MATERIALES Y MÉTODOS. Obtención de la Muestra
|
|
- Ana María Gallego Molina
- hace 5 años
- Vistas:
Transcripción
1 Consecutivamente el film es revelado en soluciones especiales para detectar o no, una reacción antígeno-anticuerpo, la cual es evidenciada como un punto negro (f). Fuente: Rojas, 2001 MATERIALES Y MÉTODOS Obtención de la Muestra Los ejemplares de sardina Monterey (Sardinops sagax caerulea) (50 kg) utilizados en esta investigación, fueron proporcionados por la empresa Productos Pesqueros de Guaymas S.A. La sardina, con aproximadamente 7 horas de haber sido capturada, se colectó directamente de la bodega del barco sardinero, donde se mantuvo a 8 C desde su captura. La muestra se colocó en abundante hielo y se transportó al Laboratorio de Investigación de la Academia de Tecnología de Alimentos de la Universidad de Sonora. Una vez en el laboratorio, la mitad del lote se evisceró en frío con cuidado de no afectar el tracto digestivo, ni otros órganos para evitar contaminaciones o pérdida de enzimas. Las vísceras obtenidas fueron colocadas en bolsas de polietileno con cierre hermético conteniendo aproximadamente 100 g cada una y se congelaron inmediatamente a -20 C hasta el momento de su utilización. Extracción y Purificación de Tripsina Preparación del Extracto Crudo de Ciegos Pilóricos 38
2 El extracto crudo de enzimas se preparó homogenizando 50 g de ciegos pilóricos con 250 ml de buffer de extracción (Tris/HCl 50 mm ph CaCl 2 10 mm + NaCl 0.15 M) durante 1 minuto, en intervalos de 15 segundos, para posteriormente centrifugar a 17,300 x g por 60 minutos. Después se separó la fase lipídica y se recuperó el sobrenadante que es donde se encuentran las enzimas digestivas (Martínez y Serra, 1989). Fraccionación con Sulfato de Amonio El extracto crudo de enzimas de los ciegos pilóricos se sometió a precipitación con sulfato de amonio, añadiendo éste de manera lenta y en frío hasta alcanzar el 70% de saturación en la solución; posteriormente se centrifugó a 17,300 x g por 60 minutos; se colectó el precipitado y se disolvió en aproximadamente 30 ml de buffer TRIS HCl 50 mm ph 7.5, NaCl 0.5 M (Janson y Rydén, 1998, Castillo-Yañez y col., 2005). Cromatografía de Filtración en Gel La solución que se obtuvo a partir del fraccionamiento con sulfato de amonio fue dialisada y se sometió a cromatografía de filtración en gel, utilizando como fase estacionaria Sephadex G-75, empacado en una columna de 1.6 x 70 cm. En esta cromatografía se separaron proteínas de peso molecular mayor a 60 kda, de las proteínas de menor peso molecular (entre 10 y ~ 60 kda), donde se encuentra la enzima de interés. Como fase móvil se utilizó el amortiguador Tris HCl 50 mm ph 7.5, NaCl 0.15 M, a una velocidad de flujo de 0.5 ml/min, colectándose fracciones de 5 ml (Castillo-Yañez y col., 2005). A las fracciones obtenidas se les detectó proteína, midiendo directamente la absorbancia a 280 nm así como por el método de Bradford 39
3 (1976); también se evaluó actividad específica tipo tripsina, utilizando benzoilarginina-p-nitroanilida (BAPNA) como sustrato específico, siguiendo el método de Erlanger y col., Los patrones electroforéticos de las fracciones fueron analizados por medio de electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio al 12% (Laemmli, 1970). Cromatografía de Intercambio Iónico Las fracciones con actividad específica tipo tripsina, obtenidas de la cromatografía de filtración en gel, fueron dializadas y liofilizadas; posteriormente fueron sometidas a cromatografía de intercambio iónico, utilizándose como fase estacionaria una resina de intercambio aniónico tipo DEAE-Sepharose Fast Flow (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden). Las resinas se empacaron en columnas de 1.6 x 20 cm y la corrida se llevó a cabo utilizando como fase móvil el amortiguador Tris HCl 50 mm ph 7.5, utilizando una velocidad de flujo de 0.25 ml/min y colectando fracciones de 5 ml. Después de lavar la resina con 3 volúmenes de solución reguladora de equilibrio (Tris HCl 50 mm ph 7.5), se cambiaron las condiciones de la fase móvil para eluir las proteínas que se adsorbieron a la misma aplicando un gradiente lineal de concentración de NaCl de 0 a 0.4 M en el mismo amortiguador de equilibrio. La concentración de proteína, la actividad específica y la electroforesis de las fracciones obtenidas, se realizaron utilizando las mismas técnicas y condiciones que en las fracciones obtenidas en la cromatografía de filtración en gel (Castillo- Yáñez y col., 2005). Las fracciones con mayor concentración de tripsina se congelaron por 24 horas a -30 C para posteriormente liofilizarlas. Ya liofilizada la muestra se dializó y se rehidrató con PBS 1 X para preparar la emulsión antigénica con 40
4 adyuvante completo e incompleto de Freund s con el fin de inmunizar a los ratones con la tripsina purificada. Animales de Experimentación Se utilizaron ratones machos de la cepa singénica C3H/HeJ de 8 a 14 semanas de edad (The Jackson Laboratories, Maine, USA). Los animales se mantuvieron en el Bioterio del Departamento de Investigación y Posgrado en Alimentos de la Universidad de Sonora (DIPA). Los ratones contaron con fotoperíodos de 12 horas a 25º C y fueron alimentados ad libitum con una dieta comercial para ratones. Inmunización de Ratones Se inmunizaron 3 ratones C3H/HeJ con 100 µg de tripsina en adyuvante completo de Freund s (GIBCO); esta emulsión se agitó en vórtex por 30 minutos para después inmunizar a los modelos por vía intraperitoneal con 200 µl de la suspensión anterior. En las siguientes inmunizaciones se utilizó adyuvante incompleto de Freund s en la misma proporción que el adyuvante completo de Freund s. Los ratones se retaron con el inmunógeno cada 10 días durante 2 meses (Ontiveros, 2005). Recolección de Sueros de Ratones Inmunizados 41
5 Antes de cada inmunización se colectaron aproximadamente 500 µl de sangre de la cola de los ratones y el suero se obtuvo después de separar el coágulo, por centrifugación a 1,100 x g durante 5 minutos. Los sueros fueron congelados a - 30 C, hasta su utilización (Ontiveros, 2005). Estandarización de Metodologías Inmunoenzimáticas para Evaluar la Respuesta Inmune Humoral Inmunoensayo Absorbente Ligado a Enzimas (ELISA) De manera inicial, con el fin de detectar si los ratones generaron anticuerpos contra la tripsina, se llevó a cabo el método de ELISA indirecto; incubando 2 µg de de la enzima, en Na 2 CO M y NaHCO M, ph 9.6, en 50 µl, en una microplaca de poliestireno. La placa fue incubada con el antígeno durante toda la noche a 4 C y después fue bloqueada con PBS1X- Tween 0.025%, durante 1 H, a temperatura ambiente (TA). Posteriormente se aplicaron diluciones seriadas de los sueros de ratón (1:50-1:1,000), incubando durante 1 H, a T.A. Como segundo anticuerpo se utilizó el antisuero de cabra anti-igg de ratón acoplado a la peroxidasa, utilizando una dilución constante de 1:2,000. En todo el proceso, se utilizó como solución de lavado, PBS 1X-Tween (0.025%) y ABTS (ácido 2,2 -azino-6,3-dietilbenstiazolinsulfónico) como cromógeno. El desarrollo de color se midió a 415 nm en un lector de microplacas Benchmark de BioRad, U.S.A., después de 15 minutos de reacción. Como controles negativos se utilizaron los sueros obtenidos antes de la inmunización (pre-inmunización). 42
6 Para determinar la cantidad óptima de antígeno (tripsina), así como la dilución del suero murino, se repitió el ensayo anterior pero utilizando distintas cantidades de tripsina que varían de 0.0 a 2.5 µg/pozo. El suero se utilizó en diluciones seriadas (1:500, 1:1,000, 1:2,000 y 1:4,000). La titulación fue realizada en todos los casos utilizando el antisuero de cabra anti IgG de ratón (1:2,000), conjugado a peroxidasa de rábano. El ensayo se repitió solo 2 ocasiones por falta de antígeno. Ensayo de Manchas (Dot-Blot) Para establecer las condiciones óptimas para el ensayo de manchas (dilución del suero de los ratones), se inmovilizaron 1.6 µg de tripsina en membranas de nitrocelulosa (Trans Blot, Bio-Rad, U.S.A) durante 1 hora. Transcurrido ese tiempo, se llevaron a cabo 5 lavados de 5 minutos con PBS 1X- Tween al 0.025% y los sitios libres de antígeno fueron bloqueados con proteína de leche semidescremada en polvo (Svelty de Nestlé) al 10%, en PBS1X-albúmina de suero bovino al 1% en agitación suave durante 1 hora. Las membranas fueron incubadas durante 1 hora con los sueros murinos, en diluciones dobles seriadas (1:500 a 1:16,000). El segundo anticuerpo (antisuero de cabra anti-igg de ratón acoplado a la peroxidasa de rábano) se utilizó en una dilución constante de 1:10,000. Para revelar se utilizó como sustrato H 2 O 2 y luminol como agente cromógeno. Los resultados se evaluaron de manera cualitativa. Éste ensayo se repitió en 6 ocasiones. 43
RESULTADOS Y DISCUSIÓN. Purificación de Tripsina
RESULTADOS Y DISCUSIÓN Purificación de Tripsina La enzima, necesaria para estandarizar el método de ELISA y el ensayo de manchas, se obtuvo mediante 4 etapas de purificación a partir de 100 g de ciegos
Más detallesMATERIALES Y MÉTODOS. Cepa de Mycobacterium tuberculosis
MATERIALES Y MÉTODOS Cepa de Mycobacterium tuberculosis Se utilizó una cepa de referencia de Mycobacterium tuberculosis H37Rv tipificada en el Instituto Nacional de Diagnóstico y Referencia Epidemiológica
Más detallesMATERIALES Y MÉTODOS. Tipo de Estudio. Muestra
MATERIALES Y MÉTODOS Tipo de Estudio Experimental. Este tipo de estudio tiene como característica primordial el poder manipular y controlar las variables, siendo en este caso la fuerza iónica y el ph.
Más detallesMATERIALES Y MÉTODOS. Animales
MATERIALES Y MÉTODOS Animales Se utilizaron ratones de género masculino de 8 a 10 semanas de edad, de la cepa singénica C3H/HeJ, adquiridos en The Jackson Laboratories (Maine, USA). Los animales se mantuvieron
Más detallesRESULTADOS Y DISCUSIÓN
RESULTADOS Y DISCUSIÓN Estimación de la Concentración Proteica del Filtrado de Cultivo de Mycobacterium tuberculosis H37Rv La curva estándar con la que se estimó la concentración proteica del filtrado
Más detallesPURIFICACION PARCIAL DE LA CASEINA PRESENTE EN
EXPERIMENTO 9 PURIFICACION PARCIAL DE LA CASEINA PRESENTE EN LA LECHE Y DETERMINACION DE SU PESO MOLECULAR Y DEL PRODUCTO DE LA HIDROLISIS POR LA ENZIMA BROMELINA DE LA PIÑA MEDIANTE ELECTROFORESIS REQUISITOS
Más detallesRESULTADOS Y DISCUSIÓN. Purificación de Tripsina
RESULTADOS Y DISCUSIÓN Purificación de Tripsina Se purificó tripsina a partir de 86 gr de ciegos pilóricos, la enzima fue separada del resto de las moléculas del extracto crudo mediante cromatografía de
Más detallesMATERIALES Y MÉTODOS. Tipo de Investigación
MATERIALES Y MÉTODOS Tipo de Investigación Se trata de un estudio transversal, observacional y analítico, en el que se comparó la glicosilación terminal de la inmunoglobulina G de un grupo de pacientes
Más detallesPURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS ESQUEMA DE PURIFICACIÓN DE UNA PROTEÍNA tejido vegetal animal homogeneizar cultivo celular bacterias levaduras células mamíferos PREPARACIÓN EXTRACTO crudo fraccionamiento subcelular
Más detallesReacciones antígeno-anticuerpos Y sus aplicaciones diagnóstica
Reacciones antígeno-anticuerpos Y sus aplicaciones diagnóstica Armando Reyna Universidad Simón Rodríguez IDECYT, Centro de Estudios Biomédicos y Veterinarios, Laboratorio de Inmunobiología areyna@inmunobiologia.net.ve
Más detalles1. RESUMEN 9 2. INTRODUCCIÓN OBJETIVOS REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA Síndrome Antifosfolípidos.. 12
INDICE N Página. 1. RESUMEN 9 2. INTRODUCCIÓN 10 3. OBJETIVOS. 11 4. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 12 4.1 Síndrome Antifosfolípidos.. 12 4.2 Generalidades de Anticuerpos Antifosfolipidos (afl). 15 4.2.1 Anticuerpos
Más detallesMETODOLOGÍA. Cultivo de G. lamblia
METODOLOGÍA Cultivo de G. lamblia Se utilizaron cultivos axénicos de trofozoítos de la cepa de G. lamblia GS/M-83- H7 (ATCC 50581) y WB clona C6 adquirida de la American Type Culture Collection (ATCC 50803),
Más detallesMATERIALES Y MÉTODOS. Material Vegetal
MATERIALES Y MÉTODOS Material Vegetal El material vegetal se adquirió en una casa comercial especializada en botánica, ubicada en el centro de la ciudad de Hermosillo, Sonora. Obtención del Extracto Metanólico
Más detallesINFORMES DE LABORATORIO
INFORMES DE LABORATORIO Nombre Licenciatura Grupo PRÁCTICO DE BIOQUIMÍCA INFORME INTRODUCCIÓN AL TRABAJO EN EL LABORATORIO 1. OBJETIVOS 2. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 2.1 Seguridad en el laboratorio Describa
Más detallesELISA y Western Blot
Universidad Central de Venezuela Facultad de Medicina Escuela de Medicina José María Vargas Cátedra de Inmunología ELISA y Western Blot Práctica 1 2018 Prof. Edwin Escobar edscobar@gmail.com Aplicaciones
Más detallesTP2: Extracción y cuantificación de proteínas
Objetivo TP2: Extracción y cuantificación de proteínas Comparar métodos de extracción de proteínas a partir de distintos organismos. Cuantificar las proteínas resultantes de cada extracto. Introducción
Más detallesPurificación de la enzima lactato deshidrogenasa de músculo esquelético de pollo
Purificación de la enzima lactato deshidrogenasa de músculo esquelético de pollo ESQUEMA GENERAL Sesión 1. Extracción y precipitación con sulfato de amonio. Sesión 2. Purificación por cromatografía Sesión
Más detallesObtención de la abrina y de la abrina aglutinina
LABORATORIOS BETERÁ 17 Obtención de la abrina y de la abrina aglutinina Félix Ganem Báez, 1 José A. Lagomasino Carrera 2 y Yamilet Álvarez Tejo 3 RESUMEN En las semillas del Abrus precatorius se encuentran
Más detallesDiario Oficial de las Comunidades Europeas
23.2.2002 ES Diario Oficial de las Comunidades Europeas L 53/37 DECISIÓN DE LA COMISIÓN de 21 de febrero de 2002 por la que se modifica el anexo D de la Directiva 90/426/CEE del Consejo con respecto a
Más detallesRESULTADOS Y DISCUSIONES
RESULTADOS Y DISCUSIONES Para realizar la evaluación del efecto de la ficoeritrina sobre la proliferación celular, se llevó a cabo el cultivo de la microalga roja Rhodosorus marinus, como fuente de la
Más detallesMETODOLOGÍA DE EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE INHIBIDORES DE PROTEASAS EN Opuntia streptacantha
METODOLOGÍA DE EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE INHIBIDORES DE PROTEASAS EN Opuntia streptacantha RESUMEN Estudiante: Jannet Alejandra Vargas Sánchez Instituto Tecnológico de Roque jannettitajm@hotmail.com
Más detallesMétodos para Inmunidad Viral
Métodos para Inmunidad Viral Radioinmunoensayo (RIA) Técnica muy sensible basada en la competencia de unión al anticuerpo específico entre el antígeno a cuantificar y cantidades conocidas del antígeno
Más detallesMATERIALES Y MÉTODOS. Diseño de Investigación
MATERIALES Y MÉTODOS Diseño de Investigación Tipo de Investigación Se trata de un estudio transversal, observacional y analítico. Este tipo de estudio identifica a personas con una enfermedad y los compara
Más detallesUniversidad Nacional de Rosario- Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Guía de Trabajo Práctico Nº2 Química Biológica
Universidad Nacional de Rosario- Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas Guía de Trabajo Práctico Nº2 Química Biológica 2018 QUÍMICA BIOLÓGICA. Año 2018 Trabajo Práctico Nº 2: PURIFICACION DE
Más detallesPurificación de proteínas Métodos cromatográficos. M. en C. Esdras Israel Carrizosa Carbajal
Purificación de proteínas Métodos cromatográficos M. en C. Esdras Israel Carrizosa Carbajal Secuencia experimental típica para purificar una proteína: Obtención de extractos libres de células Seleccionar
Más detallesAPÉNDICE DE TÉCNICAS 48
APÉNDICE DE TÉCNICAS 48 A. DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ALACALINA A.1 MATERIAL BIOLÓGICO 0.2 ml de suero A.2 FUNDAMENTO Bessey y col. (1946) introdujeron el uso de p-nitrofenilfosfato como sustrato en el
Más detallesProceso que cuenta con varias etapas cuyo objetivo es separar una proteína de interés de una mezcla de proteínas.
Proceso que cuenta con varias etapas cuyo objetivo es separar una proteína de interés de una mezcla de proteínas. La selección de técnicas de purificación depende de las propiedades de las proteínas. Características
Más detallesTEMA 14. Métodos inmunológicos para la identificación microbiana
TEMA 14 Métodos inmunológicos para la identificación microbiana Tema 14. Métodos inmunológicos para la identificación microbiana 1. Introducción 2. Detección de antígenos 2.1. Obtención de anticuerpos
Más detallesTécnicas: ELISA y Western Blot
Técnicas: ELISA y Western Blot Aspectos prácticos Prof. Diana Ortiz Cátedra Inmunología EJMV-UCV dprincz@gmail.com Fundamento: Técnica de ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay: Ensayo por Inmunoadsorción
Más detallesINSTRUCTIVO PARA EL DIAGNÓSTICO DE PLUM POX VIRUS MEDIANTE ELISA
DEPARTAMENTO LABORATORIO Y ESTACIONES CUARENTENARIAS AGRÍCOLA Y PECUARIA INSTRUCTIVO PARA EL DIAGNÓSTICO DE PLUM POX VIRUS MEDIANTE ELISA Preparación Nombre Cargo Firma Marcelo Encargado Laboratorio Cabrera
Más detallesInmunohematología 2017
Inmunohematología 2017 REACCIONES DE HEMAGLUTINACIÓN 1-Sensibilización 2-Aglutinación Ag + Ac Ag-Ac FACTORES QUE AFECTAN LA HEMAGLUTINACIÓN Enzimas LISS SAGH PEG Polibrene Albúmina Potencial zeta Tipo
Más detallesTécnicas: ELISA y Western Blot
Técnicas: ELISA y Western Blot Aspectos prácticos Prof. Diana Ortiz Cátedra Inmunología EJMV-UCV dprincz@gmail.com Fundamento: Técnica de ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay: Ensayo por Inmunoadsorción
Más detallesMATERIALES Y MÉTODOS
MATERIALES Y MÉTODOS 1. Material biológico - Escorpiones: Se utilizaron 105 escorpiones adultos de ambos sexos de la especie Hadruroides mauryi capturados en la localidad de Huari (Ayacucho) durante el
Más detallesB) Añadir al medio LB, además de la ampicilina, el IPTG (conc final, 0.5 mm) y X-Gal (conc. final 80 µg/ml). Es decir, para 100 ml de LB adicionar:
Medios utilizados en este apartado: 1.-IPTG stock solution (0.1 M) - 0.6 g IPTG. - Añadir agua estéril a un volumen final de 25 ml. Filtrar con papel secante pasando la solución a tubos eurotubos. Guardar
Más detallesCROMATOGRAFÍA. A.- INTERCAMBIO IONICO: A.1. ANIONICA A.2. CATIONCA B.- FILTRACIÓN EN GEL
CROMATOGRAFÍA. A.- INTERCAMBIO IONICO: A.1. ANIONICA A.2. CATIONCA B.- FILTRACIÓN EN GEL C.- AFINIDAD B. CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN EN GEL. 1. Principios. No requiere la unión de la proteína, lo cual
Más detallesEL TEXTO EN COLOR ROJO HA SIDO MODIFICADO
COMENTARIOS Con fundamento en el numeral 4.11.1 de la Norma Oficial Mexicana NOM-001-SSA1-2010, se publica el presente proyecto a efecto de que los interesados, a partir del 1º de mayo y hasta el 30 de
Más detallesBiodisponibilidad in vitro de hierro, zinc y proteína en platos preparados con cultivos bioforticados. Qco. Darwin Ortiz Osorio
Biodisponibilidad in vitro de hierro, zinc y proteína en platos preparados con cultivos bioforticados Qco. Darwin Ortiz Osorio Laboratorio de Calidad en Nutrientes BIODISPONIBILIDAD Es la fracción ingestada
Más detalles1. OBTENCIÓN DE ADN DE BACTERIAS PATÓGENAS
1. OBTENCIÓN DE ADN DE BACTERIAS PATÓGENAS Existen diferentes métodos para la obtención de ADN bacteriano que varían en duración y complejidad del procedimiento en función de la calidad del ADN que queramos
Más detallesACTIVIDAD ENZIMÁTICA. Dra. Lilian González Segura Departamento de Bioquímica Facultad de Química
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Dra. Lilian González Segura Departamento de Bioquímica Facultad de Química Porqué la gran mayoría de las reacciones en los seres vivos necesitan ser catalizadas para que ocurran a
Más detallesProducción de sueros policlonales para investigación y diagnóstico. Q.F. Susana Cáceres Polo Tecnológico de la Facultad de Química Pando - Canelones
Producción de sueros policlonales para investigación y diagnóstico Q.F. Susana Cáceres Polo Tecnológico de la Facultad de Química Pando - Canelones Un poco de historia La producción de sueros de origen
Más detallesANEXOS ANEXO 1. Obtención de Antígeno Soluble de G. lamblia.
ANEXOS ANEXO 1 Obtención de Antígeno Soluble de G. lamblia. Método 1.- Cultivo axénico y a confluencia de trofozoítos de Giardia (Mantener en hielo por 15 min). 2.- Centrifugar a 800 x g por 10 minutos
Más detallesIV. MATERIALES Y MÉTODOS
IV. MATERIALES Y MÉTODOS Animales de Experimentación Se utilizaron ratones de la cepa singénica C3H/HeJ (000659) de 8-12 semanas de edad, adquiridos en The Jackson Laboratories (Maine, USA). EL mantenimiento
Más detalles2. ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE PROTEÍNAS. Purificación de LDH de músculo de Gallus gallus
2. ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE PROTEÍNAS Purificación de LDH de músculo de Gallus gallus TRIS 2-amino-2-hidroximetilpropano-1,3-diol pk a = 8.07 Buffer efectivo en un rango de ph= 7.07 y 9.07 PMSF Fluoruro
Más detallesANEXOS. Anexo 1. Solución Reguladora de Acetato 0.1 M, ph 4.0 y metanol al 2% (v/v).
ANEXOS Anexo 1 Solución Reguladora de Acetato 0.1 M, ph 4.0 y metanol al 2% (v/v). 1. Tomar 6.011mL de ácido acético y aforar a 1L de agua HPLC. 2. Pesar 13.609 g de acetato de sodio y aforar a 1L de agua
Más detallesTP2: Extracción y cuantificación de proteínas
TP2: Extracción y cuantificación de proteínas Objetivos Obtener un extracto crudo de proteínas a partir de distintos órganos. Realizar un fraccionamiento a partir de una precipitación con Sulfato de Amonio.
Más detallesDANAGENE SPIN GENOMIC DNA KIT
DANAGENE SPIN GENOMIC DNA KIT Ref.0605.1 50 extracciones Ref.0605.2 250 extracciones Ref.0605.3 1000 extracciones 1. INTRODUCCION Este kit está designado para una rápida extracción y purificación de ADN
Más detallesConstrucción de la biblioteca en cósmidos de Azospirillum brasilense CBG 497.
Construcción de la biblioteca en cósmidos de Azospirillum brasilense CBG 497. Extracción de DNA genómico El DNA de A. brasilense CBG 497 se extrajo siguiendo el método descrito por la casa comercial distribuidora
Más detallesBioquímica I Curso 2010 Proteínas IV
Bioquímica I Curso 2010 Proteínas IV Temario Detección y cuantificación de una proteína específica, actividad biológica. específica. Marcha de la purificación: parámetros. Grado de purificación. Rendimiento.
Más detallesInmunohematología. Dra. Ana Cecilia Haro
Inmunohematología 2016 Dra. Ana Cecilia Haro Sensibilización Aglutinación Ag + Ac Ag-Ac Enzimas LISS SAGH PEG Polibrene Albúmina Potencial zeta Tipo de Ac Densidad antigénica Tiempo de incubación Fuerza
Más detallesCROMATOGRAFÍA a ESCALA INDUSTRIAL
CROMATOGRAFÍA a ESCALA INDUSTRIAL licor fermentación homogenado, etc. SEPARACIÓN Aislamiento primario Adsorción Purificación CONSERACIÓN/ ESTABILIZACIÓN Características: Selectividad: elevada olumen de
Más detallesTema 6 Cuantificación de proteínas
Tema 6 Cuantificación de proteínas Procedimiento de estudio de proteínas Selección de fuente Fraccionamiento de células Centrifugación Cromatografía Cromatografía en capa fina Cromatografía en columna
Más detallesTécnicas de Caracterización y purificación
Técnicas de Caracterización y purificación hidrofobicidad carga Propiedades de las proteínas utilizadas para caracterizar y purificar Carga Tamaño Forma Actividad biologica Hidrofobicidad PM Estabilidad
Más detallesPLIEGO DE CARACTERÍSTICAS TÉCNICAS C.P.A. 41/2008 HUP REACTIVOS PARA INMUNOLOGÍA Y BIOLOGÍA MOLECULAR. Lote Bien/Producto Cantidad Tipo Ud.
PLIEGO DE CARACTERÍSTICAS TÉCNICAS C.P.A. 41/2008 HUP REACTIVOS PARA INMUNOLOGÍA Y BIOLOGÍA MOLECULAR Lote Bien/Producto Cantidad Tipo Ud. 1 ACIDO ACETICO GLACIAL 100 X (221228): - Envases de un litro.
Más detallesCAPÍTULO 3 3. DESARROLLO EXPERIMENTAL. En este capítulo se describe la metodología utilizada para la extracción y
CAPÍTULO 3 3. DESARROLLO EXPERIMENTAL En este capítulo se describe la metodología utilizada para la extracción y purificación de la proteína B-FE, incluyendo los materiales y reactivos utilizados, el procedimiento
Más detallesRESULTADOS Y DISCUSIÓN. Aislamiento de Inmunoglobulina de Conejo Anti-Ferritina
RESULTADOS Y DISCUSIÓN Aislamiento de Inmunoglobulina de Conejo Anti-Ferritina El aislamiento de inmunoglobulinas provenientes del suero de conejo inmunizado con ferritina de bazo de caballo, se realizó
Más detallesMETODOLOGIA. 500 ml etanol acidificado con HCl al 0.01%, se homegeneizaron con una licuadora y
METODOLOGIA Extracción antocianinas Se utilizaron 236 gramos de hojas de col morada se sumergieron en una solución de 500 ml etanol acidificado con HCl al 0.01%, se homegeneizaron con una licuadora y permaneció
Más detallesBIORREACTRES. Estudios básicos y aplicados sobre procesos de fermentación
BIORREACTRES Ing. en Alimentos Estudios básicos y aplicados sobre procesos de fermentación Mg. Anahí V. Cuellas Docente investigadora Universidad Nacional de Quilmes TRABAJO PRACTICO Obtención de enzimas
Más detallesCROMATOGRAFÍA. A.- INTERCAMBIO IONICO: A.1. ANIONICA A.2. CATIONCA B.- FILTRACIÓN EN GEL
CROMATOGRAFÍA. A.- INTERCAMBIO IONICO: A.1. ANIONICA A.2. CATIONCA B.- FILTRACIÓN EN GEL C.- AFINIDAD A. CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO. Usos 1.- Purificar Proteínas 2.- Concentrar Proteínas Ventajas
Más detallesPURIFICACIÓN DE ENZIMAS
PURIFICACIÓN DE ENZIMAS MÉTODOS GENERALES DE EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN CAMILO BECERRA (TUQ) MARÍA FERNANDA FERRERO (TUQ) INTRODUCCIÓN EN LA NATURALEZA EXISTEN CANTIDADES INIMAGINABLES DE COMPUESTOS, PERO
Más detallesMATERIALES Y MÉTODOS Cultivo de Rhodosorus marinus
MATERIALES Y MÉTODOS Cultivo de Rhodosorus marinus La cepa de la microalga roja Rhodosorus marinus fue adquirida a través de la colección de algas de la Universidad de Texas (UTEX, Austin, Texas). El medio
Más detallesMATERIALES Y MÉTODOS. Muestras
MATERIALES Y MÉTODOS Muestras Las muestras de sangre con el bacilo M. tuberculosis se obtuvieron de 2 pacientes con tuberculosis diagnosticada por clínica, laboratorio y con cultivo positivo como controles
Más detallesELISA (Enzime Linked Immunoassay): Bases Teóricas y Fundamentos Prácticos. Versión a utilizar en sesiones: 6 y 9
LIA (nzime Linked Immunoassay): Bases Teóricas y Fundamentos Prácticos Versión a utilizar en sesiones: 6 y 9 nsayo inmunoenzimático Definición: s una técnica que combina la especificidad de los anticuerpos
Más detallesPurificación de Proteínas Parte II
Purificación de Proteínas Parte II Fase I. Obtención del extracto crudo Lisis celular. Válido para células sin pared celular como las células de tejidos animales, pero no es suficiente para células vegetales
Más detallesEXTRACCIÓN DE ADN DE HONGOS FILAMENTOSOS
EXTRACCIÓN DE ADN DE HONGOS FILAMENTOSOS Los hongos poseen un genoma complejo consistente en: ADN nuclear (n ADN) ADN mitocondrial (mt ADN) en algunos casos ADN plasmídico EXTRACCIÓN DE ADN DE HONGOS FILAMENTOSOS
Más detallesINTRODUCCIÓN AL ELISA
INTRODUCCIÓN AL ELISA 10 grupos de estudiantes 1. OBJETIVO DEL EXPERIMENTO El objetivo de este experimento es aportar a los estudiantes el conocimiento y metodología de la técnica del ELISA 2. COMPONENTES
Más detallesEntregable E3.1 INFORME SOBRE MÉTODOS ANALÍTICOS PARA FTALATOS Y MBT
EXPEDIENTE IMDEEA/2017/6 ACRÓNIMO AINOCBABY PROGRAMA Proyectos de I+D de carácter no económico realizados en cooperación con empresas TÍTULO DEL PROYECTO ALTERNATIVAS TÉCNICAMENTE VIABLES PARA LA ELIMINACIÓN
Más detallesPREPARACIÓN DE UN CONJUGADO ANTI
Rev Cubana Hematol Inmunol Hemoter 999; 5(2):32-6 Producción Instituto de Hematología e Inmunología PREPARACIÓN DE UN CONJUGADO ANTI IgG DE RATÓN-PEROXIDASA EN CABRA Lic. Julio C. Merlín Linares, Lic.
Más detallesEXTRACCIÓN DE ADN (Doyle & Doyle, 1987)
EXTRACCIÓN DE ADN (Doyle & Doyle, 1987) MATERIALES Y REACTIVOS (Grado biología molecular a analítico) Cloroformo Alcohol Isoamilico Isopropanol. Etanol al 70%. Bloques de Hielo Microcentrifuga Bloque de
Más detallesMATERIALES Y MÉTODOS. Células MARC-145
26 MATERIALES Y MÉTODOS Células MARC-145 Se utilizaron células MARC-145 (macrófagos renales de embrión de mono) para propagar el virus PRRS utilizando la cepa PRRSV 16244B Nebraska [no. de acceso al banco
Más detallesPurificación de proteínas
Purificación de proteínas Purificación Proceso que cuenta con varias etapas cuyo objetivo es lograr la concentración diferencial de la proteína o molécula de interés Condiciones generales a evaluar Calidad
Más detallesRESULTADOS. Perfil Electroforético (SDS-PAGE) de Proteínas Solubles de G. lamblia GS/M 83 H7
RESULTADOS Perfil Electroforético (SDS-PAE) de Proteínas Solubles de. lamblia S/M 83 H7 Se realizó la separación de proteínas del extracto antigénico soluble de. lamblia mediante electroforesis en geles
Más detallesTécnicas espectroscópicas para el control de calidad del azafrán. Albacete, 22/04/2009
Técnicas espectroscópicas para el control de calidad del azafrán (picrocrocina y safranal) Albacete, 22/04/2009 Análisis de la picrocrocina por extracción en fase sólida Preparación del extracto Pesar
Más detallesVII. MATERIALES Y MÉTODOS
VII. MATERIALES Y MÉTODOS 7.1 DIAGRAMA DE TRABAJO Material biológico Saccharomyces cerevisiae UDLAP-07 y CM-05 Resiembra en papa dextrosa agar para verificar pureza y viabilidad Curva de crecimiento en
Más detallesAlbúmina 22 % I.- Introducción. II.- Características. III.- Presentación
Albúmina 22 % I.- Introducción En 1945 Cameron y Diamond establecieron que ciertos sueros anti-d(anti-rh) podían aglutinar glóbulos rojos Rho positivos en presencia de albúmina de bovino pero no aglutinaban
Más detallesPRÁCTICA 1: MÉTODOS DE RUPTURA CELULAR
PRÁCTICA 1: MÉTODOS DE RUPTURA CELULAR FUNDAMENTO TEÓRICO Para estudiar la estructura y/o función de un orgánulo celular determinado, lo primero que hay que hacer es purificarlo, es decir, separarlo del
Más detallesPRÁCTICA 1: MÉTODOS DE RUPTURA CELULAR
PRÁCTICA 1: MÉTODOS DE RUPTURA CELULAR FUNDAMENTO TEÓRICO Para estudiar la estructura y/o las funciones metabólicas de los distintos compartimentos celulares hay que aislarlos del resto de los orgánulos.
Más detallesInt. Cl. 7 : C12N 9/02. 72 Inventor/es: Kajiyama, Naoki. 74 Agente: Carvajal y Urquijo, Isabel
19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 Número de publicación: 2 249 794 1 Int. Cl. 7 : C12N 9/02 12 TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA T3 86 Número de solicitud europea: 9766.6 86 Fecha de presentación
Más detallesPRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS POLICLONALES DE PROTEÍNAS DE PASTA DE AJONJOLÍ
PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS POLICLONALES DE PROTEÍNAS DE PASTA DE AJONJOLÍ Aguilera BA b, Díaz ZLE a, Reis STC b, Gómez SJG b, Mariscal LG c, Gasca GT b, Bernal SMG b a Licenciatura en Medicina Veterinaria
Más detallesRETOS DEL DIAGNÓSTICO EN PARATUBERCULOSIS EN MÉXICO
RETOS DEL DIAGNÓSTICO EN PARATUBERCULOSIS EN MÉXICO Gilberto Chávez Gris Edith Maldonado Castro Victoria E. Castrellón Ahumada. CEIEPAA, FMVZ-UNAM PRONABIVE UAA PARATUBERCULOSIS O ENFERMEDAD DE JOHNE Proceso
Más detallesCROMATOGRAFIA DE TAMIZADO MOLECULAR / FILTRACION EN GEL / EXCLUSION MOLECULAR
CROMATOGRAFIA DE TAMIZADO MOLECULAR / FILTRACION EN GEL / EXCLUSION MOLECULAR 1.-FUNDAMENTOS DE LA CROMATOGRAFIA DE TAMIZADO MOLECULAR. Las biomoléculas presentan una serie de propiedades físicas (tamaño,
Más detallesFundamento, etapas, estandarización y tipos de la pruebas de ELISA
Fundamento, etapas, estandarización y tipos de la pruebas de ELISA Armando Reyna Universidad Simón Rodríguez IDECYT, Centro de Estudios Biomédicos y Veterinarios, Laboratorio de Inmunobiología areyna@inmunobiologia.net.ve
Más detallesMATERIALES Y MÉTODOS. Obtención del Extracto Metanólico
MATERIALES Y MÉTODOS Obtención del Extracto Metanólico La planta fue colectada en el municipio de Santa Ana, Sonora y la especie fue identificada por el Herbario de la Universidad de Sonora. El material
Más detallesLEGISLACIÓN CONSOLIDADA ÍNDICE
Real Decreto 2021/1993, de 19 de noviembre, por el que se aprueba un método oficial de análisis de leche y productos lácteos. Ministerio de la Presidencia «BOE» núm. 2, de 3 de enero de 1994 Referencia:
Más detallesINSULINA GLARGINA BIOFÁRMACO
MONOGRAFÍA NUEVA Con fundamento en el numeral 4.11.1 de la Norma Oficial Mexicana NOM-001-SSA1-2010, se publica el presente proyecto a efecto de que los interesados, a partir del 1º de agosto y hasta el
Más detallesACTIVIDAD ENZIMÁTICA. Curvas temporales de la actividad enzimática de la lactato deshidrogenasa de músculo esquelético de pollo.
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Curvas temporales de la actividad enzimática de la lactato deshidrogenasa de músculo esquelético de pollo. Monitoreo de la purificación de la lactato deshidrogenasa SDS PAGE Actividad
Más detallesINDICE DE CONTENIDO SECCIÓN PAGINAS
INDICE DE CONTENIDO SECCIÓN PAGINAS EXPERIMENTO 1 1 1 INTRODUCCION A LOS METODOS EMPLEADOS EN LA BIOQUIMICA EXPERIMENTAL MODERNA REQUISITOS 1 OBJETIVOS 1 FUNDAMENTOS 1 1 COMPOSICIÓN Y ORGANIZACIÓN DE LA
Más detallesRESULTADOS Y DISCUSIÓN. Estimación de la Concentración Proteica del Filtrado de Cultivo de Mycobacterium tuberculosis H37Rv
RESULTADOS Y DISCUSIÓN Estimación de la Concentración Proteica del Filtrado de Cultivo de Mycobacterium tuberculosis H37Rv La curva estándar con la que se estimó la concentración proteica del filtrado
Más detallesINSTITUTO NACIONAL DE MEDICAMENTOS (INAME) FARMACOPEA ARGENTINA
INSTITUTO NACIONAL DE MEDICAMENTOS (INAME) FARMACOPEA ARGENTINA AV. CASEROS 2161 1264 BUENOS AIRES FAX 5411-4340-0853 R E P U B L I C A A R G E N T I N A DEXAMETASONA Sustancia de Referencia para Ensayos
Más detallesEL TEXTO EN COLOR ROJO HA SIDO MODIFICADO
COMENTARIOS Con fundamento en el numeral 4.11.1 de la Norma Oficial Mexicana NOM-001-SSA1-2010, se publica el presente proyecto a efecto de que los interesados, a partir del 1º de agosto y hasta el 30
Más detallesRESOLUCIÓN OIV-OENO EVIDENCIA DE LA QUITINASA Y LAS PROTEÍNAS DEL TIPO TAUMATINA EN VINOS BLANCOS
RESOLUCIÓN OIV-OENO 529-2017 EVIDENCIA DE LA QUITINASA Y LAS PROTEÍNAS DEL TIPO TAUMATINA EN VINOS BLANCOS LA ASAMBLEA GENERAL, Visto el artículo 2, párrafo 2 iv, del Acuerdo del 3 de abril de 2001 por
Más detallesESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE PROTEÍNAS
ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE PROTEÍNAS Purificación de la enzima lactato deshidrogenasa de músculo esquelético de pollo PARTE I. EXTRACCIÓN Y PRECIPITACIÓN POR SALADO. Las proteínas se purifican mediante
Más detallesSeparación de biomoléculas
Separación de biomoléculas Cromatografía. Aspectos generales, técnicas involucradas. FPLC, HPLC. Electroforesis. Conceptos generales y aplicaciones. Geles de poliacrilamida y agarosa. Isoelectroenfoque.
Más detallesSolución Método de preparación Comentarios Solución de carbonatotartrato y cobre (CTC) 60 ml, todavía en agitación añadir 0.1 g de CuSO 4 y 0.
7. APÉNDICE. PREPARACIÓN DE REACTIVOS. SECCIÓN I. INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO DE BIOQUÍMICA Determinación de concentración de proteínas por Lowry y Absorbancia a 280 nm Solución de carbonatotartrato Pesar
Más detalles3. Capítulo Inmunización activa de ratones de la cepa BALB/c
3. Capítulo 3 Producción y actividad funcional de anticuerpos monoclonales inducidos por pseudopéptidos derivados del antígeno MSP-2 del Plasmodium falciparum producidos en ratones de la cepa BALB/c 3.1
Más detallesEste proyecto fue realizado en el laboratorio de Ecotoxicología Acuática de la Unidad de Química Sisal, UNAM.
gabyrod98@gmail,com Este proyecto fue realizado en el laboratorio de Ecotoxicología Acuática de la Unidad de Química Sisal, UNAM. Es el estudio del destino y los efectos de los contaminantes en los ecosistemas,
Más detallesBIOQUÍMICA EXPERIMENTAL 0141 GRUPO 1 PROFESORAS. HORARIO DE CLASE Martes 7:00 11:00 LABORATORIO 307 Jueves 7:00 9:00 LABORATORIO 301
BIOQUÍMICA EXPERIMENTAL 0141 GRUPO 1 PROFESORAS Dra. Lilian González Segura lilgonzalezseg@gmail.com LAB 102, Depto de Bioquímica, Conj. E Fac. Química Dra. Sobeida Sánchez Nieto sobeida@unam.mx LAB 114,
Más detallesCROMATOGRAFIA DE GASES
CROMATOGRAFIA DE GASES INTRODUCCION INTRODUCCION La cromatografía es un método de separación de mezclas moleculares 0 5 10 15 20 tiempo (min) SEPARACION PARA SEPARAR SE EMPLEAN BASICAMENTE TRES ALTERNATIVAS:
Más detallesFASES DEL PROCESO CROMATOGRÁFICO
Apéndice CROMATOGRAFíA La cromatografía agrupa un importante grupo de técnicas que permiten separar componentes de mezclas complejas. En todas las separaciones cromatográficas la muestra que se desea separar
Más detalles- Matraces aforados de 25, 100, y ml.
Página 1 de 8 1.- INTRODUCCIÓN El presente protocolo es aplicable para el análisis cuantitativo de algunos aniones en muestras de vegetales. Los analitos son extraídos de la muestra pulverizada por medio
Más detalles