ACTUALIZACION TOMA DE MUESTRAS VIROLOGICAS

Transcripción

1 ACTUALIZACION TOMA DE MUESTRAS VIROLOGICAS M. Judith Mora R. Jefe Subpto. Enfermedas Virales ISP

2 METODOS DE DIAGNOSTICO VIRAL A. DETECCION DE VIRUS O PRODUCTOS VIRALES Aislamiento viral en cultivos celulares. Enterovirus Inoculación en animales laboratorio: Rabia Inoculación en huevos embrionados: Influenza B. DETECCIÓN DIRECTA DE VIRUS O PRODUCTOS VIRALES. Inmunofluorescencia (IF).V Respiratorios Inmunoensayo enzimático (ELISA). Rotavirus C. DETERMINACION DE ANTICUERPOS /Ag Métodos serológicos (sueros pareados o única) Inhibición la Hemoaglutinación (IHA). Influenza Inmunofluorescencia (IF). VIH ELISA (IgM IgG) Dengue, Hanta, etc. D. DETECCION DE MATERIAL GENETICO VIRAL Reacción polimerasa en cana (PCR)

3 GENERALIDADES PARA TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS PARA ESTUDIO VIROLOGICO PERIODO OPTIMO DE RECOLECCION Ej: Aislamiento fase aguda, Ac IgM-IgG TIPO DE MUESTRA Ej: Sangre c/edta, suero SITIO DE OBTENCION Ej: Deposición TECNICA DE OBTENCIÓN DE LA MUESTRA ANF Tórula faríngea RECOLECCION DE LAS MUESTRAS Envase estéril, cierre hermético, etc TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Temperatura, medio transporte, etc FORMULARIO DE ENVIO

4 1º Tº 2º: protege el embalaje/envase secundario los daños físicos durante el transporte. 3º intificar al remitente y al stinatario. Incluir formularios datos relativos a la

5 Formularios

6 Virus Entéricos Meningitis Viral Vigilancia PFA Vigilancia Rotavirus Hospitales centinelas (V, VIII, RM) MINSAL-OPS Vigilancia Gastroenteritis virales (Norovirus, ADV, Astrovirus, Rotavirus): Centinelas ambulatorios Estudio Brotes

7 Nombre exámen / Prestación Aislamiento Enterovirus Método Aislamiento en cultivos celulares Tipo Deposición: envase estéril, tapa rosca. sin medio transporte LCR: envase estéril, tapa rosca. Liq.pericárdico: envase estéril tapa rosca Requisitos previos 0-5 días evolución Volumen Deposición: 1 cuch. té LCR o Líq Pericard: 1 ml ped 2 ml adulto Transporte y conservación Congelar (-18º a -20ºC) o refrigerar (2º a 8ºC) Horario recepción s / cepas Lunes a viernes 8:00 a 12:00 hrs. Plazo respuesta en días hábiles 15 Vigilancia Aislamiento Poliovirus en cultivos (sospechos celulares os PFA) Deposición sin medio transporte en envase esteril tapa rosca 0-14 días evolución (OMS) 10 grs. (1 cuch. té) Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC.. 15 Vigilancia Virus Gastroenteri cos: Anovirus entéricos, Astrovirus, Norovirus, Rotavirus y otros * Deposición sin medio Inmunoquím transporte en envase ica y RT-PCR esteril tapa rosca. * 0-3 días evolución en niños menores 5 años (consultorios Centinelas ambulatorios) 10 grs. (1 cuch. té) Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC.. 21 (5 a 10 s por Brote diferentes pacientes) 0-3 días evolución en brotes gastroenteritis notificados a SEREMIS 10 grms. (1 cuch. té) Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC.. Técnicas Vigilancia Rotavirus (Centros Centinelas) Serológicas Inmunoenzi máticas y genotipificaci ón Deposición sin medio transporte, envase esteril tapa rosca 0-3 días evolución en niños, hasta 5 años edad, hospitalizados 10 grms. (1 cuch. té) Congelar (-18º a -20ºC) y enviar en frío 2º a 8ºC.. 21

8 Virus Respiratorios Vigilancia Virus Respiratorios (ADV, VRS, PI) e Influenza A,B Vigilancia Influenza Vigilancia Influenza IRA grave

9 Nombre exámen / Prestación Método Tipo Requisitos previos Volumen Transporte y conservación Plazo respuesta en días hábiles Aislamiento Influenza A y B Aislamiento en cultivos celulares a) Gargarismo b) Aspirado nasofaríngeo c) Tórula con secreción nasofaríngea d) Biopsia tejidos Máximo 3 días evolución Con medio transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico en frío con T 2 8 C 15 Aislamiento Virus Respiratorio Sincicial, Anovirus, Parainfluenza a) Aspirado nasofaríngeo b) Tórula con secreción nasofaríngea c) Biopsia tejidos (d ADV: Tórula secreción conjuntival ) Hasta 5 días evolución Inmunofluorescencia Indirecta para Virus Influenza A, B Inmunofluorescen cia Frotis fijado Aspirado nasofaríngeo Hasta 3 días evolución En frío con. T 2-8 C 3 Inmunofluorescencia Indirecta para VRS, PI, Metapneumovirus Hasta 5 días evolución PCR para Influenza A, B PCR Aspirado nasofaríngeo o tórula secreción Hasta 3 días s nasofaríngea o biopsia inicio los síntomas pulmón Con medio transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico en frío con T 2 8 C 5 Inhibición la Hemaglutinación para Virus Influenza A, B Inhibición la Hemaglutinación (IHA) Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca Muestras pareadas 1era. fase aguda y 2da. fase convaleciente 1 ml (ped) 2 ml (adul) En frío con. T 2-8 C 15

10 Virus Exantemáticos Vigilancia Sarampión-Rubéola Otras: CMV, Herpes

11 Nombre exámen / Prestación Método Tipo Requisitos previos Volumen pediátric a Volumen adulto Transporte y conservación Horario recepció n Plazo respu esta en días hábile s Vigilancia Sarampión Rubeola ELISA, IF, aislamiento (según algoritmo ISP) Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca. Enviar Aspirado Nasofaríngeo (*) u Orina Enviar s con formulario vigilancia con la totalidad los antecentes solicitados 1 ml suero. Aspirado nasofaring eo en medio transporte viral o 50 ml orina 2 ml suero. Aspirado nasofaringeo en medio transporte viral o 50 ml orina Aspirado con medio transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con unidas Tº 2-8ºC. 4 Estudio Inmunidad Sarampión Suero extraído en Inmunofluore forma estéril scencia (IF) enviar en tubo estéril tapa rosca No tiene 1 ml 2 ml En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas 5 Vigilancia Síndrome Rubeola Congénita. ELISA IgM (algoritmo ISP) Suero en tubo Recién nacidos < 1 ml estéril tapa rosca 1 año suero. En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas 10 Serología IgG Rubéola ELISA IgG Suero, en tubo estéril tapa rosca. 1 ml suero 3 ml suero En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas 10

12 Nombre exámen / Prestación Serología IgG CITOMEGALOVIRUS Serología IgM Citomegalovirus Aislamiento Citomegalovirus Aislamiento Herpes Simplex Aislamiento Virus Varicela Zoster Método ELISA ELISA Aislamiento en cultivos celulares Aislamiento en cultivos celulares Aislamiento en cultivos celulares Tipo Suero en tubo estéril tapa rosca. suero, en tubo estéril tapa rosca. Orina,Recolecci ón: segundo chorro. Envase estéril, tapa hermética a) LCR en tubo estéril tapa rosca o goma b) Contenido vesicular (Líquido lesión) c) Tórula Secreción Vaginal Tórula lesión vesicular Requisitos previos Estudio transplante IgM recién nacidos < 3 meses con Síndrome TORCH 24 horas evolución De 0-2 días Hasta 3 días Volumen Volumen Transporte y conservación pediátri adulto ca 1 ml suero 1 ml suero 3 ml 3 ml LCR: 1 ml 3 ml suero LCR: 1 ml En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas Refrigerar sin medio transporte viral Con medio transporte viral Hanks s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con T 2 8 C En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas Horario recepci ón Lunes a viernes 8:00 a 12:00 hrs. Lunes a viernes 8:00 a 12:00 hrs. Lunes a viernes 8:00 a 12:00 hrs. Plazo respu esta en días hábil es

13 VIH / SIDA Confirmación VIH: VIH adulto VIH pediátrico (< 2 años) Carga Viral VIH CONASIDA- MINSAL para la atención pacientes beneficiarios Fonasa con el objeto evaluar efecto terapia ARV. Estructura l VIH Gp12 0 Gp41 p2 4 TR RNA

14 Nombre exámen / Prestación Confirmación VIH adulto Método * Técnicas serológicas (según Algoritmo l ISP: ELISA, IFI, LIA, Ag) Tipo /cepa * Suero o plasma Requisitos previos Muestra reactiva al tamizaje VIH Volumen pediátrica Volume n muestr a adulto 1 ml Transporte y conservación En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas. Horario recepción s / cepas Plazo respu esta en días hábil es 14 Confirmación VIH pediátrico Carga viral para VIH * Técnicas serológicas y Biología Molecular (según Algoritmo confirmación: PCR, RNA) Algoritmo con técnicas serológicas y Biología molecular Cuantificacion RNA viral plasmatico * Sangre con anticoagulante EDTA Sangre con anticoagulante EDTA Sangre con anticoagulante EDTA. Tubo tapa lila sistema extracción al A solicitud la Sección SIDA Menores 2 años, hijos madres VIH (+), protocolo diagnóstico sida pediátrico (Resolución Minsal). Cuantificación RNA viral en seguimiento pacientes que viven con VIH 4 ml 4 ml 3 ml 6 ml Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más Lunes a 24 hrs. jueves s la 8:00 a extracción 12:00 hrs. hasta la recepción en el laboratorio Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más Lunes a 24 horas jueves s la 8:00 a extracción 12:00 hrs. hasta la recepción en el laboratorio. En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas Lunes a viernes 8:00 a 12:00 hrs

15 Virus Hepáticos Detección HBsAg, VHC: Estudio brotes Hepatitis A

16 Nombre exámen / Prestación Volumen Método Tipo Requisitos previos pediátrica Volumen adulto Transporte y conservación Plazo respuest a en días hábiles Confirmación Antígeno Superficie Hepatitis B ELISA, neutralización (según algoritmo ISP) Suero en tubo estéril tapa rosca o goma Muestra con tamizaje doblemente 1 ml 3 ml reactivo a HBsAg En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas 15 Confirmación Virus Hepatitis C ELISA, RT-PCR *, Inmunoblot (según Algoritmo) * Plasma con anticoagulante (EDTA). En tubo estéril tapa rosca o goma Muestra Doblemente reactiva a Ac-VHC. 3 ml sangre (EDTA) y 1 ml plasma 5 ml sangre (EDTA) y 3 ml plasma En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas. 15 Vigilancia brotes Hepatitis A ELISA (IgM) Suero en tubo estéril 0-10 días s tapa rosca. inicio los síntomas 1 ml suero 3 ml suero En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas 7

17 Virus Enf. Emergentes: Hantavirus Virus Dengue Virus Nilo Occintal :

18 Nombre exámen / Prestación Método Tipo Requisitos previos Volume n muestr a pediátri ca Volumen Transporte y conservación adulto Horario recepción s / cepas Plazo respu esta en días hábile s ELISA, RT- Vigilancia Infección PCR (según por Hantavirus algoritmo l ISP) a)sangre con EDTA (tubo tapa lila) y Sangre sin anticoagulante (tubo tapa roja) b)tejido pulmón en tubo estéril tapa rosca, sin presevantes. (punción cardiaca) Caso sospechoso Inicio sintomas 3 ml sangre 5 ml sangre En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas Lunes a domingo las 24 horas 3 * ELISA *Aislamiento Suero extraído en Vigilancia Dengue // PCR forma estéril. En Fiebre Amarilla (según tubo estéril tapa algoritmo l rosca. ISP) Con 6 o más días evolución. IgM Para estudio brote 2 ml 3 ml ntro los 3 primeros días evolución En frío con. T 2-8 C 10 Vigilancia Virus l Nilo Occintal Técnicas Serológicas ELISA LCR y Suero en tubo estéril tapa rosca. 1 ml > a 8 días suero y evolución. 1 ml LCR En frío 2 a 3 ml 8 ºC con suero y 2 unidas ml LCR 10

19 Lab. Virus Oncogénicos y otros Nombre exámen / Prestación Método Tipo Requisitos previos Volumen Volumen adulto pediátrica Transporte y conservación Plazo respu esta en días hábile s Confirmación HTLV I/II ELISA, IF, PCR (según algoritmo) Sangre con anticoagulante (EDTA o citrato) Muestra Doblemente reactiva y en casos sospecha Leucemia Linfotrópica y Paraparesia Espástica 3ml 5 ml En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidas. No más 4 ds. s la extracción hasta la recepción en el laboratorio 15 Estudio Brotes Parotiditis Serología, PCR Suero o plasma y Orina en tubo estéril Sólo estudio brote según circular MINSAL 1 ml suero y 3 ml orina 3 ml suero y 3 ml orina En frío 2 a 8 ºC con unidas 7 PCR para Virus Papiloma Humano (VPH) PCR Tórula lesión o raspado zona sospechosa infección genital con medio transporte estéril.biopsias tejidos o condiloma en tubo estéril tapa rosca con medio transporte. En frío 2 a 8 ºC con unidas 10

20 Factores a revisar: Demora en envío las s s laboratorio Cumplir indicaciones envío (BS, envase, Tº) Intificación correcta l paciente Formulario indicado y vigente Completar antecentes l formulario: Fecha obtención Inicio síntomas (ds evolución) Resultados exámenes solicitados (Ej. Absorbancias) Vacunas (Ej: Polio) Etc. Diferencias entre el código l tubo y l antecente. Volumen solicitado

21 Gracias