IMPLEMENTACIÓN DE UNA PCR-MULTIPLEX PARA LA IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LOS POLIMORFISMOS EN LOS GENES HNF1-a y HNF4-a

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2 IMPLEMENTACIÓN DE UNA PCR-MULTIPLEX PARA LA IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LOS POLIMORFISMOS EN LOS GENES HNF1-a y HNF4-a M.C Vargas-Trujeque Ana Carolina * Q.F.B. Amezquita-Ramón Diana* Dr. Boldo-León Xavier Miguel* Dra. Martínez-López M. Carolina* RESUMEN El avance genético ha sido un componente dominante en la salud de este siglo, el conocimiento de la estructura y de los componentes del DNA han permito generar herramienta como la PCR, una técnica in vitro sencilla, sensible y relativamente rápida, para visualizar directamente las diferencias polimorficas en el DNA. El objetivo de este trabajo es el diseño de una PCR-Multiplex- HNF1-a y PCR-Multiplex- HNF4-a para el diagnostico de diabetes tipo MODY1 y MODY3. El diseño de iniciadores se realizó sobre secuencias de genes (HNF-4a y HNF-1a ) tomadas del GenBank, ( se agrego una pinza CG de 60pb, para asegurar visualizar las mutaciones a través de DGGE. La eficiencia de los iniciadores se probó teóricamente en el simulador Oligoanalyzer. La Tm se confirmo con una PCR de gradiente. Finalmente se definió la PCR-Múltiplex- HNF1-alfa: ph 8.5, Taq DNA polimerasa 5U/µl, dntps 400µM, MgCl 2 3mM (Promega), 250 ng de DNA, 0.15 mm de los iniciadores 1C-F, 1b-R, 2-F, 2-R; 0.2 mm de los inciadores 3-F, 4-R, 0.3 mm del iniciador 7-F y 7-R para un volumen final de 25 l. Concluimos diciendo que hemos implementado una PCR-Multiplex para el gen HNF1a en la cual podemos obtener información de varios loci en una sola reacción y disminuir el tiempo de análisis. INTRODUCCIÓN Existe una variante monogénica de la diabetes, que tiene un comportamiento semejante a la diabetes tipo 2 que se presenta en individuos jóvenes y se denomina como Diabetes tipo MODY (Maturity-Onset Diabetes of the Young), se presenta frecuentemente antes de los 25 años y se caracteriza por un defecto secretorio de insulina que puede ser moderado o severo de acuerdo al gen que se encuentre mutado. Su patrón de herencia es autosómico dominante. La Diabetes tipo MODY presenta mutaciones en 6 genes, estos codifican para la enzima glucosinasa (GGK/MODY 2) o para el factor nuclear de hepatocitos 4 a (HNF-4a/MODY 1), Factor nuclear hepatocito 1 a(hnf-1a MODY 3), Factor promotor de la insulina 1 (IPF/(MODY 4) (11), Factor nuclear hepatocito 1a(HNF- 1b/MODY 5) y Factor diferenciación neurogénico 1 (NEUROD1/MODY6). Los genes involucrados en este tipo de diabetes están finamente involucrados en la red transcripcional, órgano específico y metabólico. Velueta-Vázquez y colaboradores realizaron en el 2004 un estudio en el estado de Tabasco en 2 etnias de la chontalpa, encontrando una polimorfismos para MODY 3 de 17.14% y 8.5% respectivamente. El estudio de estos polimorfismo tienen múltiples aplicaciones, su empleo puede servir para trazar el origen de las poblaciones y realizar estudios que permitan reconstruir la historia de la enfermedad y dar tratamiento específico. * División Académica Ciencias de la Salud 116

3 El Genoma humano esta formado por ADN, esta molécula que contiene toda la información genética de un individuo, tiene una estructura de doble hélice que consta de dos cadenas de nucleótidos las bases son adenina, timina, citosina y guanina, cuyas secuencias, es decir el orden lineal de los nucleótidos en que están incluidas son típicas en cada individuo y que poseen las instrucciones exactas requeridas por un organismo para construir sus rasgos característicos. La diversidad o variabilidad genética, se debe a variaciones en la secuencia del genoma, en un sentido amplio el concepto diversidad se hace sinónimo de polimorfismo, existen varios tipos de polimorfismo (inserciones, deleciones, cambios en el numero de secuencias repetidas) pero los mas frecuentes son los denominados SNPs (Single Nucleotido Polymorphisms), el estudio de estos SNPs ha adquirido un notable auge por su posible contribución a la definición de las bases moleculares de las enfermedades complejas o multigénicas. La PCR es una técnica de amplificación directa de un gen o un fragmento de DNA, esta es una técnica in vitro sencilla, sensible y relativamente rápida, la cual consiste en ciclos de temperatura repetidos con tres etapas por ciclo, la desnaturalización, la hibridación especifica y la elongación. El método PCR-Multiplex consiste en combinar en una reacción todos los iniciadores del sistema que queremos amplificar simultáneamente, de esta manera obtendremos información de varios loci en una sola reacción. OBJETIVOS Diseñar una PCR-Multiplex-DGGE, para determinar mutaciones en los genes HNF1-a y HNF4a. METODOLOGÍA Y RESULTADOS Se seleccionó a un grupo de 103 jóvenes con antecedentes familiares de diabetes mellitus, se les realizo historia clínica completa y análisis de laboratorio. La extracción del DNA genómico se obtuvo a partir de muestras de sangre total mediante el Kit Wizard Genomic DNA purification (Promega, Madison, WI, USA), después de la extracción, la integridad del DNA fue corroborado mediante corrimiento electroforético en gel de agarosa al 1% y tanto la pureza como la concentración de este se determino en espectrofotometría (Smartspec 3000, Bio-Rad, USA). La PCR se realizó con la mezcla comercial de GoTaq Green Master Mix (Promega, Madison WI, USA). El diseño de iniciadores se realizó sobre secuencias de genes HNF-4 alfa y HNF1 a que se encuentran en le GenBank, ( con número de acceso U72959 y U72612 respectivamente, (ver tabla 1) a uno de los iniciadores se agrego una pinza CG de 60pb (CCg ggc ggg CCg ggc gag ggc ggg Cgg ACg ggc Cgg gca ggg ggc gcg CAg gcc gcg ggc) con el objetivo de asegurar que el extremo 3 hibride correctamente debido a los enlaces de hidrógenos que se dan entre los residuos de GC, ayudando así a mejorar la eficiencia de la reacción de PCR minimizando cualquier deshibridación que pudiese ocurrir. 117

4 Tabla 1. Iniciadores usados en la amplificación de los genes HNF4a y HNF1a GEN FRAGMENTO FOWARD (5 3 ) REVERSE (5 3 ) TAMAÑO Tm HNF4a Exon 1 Pinza GC-TCC AGC AAA AGT CGA TCC C CAG GCT GAC CTC AGC CAG 1106pb 61 C HNF4a Exon 2 Pinza GC- CAA GTC TGT GAA GTC ACA ACC CAG AAG AGC CTT GAA GGC C 572pb 60 C HNF4a Exon 3 Pinza GC-TGG ATA GCC AGG GCC C CCA TTA GCC AGT CAC CCT G 364pb 59 C HNF4a Exon 4 CAT CAG TCA CAG ACA CCC C Pinza GC-CTT AGA GGA GAA GCA GGG C 663pb 57 C HNF4a Exon 7 Pinza GC- TGC AGT TCC AGA ATC TGG TC GCC TCC CAA AGT GAT GGG 771pb 61 C HNF1a Exon 1 AGG CAA ACG CAA CCC AC Pinza GC- GCA GAG GAG CAG TTC AGG 603pb 61 C HNF1a Exon 2 Pinza GC-CCT GGG CTC CAT AAC TGC ATG CAG GTT GAA TCC CAC TG 474pb 61 C HNF1a Exon 3-4 Pinza GC- GGA ATG GAC GAG GGA AGG GGT GAC TGC TGT CAA TGG GAC 1085pb 62 C Para evitar la complementariedad dentro de la secuencia de cada iniciador, se utilizó el programa Oligonalyzer ( este programa arroja la estructura secundaria de los homodímeros o heterodímeros formados, así como la Tm en diversas condiciones de fuerza iónica, posterior a esto se realizó una PCR con gradiente desnaturalizante en el termociclador Touchgene gradient (Techne, Mod. FTGRAD2D) con una Tm de 64 C como base con un 10 C, (Fig. 1) para determinar la Tm adecuada la cual fue para HNF1a 60 C y para HNF4a 61 C, se utilizó marcador molecular de 100 pb DNA ladder (Invitrogen). Después de observar formaciones secundarias en las amplificaciones de la PCR realizada y basados en la literatura se decide aumentar los ciclos y disminuir los tiempos de hibridación. Fig. 1 Gel con gradiente desnaturalizante La PCR de los exones correspondientes se llevo a un volumen de 25µl conteniendo 100ng de la plantilla del DNA genómico, 12.5µl de GoTaq Green Master Mix 2x (ph 8.5, Taq DNA polimerasa 5U/µl, dntps 400µM, MgCl 2 3mM) y 10.5µl agua libre de nucleasas (Promega, Cat.M7123) y 0.5µl de cada iniciador a 10mM. (Fig. 2,3) 118

5 Fig. 2 Gel en agarosa al 1% de las amplificaciones de HNF-1a. Fig. 3 Gel en agarosa al 1% de las amplificaciones de HNF-4a Características Químicas de la PCR- Múltiplex- HNF1-alfa La realización de la PCR-Multiplex para el gen HNF1a (MODY 3) se llevo a un volumen de 25 l conteniendo 250ng de la plantilla del DNA genómico, 12.5 l de GoTaq Green Master Mix 2x (ph 8.5, Taq DNA polimerasa 5U/µl, dntps 400µM, MgCl 2 3mM) y 6.02µl agua libre de nucleasas (Promega, Cat.M7123) y 0.37µl del iniciador 1C-F a 10Mm, 0.37 l del iniciador 1b-R a 10Mm, 0.37µl del iniciador 2-F a 10Mm, 0.37µl del iniciador 2- R a 10Mm, 0.5 l del iniciador 3-F a 10Mm, 0.5µl del iniciador 4-R a 10Mm, 0.75 l del iniciador 7-F a 10Mm, 0.75 l del iniciador 7-R a 10Mm. (Fig. 4). SEGMENTOS TEMPERATURA TIEMPO Características Desnaturalización Físicas Inicial de la PCR- 95 C Múltiplex- HNF1-alfa 5 minutos Desnaturalización 94 C 30 segundos La realización Alineación de las amplificaciones 61 C en la PCR para 30 segundos el gen HNF1a fue llevada a 38 ciclos, seguido de: Extensión 72 C 30 segundos Extensión Final 72 C 7 minutos DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES Fig. 4 PCR-multiplex de HNF-1a en gel de agarosa al 1.8% Hemos implementado una PCR-Multiplex en la cual podemos obtener información de varios loci en una sola reacción, menor cantidad de templado y disminución del tiempo de análisis así como 119

6 menor cantidad de reactivos, además de añadirle una pinza de CG de 60pb a los iniciadores lo cual nos permitirá encontrar diferencias de hasta una sola mutación para los genes HNF4a y HNF1a. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. Sánchez-Reyes L, Fanghanel G, Márquez-Cid M-E, Salazar-Rocha R, Labastida-Sánchez C, Solís-Pérez A, Tusie-Luna M-t Actualización de los diferentes subtipos de diabetes tipo MODY Rev. Endocrinología y Nutrición (9) 1; Fajans S-S, Graeme I, Bell, and Polonsky K-S. 2001, Molecular Mechanisms and clinical pathophysiology of Maturity-Onset Diabetes of the Young. N Engl J Med, 345 (13); Aguilar-Salinas CA, Reyes-Rodriguez E, Ordoñez-Sanchez ML, Arellano-Torres M, Ramirez- Jimenez S, Domínguez-López A, Martinez-Francois JR, Velasco-Perez ML, García-García E, Gómez- Pérez F, Rull J and Tusie-Luna MT Early-Onset Type 4.Costa A, Bescos M, Velho G, Chevre J, Vidal J, Sesmilo G, Bellanne-Chantelot C, Froguel P, Casamitjana R, Rivera-Fillat, Gomis R and Conget I Genetic and Clinical characterization of maturity-onset diabetes of the young in Spanish families. E J Endo (142): Aguilar-Salinas CA, Vazquez-Chavez C, Gamboa-Marrufo R, García Soto N et al Prevalence of obesity, diabetes, hipertensión and tobacco consumption in an urban Mexican population. Arch Med Res (32); Velueta-Vazquez Leticia Análisis de Mutaciones de los genes HNF-4ª y HNF-1ª En dos poblaciones de la etnia chontal del estado de Tabasco. Tesis de Maestria. 120

7 ANÁLISIS FILOGENÉTICO DE VIRUS DENGUE EN EL ESTADO DE TABASCO RESUMEN M.C Erick Mauricio Brindis Fuentes * Dra. Mirian Carolina Martínez López* Dra. Gilma Sánchez Burgos* 2 Dr. Juan Salas Benito ** Dr. Xavier Miguel Boldo León* El Virus Dengue (VD) es el causante de la infección viral transmitida por vector (mosquitos Aedes) más prevalente en el mundo, se estima que más de 50 millones de casos de Fiebre por Dengue (FD) y más de 500,000 casos de Fiebre Hemorrágica por Dengue (FHD) ocurren anualmente en el mundo con una tasa de letalidad cercana al 20 % cuando no se da tratamiento adecuadamente. En América prácticamente todas las regiones tropicales y subtropicales reportan casos de FD y se ha incrementado la severidad de los casos hemorrágicos. En México, la Dirección General de Epidemiología de la Secretaria de Salud, reportó hasta el 2002, 6251casos de FHD afectando a 16 estados, 5 reportaron en promedio más de 500 casos. Así, la FD/FHD es un problema prioritario de salud pública. Se realizó un estudio virológico en Tabasco con el fin de conocer la distribución y transmisión viral, para ello se estandarizó un método de análisis por RT- PCR del serotipo de virus dengue para diagnosticar oportunamente los casos de dengue. Se identificó el virus dengue serotipo 2 en 184 sueros de 200 pacientes con diagnóstico clínico de dengue en Tabasco. Se analizarán las secuencias de los genes que codifican para las cuatro proteínas estructurales (C, M y E) del virus dengue para determinar la relación filogenética de estos casos con los reportados en el GeneBank y conocer su origen y distribución geográfica. INTRODUCCIÓN El virus dengue contiene una sola cadena no segmentada, en sentido positivo de RNA de una longitud de 11 kb (1). El genoma del virus dengue codifica para una poliproteína con un solo marco de lectura abierto que codifica para 3 proteínas estructurales y 7 no estructurales. Estas proteínas son la base para la clasificación de los cuatro serotipos del virus dengue (DEN 1-4), genéticamente relacionados pero antigénicamente distintos. La infección por cualquiera de estos puede causar una enfermedad febril autolimitada conocida como Fiebre por Dengue (FD) (2), así como Fiebre Hemorrágica por Dengue (FHD) y Síndrome de Choque por Dengue (SCD) en individuos que son reinfectados con un serotipo diferente (3). Algunos casos de FHD/SCD se han asociado con infecciones primarias por cepas del virus dengue con mayor virulencia (4). Se ha sugerido que las cepas virulentas presentan un incremento en su replicación dentro de las células blanco de los humanos; por lo tanto, el virus por sí mismo puede jugar un papel importante en la severidad de ésta enfermedad. Por otra parte, algunos genotipos han sido asociados con epidemias de FHD, mientras que otros son responsables de enfermedades leves en ciertas áreas aún cuando causan infecciones secundarias. En infecciones secundarias se han observado diferencias significativas en la severidad de la enfermedad, dependiendo del origen de la cepa. Por lo que la presencia de un genotipo especifico en un área puede estar asociado con un incremento en el riesgo de aparición de casos de FHD y SCD (5). En México la FHD/SCD aparecieron en proporciones epidémicas en 1996 y El DEN- 3 fue el serotipo más frecuentemente aislado en estos años, pero los otros tres serotipos también estuvieron presentes. Después de un periodo en el que no se reportaron casos * División Académica de Ciencias de la Salud ** Escuela Nacional de Medicina y Homeopatía, IPN 121

8 de FHD ( ), en el 2002 se incrementó el número de casos de esta enfermedad y más de 1000 casos se han reportado por año desde el En ese mismo año se reportó la introducción del genotipo Americano/Asiático del DEN-2 en Yucatán (6), en el 2006 este mismo genotipo fue detectado en Oaxaca sugiriendo su posible introducción desde Venezuela (7). Tabasco se encuentra clasificado como uno de los Estados con mayor riesgo de transmisión del dengue en México, sin embargo, a pesar de la cocirculación de distintos serotipos en diferentes años, únicamente de 1984 al 2002 se han reportado 135 casos de FHD por lo que se clasifica como un Estado con bajo riesgo para presentar la FHD (8). Del 2004 al 2005 el CENAVECE reportó que en Tabasco se presentaron 441 casos de FD y 19 casos de FHD, lo cual, marcaría un cambio en esta clasificación quedando Tabasco como uno de los Estado con riesgo medio para presentar casos de FHD. Existen diversos métodos diagnósticos para la detección del virus dengue, la selección del método a usar depende principalmente del estadio de la enfermedad en el que se encuentre el paciente, por lo que el conocimiento de la cinética de los diferentes marcadores del curso de la infección por dengue es de la mayor importancia para su diagnóstico. El método más rápido, sensible y específico es la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Esta técnica ha facilitado el desarrollo de un gran número de ensayos diagnósticos para detectar virus, incluyendo los virus dengue (9). El método que nosotros utilizamos está basado en el de Lanciotti (1992) que consiste en hacer una reamplificación del cdna obtenido en un primer paso de RT-PCR, esto porque es muy difícil observar resultados positivos en una primera amplificación ya que la cantidad de partículas virales, y por lo tanto de RNA, es muy pequeña. A este método se le conoce como RT-PCR anidado (Nested). El análisis genético es una herramienta importante para monitorear la transmisión y la eventual introducción de un nuevo genotipo en un área endémica. Las variaciones genéticas entre los virus dengue han sido estudiadas utilizando diferentes métodos, sin embargo, el análisis filogenético basado en las secuencias de nucleótidos es aceptado universalmente como el método más fidedigno. En diversos estudios se han realizado análisis filogenéticos basados en distintas secuencias de nucleótidos de diferentes regiones tales como la proteína E, la unión E-NS1, unión C-PrM, NTRs de 5 y 3 y del genoma viral completo del virus dengue (10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18). En la mayoría de estos estudios, los análisis de secuencia son de los virus dengue aislados de cultivos o bien de virus adaptados en cerebro de ratón. Sin embargo, para elucidar la composición genética exacta, nosotros, en nuestro estudio, determinaremos las secuencias de nucleótidos del virus dengue directamente desde las muestras de suero. OBJETIVOS Y METAS Identificar el serotipo del virus dengue en el suero de pacientes con diagnóstico clínico de dengue por RT-PCR y realizar un análisis filogenético del virus para conocer tanto la distribución de los genotipos en el Estado como su relación con otros genotipos de Latinoamérica. MATERIALES Y MÉTODOS Se utilizaron, como controles positivos, lisados de cerebro de ratón infectados con las cepas prototipos de virus dengue: Dengue-1 (Hawai) 3x10 6 UFP/ml, Dengue-2 (NGC) 1X10 9 UFP/ml, Dengue-3 (H87), Dengue-4 (H241) 6X10 6 UFP/ml, donados por el Dr. José 122

9 Ramos Castañeda del Instituto Nacional de Salud Pública (INSP) Cuernavaca, Morelos. Se analizaron 200 sueros de pacientes con diagnóstico clínico de dengue que se encontraban en etapa febril. Estos fueron proporcionados por la Secretaría de Salud del estado de Tabasco. El aislamiento de RNA viral se realizó utilizando el kit comercial MagMAX Viral RNA isolation kit (Ambion cat. 1929) siguiendo las indicaciones del fabricante. El serotipo infectante se determinó mediante RT-PCR anidada siguiendo el método de Lanciotti (9) con algunas modificaciones que aquí se describen brevemente: 2.5 µl de PCR buffer 10X sin Mg (Promega cat. M1665), 2.5 µl MgCl 2 25 mm (Promega cat. M1665), 1.0 µl dntp Mix 10 mm c/u (Promega cat. C1141), 1.25 µl DTT 100 mm (Invitrogen cat ), 1.0 µl Inhibidor de RNAsas 40 U/µl (Promega cat N2511), 0.5 µl Oligonucleótido D1 10 µm, 0.5 µl Oligonucleótido D2 10 µm, 0.1 µl Transcriptasa reversa (Promega cat. A3801), 0.2 µl Taq DNA polimerasa 5 U/µl (Promega cat. M1665), 2.5 µl de RNA. El volumen final de la reacción se ajustó a 25 µl. Para realizar el diagnóstico específico de los serotipos Den-1, Den-2, Den-3 y Den-4 mediante la amplificación de productos de PCR de 482, 119, 290, 392 pb respectivamente, se preparó otra mezcla de reacción sin el inhibidor de RNAsas, el DTT y la enzima transcriptasa reversa, el oligonucleótido D2 se cambió por uno de los oligonucleótidos TS1-TS4. Actualmente se está realizando la amplificación de los genes que codifican para las proteínas estructurales (C, M y E) del virus dengue para su posterior secuenciación y análisis filogenético. RESULTADOS Se obtuvieron 184 muestras positivas para el serotipo 2, en la Fig. 1 se observa el resultado para algunas de ellas. Carril 1 Carril 2 Carril 3 Carril 4 Carril 5 Carril 6 Carril 7 Carril 8 Carril 9 Carril 10 Carril 11 Carril 12 Carril 13 Carril 14 Carril 15 Carril pb 300 pb 200 pb 100 pb 119 pb Fig. 1 Gel de Agarosa al 3%. Se observan bandas de producto esperado (119pb). Carril 1 Ladder de 100 pb, Carril 2 control positivo, Carril 3 control negativo, Carril 4-16 muestras positivas. Estas muestras positivas se encontraron distribuidas en 10 de los 17 municipios del Estado (Fig. 2) siendo los más afectados el municipio de Cárdenas y Centro con 40 y 30 casos respectivamente. Con diagnóstico clínico de FHD se reportaron únicamente 6 123

10 casos durante el brote y 4 casos con diagnóstico de Fiebre por dengue con manifestaciones hemorrágicas. El resto de los casos correspondió al diagnóstico de FD. Se afectaron indistintamente tanto el sexo masculino como el femenino con 104 y 96 casos respectivamente. El grupo de edad más afectado comprende de los 10 a 25 años con un 48% de los casos (Fig. 3). Cárdenas Centla Centro Comalcalco Cunduacan Macuspana Nacajuca Paraíso Tacotalpa Tenosique Fig. 2 Mapa del Estado de Tabasco donde se ilustran los municipios afectados PORCIENTO (%) < a a a 55 > 56 GRUPO DE EDAD (AÑOS) Grafica 1. Muestra el porcentaje de pacientes por grupo de edad DISCUSIÓN Como se mencionó anteriormente, el virus dengue consiste en cuatro serotipos (Den 1-4) genéticamente relacionados pero antigénicamente distintos, los cuales a su vez se pueden subdividir en subtipos, también conocidos como genotipos, basándose en niveles de variación genética. En el Estado de Tabasco el brote de dengue ocurrido en el año 2006 fue producido por el serotipo 2 del VD, esto queda sustentado por nuestros resultados obtenidos mediante el RT-PCR. Esto concuerda con los resultados encontrados por Cisneros y col. y Loroño Piño y col. (7, 6) en los que encontraron al dengue 2 como responsable del brote en el año 2005 y 2002 respectivamente, es posible que por la cercanía con dichos estados (sureste de la República Mexicana) los virus sean introducidos periódicamente. Es importante determinar el genotipo de los virus encontrados en el estado de Tabasco para demostrar si genéticamente corresponden a los mismos aislados en los Estados antes mencionados. De no ser así se tendría que contemplar la posibilidad de que los virus 124

11 dengue podrían estar introduciéndose a través de la frontera sur con Guatemala ya que Tabasco forma parte de la misma. Los estudios filogenéticos proveen grandes aproximaciones para monitorear la introducción, movimiento y tráfico de los virus así como para predecir la potencial consecuencia epidemiológica de dicho evento, es por esto que nosotros proponemos que como parte de el sistema de vigilancia epidemiológica se realice la determinación del genotipo viral para alertar, oportunamente, a la población y a todo el sistema de salud en el caso que se detecte la introducción de un genotipo con potencial para producir casos hemorrágicos. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Peyrefitte Christopher N. y col Emerging Infectious Diseases Vol.11, 5: Fields Bernard Virology, 4 edición 33: Paban Kumar Dash y col Journal of Medical Virology 74: Rosen L Am. J. Trop. Med. Hyg. 26: Douglas y col The Lancet 354(23): Lorono-Pino M.A. y col American Journal Tropical Hygen 71(4): Cisneros y col Archives of Virology 151: Dirección General de Epidemiologia, C.-S. Situación de Dengue en México Lanciotti y col Journal of Clinical Microbiology 30(3): Irie K y col Gene 75: Rico-Hesse y col Virology 173: Deubel y col Archives of Virology 129: Lewis y col Virology 197: Lanciotti y col J. Gen. Virol. 78: Mangada M.N.M., Igarashi A Virus Genes 14: Singh U.B. y col Journal Infectious Disease 180: Singh U.B., Seth P Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health 32: Twiddy S.S. y col Virology 298:

12 INTERVENCIÓN EDUCATIVA EN SALUD BUCAL DEL BINOMIO MADRE- HIJO. TAMULTÉ DELICIAS, CENTRO, TABASCO RESUMEN C.D. Norma Elena Olán Acosta * M en C Marcelina Cruz Sánchez* MSP. Renán García Falconi* Objetivo: evaluar el efecto de una intervención educativa para modificar el nivel de conocimientos sobre la enfermedad bucal y su prevención. Metodología: se realizó un estudio cuasi-experimental antes/después con 103 madres de familias del Centro Avanzado de Atención Primaria de Salud Tamulté Delicias durante el período Noviembre 2006-Abril 2007, se aplicó un cuestionario que contenía 48 aseveraciones, se diseñó un paquete de información con ocho contenidos temáticos, el programa se desarrolló los días miércoles y viernes con grupos aproximados de 17 madres de familias, se emplearon técnicas educativas, afectivo-participativas y lúdicas, las etapas en que consistió este estudio fueron: diagnóstica, donde se determinó el perfil bucal en los niños menores de cinco años y aplicación del (pre-test), de intervención y evaluación (post-test). Resultados: al comienzo de la intervención 51 (49.5%) de las madres participantes poseían un conocimiento insuficiente sobre la enfermedad bucal y su prevención, al término solo 23 (22.3%) mantuvieron insuficiente, de tal forma que solo 80 (77.7%) de las participantes mostraron puntuaciones más elevadas después de acción educativa, estos resultaron fueron significativo (p<0.05) mediante la prueba t student para medias repetidas. Conclusiones: la intervención educativa en salud bucal mostró ser eficaz para modificar positivamente el nivel de conocimiento. Palabras claves: Salud bucal, prevención, enfermedades de las encías, conocimientos, intervención educativa. lintroducción En salud, el proceso salud enfermedad bucal en los individuos, familias y comunidad está determinado por agentes bacterianos, dieta rica en carbohidratos, fluoruros, hábitos higiénicos bucales, acceso a los servicios estomatológicos, capacitación en conocimiento sobre problemas bucodentales, responsabilidad individual de su propia salud y las prácticas o asistencia periódica a los servicios estomatológico. La tarea de la prevención coincide exactamente con la educación, pues trata de promover el desarrollo de habilidades y capacidades de adaptación que constituyen factores de protección antes situaciones de riesgo. En el contexto del ambiente familiar es donde se inicia está educación, es fundamental en los niños, quienes crecen y realizan el aprendizaje para conformar su visión de vida y del potencial de salud que contribuirá al logro de una mejor calidad de la misma, sin embargo también la familia puede tener efectos menos favorables sobre los niños cuando transmiten patrones que influyen negativamente sobre los niveles educacionales. Un rol siempre multifacético dentro de la familia, es el de las madres, son ellas quienes se encargan de la enseñanza y formación de actitudes y creencias sobre salud bucal y son quienes toman decisiones acerca de los cuidados y comportamientos en la salud de los niños i. Dada la problemática observada en detrimento de la salud bucal materno-infantil consideramos investigar Cuál es el efecto de una intervención educativa sobre la * División Académica de Ciencias de la Salud 126

13 enfermedad bucal y su prevención al medir el nivel de conocimientos de las madres de niños menores de cinco años del CAAPS Tamulté Delicias? Teniendo en cuenta lo anterior se genera la necesidad de implementar una intervención educativa, proporcionando medidas preventivas y de auto-cuidado, con un enfoque de promoción y fomento a la salud, existentes en una serie de procedimientos individuales, grupales e informativos. OBJETIVOS Objetivo General Evaluar el efecto de la intervención educativa sobre la información que poseen las madres de niños menores de cinco años acerca de la enfermedad bucal y su prevención. Objetivo Específico 1) Caracterizar la salud bucal del niño de tres a cinco años utilizando los índices de caries dental e higiene oral simplificado. 2) Realizar una intervención educativa sobre la enfermedad bucal y su prevención, en madres con niños menores de cinco años. 3) Evaluar el nivel de conocimiento sobre la enfermedad bucal y su prevención en las madres de niños menores de cinco años antes y después de una intervención educativa. MATERIALES Y MÉTODOS Tipo de Estudio, el trabajo de investigación esta enmarcado dentro de un estudio de tipo cuasi-experimental antes/después con intervención educativa. Población y Muestra, se determinó una muestra para una proporción a partir de los datos de N= 1373, p=0.5, d= 0.1 y un 95% de confianza, considerando una tasa de no respuesta (TNR) de un 25%. Se obtuvo una n f= 300 madres de familia, Posteriormente se realizó un muestreo aleatorio simple no probabilístico por conveniencia sin reemplazo, finalmente la muestra estuvo integrada por 103 madres de familia dado que el resto de las seleccionadas se negaron a participar en la intervención. La presente investigación se realizó durante el período Noviembre 2006-Abril Criterios de Inclusión, Exclusión y Eliminación De inclusión: niños en edad preescolar de tres a cinco años, madre de familia de niño menor de cinco años, estar dispuesta a compartir sus conocimientos y pertenecer al Programa de Salud de la Infancia. De exclusión: madres de familia que no deseen formar parte del estudio, madres de familia de nuevo ingreso que no aparecen dentro del censo y madres de familia que pertenecen a otra localidad. De eliminación: personas que no sean madres de familia (tutores) y una vez aceptada a participar, se muestra renuente en lo que se le solicite. Instrumento: la construcción del instrumento constó de cuatro etapas: elaboración de los items, diseño de la escala tipo likert, realización de la prueba piloto y validación de la escala. Recolección de la información: para determinar el perfil de salud bucal de los niños, se recopiló información a partir de fuentes secundarias de formatos, registros y Programa de Salud Bucal ii.procesamiento de datos: con el fin de concentrar la información obtenida de los cuestionarios, se elaboró una base de datos en el programa Microsoft office Excel 2003, procesados en un software estadístico SSPS versión La prueba utilizada fue t de student para medias repetidas para someter a prueba la diferencia entre los puntajes obtenidos en el pre y post-intervención para obtener 127

14 diferencias significativas de acuerdo a los resultados. Análisis de la información: Se procedió analizar los resultados a partir de tablas de resúmenes y gráficos, los resultados se compararon con otros autores. Consideraciones Éticas: desde el punto de vista ético la presente investigación se ajustó a los principios científicos establecidos en la Ley General de Salud del libro titulo segundo, de los aspectos éticos de la investigación en seres humanos iii. Intervención.- El estudio se diseñó en 3 fases: a) Fase inicial o diagnóstica: consistió en dos etapas, la primera para identificar el perfil de salud bucal de los niños menores de cinco años y la segunda se aplicó un cuestionario basal sobre conocimientos de la enfermedad bucal y su prevención, previó a la intervención educativa. Posteriormente, se diseñó la intervención educativa, para su implementación y medición. b) Fase de Implementación: Una vez obtenida la anuencia del director, se tomaron acuerdos sobre las actividades a realizar, personal participante y selección del lugar para las sesiones educativas, quedando como propuesta la participación activa de los promotores de salud e higienista dental y como promotor voluntario una madre de familia, las madres fueron convocadas a reunión, los días miércoles y viernes, aproximadamente 17 por grupo, a todas se les aplicó un cuestionario basal y luego se efectuó un programa de actividades educativas. Los contenidos temáticos abordaron conceptos como: 1) la boca y sus funciones, 2) la estructura de los dientes, 3) tipos de dentición, 4) alimentación y la salud bucal, 5) técnica de cepillado, 6) instrucción del uso de hilo dental, 7) caries dental y enfermedades de las encías y 8) importancia del flúor en la prevención de caries dental. c) Fase de Evaluación: al finalizar la etapa anterior se aplicó nuevamente el cuestionario de la investigación. RESULTADOS La edad de las madres participantes osciló en el rango de con el 47.6%, respecto a la escolaridad predominó el nivel secundaria con un 43.7%, en relación al número de hijos, el porcentaje más alto es de un hijo con el 45.6%, refieren estar embarazadas un 7.8%, respecto a la ocupación predominan las labores del hogar con un 85.4%, el estado civil es entre casadas y unión libre con un 43.7%. Al determinar el perfil de salud bucal de los niños se observó un índice moderado de caries ceo-d de 4.2, el índice de higiene oral simplificado fue regular de 1.4. En relación ala prevención 46 (44.7%) de las madres de familia tenían un conocimiento insuficiente, una vez efectuada la última 20 (19.4%) alcanzaron la categoría contraria, en tanto 57 (55.3%) poseían noción sobre medidas preventivas y de higiene oral, algunas mantuvieron y enriquecieron la información siendo estas 83 (80.6%) después de la actividad educativa adquiriendo suficiente conocimiento, estos resultados fueron significativos (p<0.05). En cuanto a la enfermedad bucal, las madres de familia tuvieron insuficiente conocimiento antes de la intervención 45 (43.7%) desconociendo muchos de los elementos indispensables para reconocer los principales factores de riesgo, pero después 26 (25.2%) lograron las categorías contrarias aumentando el nivel de conocimiento sobre la caries dental y enfermedades de las encías. En relación al nivel de conocimiento suficiente solo lo tenían 58 (56.3%) después de la intervención se incremento a 77 (74.8%), el tema más complejo de entender para ellas fue el de la inflamación de las encías o gingivitis siendo significativo t=2.935 p<0.05 al incrementar sus conocimientos. En nivel de conocimiento en general, al comienzo de la intervención 51 (49.5%) de las madres participantes poseían un conocimiento insuficiente sobre la enfermedad bucal y su prevención, pero después de ella solo 23 (22.3) mantuvieron insuficiente, estos 128

15 resultaron fueron significativo (p<0.05) de forma que solo 80 (77.7%) de las progenitoras mostraron puntuaciones más elevadas en la prueba post-curso. DISCUSIÓN El estudio demostró que los niños menores de cinco años, tienen un índice de caries dental con un grado de severidad moderado en dentición temporal. Otro estudio con las mismas características realizado en México por Villalobos et al. vi reportó un índice de caries dental alto, lo que denota la poca importancia de las madres de familia hacia la salud bucal. Esto contradice lo establecido en las Metas del Milenio vii y el componente bucal para América Latina el principal objetivo es mantener a la población menor de doce años con índices dentales bajos. El estado de higiene bucal mostró ser regular, estos son resultados similares a los reportado por Compodónico Reátegui en Perú viii reportaron un índice regular, confirmando que existe placa bacteriana en un tercio de la superficie de los dientes, siendo el factor de riesgo más importante para desarrollar caries y enfermedad periodontal, en este sentido los resultados de este estudio expresan que la frecuencia del cepillado dental es muy variada y con alto consumo de azúcares. Al realizar el análisis de los resultados sobre el nivel de conocimiento de la prevención bucal, se consideró que en la encuesta basal antes de la intervención las madres de familia tenían suficiente conocimiento, esto contradice el estudio realizado por Rodríguez Vargas ix en Lima Perú en un grupo de madres gestantes encontrándose un mayor número de ellas, con insuficiente conocimiento. En relación a la prevención después de la intervención las madres de familia tuvieron un suficiente el conocimiento, las restantes tienen información insuficiente para llevar a cabo actividades preventivas, semejante a este tipo de estudio lo determina en Cuba Bravo et al x. En una intervención educativa en hábitos bucales deformantes en el circulo infantil Amores de la Patria en donde se elaboró un programa de educación sanitaria con métodos efectivos de comunicación dirigidos a padres de familias, la mayoría de ellos tuvieron una adecuada cultura sanitaria. Se puede decir que, en cuánto a las técnicas lúdicas empleadas con las madres de familia mostraron que el juego de la lotería, en el que se incluyen mensajes sobre la salud bucal e higiene es empleado como una herramienta útil en la educación para la salud, Castillo, Rodríguez y Guerrero xi en México, determinaron el juego una alternativa para la enseñanza e incrementando el nivel de conocimiento. La segunda parte de las categorías se refiere al nivel de conocimiento sobre la enfermedad bucal como caries dental y enfermedad periodontal antes de la intervención educativa se tenia insuficiente conocimiento, contrario a los resultados anteriormente expuesto el estudio de Murrieta Linares y Zurita xii en México sobre la prevalencia de gingivitis con el grado de higiene oral, mostró que las madres de familia tienen información necesaria permitiendo reconocer factores de riesgo de la enfermedad. Al comparar los resultados con la segunda encuesta, se obtuvo resultados favorables, la mayor parte las madres participantes, modificaron sus conocimientos, las restante no obtuvieron porcentajes aceptables este último resultado puede incidir en la prevalencia de enfermedades bucales, esto lo demuestra Martín Cala. aún cuando los conocimientos no determinan por sí sola la conducta del ser humano si influye en forma amplia en ellos. En cuánto a conocimientos generales, las diferencias observadas antes y después de la acción educativa resultaron altamente significativas pues se aplicó un proceder que coadyuvó a la unión del grupo de madres en la motivación, para obtener mejor 129

16 conocimiento lo cuál promovió cambios muy satisfactorios en ese sentido, esto coincide con la intervención educativa Sonrisas Saludables realizada por Díaz Xiii para modificar el nivel de conocimientos y actitudes negativas hacia la salud bucal la acción desarrollada alcanzó valores por arriba de los reportados en esta investigación. La intervención educativa en madres de familia de menores de cinco años demostró ser eficaz al obtener resultados satisfactorios en cuanto a la modificación de conocimientos inadecuados sobre la salud bucal. CONCLUSIONES 1) El estado de salud bucal de los niños está alterado por la presencia de caries temprana en dentición temporal, cada niño menor de cinco años tiene un ceo-d de 4.2 órganos dentarios afectados, estas lesiones van a repercutir en la salud integral de los niños durante todas las etapas de la vida. 2) Los niños poseen una higiene oral regular, con alto contenido de ingesta de azúcares, existe deficiente cepillado dental, la mayoría lo realiza entre una y dos veces al día, existiendo un medio propicio para que se manifieste la enfermedad bucal. 3) La edad de las madres es de vital importancia predominando el rango de años, ostentan como nivel básico de estudios secundaria, en promedio tienen entre uno y dos hijos, como hallazgo durante la intervención ocho estaban embarazadas sin control odontológico, la mayoría se dedica a labores del hogar y el estados civil existiendo dos predominio casada y unión libre 4) La evaluación previa a la intervención mostró que las madres de familia tenían, insuficiente información sobre la enfermedad bucal y su prevención, la intervención resultó ser efectiva mejorando las puntuaciones de las participantes en la evaluación posterior. 5) Por todo lo anterior podemos concluir que las intervenciones educativas en salud bucal, dirigidas a madres de familia son eficaces para modificar positivamente el nivel de conocimiento. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1 Hernández Gutiérrez M, Ramos Hurtado I, Monteagudo Pérez M, Jiménez Mesa. Análisis de la Situación de Salud Bucal. Medicentro 1999, 3(1). 1 Creencias y conocimientos sobre la enfermedad bucal en docentes de educación inicial y primaria [articulo en línea] el 23 Junio de 2006]. 1 Ludeña A, K. Olson Joanne, Y. Pasco A, Promoción de la salud y calidad de vida entre madres de preadolescentes. Una etnografía enfocada. Rev. Latino-am Enfermage novembro-desembro; 13 número especial): ww.eerp.usp.br/rlaer. 1 Secretaría de Salud. Programa Nacional de Salud Bucal SSA México D.F Reglamento sobre Investigación en salud. Ley de Salud Pública. Diario Oficial de la Federación Médica. México. DF. 7 de febrero Villalobos-Rodelo J.J, Medina Solís C.E, Molina-Frechero N. et al. Dental caries in schoolchildren aged 6-12 years in Navolato, Sinaloa, México: Experience, prevalence, severity and treatment needs. Biomédica, June 2006, vol.26, no.2, p ISSN Romero Yhajaira Las Metas del milenio y el componente bucal de la Salud. Fundación Acta Odontológica Venezolana Vol. 44 no. 2/2006 ISSN Campodónico Reátegui C, Pineda Mea M, Chein Villacampa S, Benavente Lipa L, Ventocilla Huasupoma M. El estado nutricional como riesgo para desarrollar caries en niños menores de cinco años de edad. Odontología Sanmarquina. Vol. 1 No. 7 enero-junio Rodríguez Vargas MC. Nivel de Conocimiento sobre Prevención en gestantes del Hospital Nacional Daniel A. Carrión en el año [Tesis. Profesional]. Lima Perú Bravo Lorenzo D, León de la Fe I, Llorach Duch José, Chaviano Moreno Magalis. Intervención Educativa en Hábitos Bucales deformantes en el Círculo Infantil Amores de la Patria.Rev.medica electrón; 26(6), nov.-dic

17 1 Castillo Lizardo J.M, Rodríguez Morán M, Guerrero Romero F. El juego como alternativa para la enseñanza de conceptos básicos de salud. Rev. Panam. Salud Pública vol. 9 no.5 Washington May 2001 ISSN Murrieta Pruneda JF, Juárez López LA, Linares Vieyra C, Zurita Murillo V. Prevalencia de gingivitis en un grupo de escolares y su relación con el grado de higiene oral y el nivel de conocimientos sobre salud bucal demostrado por sus madres. Bol. Med. Hosp. Infant. Mex. [periódico en la Internet] Feb [citado 2007 Mayo 23]; 61(1): Disponible en: =iso 1 Díaz del Mazo L et al. Modificación de los conocimientos y actitudes sobre salud bucal en adolescentes del Reparto Sueño. MEDISAN 2001;5(2):

18 SALUD BUCAL Y APOYO SOCIAL EN ADULTOS MAYORES, EN OXIACAQUE, TABASCO RESUMEN 132 C.D. Domingo Mier y Concha Mármol* Lic. En Enf. Marcelina Cruz Sanchez * 0bjetivo: identificar la relación que existe entre el apoyo social percibido y las enfermedades bucales del adulto mayor. Material y Método: estudio descriptivo transversal único en mayores de 60 años de Oxiacaque, Nacajuca Tabasco. Material y Método: Se aplicaron dos cuestionarios para las variables demográficas y otro de apoyo social, y la guía clínica, para determinar el índice de caries dental e higiene oral simplificado. Se utilizó un paquete estadístico SPSS versión Resultados: el 51% de los adultos mayores son del sexo femenino, mismas que se dedican a labores del hogar, el 47% de total de los adultos mayores no acude al dentista, prevalece la gingivitis en un 81.2%, el 94% tiene un índice caries dental alto, el 98% no utiliza prótesis y el 100% recibe apoyo social tanto como desea. Conclusiones: la mayoría de los adultos mayores no acude al dentista, el índice de higiene oral que prevalece es malo, la afección bucal es la gingivitis, el índice de caries dental es alto, la totalidad de los adultos mayores no utiliza prótesis; el apoyo social se comportó de una manera positiva en casi la totalidad de los adultos mayores teniendo una estrecha conexión con todas las relaciones interpersonales. Palabras claves: adulto mayor, salud bucal y apoyo social. INTRODUCCIÓN El envejecimiento es un fenómeno natural que puede ser definido como la suma de alteraciones morfológicas y funcionales que ocurren en el organismo y que conllevan a la disminución de su función y de su habilidad para soportar estrés. El envejecimiento es un proceso inevitable que sucede en todas las formas de vida y que debe ser considerando como un fenómeno normal y no como una enfermedad, sin embargo, es difícil delimitar donde terminan los procesos normales que se presentan con el envejecimiento y donde comienzan los cambios patológicos, debido a que todos los cambios biológicos básicos que ocurren con la edad se suma el aumento de la vulnerabilidad a las enfermedades. El envejecimiento poblacional no constituye un problema de salud, más bien es un logro de la humanidad, en el cual ha tenido mucho que ver el desarrollo científico técnico alcanzado. Sin embargo, con él comienzan a proliferar enfermedades crónicas y degenerativas, y limitaciones relacionadas con estas, que disminuyen en el anciano su percepción de salud y por tanto la calidad de su vida lo que condiciona una atención especial, en virtud de satisfacer la nueva demanda que ella genera. (1) El envejecimiento es un fenómeno natural que agrupa alteraciones morfológicas y funcionales del organismo. El envejecimiento es la disminución a la adaptación por la pérdida de la capacidad funcional de los diversos órganos como consecuencia del tiempo, es un proceso dinámico, progresivo e irreversible, donde intervienen factores biológicos, psicológicos y sociales que no pueden ser considerados como enfermedad ni fenómeno unicausal. El vínculo entre edad y estado de salud de las personas es plenamente conocido, lo que hace posible predecir el desarrollo de ciertas enfermedades si se conoce la proporción que representan los distintos grupos de edad en la población y el comportamiento epidemiológico de éstas. (2) Con el aumento de la edad, en los tejidos dentarios se producen cambios dimensionales, estructurales y funcionales. Estos cambios * División Académica de Ciencias de la Salud

19 están relacionados con la formación de tejido calcificado adicional sobre las paredes de la dentina o dentro del tejido pulpar, lo que disminuye el volumen original de la cavidad pulpar, la disminución de la densidad celular, el aparente aumento del componente fibroso, la disminución gradual de la irrigación sanguínea y de la innervación trae consigo la disminución de la capacidad de defensa y recuperación y una reducción en la sensibilidad a diferentes estímulos. (3) En la tercera edad, el individuo debe enfrentar no sólo cambios físicos e intelectuales propios de la edad, sino también a cambios de estilos de vida, roles y responsabilidades sociales. Estas situaciones llevan a los adultos mayores a estar constantemente expuestos a estresares, entendiendo por estresares a las demandas del medio ambiente social o demandas internas que requieren que el individuo reajuste sus patrones habituales de comportamiento. (4) OBJETIVO GENERAL Identificar la relación entre la salud bucal y el apoyo social percibido en el adulto mayor, en Oxiacaque, Nacajuca, Tabasco. METODOLOGÍA Tipo y diseño de estudio: La investigación consistió en un estudio observacional, descriptivo, de corte transversal único. Población y Muestra: Población: La población del poblado de Oxiacaque, Nacajuca esta constituido por 1727 personas de las cuales 96 son adultos mayores de 60 años. Dado el tamaño pequeño de la población objeto de este estudio se decidió estudiarla a toda ella. Instrumentos, Técnicas y procedimientos: Para medir la variable estado de salud bucal del adulto mayor se diseñó una guía de entrevista que contenía los siguientes segmentos: Variables sociodemográficas, Factores de Riesgo, pruebas de sensibilidad en los dientes, Índice de caries, Índice de higiene oral simplificado sarro y detritus y el índice de prótesis. Para la exploración bucal se utilizaron, espejo bucal, pinza de curación, explorador. La Variable Apoyo social percibido, se midió a través de la escala de apoyo social funcional de DUKE-UNC-11 modificada por Broadhead, que se utiliza para medir el apoyo social en su dimensión cualitativa. Esta escala fue validada en nuestro medio por Revilla Ahumada y cols. Quienes obtuvieron un factor de consistencia interna alfa de cronbach de , en la prueba piloto de esta investigación la escala arrojó un coeficiente alfa de 0.92 Procedimiento: Se diseñò ad hoc una guía de entrevista, que se aplicó en cada una de las personas que fueron universo de este trabajo de investigaciòn por el titular de la investigación y el personal profesional involucrado en la misma. RESULTADOS En el cuadro número 1 podemos observar que el 36.5% de los adultos mayores se encontraron en el grupo de edad de 65 a 69 años; el 51% de las personas entrevistadas correspondieron al sexo femenino, la actividad laboral preponderante es el de ama de casa con un 51.0%, seguido de campesino con un 40.6% 133

20 Cuadro numero 1. Características sociodemográficas. Variables Sociodemográficas Fi (n=96) % Sexo Femenino Masculino Edad (años) Actividad laboral Campesino Comerciante Ama de casa Jubilado Fuente: Entrevista directa Nacajuca En la pregunta de si padecían alguna enfermedad el 85.4% respondió afirmativamente, de ellos destacan Problemas articulares y la hipertensión arterial CUADRO No. 2 Frecuencia de la asistencia al dentista. Numero Porcentaje Una vez al año Dos veces al año Solo cuando tengo alguna molestia Nunca Total Fuente: Entrevista directa Nacajuca Respecto al indicador frecuencia con que asiste al dentista, los resultados muestran que las opciones nunca asisten y sólo cuando tengo alguna molestia, fueron las señaladas con un 91.6%. (Cuadro 2) Al hacer la revisión de la cavidad bucal se encontró un grave deterioro de la salud oral representado por 80.2% de los adultos mayores que tienen un estado dental malo. (Cuadro 3) CUADRO No. 3 Estado dental de los participantes Numero Porcentaje Bueno Regular Malo Total Fuente: Entrevista directa Nacajuca En el cuadro 4 nos muestra la revisión del estado dental permitió una distribución por tipo de afección la que mas se presenta siendo la gingivitis la afección que predominó con 81.2% CUADRO No. 4 Afecciones bucodentales Numero Porcentaje Movilidad Dolor dentario Gingivitis Total Fuente: Entrevista directa Nacajuca Las afecciones bucales manifiestan algunos síntomas que son percibidos por las personas como sensaciones de dolor o desagradables al ingerir alimentos fríos o calientes, otros más aparecen al momento del cepillado dental, este indicador reveló, que en su mayoría los participantes no presentan estas manifestaciones. Las molestias mas frecuentemente mencionadas fueron inflamación de las encías (61.5%) dolor cuando se cepillan los dientes (33.3%) y ardor en las encías al tomar frío (24.0%). (Cuadro 5) CUADRO No. 5 Sensibilidad Dental Dolor Se entumen los dientes Ardor en las encías Le sangran las encías Inflamación de encías Al tomar caliente Al tomar frio Nada Total 134