.67% de concordancia tanto para VDRL-MICROELISA y RPR- MICROELISA. Además, Liu y col. En 2014, probó la especificidad y sensibilidad de la técnica para detección de anticuerpos anti Treponema pallidum, por CLIA. De acuerdo a éstos estudios, se establece que la sensibilidad y especificidad de la técnica CLIA, además de que el tiempo de respuesta y la estabilidad de dicha prueba para la detección de anticuerpos anti Treponema pallidum, es mucho más alta que la de MICROELISA, pero debido a los costos de esta prueba es más difícil el acceso a la misma. Nuestro estudio concluye que la detección de anticuerpos IgG anti Treponema pallidum por la técnica de MICROELISA, requiere un mayor tiempo para su proceso a comparación que las pruebas serológicas no treponémicas para la detección de sífilis, más aún la sensibilidad y especificidad de la técnica MICROELISA son más altas. Por otro lado Park y cols. en 2011, enfrentaron de la misma manera que en nuestro estudio, pruebas de tamizaje, como RPR contra MICROELISA para la detección de anticuerpos anti Treponema pallidum, en lo que lograron obtener que de las muestras analizadas que fueron RPR negativo, un 58% reveló un resultado de presencia de anticuerpos anti Treponema pallidum, probando nuevamente así, que la realización de pruebas serológicas de rutina para el rastreo de sífilis tiene que ser extendido hacia pruebas treponémicas como MICROELISA. Por nuestro lado en este estudio se obtuvo que de las 82 muestras procesadas con un resultado RPR y VDRL no reactivo 2 revelaron presencia de anticuerpos IgG anti Treponema pallidum utilizando la técnica de MICROELISA. 44

60 A la sífilis en el Ecuador se la trata de dos maneras, como manejo sindrómico y de forma etiológica, siendo 2468 casos atendidos que corresponden a la fase primaria de esta enfermedad, y son el 0,7% de las atenciones totales en el país. De forma etiológica han sido atendidos 1456 casos, diagnosticados en fase secundaria. Para lograr este diagnóstico se requieren de las pruebas de tamizaje que son RPR y VDRL. Es por esto que se puede apreciar que el porcentaje de trabajadoras sexuales atendidas en el CENTRO DE SALUD No.3 en el mes de julio de 2015, con resultados VDRL reactivo es de 4,7%, RPR reactivo de 4,7%, y MICROELISA positivo de 6,98%, resultando una mayor sensibilidad para la prueba de detección de Anticuerpos anti Treponema pallidum IgG, ya que logro una mayor detección de muestras con resultado positivo. 45

61 CAPÍTULO V 5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 5.1 CONCLUSIONES De acuerdo a los resultados obtenidos, y a la comparación de cada una de estas pruebas entre sí y con una prueba de oro, se demostró la alta eficacia que tiene la técnica de MICROELISA para la detección de anticuerpos de tipo IgG de Treponema pallidum en el rastreo de sífilis en trabajadoras sexuales, en contra de las pruebas serológicas de tamizaje no treponémicas VDRL y RPR. Cada una de las muestras de las 86 trabajadoras sexuales que acudieron a la atención en el Centro de Salud No. 3de Quito fueron sometidas a las 4 pruebas, independientemente de los resultados obtenidos. Se determinó que la sensibilidad y especificidad de la prueba de MICROELISA para la detección de anticuerpos IgG anti Treponema pallidum en el rastreo de sífilis son mucho más altas que de las pruebas serológicas no treponémicas, VDRL y RPR, habiendo enfrentado a cada una de estas pruebas con la prueba de oro para la detección de sífilis FTA-abs 46