El Laboratorio Clínico y HbA1c

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1 El Laboratorio Clínico y HbA1c Dra. Verónica Ramírez M. Sudepto. Coordinación Externa Depto. Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia 26 de noviembre,

2 Hemoglobina A1c (Hb A1c) Hemoglobina del adulto 97% Hb A 2,5% Hb A2 0,5% Hb F HbA1c HB A1 Hb A1 = Hb A1a, Hb A1b, HbA1c Hb A1c 80% de Hb A1 Sinónimos: A1c,Glicohemoglobina, Hemoglobina glicada. 2

3 Glicación de hemoglobina val 3

4 Glicación de hemoglobina Ocurre en forma continua durante la vida de los GR. Formación es irreversible. Concentración de HbA1c depende d de : Nivel de glucosa en sangre Vida media de los glóbulos rojos: duración de la exposición. Permeabilidad de los glóbulos rojos (gap de glicación). Se excluye: anemia, hemólisis, déficit de vitamina B12 y folatos, hemoglobinopatías. 4

5 Rol del laboratorio en el manejo de DM Diagnóstico: Preclínico(pesquisa) Glicemia de ayuno Test de tolerancia a la glucosa A1c Insulina Test de resistencia a la insulina Clínico Glicemia de ayuno Test de tolerancia a la glucosa A1c Manejo o control Complicaciones agudas Glicemia glucosuria Cetonemia cetonuria Estado ácido base Equilibrio hidro electrolítico (electrolitos, osmolaridad) Lactato Complicaciones crónicas Glicemia glucosuria A1c Fructosamina Proteinuria Microalbuminuria Insulina Péptido C 5

6 Métodos analíticos para HbA1c Según carga: HPLC Más susceptible a interferencias i por variantes de hemoglobina (hemoglobinopatías). Según estructura: Cromatografía de afinidad con boronato: menos interferencias por variantes. Inmunoensayos: Anticuerpos contra el extremo glicado N terminal de la cadena beta. Interferencias poco frecuentes pero difíciles de detectar. Uso con precaución en algunas poblaciones. 6

7 Métodos analíticos para HbA1c Método Usuarios PEEC ISP Subprograma Hemoglobina Glicada Proporción de Usuarios Inmunoensayo 68.7% HPLC 26.2% Cromatografía de intercambio iónico 3.3% Cromatografía de afinidad 1.8% 7

8 Los orígenes de la estandarización 1993 New England Journal of Medicine Resultados de Diabetes Control and Complications Trial (DCCT). Relación entre niveles de glucosa en sangre y riesgo de complicaciones vasculares. 1996National Glycohemoglobin Standardization Program (NGSP) Estandarización contra el método usado por el laboratorio de referencia del DCCT HPLC. Patrocinado en parte por American Diabetes Association (ADA). Certificado de trazabilidad al método DCCT a los fabricantes de ensayos. HbA1c expresada en%. Mejora la comparabilidad de los resultados entre laboratorios. 8

9 Método IFCC La trazabilidad establecida de esta forma corresponde a método de comparación designado (DCM) más que a un método de referencia (RM). International Federation Of Clinical Chemistry (IFCC) IFCC Working Group on HbA1c Standardization (1995) 2001 Preparación de material de referencia primario y desarrollo de métodos de referencia aprobados por IFCC Grupo de trabajo termina la tarea, queda funcionando una red de laboratorios supervisada por el IFCC Committee on Traceability in Laboratory Medicine (C TLM). 9

10 Método IFCC Definición del analito HbA1c es la hemoglobina que está irreversiblemente glicada en uno o ambos extremos N terminal de las valinas de la cadena beta. Material de referencia primario Mezclas de Hb A1c HbA0 puras. Fracciones aisladas usando cromatografía de intercambio catiónico y de afinidad y caracterizada isoelectroenfoque capilar y espectrometría de masas con ionización electrospray (ESI MS) 10

11 Método IFCC Método de referencia IFCC Se desarrollaron dos métodos que miden específicamente los residuos N terminal glicados de las cadenas beta. Proteolisis de hemoglobina en péptidos. pp Peptidos glicados y no glicados resultantes son separados por HPLC. Cuantificación por espectrometría de masas (MS) o electroforesis capilar (CE). Se mide HbA1c como una razón entre péptidos N terminal glicados y no glicados y se expresa como porcentaje. 11

12 Relación IFCC NGSP Excelente correlación. Valores absolutos son diferentes: Los resultados IFCC son consistentemente % más bajos. Cuál reportar? Ecuación maestra: NGSP% = ( IFCC%) IFCC recomienda expresar resultados como mmol HbA1c/mol Hb

13 Relación IFCC NGSP % HbA1c % HbA1c NGSP IFCC 5,0 3,1 6,0 4,2 70 7,0 53 5,3 8,0 6,4 9,0 7,5 10,0 86 8,6 11,0 9,7 12,0 10,8 IFCC HbA1c NGSP HbA1c eag eag (mmol/mol) (%) (mg/dl) (mmol/l) eag (mg/dl) = (28.7 HbA1c) 46.7 eag (mmol/l)= (1.59 HbA1c)

14 HPLC CPRL Lab. Central de Referencia 1 PRL Lab. de Referencia 1 Métodos comerciales SRL Lab. de Referencia 2 Monitoreo Mensual (Red - CPRL) 10 muestras sangre congeladas rango 4-10%. Bianual (IFCC/NGSP) Límites para las diferencias observadas CPRL/laboratorios individuales y seguimiento de CV% (PRL, SRL) R.Little. Clin Chem 2011;57:

15 Procesos NGSP Calibración - Certificado de trazabilidad a los fabricantes. - Proceso anual. - Comparación con SRL Certificación - Incluye laboratorios individuales en dos niveles de cumplimiento de requisitos. Evaluación de la calidad -Vigilancia de los datos de CAP Survey GH2 y LN15.(Sesgo promedio y CV%) -Dos envíos al año, sangre total. -Valores asignados por NGSP. R.Little. Clin Chem 2011;57:

16 Procesos NGSP R.Little. Clin Chem 2011;57:

17 R.Little. Clin Chem 2011;57: HPLC % Inmunoensayo % 17

18 Métodos analíticos para HbA1c Usuarios PEEC ISP Subprograma Hemoglobina Glicada

19 19

20 Informe de resultados 20

21 Informe de resultados 21

22 22

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