INDICE. Introducción 3. Parámetros de análisis y esquema del proceso de medición 4. Ejemplo de una muestra normal 5. Patrones anormales 6

Transcripción

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2 INDICE Introducción 3 Parámetros de análisis y esquema del proceso de medición 4 Ejemplo de una muestra normal 5 Patrones anormales 6 Lista de mensajes interpretativos 8 Pantalla de resultados y su interpretación 9 Ejemplos de leucocitosis 11 Casos de células inmaduras de tipo mieloide 17 Casos de células inmaduras de tipo linfoide 31 Cambios de resultados durante la terapia 43 Casos de células de apariencia específica 51

3 INTRODUCCION LA IMPORTANCIA DE OBSERVAR EL MATERIAL CON INTELIGENCIA La tinción Giemsa se emplea desde hace más de 100 años. Incluso ya podíamos ver impresiones claras y nítidas de células sanguíneas, incluyendo neutrófilos y eosinófilos, en el Diario de la Academia de Tokio, Japón (Journal of the Tokio, Japan Academy), del 15 de junio de 1885 (Era de Meiji). En estas impresiones notamos la gran minuciosidad con que nuestros predecesores representaron células sanguíneas, utilizando al máximo los microscopios de baja resolución disponibles en ese tiempo. Eso me lleva a pensar en el gran progreso que han alcanzado en el análisis de la sangre las clínicas contemporáneas en relación con esa época. Afortunadamente, la tecnología utilizada en los contadores hematológicos se ha desarrollado a tal punto que ahora podemos obtener un diferencial leucocitario en uno o dos minutos con unos pocos microlitros de muestra de sangre. Los analizadores actuales no solamente nos ofrecen el conteo del diferencial sino también el conteo absoluto, así como dispersogramas de leucocitos en los cuales las células son distribuidas de acuerdo con sus características ópticas, con la ventaja de que los resultados son mostrados al instante. En leucocitos normales, el análisis automatizado supera ampliamente en precisión y exactitud al análisis manual. En muestras patológicas, el dispersograma aparece con mensajes o avisos de alerta que sugiere el tipo de anormalidad presente; por lo tanto, el análisis microscópico puede realizarse sobre la base de los mensajes o avisos generados por el dispersograma. Esto genera un gran ahorro de tiempo y costos. Hace poco estuve en un curso sobre exámenes de sangre. Para mi sorpresa, muchos encargados del examen microscópico de muestras están habituados al uso de analizadores automatizados, aunque existe al mismo tiempo una tendencia a realizar una observación más superficial en el análisis morfológico y una menos confiable técnica manual para PT en los exámenes de coagulación. Esto parece constituir una influencia negativa del análisis automático, pues existe el riesgo de depositar excesiva confianza solamente en la impresión de los resultados del contador automático. A diferencia de la Era de Meiji, con los impresionantes cambios ocurridos en el sistema médico en general, nosotros nos vemos forzados a obtener y evaluar, en el laboratorio, los valores necesarios para el diagnóstico de múltiples muestras y parámetros en un corto lapso de tiempo. Los analizadores actuales, construidos sobre una base de software de alta tecnología, nos permiten no sólo obtener sino también manipular y procesar cantidades enormes de resultados. Sin embargo, es difícil establecer si toda la información generada retorna al médico. Por ejemplo, a pesar de que la información numérica -que incluye el conteo completo de células o hemograma y el diferencial de leucocitos- es transferida por sistema de cómputo a los médicos, pocos laboratorios transfieren los dispersogramas y los mensajes o señales de avisos a los médicos. Se presta poca atención a la variedad de información que tienen estos analizadores -que incluye datos básicos del análisis microscópico-, aun cuando a la luz de su utilidad clínica deberían ser usados activamente. Tener la mente y la vista entrenados es indispensable para obtener el máximo provecho de esta información cuando se examina la sangre. Espero sinceramente que este compendio les resulte útil, si bien es sólo una mínima parte del esfuerzo diario de los laboratorios de estudio hematológico. Noriyuki Tatsumi Profesor, Departamento de Clínica y Laboratorio Médico, Escuela de Medicina de la Universidad de Osaka, Osaka (Japón) Agosto,

4 Parámetros de análisis y esquema del proceso de medición * Las equivalencias figuran en la página 7. 4

5 Ejemplo de una muestra normal (1) WBC 6.90 [10 9 /L] RBC 4.64 [10 12 /L] HGB 154 [g/l] HCT 44.0 [%] MCV 94.8 [fl] MCH 33.1 [pg] MCHC 350 [g/l] PLT 353 [10 9 /L] RDW-SD 46.0 [fl] RDW-CV 13.4 [%] PDW 11.6 [fl] MPV 10.6 [fl] P-LCR 30.0 [%] PCT 0.37 [%] NEUT 4.19 [10 9 /L] 60.7 [%] LYMPH 1.54 [10 9 /L] 22.3 [%] MONO 0.51 [10 9 /L] 7.4 [%] EO 0.60 [10 9 /L] 8.7 [%] BASO 0.06 [10 9 /L] 0.9 [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 1.70 [%] 78.9 [10 9 /L] IRF 6.7 [%] LFR 93.3 [%] MFR 6.1 [%] HFR 0.6 [%] (10) (11) (12) WBC IP Message(s) RBC/ RET IP Message(s) PLT IP Message(s) (1) Resultados del análisis. (2) Dispersograma del diferencial (DIFF). (3) Dispersograma de leucocitos y basófilos (WBC/BASO). (4) Dispersograma de células mieloides inmaduras (IMI). (5) Dispersograma de eritrocitos nucleados (NRBC). (6) Dispersograma de reticulocitos (RET). (7) Dispersograma de plaquetas ópticas (PLT-O). (8) Histograma de hematíes o eritrocitos (RBC). (9) Histograma de plaquetas (PLT). (10) Sistema de avisos interpretativos de leucocitos (WBC). (11) Sistema de avisos interpretativos de hematíes y reticulocitos (RBC, RET). (12) Sistema de avisos interpretativos de plaquetas (PLT). 5

6 Patrones anormales Fluorescencia Radiofrecuencia (RF) Ghost Dispersión lateral Corriente Directa (CD) Dispersión frontal Dispersión frontal Fragment WBC Fragment WBC Fragment Fluorescencia Fluorescencia Dispersión frontal Dispersión frontal *Las equivalencias figuran en la página 7 Fluorescencia Dispersión lateral 6

7 Blastos (Blasts) En el dispersograma DIFF, los blastos aparecen en el área indicada como Blasts/Atypical Lympho. En el dispersograma IMI, los blastos aparecen en el área indicada como Blasts. Por la acción de los lisantes, los blastos son reducidos a la mitad o a un tercio de su tamaño. Debido a que los blastos poseen un núcleo condensado, desigual y sólo un pequeño número de gránulos inmaduros, son las células de menor densidad. Gránulos inmaduros (Immature Gran) En el dispersograma DIFF, los gránulos inmaduros aparecen en el área indicada como Immature Gran. En el dispersograma IMI, los gránulos inmaduros aparecen en el área indicada como Immature Gran. Así como los blastos, los gránulos inmaduros son reducidos a la mitad o a un tercio de su tamaño por la acción de los lisantes. Asi mismo, por su grado de madurez nuclear y su volumen granular, la densidad de los gránulos inmaduros es mayor que la de los blastos. Desvío izquierdo (Left Shift) En el dispersograma DIFF, las bandas aparecen en el área indicada como Left Shift. En el dispersograma IMI, las bandas aparecen en el área indicada como Left Shift. Linfocitos atípicos (Atypical Lympho) En el dispersograma DIFF, los linfocitos atípicos aparecen en el área indicada como Blasts/Atypical Lympho. En esa área aparecen linfocitos atípicos y blastos. Linfocitos anormales/l-blastos (Abn Lympho/L-Blasts) Cuando aparecen linfocitos atípicos o anormales en el área indicada como Blasts/Atypical Lympho en el disperosograma DIFF, monitorear con la información del dispersograma IMI. Hematíes nucleados (NRBC) En el dispersograma NRBC, los hematíes nucleados aparecen en el área indicada como NRBC. En el dispersograma DIFF, los hematíes nucleados aparecen en el área indicada como NRBC. Aglutinación de plaquetas (PLT Clumps) En el dispersograma IMI, la aglutinación de plaquetas aparece en el área indicada como PLT Clumps. Debido a que las plaquetas mantienen su forma en el reactivo lisante, aparecen entre el área de los fantasmas (ghost) de hematíes y el área de PLT Clumps. Las aglutinaciones plaquetarias aparecen en el área comprendida entre el área de los fantasmas y el área de neutrófilos. En el dispersograma NRBC también aparecen aglutinaciones plaquetarias en el área indicada como PLT Clumps. GLOSARIO DE PARÁMETROS WBC: Leucocitos Baso%: Porcentaje de basófilos Baso#: Número de basófilos NRBC: Hematíes nucleados Lymph: Linfocitos Neut: Neutrófilos Mono: Monocitos Eo: Eosinófilos RET: Reticulocitos PLT-O: Plaquetas ópticas HFR: Porcentaje de fluorescencia alta MFR: Porcentaje de fluorescencia media LFR: Porcentaje de fluorescencia baja IRF: Fracción de reticulocitos inmaduros HPC#: Número absoluto de células pluripotenciales hematopoyéticas HPC%: Porcentaje de células pluripotenciales hematopoyéticas RBC: Hematíes o eritrocitos HCT: Hematocrito MCV: Volumen corpuscular medio RDW-SD: Distribución del ancho de la curva de eritrocitos DS RDW-CV: Distribución del ancho de la curva de eritrocitos CV PLT-I: Plaqueta obtenida por impedancia PCT: Platocrito PDW : Distribución del ancho de la curva de plaquetas MPV: Volumen plaquetario medio P-LCR: Porcentaje de plaquetas grandes MCH: Hemoglobina corpuscular media MCHC: Concentración de hemoglobina corpuscular media HGB: Hemoglobina Método SLS (Lauril sulfato sódico) Ghost: Fantasma(s), residuo celular después de la lisis de eritrocitos Fragment: Fragmento(s) 7

8 Lista de mensajes interpretativos WBC (Leucocitos ) RBC (Hematíes) PLT (Plaquetas) Ítem Canal de análisis Parámetro clave Fórmula o regla para la generación de avisos <Anormal> WBC Abn Scattergram WBC/BASO, DIFF Dispersograma Determinado de los dispersogramas WBC/BASO y DIFF NRBC Abn Scattergram NRBC Dispersograma Determinado del dispersograma NRBC Neutropenia NEUT#, NEUT% NEUT# < 1.00 x 10 9 /L (o % ajustado) Neutrophilia NEUT#, NEUT% NEUT# > x 10 9 /L (o % ajustado) Lymphopenia LYMPH#, LYMPH% LYMPH# < 0.80 x 10 9 /L (o % ajustado) Lymphocytosis LYMPH#, LYMPH% LYMPH# > 4.00x 10 9 /L (o % ajustado) Monocytosis MONO#, MONO% MONO# > 1.00 x 10 9 /L (o % ajustado) Eosinophilia EO#, EO% EOS# > 0.70 x 10 9 /L (o % ajustado) Basophilia BASO#, BASO% BASO# > 0.20 x 10 9 /L (o % ajustado) Leukocytopenia WBC WBC < 2.50 x 10 9 /L Leukocytosis WBC WBC >18.00 x 10 9 /L NRBC present NRBC NRBC% NRBC% > 0.02 <Sospecha> Blasts? DIFF/IMI Dispersograma Determinado de los dispersogramas DIFF e IMI Immature Gran? DIFF/IMI Dispersograma Determinado de los dispersogramas DIFF e IMI Left Shift? DIFF/IMI Dispersograma Determinado de los dispersogramas DIFF e IMI Atypical Lympho? DIFF/IMI Dispersograma Determinado de los dispersogramas DIFF e IMI Abn Lympho/L-Blasts? DIFF/IMI Dispersograma Determinado de los dispersogramas DIFF e IMI NRBC? DIFF Dispersograma Determinado del dispersograma DIFF RBC Lyse resistance WBC.D vs. WBC Diferencia en el conteo de WBC en los dispersogramas WBC/BASO y DIFF <Anormal> RBC Abn Distribution RBC RL, RU, MP, aviso DW Determinación de valores por cómputo y comparación de los tamaños de ítems Dimorphic Population RBC Aviso MP de valores Evaluación basada en la forma del pico y la diferencia (histograma) entre el pico y la base del histograma RET Abn Scattergram RET Dispersograma Determinado del dispersograma RET Reticulocytosis RET#, RET% RET% > 0.05 o RET# > 200 x 10 9 /L Anisocytosis RDW-SD, RDW-CV RDW-SD > 65fL o RDW-CV > 0.20 Microcytosis MCV MCV < 70 fl Macrocytosis MCV MCV > 110fL Hypochromia MCHC MCHC < 290g/L Anemia HGB HGB < 100g/L Erythrocytosis RBC RBC > 6.50 x /L <Sospecha> RBC Agglutination? RBC MCHC,MCH,RBC,RU (%) Determinación de valores por cómputo y comparación de los tamaños de ítems Turbidity/HGB Interference? MCHC MCHC > 365g/L Iron Deficiency? MCHC,MCV, RDW-CV Determinación de valores por cómputo y comparación de los tamaños de ítems HGB Defect? RDW-CV, MCV Determinación de valores por cómputo y comparación de los tamaños de ítems Fragments? RET, RBC Dispersograma,RDW-SD, Determinado del dispersograma RET PU,PU(%),MCV,RL,MCHC Determinación de valores por cómputo y comparación de los tamaños de ítems <Anormal> PLT Abn Scattergram RET Dispersograma Determinado del dispersograma RET PLT Abn Distribution PLT PDW, PL(%), PU(%), PMFV, Determinación de valores por cómputo y comparación PLT, P-LCR, MPV, PU de los tamaños de ítems Thrombocytopenia PLT PLT < 60 x10 9 /L Thrombocytosis PLT PLT > 600 x 10 9 /L <Sospecha> PLT Clumps? DIFF, IMI, NRBC Dispersograma Determinado de los dispersogramas DIFF, IMI y NRBC PLT Clumps (S)? PLT PDW, PL(%), PU(%), PMFV, Determinación de valores por cómputo y comparación PLT, P-LCR, MPV, PU de los tamaños de ítems Nota 1) Los límites de los mensajes anormales que están basados en números pueden ser modificados por el usuario. Nota 2) Las reglas y las fórmulas están sujetas a cambios para mejorarlas. RL: Posición del discriminador inferior de los hematíes. RU: Posición del discriminador superior de los hematíes. PL: Posición del discriminador inferior de las plaquetas. PU: Posición del discriminador superior de las plaquetas. PL(%): Porcentaje en el cual el discriminador inferior cruza la curva de las plaquetas, asumiendo que el pico de esta curva es el 100%. PU(%): Porcentaje en el cual el discriminador superior cruza la curva de las plaquetas, asumiendo que el pico de esta curva es el 100%. Aviso MP: Aviso generado cuando el histograma de hematíes tiene múltiples picos. Aviso DW: Aviso generado cuando RDW-SD no puede ser analizado. 8

9 Pantalla de resultados y su interpretación Casos en los cuales no aparecen datos en la pantalla Los mensajes que se muestran en el cuadro son generados cuando aparecen hallazgos anormales que son interpretados por el instrumento como error de muestreo (sampling error), error de análisis (analysis error), datos fuera de rango (over range), baja confiabilidad (low reliability), etc. Categoría Imposible de analizar Fuera de rango Baja confiabilidad de datos Error de análisis En pantalla Interpretación [-----] El análisis no puede ser realizado debido a que la separación del diferencial o la autodiscriminación no es posible. [++++] El límite de los rangos mostrados ha sido excedido. [*] [----] Cuando se detecta una anormalidad en una muestra, esto indica que los datos no son confiables. (Los resultados pueden ser revisados en el banco de datos). Los datos no pueden ser obtenidos debido a una falla mecánica. En el caso de WBC<0.10 x 10 9 /L, los datos del diferencial de cinco partes no son emitidos. En el caso de WBC<1.00 x 10 9 /L, aparece un asterisco (*) a la derecha del resultado del diferencial de cinco partes, lo que indica baja confiabilidad. En el caso de mensajes interpretativos Cuando aparece un mensaje interpretativo (IP), los resultados son juzgados como no confiables debido a la anormalidad indicada por el IP. Aparece un asterisco (*) a la derecha del resultado o la marca (--), como se ve en la tabla. RBC RET# RET# RET% HCT IRF PDW MCV HGB LFR MPV MCH MCH RDW RDW MFR PLT PLCR WBC NEUT LYMPH MONO EO BASO NRBC MCHC MCHC SD CV HFR PLT-O PCT WBC Abn Scattergram 1)Lymph, Mono )Neut, Eo )Mono, Neut )Lymph, Neut )Lymph, Baso (DIFF) )Mono, Eo )Ghost, Baso (DIFF) )Ghost, Lymph )Ghost, Neut )Ghost, NLME * * * * * * * 11)BASO, NLME NRBC Abn Scatergram * NRBC present * * * * * Blasts? * * * Immature Gran? * * * Left Shift? * * Atypical Lympho? * * * Abn Lympho/L-Blasts? * * * NRBC? * * * * * RBC Lyse resistance * * * * * * RBC Abn Distribution 1)MP-Flag * )RDW-SD abnormality * -- * 3)Other * * * Dimorphic Population RET Abn Scattergram * RBC Agglutination? * Turbidity/ HGB Interference? * Iron Deficiency? PLT Abn Scattergram * * PLT Abn Distribution 1)PDW abnormality * -- 2) Other * * PLT Clumps? * * * * * * * * PLT Clumps(S)? * * * * * * * * 9

10 Casos en los cuales no aparecen los mensajes interpretativos (IP) 1. Si los parámetros requeridos para la determinación del mensaje (IP) no pueden ser calculados, aparece la señal (----) o (++++). 2. Cuando el conteo absoluto de leucocitos (WBC#) es menor que 0.50 x 10 9 /L, no se determinan mensajes de sospecha para los leucocitos. 3. Cuando el conteo absoluto de leucocitos (RBC#) es menor que 0.50 x /L, no se determinarán mensajes interpretativos de hematíes, excepto RBC Abn Distribution. 4. En las muestras medidas en modos especiales, tales como control de calidad. Otros (&) : Indica que los datos fueron corregidos debido a alguna interferencia, como hematíes nucleados (NRBC) o fragmentos de eritrocitos (RBC). WBC& : Indica que los resultados fueron corregidos por el conteo de hematíes nucleados (NRBC), detectados en el canal NRBC. LYMPH#& : Indica que el número de linfocitos (LYMPH#) fue corregido por el número de hematíes nucleados (NRBC#), detectado en el canal NRBC. LYMPH%& : Indica que el porcentaje de linfocitos (LYMPH%) fue corregido por el número de hematíes nucleados (NRBC#), detectado en el canal NRBC. PLT& : Indica que los resultados reportados son las plaquetas ópticas PLT-O, debido a que los resultados del método de impedancia no son confiables. (@) : Indica que los resultados están fuera de los límites de linearidad. 10

11 Ejemplos de leucocitosis Neutrofilia 12 Linfocitosis 13 Monocitosis 14 Eosinofilia 15 Basofilia 16 11

12 Ejemplos de leucocitosis Neutrofilia Información medida por el XE-2100 WBC * [10 9 /L] RBC [10 12 /L] HGB 64 - [g/l] HCT [%] Diferencial manual MCV [fl] MCH 31.2 [pg] Banda 6.5 [%] MCHC [g/l] Segmentados 88.0 [%] PLT 242 * [10 9 /L] Linfocitos 1.5 [%] RDW-SD [fl] Monocitos 2.0 [%] RDW-CV [%] Eosinófilos 1.0 [%] PDW 10.2 * [fl] Basófilos 1.0 [%] MPV 9.9 * [fl] Macroplaquetas (+) P-LCR 23.0 * [%] PCT 0.24 * [%] NEUT * [10 9 /L] 93.2 * [%] LYMPH 0.67 * [10 9 /L] 5.2 * [%] MONO 0.11 * [10 9 /L] 0.8 * [%] EO 0.09 * [10 9 /L] 0.7 * [%] BASO 0.01 [10 9 /L] 0.1 [%] NRBC 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [/100WBC] RET 0.60 [%] 12.3 [10 9 /L] IRF 26.6 [%] LFR 73.4 [%] MFR 17.7 [%] HFR 8.9 [%] WBC IP Messages Neutrophilia Lymphopenia RBC/RET IP Messages Anisocytosis Anemia PLT IP Messages PLT Clumps? Este es un caso de neutrofilia donde el conteo manual dio un resultado de 94.5% y el XE-2100 de 93.2%. En el dispersograma DIFF aparecen muchos puntos azules en el área de neutrófilos (indicado por ) típico de neutrofilia. Debido a que el porcentaje de bandas es de 6.5%, pero menor que 0.9 x 10 9 /L, no aparece el mensaje Left Shift?. En este caso no se notan agregados de plaquetas, pero sí plaquetas grandes. En consecuencia, aparece el mensaje PLT Clumps?. 12

13 Ejemplos de leucocitosis Linfocitosis Información medida por el XE-2100 WBC 1.87 *[10 9 /L] RBC 4.67 [10 12 /L] HGB 146 [g/l] Diferencial manual HCT 40.5 [%] MCV 86.7 [fl] Banda 0.5 [%] MCH 31.3 [pg] Segmentados 4.5 [%] MCHC 360 [g/l] Linfocitos 93.5 [%] PLT & 72 *[10 9 /L] Monocitos 1.0 [%] RDW-SD 42.6 [fl] Eosinófilos 0.0 [%] RDW-CV 13.6 [%] Basófilos 0.0 [%] PDW ---- [fl] Mielocitos 0.5 [%] MPV ---- [fl] Plaquetas gigantes (+) P-LCR ---- [%] PCT ---- [%] NEUT 0.10 *[10 9 /L] 5.3 * [%] LYMPH 1.77 *[10 9 /L] 94.7 * [%] MONO 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [%] EO 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.00 [10 9 /L] 0.0 [%] NRBC 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [/100WBC] RET 0.31 [%] 14.5 [10 9 /L] IRF 8.4 [%] LFR 91.6 [%] MFR 6.0 [%] HFR 2.4 [%] WBC IP Messages Neutropenia Leukocytopenia RBC/RET IP Messages PLT IP Messages PLT Abn Distribution PLT Clumps (S)? Este es un caso de linfocitosis donde el conteo manual dio un resultado de 93.5% y el XE-2100 de 94.7%. En el dispersograma DIFF aparecen muchos puntos rosados en el área de linfocitos (indicado por ), indicativo de linfocitosis. 13

14 Ejemplos de leucocitosis Monocitosis Información medida por el XE-2100 WBC & 6.62 [10 9 /L] Diferencial manual RBC 3.38 [10 12 /L] Banda 0.5 [%] HGB 103 [g/l] Segmentados 48.5 [%] HCT 31.0 [%] Linfocitos 23.5 [%] MCV 91.7 [fl] Monocitos 17.5 [%] MCH 30.5 [pg] Eosinófilos 0.0 [%] MCHC 332 [g/l] Basófilos 0.0 [%] PLT 349 [10 9 /L] Mielocitos 3.5 [%] RDW-SD 49.8 [fl] Metamielocitos 0.5 [%] RDW-CV 15.9 [%] PDW 10.1 [fl] Linfocitos atípicos 1.0 [%] MPV 9.6 [fl] Granulación tóxica (+) P-LCR 20.9 [%] Hematíes nucleados (+) PCT 0.34 [%] * NEUT & 3.82 [10 9 /L] 57.7 [%] LYMPH & 1.25 [10 9 /L] [%] MONO [10 9 /L] [%] EO 0.02 *[10 9 /L] 0.3 * [%] BASO 0.06 *[10 9 /L] 0.9 * [%] NRBC 0.04 [10 9 /L] 0.6 [/100WBC] RET 2.45 [%] 82.8 [10 9 /L] IRF 33.2 [%] LFR 66.8 [%] MFR 23.8 [%] HFR 9.4 [%] * Parámetros de investigación IG 0.23 [10 9 /L] 3.5 [%] WBC IP Messages Monocytosis Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. En este caso se midió una cantidad de monocitos de 17.5% por método manual y 18.7% por el XE En el dispersograma DIFF aparecen muchos puntos verdes en el área de monocitos (indicado por ), indicativo de monocitosis. Los puntos están ubicados por encima del área de neutrófilos (indicado por ) en el dispersograma DIFF. Esto sugiere la presencia de granulocitos inmaduros (IG), lo cual es corroborado por la presencia de puntos rojos en el dispersograma IMI. En la pantalla de investigación (research) del XE-2100 se obtuvo 3.5% de granulocitos inmaduros, resultado similar a los 3.5% de mielocitos y 0.5% de metamielocitos medidos por el método manual. 14

15 Ejemplos de leucocitosis Eosinofilia Información medida por el XE-2100 WBC *[10 9 /L] RBC 3.88 [10 12 /L] HGB 109 [g/l] Diferencial manual HCT 33.9 [%] Banda 0.0 [%] MCV 87.4 [fl] Segmentados 8.5 [%] MCH 28.1 [pg] Linfocitos 11.5 [%] MCHC 322 [g/l] Monocitos 1.0 [%] PLT 249 *[10 9 /L] Eosinófilos 78.5 [%] RDW-SD 51.8 [fl] Basófilos 0.5 [%] RDW-CV 16.0 [%] PDW 10.8 * [fl] Aglutinación de MPV 10.0 * [fl] plaquetas (+) P-LCR 24.5 * [%] PCT 0.25 * [%] NEUT 2.19 *[10 9 /L] 7.6 * [%] LYMPH 2.58 *[10 9 /L] 9.0 * [%] MONO 0.39 *[10 9 /L] 1.4 * [%] EO *[10 9 /L] 81.8 * [%] BASO 0.07 [10 9 /L] 0.2 [%] NRBC 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [/100WBC] RET 1.04 [%] 40.4 [10 9 /L] IRF 9.8 [%] LFR 90.2 [%] MFR 8.2 [%] HFR 1.6 [%] WBC IP Messages Eosinophilia Leukocytosis RBC/RET IP Messages PLT IP Messages PLT Clumps? En este caso se midió una cantidad de eosinófilos de 78.5% por método manual y 81.8% por el XE En el dispersograma DIFF aparecen puntos rojos en el área de eosinófilos (indicado por ), indicativo de eosinofilia. En el canal DIFF del XE-2100, la unión específica de un ácido orgánico presente en el STROMATOLYSER-4DS con los gránulos de los eosinófilos, aumenta la intensidad de dispersión de luz lateral, lo cual permite distinguir entre neutrófilos y eosinófilos. 15

16 Ejemplos de leucocitosis Basofilia Información medida por el XE-2100 WBC & [10 9 /L] Diferencial manual RBC 3.46 [10 12 /L] HGB 100 [g/l] Banda 1.0 [%] HCT 31.5 [%] Segmentados 64.0 [%] MCV 91.0 [fl] Linfocitos 13.5 [%] MCH 28.9 [pg] Monocitos 1.5 [%] MCHC 317 [g/l] Eosinófilos 3.5 [%] Basófilos 13.5 [%] PLT 9 /L] Promielocitos 0.5 [%] RDW-SD 53.9 [fl] Mielocitos 0.5 [%] RDW-CV [%] Metamielocitos 0.5 [%] PDW 10.4 [fl] Linfocitos atípicos 1.5 [%] MPV 9.7 [fl] Hematíes P-LCR 22.4 [%] nucleados 2/200 leucocitos PCT [%] NEUT & *[10 9 /L] 65.8 * [%] LYMPH & 3.27 *[10 9 /L] 15.0 * [%] MONO 0.33 *[10 9 /L] 1.5 * [%] EO 0.35 *[10 9 /L] 1.6 * [%] BASO 2.93 *[10 9 /L] 13.4 * [%] NRBC 0.22 [10 9 /L] 1.0 [/100WBC] RET 4.00 [%] [10 9 /L] IRF 21.4 [%] LFR 78.6 [%] MFR 17.2 [%] HFR 4.2 [%] * Parámetros de investigación IG 0.58 [10 9 /L] 2.7 [%] WBC IP Messages Neutrophilia Basophilia Leukocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages Thrombocytosis * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. En este caso se midió una cantidad de basófilos de 13.5% por método manual y 13.4% por el XE En el dispersograma WBC/BASO aparecen grupos de puntos negros en el área de basófilos (indicado por ), indicativo de basofilia. En el dispersograma DIFF aparece una mancha azul (indicado por ) en el área rodeada de linfocitos, neutrófilos y área de fantasmas. Esto indica el área de basófilos en el dispersograma DIFF. 16

17 Casos de celulas inmaduras de tipo mieloide Leucemia mieloide aguda (LMA)-M1(1) 18 Leucemia mieloide aguda (LMA)-M1(2) 20 Leucemia mieloide aguda (LMA)-M1(3) 22 Leucemia mieloide aguda (LMA)-M2 24 Síndrome mielodisplásico (SMD)-AREB-t 26 Mielofibrosis 28 17

18 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 Leucemia mieloide aguda (LMA)-M1(1) WBC 3.74 [10 9 /L] RBC 2.96 [10 12 /L] HGB 88 [g/l] HCT [%] MCV [fl] MCH 29.7 [pg] MCHC 348 [g/l] PLT & 35 - [10 9 /L] RDW-SD 48.0 [fl] RDW-CV 15.4 [%] PDW 14.8 [fl] MPV 11.5 [fl] P-LCR 37.0 [%] PCT [%] NEUT 0.27 * [10 9 /L] 7.2 * [%] LYMPH 2.25 * [10 9 /L] 60.2 * [%] MONO 1.22 * [10 9 /L] 32.6 * [%] EO 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 0.09 [%] 2.7 [10 9 /L] IRF 12.6 [%] LFR 87.4 [%] MFR 6.3 [%] HFR 6.3 [%] Diferencial manual Banda 0.0 [%] Segmentados 0.0 [%] Linfocitos 22.5 [%] Monocitos 0.0 [%] Eosinófilos 0.0 [%] Basófilos 0.0 [%] Blastos 77.5 [%] WBC IP Messages Neutropenia Monocytosis Blasts? Immature Gran? RBC/RET IP Messages Anemia PLT IP Messages Thrombocytopenia En el dispersograma DIFF, los puntos se extienden desde el área de linfocitos y monocitos hacia zonas de mayor fluorescencia lateral (indicado por ), lo que sugiere la aparición de blastos. En el dispersograma IMI aparecen muchos puntos rojos en la zona donde la radiofrecuencia (RF) es baja (indicado por ), lo que sugiere la presencia de blastos (77.5% medido por el método manual de conteo diferencial). 18

19 Hallazgos clínicos En marzo de 1999, un paciente visitó al médico debido a que sufría de fiebre y dolor anal. Al observarse leucocitosis y presencia de blastos, el paciente fue derivado a nuestro departamento. En el momento de la admisión, tenía un valor de proteína C reactiva (PCR) de 0.18g/L y una temperatura de C. Los resultados de rayos X y tomografía computarizada de tórax revelaron neumonía y se observó un absceso anal. En consecuencia, se inició una terapia con antibióticos. Para la leucemia se ordenó una terapia combinada de Idarubicina y Citarabina desde el 26 de mayo hasta el 15 de junio, seguido de Citarabina y Daunorubicina. No se consiguió remisión completa. Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/Monocitos Células NK CD2 6.0 CD CD CD CD3 2.7 CD CD CD CD4 1.3 CD CD CD CD5 3.6 HLA-DR 12.3 CD CD7 4.0 CD Otros CD8 2.4 CD Los estudios con marcadores de superficie celular mostraron resultados positivos para CD13 y CD33 (marcadores para series granulocítica y monocítica). Se obtuvo resultado negativo para CD36, expresado en la serie plaquetaria y monocítica. En consecuencia, este caso es considerado una leucemia mieloide. Información obtenida del análisis del frotis Tinción peroxidasa Tinción May-Giemsa (x 1000) (x 1000) Este es un caso diagnosticado como LMA-M1. En sangre periférica se encontró un 77.5% de blastos tipo I (tamaño pequeño, citoplasma angosto, cariotipo anormal). Se observó una reacción leve a la peroxidasa. 19

20 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Leucemia mieloide aguda (LMA)-M1(2) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC 9 /L] RBC [10 12 /L] Diferencial manual HGB 68 - [g/l] Banda 0.5 [%] HCT [%] MCV [fl] Segmentados 0.5 [%] MCH 35.1 [pg] Linfocitos 4.0 [%] MCHC 340 [g/l] Monocitos 0.0 [%] PLT & 2.9 *[10 9 /L] Eosinófilos 0.0 [%] RDW-SD [fl] Basófilos 0.0 [%] RDW-CV [%] Blastos 95.0 [%] PDW 14.2 * [fl] MPV 10.1 * [fl] P-LCR 29.9 * [%] PCT 0.02 * [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.01 *[10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 1.29 *[10 9 /L] 0.5 * [%] NRBC 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [/100WBC] RET 0.14 [%] 2.7 [10 9 /L] IRF 18.8 [%] LFR 81.2 [%] MFR 12.5 [%] HFR 6.3 [%] WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Basophilia Leukocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages Anemia Thrombocytopenia PLT Clumps? En el dispersograma DIFF, los puntos se extienden desde el área de linfocitos y monocitos hacia zonas de mayor fluorescencia lateral (indicado por ). El diferencial de leucocitos no puede ser determinado. Este es un caso de 95% de blastos medidos por el método manual. Los puntos rojos están ampliamente distribuidos en el dispersograma IMI, lo que sugiere la presencia de gran cantidad de blastos. 20

21 Hallazgos clínicos Un paciente con malestar general desde mayo de 1999, visitó al médico en junio de ese año. Debido a que los resultados del laboratorio indicaron leucocitos 28.5 x 10 9 /L (blastos 97.0%), hemoglobina 84g/L, plaquetas 10 x 10 9 /L y LDH 1,361 IU/L, el paciente fue derivado a nuestro departamento. Se le diagnosticó LMA-M1 por medio de una punción de médula ósea realizada el 30 de junio. Información obtenida del análisis del frotis Tinción peroxidasa La estructura nuclear es fina. Algunas células tienen uno o dos nucléolos y la mayoría de ellos son indiferenciados. El núcleo posee una hendidura en la parte central. El citoplasma se coloreó azul con ligera turbidez. El porcentaje de blastos tipo I es del 95%. La reacción a la peroxidasa fue de nula a moderada. (x 1000) Tinción May-Giemsa (x 1000) 21

22 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 Leucemia mieloide aguda (LMA)-M1(3) WBC [10 9 /L] RBC 4.16 [10 12 /L] HGB 120 [g/l] Diferencial manual HCT 36.7 [%] Banda 0.5 [%] MCV 88.2 [fl] Segmentados 2.0 [%] MCH 28.8 [pg] Linfocitos 6.5 [%] MCHC 327 [g/l] Monocitos 0.5 [%] PLT 63 [10 9 /L] Eosinófilos 0.0 [%] RDW-SD 46.3 [fl] Basófilos 0.0 [%] RDW-CV 14.4 [%] PDW 14.9 [fl] Blastos 90.0 [%] MPV 11.5 [fl] Mielocitos 0.5 [%] P-LCR 36.6 [%] PCT [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.01 *[10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.12 *[10 9 /L] 0.6 * [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 1.36 [%] 56.6 [10 9 /L] IRF 15.7 [%] LFR 84.3 [%] MFR 13.9 [%] HFR 1.8 [%] WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Leukocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift RBC/RET IP Messages PLT IP Messages En el dispersograma DIFF, los puntos se extienden desde el área de linfocitos y monocitos hacia zonas de intensa fluorescencia lateral (indicado por ). El diferencial de leucocitos no puede ser determinado. En el dispersograma IMI aparecen muchos puntos rojos en el área donde la radiofrecuencia es muy débil (indicado por ). Esto sugiere que los blastos (90% medido por el diferencial manual) están distribuidos en esa área. 22

23 Hallazgos clínicos El 6 de junio de 1999, un paciente presentó dolor en la rodilla derecha y en la articulación de la cadera, lo que le impedía caminar. El paciente visitó al ortopedista el 7 de junio y se le administraron antibióticos, pero los síntomas persistieron. El 9 de junio, visitó el Departamento de Ortopedia del Hospital T. El hemograma indicó leucocitos 25.7 x 10 9 /L (blastos 95%), hemoglobina 117g/L y plaquetas 70 x 10 9 /L, por lo que el paciente fue derivado a nuestro hospital. Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/Monocitos CD2 <1.0 CD10 <1.0 CD CD3 <1.0 CD19 <1.0 CD CD4 <1.0 CD20 <1.0 CD CD5 <1.0 HLA-DR 4.4 CD7 <1.0 CD8 <1.0 Los marcadores de superficie celular mostraron resultados positivos para CD13 y CD33. Se obtuvo resultado negativo para CD14. Debido a que los marcadores linfoides fueron negativos, el caso se consideró como una leucemia mieloide. Información obtenida del análisis del frotis Tinción peroxidasa Este es un caso de inicio de una LMA-M1. Los blastos tipo I (coloreados en gris azulado, con estructura nuclear fina y un gran citoplasma) comprenden el 90%. Se observó reacción a la peroxidasa de nula a débil. (x 1000) Tinción May-Giemsa (x 1000) 23

24 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 Leucemia mieloide aguda (LMA)-M2 WBC & [10 9 /L] RBC [10 12 /L] HGB 75 - [g/l] Diferencial manual HCT [%] MCV [fl] Banda 0.0 [%] MCH 36.9 [pg] Segmentados 1.5 [%] MCHC 333 [g/l] Linfocitos 3.5 [%] PLT & 33 *[10 9 /L] Monocitos 0.5 [%] RDW-SD [fl] Eosinófilos 0.0 [%] RDW-CV 15.2 [%] Basófilos 0.5 [%] PDW ---- [fl] Blastos 90.0 [%] MPV ---- [fl] Promielocitos 3.0 [%] P-LCR ---- [%] Mielocitos 1.0 [%] PCT ---- [%] Hematíes nucleados (+) NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.01 *[10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.04 *[10 9 /L] 0.1 * [%] NRBC 0.36 [10 9 /L] 0.7 [/100WBC] RET 0.91 [%] 18.5 [10 9 /L] IRF 36.9 [%] LFR 63.1 [%] MFR 22.5 [%] HFR 14.4 [%] WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Leukocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift RBC/RET IP Messages Macrocytosis Anemia PLT IP Messages PLT Abn Distribution Thrombocytopenia En el dispersograma DIFF, los puntos en las áreas de los linfocitos y monocitos (indicado por ) forman una agrupación amplia. El diferencial de leucocitos no puede ser determinado. En el dispersograma IMI se encuentran muchos puntos rojos (indicado por ). Esto indica que blastos, promielocitos y mielocitos (90%, 3% y 1%, respectivamente, determinados por el método manual) están distribuidos en esta área. En el dispersograma NRBC se observan puntos rosados (indicado por ), lo cual sugiere la presencia de hematíes nucleados. 24

25 Hallazgos clínicos En abril de 1999, un paciente visitó al médico porque tenía algunos nódulos linfáticos inflamados en la región inguinal. La evaluación clínica reveló un conteo de leucocitos de 3.9 x 10 9 /L (blastos 32%) hemoglobina 80g/L, plaquetas 73 x 10 9 /L y LDH 622 IU/L. Por lo tanto, el paciente fue derivado a nuestro departamento. Al paciente se le diagnosticó LMA-(M2) por medio de una punción de médula ósea efectuada el 27 de mayo. Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/Monocitos Células NK CD2 4.9 CD CD CD CD3 2.8 CD CD CD4 2.1 CD CD CD5 3.5 HLA-DR 8.2 CD7 4.3 CD8 2.5 Resultados positivos solamente para los marcadores de superficie celular CD13 y CD33. Por lo tanto, este caso fue considerado como una leucemia mieloide. Información obtenida del análisis del frotis Tinción May-Giemsa (Blastos tipo I) Tinción May-Giemsa (Blastos tipo II) Tinción peroxidasa (x 1000) (x 1000) (x 1000) En este caso se encuentran mezclados blastos tipo I (con relación núcleo/citoplasma muy alta y el citoplasma angosto), vistos en la figura de la izquierda, y blastos tipo II (con citoplasma ancho y maduro, con gránulos poco distinguibles o distinguibles), los cuales se ven en las dos primeras figuras. Este es un caso de primera aparición de LMA-M2. En la figura de la derecha vemos una reacción a la tinción o coloración con peroxidasa fuerte. 25

26 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 Síndrome mielodisplásico (SMD)-AREB-t * WBC & [10 9 /L] RBC 3.20 [10 12 /L] HGB 92 [g/l] HCT 27.5 [%] MCV [fl] MCH 28.8 [pg] MCHC 335 [g/l] PLT & 37 - [10 9 /L] RDW-SD 43.2 [fl] RDW-CV 13.5 [%] PDW [fl] MPV 11.1 [fl] P-LCR 36.2 [%] PCT [%] NEUT & 4.99 [10 9 /L] 49.5 [%] LYMPH & 2.31 * [10 9 /L] 22.9 * [%] MONO 2.26 * [10 9 /L] 22.4 * [%] EO 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.02 * [10 9 /L] 0.2 * [%] NRBC 0.12 [10 9 /L] 1.2 [/100WBC] RET 0.14 [%] 4.5 [10 9 /L] IRF 16.7 [%] LFR 83.3 [%] MFR 13.0 [%] HFR 3.7 [%] Diferencial manual Banda 2.5 [%] Segmentados 42.0 [%] Linfocitos 21.5 [%] Monocitos 6.0 [%] Eosinófilos 0.0 [%] Basófilos 5.5 [%] Blastos 17.5 [%] Mielocitos 3.5 [%] Metamielocitos 1.0 [%] Linfocitos atípicos 0.5 [%] Hematíes nucleados (+) * Parámetros de investigación IG 0.50 [10 9 /L] 5.0 [%] WBC IP Messages Monocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages Anemia PLT IP Messages Thrombocytopenia * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. En el dispersograma DIFF no puede determinarse el límite entre linfocitos y monocitos (indicado por ), lo que sugiere la presencia de blastos. Se encuentran puntos por encima de la zona de monocitos (indicado por ), lo cual sugiere la aparición de linfocitos atípicos. Este es un caso de 17.5% de blastos, 3.5% de mielocitos y 1.0% de metamielocitos medidos por el método manual. Estas células están presentes en el área de puntos rojos en el dispersograma IMI (indicado por ). 26

27 Hallazgos clínicos Un paciente presentó dolor de cuello a fines de enero de El hemograma reveló pancitopenia el 24 de febrero, mientras que el 28 de febrero la punción de médula ósea reveló la presencia de blastos, por lo que fue derivado a nuestro departamento. Debido a que una segunda punción reveló un 18.2% de blastos y 3 líneas de malformación, el paciente fue diagnosticado como una osteomielodisplasia. Se le administró en dos oportunidades Citarabina y G-CSF, pero no hubo remisión. Al paciente se le estuvo administrando Etoposida oral y se le puso bajo seguimiento como paciente ambulatorio. Información obtenida del análisis del frotis Tinción May-Giemsa (blasto) Tinción May-Giemsa (blasto) Tinción May-Giemsa (linfocito atípico) (x 1000) (x 1000) (x 1000) Este es un caso de síndrome mielodisplásico con anemia refractaria con excesivos blastos en transformación o SMD (AREB-t), en el cual se encontró un 17.5% de blastos (la relación núcleo/citoplasma es alta, el citoplasma presenta color gris azulado y se encuentran gránulos azurófilos). Se observan plaquetas y bandas gigantes. 27

28 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Mielofibrosis Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 * WBC & *[10 9 /L] RBC 3.02 [10 12 /L] HGB 84 [g/l] HCT 27.3 [%] MCV 90.4 [fl] MCH 27.8 [pg] MCHC [g/l] PLT 711 *[10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV [%] PDW 11.6 * [fl] MPV 10.5 * [fl] P-LCR 28.2 * [%] PCT 0.74 * [%] NEUT & [10 9 /L] 61.5 [%] LYMPH & 1.78 *[10 9 /L] 3.8* [%] MONO 1.05 *[10 9 /L] 2.2* [%] EO 0.07 *[10 9 /L] 0.1* [%] BASO ---- [10 9 /L] ---- [%] NRBC 1.70 *[10 9 /L] 3.6* [/100WBC] RET 5.01 [%] [10 9 /L] IRF 32.9 [%] LFR 67.1 [%] MFR 25.8 [%] HFR 7.1 [%] Diferencial manual Banda 20.0 [%] Segmentados 37.0 [%] Linfocitos 5.0 [%] Monocitos 0.0 [%] Eosinófilos 1.0 [%] Basófilos 5.0 [%] Blastos 0.5 [%] Promielocitos 0.5 [%] Mielocitos 17.5 [%] Metamielocitos 12.5 [%] Megacariocitos 1.0 [%] Hematíes nucleados 5/200 leucocitos * Parámetros de investigación IG [10 9 /L] 28.2 [%] WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Monocytosis Leukocytosis NRBC Present Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages Reticulocytosis Anisocytosis Anemia PLT IP Messages Thrombocytosis PLT Clumps? * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. En el dispersograma DIFF aparecen puntos azules distribuidos por encima del área de neutrófilos (indicado por ). Esto sugiere la presencia de granulocitos inmaduros, lo que es avalado por el hecho de que aparecen puntos rojos en el dispersograma IMI. En el dispersograma NRBC aparecen puntos rosados (indicado por ), lo que sugiere la presencia de hematíes nucleados (NRBC). Los hematíes nucleados medidos por el método manual arrojaron un resultado de 5 por cada 200 leucocitos, similar al obtenido por el XE-2100 de 3.6 hematíes nucleados por cada 100 leucocitos. 28

29 Hallazgos clínicos A un paciente se le diagnosticó una mielofibrosis en El 8 de mayo de 1998, el paciente fue admitido en el Departamento de Radiología con una hipertensión portal complicada por várices en el esófago y por várices gástricas. Se cree que la razón de las várices fue el aumento del flujo sanguíneo en la vena lienal a raíz de la esplenomegalia. El 5 de junio de 1998 se realizó una embolización de la arteria esplénica. Información obtenida del análisis del frotis Tinción May-Giemsa (blasto) Tinción May-Giemsa (micro-megacariocito) (x 1000) (x 1000) Se observó un aumento de mieloblastos y leucocitos segmentados en sangre periférica, además de un incremento de basófilos y plaquetas. Se notó la presencia de micromegacariocitos y eritroblastos. 29

30 Principio del XE-2100 (1) Citometría de flujo por láser semiconductor El XE-2100 ilumina la muestra mediante un rayo láser semiconductor y clasifica las células por medio de tres señales que estas producen: luz dispersa frontal, luz dispersa lateral y fluorescencia lateral. La intensidad de la luz dispersa frontal indica el volumen celular; la luz dispersa lateral, el contenido interno celular, como núcleo y gránulos; y la fluorescencia lateral, la cantidad de ADN y ARN presente. Tubo fotomultiplicador (fluorescencia de 660nm o más) 30

31 Casos de células inmaduras de tipo linfoide Leucemia linfocítica aguda (LLA)-L1(1) 32 Leucemia linfocítica aguda (LLA)-L1(2) 34 Leucemia linfocítica aguda (LLA)-L2(1) 36 Leucemia linfocítica aguda (LLA)-L2(2) 38 Leucemia linfocítica crónica (LLC) 40 31

32 Casos de células inmaduras de tipo linfoide Leucemia linfocítica aguda (LLA)-L1(1) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & 9 /L] RBC [10 12 /L] Diferencial manual HGB 65 - [g/l] Banda 0.5 [%] HCT [%] Segmentados 0.5 [%] MCV [fl] Linfocitos 4.5 [%] MCH 28.5 [pg] Monocitos 0.5 [%] MCHC 353 [g/l] Eosinófilos 0.0 [%] PLT & 74 *[10 9 /L] Basófilos 0.0 [%] RDW-SD 44.8 [fl] Blastos 93.0 [%] RDW-CV [%] Linfocitos atípicos 1.0 [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] Hematíes P-LCR ---- [%] nucleados 1/200 leucocitos PCT ---- [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.20 *[10 9 /L] 0.1 * [%] BASO ---- [10 9 /L] ---- [%] NRBC 0.43 *[10 9 /L] 0.2 * [/100WBC] RET 1.46 [%] 33.3 [10 9 /L] IRF 22.6 [%] LFR 77.4 [%] MFR 17.9 [%] HFR 4.7 [%] WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Leukocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages Anemia PLT Abn Distribution PLT Clumps? En el dispersograma DIFF, los puntos en las áreas de linfocitos y monocitos forman un solo grupo (indicado por ). Esto sugiere que los blastos (93% según el método manual) aparecen en esta área. En el área donde la fluorescencia lateral es más fuerte, se encuentran puntos (indicado por ) que sugieren la presencia de linfocitos atípicos. En el dispersograma IMI aparecen puntos rojos que sugieren la presencia de blastos. En este caso se encontró un eritrocito nucleado por cada 200 leucocitos, según el método manual. En el dispersograma NRBC aparecen puntos rosados (indicado por ), lo que demuestra que incluso en las muestras con un pequeño número de hematíes nucleados la detección es sensible. 32

33 Hallazgos clínicos Un paciente experimentó pérdida de apetito desde fines de julio de 1999 y desarrolló un estado febril a principios de agosto, que duró aproximadamente dos días. El paciente visitó a su médico el 15 de agosto y el examen de sangre reveló leucocitos x 10 9 /L, hemoglobina 64g/L y plaquetas 10 x 10 9 /L. Debido a estos hallazgos, el paciente fue remitido a nuestro hospital. Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/Monocitos CD2 3.2 CD CD CD3 3.0 CD CD14 <1.0 CD4 1.4 CD CD33 <1.0 CD5 3.3 CD CD7 4.4 HLA-DR 95.8 CD8 1.4 El estudio de marcadores de superficie obtuvo resultados positivos para CD10, CD19 y HLA-DR; fue negativo para CD20. Por lo tanto, este caso está considerado como una LLA célula tipo pre-b. Información obtenida del análisis del frotis Tinción peroxidasa Este es un caso de diagnóstico nuevo de LLA-L1. Los blastos constituyen un 93% de las células. Son de tamaño pequeño, con alto porcentaje de núcleo/citoplasma (N/C), poco citoplasma y de cariotipo extremadamente anormal, pues presenta lobulación y reacción peroxidasa negativa. (x 1000) Tinción May-Giemsa (x 1000) 33

34 Casos de células inmaduras de tipo linfoide Leucemia linfocítica aguda (LLA)-L1(2) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & [10 9 /L] RBC 3.62 [10 12 /L] Diferencial manual HGB 105 [g/l] Banda 0.0 [%] HCT 32.0 [%] Segmentados 1.5 [%] MCV 88.4 [fl] Linfocitos 1.5 [%] MCH 29.0 [pg] Monocitos 0.0 [%] MCHC 328 [g/l] Eosinófilos 0.5 [%] PLT 172 [10 9 /L] Basófilos 0.0 [%] RDW-SD 49.1 [fl] Blastos 96.0 [%] RDW-CV 15.2 [%] Metamielocitos 0.5 [%] PDW 12.9 [fl] MPV 11.6 [fl] Hematíes nucleados (+) P-LCR 37.1 [%] PCT 0.20 [%] NEUT 1.74 [10 9 /L] [%] LYMPH & [10 9 /L] [%] MONO 0.55 [10 9 /L] 1.9 [%] EO 0.03 [10 9 /L] 0.1 [%] BASO 0.05 [10 9 /L] 0.2 [%] NRBC 0.19 [10 9 /L] 0.7 [/100WBC] RET 1.46 [%] 52.9 [10 9 /L] IRF 12.4 [%] LFR 87.6 [%] MFR 11.1 [%] HFR 1.3 [%] WBC IP Messages Lymphocytosis Leukocytosis Abn Lympho/L-Blasts? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages En el dispersograma DIFF, el límite entre las áreas de monocitos y linfocitos es indistinguible (indicado por ). Además, en el dispersograma IMI no hay puntos rojos que denotarían la presencia de células inmaduras. Estos resultados sugieren la presencia de linfoblastos. En el dispersograma NRBC hay puntos rosados (indicado por ), que sugieren la presencia de hematíes nucleados. 34

35 Hallazgos clínicos Un paciente, con malestar general y síntomas de resfrío común, visitó al médico en junio de Se notó la presencia de leucocitosis, anemia y trombocitopenia. Debido a que en el diferencial de leucocitos se encontraron blastos, el paciente fue remitido a nuestro departamento. Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/Monocitos Células NK CD2 6.0 CD CD CD CD3 3.9 CD CD CD CD4 3.1 CD CD CD CD5 3.7 HLA-DR 97.1 CD Otros CD7 5.2 CD CD CD8 2.8 CD Los marcadores de superficie positivos fueron CD10, CD19, CD20 y HLA-DR. Por lo tanto, se considera que este caso es una leucemia linfática de células B bastante maduras. Información obtenida del análisis del frotis Tinción May-Giemsa Tinción peroxidasa (x 1000) (x 1000) A este paciente se le diagnosticó por primera vez LLA-L1. Los blastos constituyen un 96% de las células. Son de tamaño pequeño, alto porcentaje de núcleo/citoplasma (N/C) con un solo nucléolo o con nucléolos indistinguibles y peroxidasa negativa. 35

36 Casos de células inmaduras de tipo linfoide Leucemia linfocítica aguda (LLA)-L2(1) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & [10 9 /L] RBC 3.93 [10 12 /L] HGB 117 [g/l] HCT 35.8 [%] MCV 91.1 [fl] MCH 29.8 [pg] MCHC 327 [g/l] PLT 179 [10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV [%] PDW 10.6 [fl] MPV 9.9 [fl] P-LCR 23.0 [%] PCT 0.18 [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.12 *[10 9 /L] 0.2 * [%] BASO ---- [10 9 /L] ---- [%] NRBC 0.22 [10 9 /L] 0.5 [/100WBC] RET 3.43 [%] [10 9 /L] IRF 20.9 [%] LFR 79.1 [%] MFR 17.1 [%] HFR 3.8 [%] Diferencial manual Banda 4.0 [%] Segmentados 18.0 [%] Linfocitos 10.5 [%] Monocitos 2.5 [%] Eosinófilos 0.5 [%] Basófilos 0.0 [%] Blastos 61.5 [%] Mielocitos 2.5 [%] Metamielocitos 0.5 [%] Hematíes nucleados 6/200 leucocitos WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Leukocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages En el dispersograma DIFF, los puntos en las áreas que ocupan los linfocitos y monocitos forman un solo grupo (indicado por ). El diferencial de leucocitos no pudo ser determinado. En el dispersograma IMI se ven puntos rojos (indicado por ). Esto sugiere la presencia de granulocitos inmaduros en esta área, los cuales fueron observados en el diferencial manual. En este caso se encontró, por el método manual, 6 eritrocitos nucleados por cada 200 leucocitos. En el dispersograma NRBC se observan puntos rosados (indicado por ). El conteo de hematíes nucleados detectados por el XE-2100 es de 0.5 por cada 100 leucocitos. 36

37 Hallazgos clínicos Un paciente, cuyo principal síntoma era la inflamación de un ganglio linfático cervical, visitó nuestro departamento en mayo de Algunos de los resultados obtenidos fueron leucocitos 40.9 x 10 9 /L (blastos 85%), hematíes 3.71 x /L, hemoglobina 109g/L y plaquetas 159 x 10 9 /L. A este paciente se le diagnosticó LLA(L2) mediante una punción de médula ósea. Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/Monocitos Células NK CD CD CD CD CD3 7.5 CD CD CD CD4 3.3 CD CD CD5 6.7 HLA-DR 89.6 CD Otros CD CD CD CD8 2.6 Los marcadores positivos fueron CD7, CD19, HLA-DR, CD13, CD33 y CD34. Se considera una tumorigénesis a nivel muy inmaduro. Información obtenida del análisis del frotis Tinción May-Giemsa (sangre periférica) (x 1000) En la sangre periférica, los blastos constituyen el 61.5%. Estos varían de pequeños a medianos y tienen alto porcentaje núcleo/citoplasma (N/C), presentan formación de lóbulos en el núcleo y nucléolos no distinguibles. En la médula ósea se encuentran muchos blastos (grandes, alto porcentaje núcleo/citoplasma y segregación nuclear marcada). Coloración con peroxidasa negativa. Este es un caso que muestra el comienzo de una LLA-L2. Tinción peroxidasa (médula ósea) (x 1000) 37

38 Casos de células inmaduras de tipo linfoide Leucemia linfocítica aguda (LLA)-L 2(2) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & 5.12 [10 9 /L] RBC 2.79 [10 12 /L] HGB 95 [g/l] HCT 28.4 [%] MCV [fl] MCH 34.1 [pg] MCHC 335 [g/l] PLT & 42 *[10 9 /L] RDW-SD 51.0 [fl] RDW-CV [%] PDW 16.3 * [fl] MPV 13.2 * [fl] P-LCR 47.7 * [%] PCT 0.06 * [%] NEUT 2.54 *[10 9 /L] 49.6 * [%] LYMPH & 0.75 *[10 9 /L] 14.6 * [%] MONO 1.70 *[10 9 /L] 33.2 * [%] EO 0.07 [10 9 /L] 1.4 [%] BASO 0.06 [10 9 /L] [%] NRBC 0.03 [10 9 /L] 0.6 [/100WBC] RET 1.82 [%] 50.8 [10 9 /L] IRF 19.9 [%] LFR 80.1 [%] MFR 15.5 [%] HFR 4.4 [%] Diferencial manual Banda 13.0 [%] Segmentados 40.0 [%] Linfocitos 12.5 [%] Monocitos 3.0 [%] Eosinófilos 1.0 [%] Basófilos 1.0 [%] Blastos 28.5 [%] Mielocitos 1.0 [%] Hematíes nucleados (+) WBC IP Messages Lymphopenia Monocytosis Atypical Lympho? Abn Lympho/L-Blasts? RBC/RET IP Messages Anemia PLT IP Messages PLT Abn Distribution Thrombocytopenia En el dispersograma DIFF, el límite entre las áreas de monocitos y linfocitos es indistinguible (indicado por ). Esto sugiere que los blastos (observados con el método manual) están presentes en esta área. Los pocos puntos rojos presentes en el dispersograma IMI (indicado por ) sugieren la presencia de unos pocos granulocitos inmaduros. 38

39 Hallazgos clínicos Un paciente que presentaba malestar general visitó al médico en febrero de Se notó la presencia de trombocitopenia, leucocitosis y blastos, por lo que fue remitido a nuestro departamento. En respuesta a la quimioterapia se produjo una total remisión. En enero de 1997 se le realizó un trasplante alogénico de médula ósea, pero el paciente tuvo una recaída en mayo de Se obtuvo remisión otra vez en respuesta a la terapia de inducción de reremisión. Se produjo recurrencia nuevamente en mayo de Se le dio una dosis media de Citarabina que no produjo resultado. Desde el 21 de julio se le comenzó a tratar con terapia combinada de Citarabina, Enocitabina, Etoposida, Vindesina y Vinblastina. Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/Monocitos Células NK CD3 7.2 CD CD CD CD4 1.9 CD CD CD CD7 7.1 CD CD CD8 5.9 HLA-DR 58.3 CD Los datos del marcador de superficie se obtuvieron al comienzo de la enfermedad. Hubo resultados positivos para CD10, CD19 y HLA-DR, que son marcadores para las series células B. Se obtuvo un resultado negativo para CD20. Por lo tanto, este caso se considera como LLA tipo célula pre-b. Información obtenida del análisis del frotis Tinción May-Giemsa Este es un caso de recurrencia de LLA-L2. Los blastos constituyen el 28.5% (presentan alto porcentaje núcleo/citoplasma, muy poco citoplasma y algunos núcleos lobulados). Tinción May-Giemsa (x 1000) Tinción May-Giemsa (x 1000) (x 1000) 39

40 Casos de células inmaduras de tipo linfoide Leucemia linfocítica crónica (LLC) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC [10 9 /L] RBC 3.23 [10 12 /L] HGB 101 [g/l] HCT 31.5 [%] MCV 97.5 [fl] MCH 31.3 [pg] MCHC 321 [g/l] PLT 245 [10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV [%] PDW 10.4 [fl] MPV 10.2 [fl] P-LCR 25.3 [%] PCT 0.25 [%] NEUT [10 9 /L] [%] LYMPH [10 9 /L] [%] MONO 0.21 [10 9 /L] 1.8 [%] EO 0.03 [10 9 /L] 0.3 [%] BASO 0.01 [10 9 /L] 0.1 [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 1.31 [%] 42.3 [10 9 /L] IRF 19.5 [%] LFR 80.5 [%] MFR 15.0 [%] HFR 4.5 [%] Diferencial manual Banda 0.0 [%] Segmentados 10.0 [%] Linfocitos 86.5 [%] Monocitos 1.5 [%] Eosinófilos 0.0 [%] Basófilos 0.0 [%] Prolinfocitos 2.0 [%] WBC IP Messages RBC/RET IP Messages Lymphocytosis Abn Lympho/L-Blasts? PLT IP Messages En el dispersograma DIFF, el límite entre las áreas de linfocitos y monocitos es indistinguible (indicado por ). Además, ningún granulocito inmaduro aparece en el dispersograma IMI. Estos resultados sugieren la aparición de linfocitos anormales. 40

41 Hallazgos clínicos Un paciente visitó el departamento de medicina general de nuestro hospital en abril de 1996, debido a un dolor en el hipocondrio izquierdo y progresivo dolor de espalda. Aunque el conteo de leucocitos fue de 8 x 10 9 /L, se observaron en el conteo diferencial un 55% de linfocitos y 8% de linfocitos atípicos, por lo que se le realizó una punción de la médula ósea. El porcentaje de linfocitos maduros aumentó notablemente a 91.2% y el marcador de superficie CD19 también aumentó a 67.4%. Este caso fue diagnosticado como LLC. Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B CD CD CD CD CD CD CD CD8 4.2 Los marcadores de superficie son CD5-, CD10, CD19+ y CD20+. Proliferan las células maduras B. Análisis morfológicos revelaron que la mayoría de las células son linfocitos maduros. Por lo tanto, este caso se considera como LLC-B CD5 negativo. Información obtenida del análisis del frotis Tinción May-Giemsa Tinción May-Giemsa (x 1000) (x 1000) Este es un caso de LLC. Los linfocitos maduros son bastante dominantes. Se observan unos pocos prolinfocitos (alto porcentaje de núcleo/citoplasma y nucléolos distinguibles). 41

42 Principio del XE-2100 (2) Canal del diferencial leucocitario (DIFF) Un surfactante provoca lisis completa de eritrocitos y plaquetas, mientras que los leucocitos son parcialmente lisados. Un segundo reactivo tiñe los ácidos nucleicos. Este canal diferencia los leucocitos en cuatro tipos. Un surfactante en el STROMATOLYSER-4DL causa lisis o destrucción de leucocitos y plaquetas, provocando al mismo tiempo pequeñas aberturas en la membrana de los leucocitos. Un colorante polimetino en el STROMATOLYSER-4DS migra hacia el leucocito dañado y se une a los ácidos nucleicos y a los organelos citoplasmáticos. Cuando las células son expuestas a la luz del láser de 633nm, la intensidad de la fluorescencia es proporcional al contenido del ácido nucleico. Un ácido orgánico en el STROMATOLYSER-4DL se une específicamente a los gránulos de los eosinófilos, lo cual permite diferenciarlos de los neutrófilos mediante una señal más alta de luz lateral dispersa. 42

43 Cambios en los resultados durante la terapia Leucemia mieloide aguda (LMA)-M1 44 Leucemia mieloide crónica (LMC) 47 43

44 Cambios en los resultados durante la terapia Hallazgos clínicos Leucemia mieloide aguda (LMA)-M1 En marzo de 1999, un paciente visitó al médico a causa de fiebre y dolor anal. En el frotis se observó leucocitosis y blastos, por lo que el paciente fue remitido a nuestro departamento. En el momento de la admisión, el paciente tenía un valor proteína C reactiva (PCR) de 0.18g/L y una temperatura de ºC. Los resultados de las radiografías y un TC de tórax revelaron neumonía, y se observó un absceso anal. Consecuentemente, se inició una terapia con antibióticos. Para la leucemia, se le administró una terapia combinada de Idarubicina y Citarabina desde el 26 de mayo hasta el 15 de junio, seguida por Daunorubicina y Citarabina. No se obtuvo una remisión completa. (x 10 9 /L) (x 10 9 /L) Discusión (1) Junio 7, 1999 WBC [10 9 /L] RBC [10 12 /L] HGB 72 - [g/l] HCT [%] MCV 88.7 [fl] MCH 29.0 [pg] MCHC 327 [g/l] PLT & 34 - [10 9 /L] RDW-SD 50.0 [fl] RDW-CV 15.7 [%] PDW 12.5 [fl] MPV 10.2 [fl] P-LCR 29.1 [%] PCT [%] NEUT 0.02 * [10 9 /L] 3.1 * [%] LYMPH 0.58 * [10 9 /L] 90.6 * [%] MONO 0.03 * [10 9 /L] 4.7 * [%] EO 0.01 * [10 9 /L] 1.6 * [%] BASO 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [%] NRBC 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [/100WBC] RET 0.08 [%] 2.0 [10 9 /L] IRF 3.8 [%] LFR 96.2 [%] MFR 3.8 [%] HFR 0.0 [%] RBC/RET IP Messages Anemia PLT IP Messages Thrombocytopenia WBC IP Messages Neutropenia Lymphopenia Leukocytopenia Blasts? Estos datos se obtuvieron 6 días después de la administración de 150 mg de Citarabina. El conteo de leucocitos fue de 0.64 x 10 9 /L y se encontró un pequeño número de puntos en el dispersograma del XE En el dispersograma IMI se notan puntos rojos en el área donde la radiofrecuencia es más baja (indicado por ), lo que podría sugerir la presencia de células hematopoyéticas pluripotenciales. 44

45 Cambios en los resultados durante la terapia (2) Junio 14, 1999 WBC 3.74 [10 9 /L] RBC 2.96 [10 12 /L] HGB 88 [g/l] HCT [%] MCV [fl] MCH 29.7 [pg] MCHC 348 [g/l] PLT & 35 [10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV 15.4 [%] PDW 14.8 [fl] MPV 11.5 [fl] P-LCR 37.0 [%] PCT [%] NEUT 0.27 * [10 9 /L] 7.2 * [%] LYMPH 2.25 * [10 9 /L] 60.2 * [%] MONO 1.22 * [10 9 /L] 32.6 * [%] EO 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 0.09 [%] 2.7 [10 9 /L] IRF 12.6 [%] LFR 87.4 [%] MFR 6.3 [%] HFR 6.3 [%] RBC/RET IP Messages Anemia PLT IP Messages Thrombocytopenia WBC IP Messages Neutropenia Monocytosis Blasts? Immature Gran? En el dispersograma DIFF, los puntos en el área de linfocitos y en el área en la cual la fluorescencia lateral es fuerte forman un solo grupo (indicado ). Esto sugiere la presencia de blastos, lo que es respaldado por el hallazgo de puntos rojos en el área donde la radiofrecuencia es más baja (indicado por ) en el dispersograma IMI. (3) Julio 5, 1999 WBC [10 9 /L] RBC 2.90 [10 12 /L] RBC/RET IP Messages HGB 89 [g/l] HCT [%] MCV 89.3 [fl] Anemia MCH 30.7 [pg] MCHC 344 [g/l] PLT IP Messages PLT & 25 - [10 9 /L] RDW-SD 44.7 [fl] Thrombocytopenia RDW-CV 13.6 [%] PDW 13.4 [fl] MPV 10.9 [fl] WBC IP Messages P-LCR 33.0 [%] Neutropenia PCT [%] NEUT 0.04 * [10 9 Lymphopenia /L] 12.5 * [%] LYMPH 0.20 * [10 9 /L] 62.5 * [%] Leukocytopenia MONO 0.08 * [10 9 /L] 25.0 * [%] EO 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [%] NRBC 0.00 * [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 0.12 [%] 3.5 [10 9 /L] IRF 11.9 [%] LFR 88.1 [%] MFR 11.9 [%] HFR 0.0 [%] El conteo de leucocitos es de 0.32 x 10 9 /L y está en su nadir. 45

46 Cambios en los resultados durante la terapia (4) Julio 9, 1999 WBC [10 9 /L] RBC 2.54 [10 12 /L] RBC/RET IP Messages HGB 76 - [g/l] HCT [%] MCV 89.8 [fl] Anemia MCH 29.9 [pg] MCHC 333 [g/l] PLT & 27 *[10 9 /L] PLT IP Messages RDW-SD 45.8 [fl] PLT Abn Distribution RDW-CV 14.0 [%] PDW ---- [fl] Thrombocytopenia MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] PCT ---- [%] WBC IP Messages NEUT 0.09 *[10 9 /L] 6.2 * [%] LYMPH 1.20 *[10 9 /L] 81.6 * [%] Neutropenia MONO 0.18 *[10 9 /L] 12.2 * [%] Leukocytopenia EO 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [%] Blasts? NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 0.89 [%] 22.6 [10 9 Immature Gran? /L] IRF 27.3 [%] LFR 72.7 [%] MFR 21.9 [%] HFR 5.4 [%] En el dispersograma DIFF, los puntos en el área de linfocitos y en el área en que la fluorescencia lateral es fuerte forman un solo grupo (indicado por ). Esto sugiere la presencia de blastos, lo que es respaldado por el hallazgo de puntos rojos en el área donde la radiofrecuencia es más baja (indicado por ) en el dispersograma IMI. Estos datos son similares a los obtenidos el 14 de junio. (5) Julio 19, 1999 WBC [10 9 /L] RBC 3.48 [10 12 /L] HGB 106 [g/l] HCT [%] MCV 91.7 [fl] MCH 30.5 [pg] MCHC 332 [g/l] PLT & 33 - [10 9 /L] RDW-SD 43.5 [fl] RDW-CV 13.0 [%] PDW 11.1 [fl] MPV 12.7 [fl] P-LCR 41.4 [%] PCT [%] NEUT 0.01 * [10 9 /L] 1.2 * [%] LYMPH 0.80 * [10 9 /L] 98.8 * [%] MONO 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [%] EO 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [%] NRBC 0.00 * [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 0.18 [%] 6.3 [10 9 /L] IRF 5.3 [%] LFR 94.7 [%] MFR 5.3 [%] HFR 0.0 [%] RBC/RET IP Messages PLT IP Messages Thrombocytopenia WBC IP Messages Neutropenia Leukocytopenia El conteo de leucocitos disminuye nuevamente a 0.81 x 10 9 /L en respuesta a la terapia combinada de Mitixantrona, Enocitabina, Etoposida, Vindesina, Vincristina y Predonisolona iniciada el 12 de julio. 46

47 Leucemia mieloide crónica (LMC) Cambios en los resultados durante la terapia Hallazgos clínicos Una mujer de 57 años presentó distensión abdominal el 26 de abril de Al mismo tiempo, experimentaba pérdida del apetito y de peso. Ella visitó el Departamento de Medicina Interna en nuestro hospital el 31 de mayo. Los hallazgos en los exámenes incluyeron leucocitos x 10 9 /L, LDH 1,530 IU/L, los cuales eran mucho más altos que lo normal; por lo tanto, la paciente fue remitida al Departamento de Hematología. Mediante punción en la médula ósea y examen de cromosomas (ph1 positivo) se le diagnosticó LMC. (x 10 9 /L) LEUCOCITOS α LEUCOCITOS Junio Junio Junio Julio Julio Julio Julio Discusión (1) Junio 11, 1999 WBC & 9 /L] RBC/RET IP Messages RBC HGB [10 12 /L] [g/l] Anemia HCT MCV [%] [fl] * Parámetros de investigación MCH MCHC [pg] [g/l] IG [10 9 /L] 11.0 [%] PLT 353 * [10 9 /L] RDW-SD RDW-CV [fl] [%] PLT IP Messages PDW ---- [fl] PLT Abn Distribution MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] PLT Clumps? PCT ---- [%] * NEUT & [10 9 /L] 45.3 [%] LYMPH ---- [10 9 WBC IP Messages /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] WBC Abn Scattergram EO * [10 9 /L] 6.1 * [%] Eosinophilia BASO ---- [10 9 /L] ---- [%] NRBC 2.08 * [10 9 Leukocytosis /L] 1.0 * [/100WBC] RET 2.49 [%] 88.1 [10 9 /L] IRF 29.5 [%] Blasts? LFR 70.5 [%] Immature Gran? MFR 22.4 [%] Left Shift? HFR 7.1 [%] Este es un caso de LMC en el que el conteo leucocitario es más de 200 x 10 9 /L. En el dispersograma DIFF no se pueden clasificar los leucocitos. En el dispersograma IMI, numerosos puntos rojos están distribuidos a través de todo el gráfico, lo que sugiere la presencia de muchos granulocitos inmaduros. * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. 47

48 Cambios en los resultados durante la terapia (2) Junio 25, 1999 RBC/RET IP Messages WBC & 9 /L] RBC 3.79 [10 12 /L] RET Abn Scattergram HGB 100 [g/l] Anisocytosis HCT 32.3 [%] MCV [fl] MCH 26.4 [pg] * Parámetros de investigación MCHC 310 [g/l] PLT 394 * [10 9 /L] IG [10 9 /L] 8.5 [%] RDW-SD [fl] RDW-CV [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] PLT IP Messages P-LCR ---- [%] PLT Abn Distribution PCT ---- [%] * NEUT & [10 9 /L] 51.0 [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] PLT Clumps? MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO ---- [10 9 /L] ---- [%] WBC IP Messages BASO ---- [10 9 /L] ---- [%] NRBC 1.29 * [10 9 /L] 1.1 * [/100WBC] WBC Abn Scattergram RET 2.69 * [%] * [10 9 /L] Leukocytosis IRF 33.5 * [%] LFR 66.5 * [%] Blasts? MFR 24.8 * [%] Immature Gran? HFR 8.7 * [%] Left Shift? El conteo de leucocitos disminuye a la mitad de los datos medidos el 11 de junio como respuesta a la terapia con Hidroxi Carbamida, Ranimustine y otras. Pero aún es más de 100 x 10 9 /L. * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. (3) Julio 5, 1999 RBC/RET IP Messages WBC & * [10 9 /L] RBC 3.97 [10 12 /L] HGB HCT [g/l] [%] * Parámetros de investigación MCV MCH [fl] [pg] IG 2.59 [10 9 /L] 14.5 [%] MCHC [g/l] PLT & 215 * [10 9 /L] RDW-SD RDW-CV [fl] [%] PLT IP Messages PDW MPV [fl] [fl] PLT Abn Distribution P-LCR ---- [%] PLT Clumps? PCT ---- [%] * NEUT & 8.54 [10 9 /L] 47.8 [%] LYMPH & 2.92 * [10 9 /L] 16.3 * [%] WBC IP Messages MONO 3.12 * [10 9 /L] 17.5 * [%] EO 0.05 * [10 9 Neutrophilia /L] 0.3 * [%] BASO 0.65 * [10 9 Monocytosis /L] 3.6 * [%] NRBC 0.21 * [10 9 /L] 1.1 * [/100WBC] Basophilia RET IRF [%] [%] 60.3 [10 9 /L] Blasts? LFR 71.9 [%] Immature Gran? MFR 23.1 [%] Left Shift? HFR 5.0 [%] El conteo de leucocitos ha disminuido más y el diferencial puede ser determinado en el dispersograma DIFF del XE * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. 48

49 Cambios en los resultados durante la terapia (4) Julio 19, 1999 WBC & *[10 9 /L] RBC 3.97 [10 12 /L] HGB 106 [g/l] HCT 34.2 [%] MCV 86.1 [fl] MCH 26.7 [pg] MCHC 310 [g/l] PLT 445 *[10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV [%] PDW 17.8 * [fl] MPV 13.1 * [fl] P-LCR 47.4 * [%] PCT 0.58 * [%] * NEUT & LYMPH & [10 9 /L] *[10 9 /L] 68.5 [%] 4.1 * [%] MONO 3.18 *[10 9 /L] 7.0 * [%] EO 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [%] BASO ---- [10 9 /L] ---- [%] NRBC 0.44 *[10 9 /L] 1.0 * [/100WBC] RET 3.05 [%] [10 9 /L] IRF 23.1 [%] LFR 76.9 [%] MFR 17.5 [%] HFR 5.6 [%] RBC/RET IP Messages Anisocytosis * Parámetros de investigación IG 6.63 [10 9 /L] 14.6 [%] PLT IP Messages PLT Abn Distribution PLT Clumps? WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Monocytosis Leukocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift? El conteo de leucocitos ha aumentado nuevamente. Los puntos rojos en el dispersograma IMI han aumentado también. Estos resultados sugieren una recurrencia. * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. * (5) Julio 26, 1999 WBC RBC [10 9 /L] [10 12 /L] HGB 107 [g/l] HCT 34.4 [%] MCV 86.4 [fl] MCH 26.9 [pg] MCHC 311 [g/l] PLT & 235 [10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV [%] PDW 16.2 [fl] MPV 12.1 [fl] P-LCR 41.2 [%] PCT 0.31 [%] NEUT & 6.14 [10 9 /L] 66.9 [%] LYMPH 1.30 * [10 9 /L] 14.2 * [%] MONO 0.60 * [10 9 /L] 6.5 * [%] EO 0.02 * [10 9 /L] 0.2 * [%] BASO 0.36 * [10 9 /L] 3.9 * [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 0.94 [%] 37.4 [10 9 /L] IRF 16.9 [%] LFR 83.1 [%] MFR 15.0 [%] HFR 1.9 [%] El conteo de leucocitos finalmente ha descendido a menos de 10 x 10 9 /L y el diferencial de leucocitos puede ser determinado por el XE En el dispersograma DIFF, los puntos azules se extienden desde el área de los neutrófilos hasta el área por encima de éstos (indicado por ), lo que sugiere la aparición de granulocitos inmaduros. * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. RBC/RET IP Messages Anisocytosis * Parámetros de investigación IG 0.76 [10 9 /L] 8.3 [%] PLT IP Messages WBC IP Messages Basophilia Blasts? Immature Gran? Left Shift? 49

50 PRINCIPIO DEL XE-2100 (3) Canal de leucocitos y basófilos (WBC/BASO) En este canal, el XE-2100 usa señales frontales y laterales de luz dispersa. Un reactivo acídico produce lisis y reducción del tamaño de los hematíes y las plaquetas. Este reactivo reduce también los leucocitos, dejando solamente los núcleos. Los basófilos permanecen casi en su estado original. El conteo total de leucocitos y de basófilos son obtenidos a través de este canal. El surfactante STROMATOLYSER-FB produce, por su acción lisante, fantasmas de hematíes y de plaquetas reduciendo los leucocitos sólo a sus núcleos, con excepción de los basófilos. Las diferencias volumétricas resultantes entre los basófilos y otras células son analizadas usando la información de señales de luz dispersa lateral y luz dispersa frontal. La intensidad de la luz dispersa frontal indica el volumen de las células, mientras que la luz dispersa lateral representa la complejidad de los residuos celulares. Los basófilos aparecen como una población separada. Los núcleos también están separados de los fantasmas. El conteo total de leucocitos es la suma de los núcleos y basófilos. Los hematíes nucleados están incluidos en este conteo. 50

51 Casos de células de apariencia específica Caso de linfocitos de apariencia atípica 52 Caso de hematíes de apariencia falciforme 54 Muestra infantil

52 Casos de células de apariencia específica Caso de linfocitos de apariencia atípica Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC *[10 9 /L] RBC [10 12 /L] Diferencial manual HGB 66 - [g/l] Banda 9.0 [%] HCT [%] Segmentados 58.5 [%] MCV 86.9 [fl] MCH 26.9 [pg] Linfocitos 15.0 [%] MCHC 310 [g/l] Monocitos 6.0 [%] PLT 176 *[10 9 /L] Eosinófilos 5.0 [%] RDW-SD 45.9 [fl] Basófilos 0.0 [%] RDW-CV 14.6 [%] Mielocitos 0.5 [%] PDW 23.1 * [fl] Linfocitos atípicos 6.0 [%] MPV 13.4 * [fl] Formaciones rouleaux P-LCR 49.3 * [%] PCT 0.24 * [%] NEUT 5.35 *[10 9 /L] 45.8 * [%] LYMPH 4.29 *[10 9 /L] 36.6 * [%] MONO 1.28 *[10 9 /L] 10.9 * [%] EO 0.45 *[10 9 /L] 3.8 * [%] BASO [10 9 /L] [%] NRBC 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [/100WBC] RET 0.36 [%] 8.8 [10 9 /L] IRF 15.7 [%] LFR 84.3 [%] MFR 11.8 [%] HFR 3.9 [%] WBC IP Messages Lymphocytosis Monocytosis Basophilia Atypical Lympho? Abn Lympho/L-Blasts? RBC/RET IP Messages Anemia PLT IP Messages PTL Abn Distribution PLT Clumps(S)? En el dispersograma DIFF aparecen puntos rosados en el área donde la fluorescencia es fuerte (indicado por ), lo que sugiere la presencia de linfocitos atípicos. Se observaron linfocitos atípicos (6%) en el frotis, lo que concuerda con los mensajes de sospecha generados por el XE

53 Hallazgos clínicos Un paciente que tenía un poco de fiebre y crecimiento sistemático de los nódulos linfáticos, visitó al médico en octubre de Debido a que el conteo de linfocitos, la proteína total y la γ globulina habían aumentado, el paciente fue remitido a nuestro departamento. El resultado de los exámenes reveló leucocitos 12.6 x 10 9 /L (linfocitos atípicos 10%), hematíes 3.70 x10 12 /L, hemoglobina 106g/L, plaquetas177 x 10 9 /L, proteína total 96g/L y porcentaje de γ globulina del 48.9%. A este paciente se le diagnosticó un linfoma célula T angioinmunoblástico mediante una biopsia en el nódulo linfático derecho, la que se efectuó el 4 de noviembre de ese año. Información obtenida del análisis del frotis Tinción May-Giemsa Tinción May-Giemsa (x 1000) (x 1000) Se encontraron linfocitos atípicos de Downey tipo I (con citoplasma teñido de azul oscuro). La estructura nuclear es áspera y algunos linfocitos atípicos presentan lobulación nuclear. Los hematíes se presentan en forma de rollos. 53

54 Casos de células de apariencia específica Caso de hematíes de apariencia falciforme Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 * WBC & [10 9 /L] RBC [10 12 /L] HGB 59 - [g/l] HCT [%] MCV [fl] MCH 35.1 [pg] MCHC 351 [g/l] PLT 373 [10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV [%] PDW 10.9 [fl] MPV 9.9 [fl] P-LCR 23.7 [%] PCT [%] NEUT & 7.83 *[10 9 /L] 61.3 * [%] LYMPH & 2.69 *[10 9 /L] 21.1 * [%] MONO 1.52 *[10 9 /L] 11.9 * [%] EO 0.48 *[10 9 /L] 3.8 * [%] BASO 0.10 *[10 9 /L] 0.8 * [%] NRBC 1.17 [10 9 /L] 9.1 [/100WBC] RET 19.19@ [%] *[10 9 /L] IRF 28.2 * [%] LFR 71.8 * [%] MFR 21.0 * [%] HFR 7.2 * [%] Diferencial manual Banda 6.0 [%] Segmentados 30.0 [%] Linfocitos 50.5 [%] Monocitos 1.0 [%] Eosinófilos 11.5 [%] Basófilos 1.0 [%] Hematíes nucleados 20/200 WBC Poiquilocitos (+) * Parámetros de investigación IG 0.14* [10 9 /L] 1.1* [%] WBC IP Messages Monocytosis NRBC Present Immature Gran? RBC/RET IP Messages RET Abn Scattergram Reticulocytosis Anemia PLT IP Messages * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. En el dispersograma NRBC aparecen puntos rosados (indicado por ), lo que sugiere la presencia de hematíes nucleados. El resultado obtenido por el XE-2100 es 9.1 hematíes nucleados por cada 100 leucocitos, similar a los datos obtenidos con el método manual. En el dispersograma RET, puntos en el área de fluorescencia baja y hematíes maduros forman un grupo redondo (indicado por ). Este tipo de dispersograma se presenta muy pocas veces. 54

55 Hallazgos clínicos A una paciente se le diagnosticó una enfermedad de células falciformes cuando tenía tres años de edad. En su segundo parto fue internada en el Departamento de Obstetricia y Ginecología de nuestro hospital. Los exámenes del 26 de octubre de 1999 revelaron leucocitos 11.1 x 10 9 /L, hematíes 1.78 x /L, hemoglobina 86g/L, Hematocrito 18.6%, plaquetas 379 x 10 9 /L, T-Bil 27 µ mol/l, LDH 1,197 IU/L, AST 75 IU/L y ALT 24 IU/L. Información obtenida del análisis del frotis Fotografía de microscopía electrónica Este es un caso de enfermedad de células falciformes. Se encontraron numerosos eritroblastos y poiquilocitos con forma falciforme, los que se confirmaron como células falciformes en la prueba para la determinación de anemia falciforme. (x 2000) Tinción May-Giemsa Fotografía de microscopía de fase de contraste (Análisis de anemia falciforme) (x 1000) (x 400) 55

56 Casos de células de apariencia específica Muestra infantil Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 Diferencial manual WBC & 9.20 [10 9 /L] Banda 0.5 [%] RBC 4.51 *[10 12 /L] Segmentados 46.5 [%] HGB 164 [g/l] Linfocitos 40.5 [%] HCT 48.8 * [%] Monocitos 7.0 [%] MCV * [fl] Eosinófilos 1.0 [%] MCH 36.4 * [pg] MCHC 336 * [g/l] Basófilos 3.0 [%] PLT 349 [10 9 Mielocitos 0.5 [%] /L] RDW-SD 66.8 * [fl] Linfocitos atípicos 1.0 [%] RDW-CV 17.0 * [%] Hematíes nucleados 4/200 WBC PDW 11.2 [fl] Macroplaquetas (+) MPV 10.5 [fl] Cuerpos de Howell-Jolly (+) P-LCR 27.6 [%] Punteado basófilo (+) PCT [%] NEUT 5.29 *[10 9 /L] 57.4 * [%] LYMPH & 3.18 *[10 9 /L] 34.6 * [%] MONO 0.57 *[10 9 /L] 6.2 * [%] EO 0.09 *[10 9 /L] 1.0 * [%] BASO 0.07 *[10 9 /L] 0.8 * [%] NRBC 0.34 [10 9 /L] 3.7 [/100WBC] RET 3.47 [%] *[10 9 /L] IRF 32.6 [%] LFR 67.4 [%] MFR 23.3 [%] HFR 9.3 [%] WBC IP Messages NRBC Present Immature Gran? RBC/RET IP Messages RBC Abn Distribution Anisocytosis PLT IP Messages En el dispersograma DIFF, todas las células se agrupan generalmente en la región donde la sensibilidad a la fluorescencia es menor. Este patrón se considera característico de la sangre de los niños. Los puntos rojos difusos en el dispersograma IMI (indicado por ) sugiere la presencia de granulocitos inmaduros. Se considera que los mielocitos (0.5% según el método manual) están distribuidos en esta área. Este caso presenta 4 hematíes nucleados por cada 200 leucocitos, según el método manual. En el dispersograma NRBC, los puntos rosados (indicado por ) sugieren la aparición de hematíes nucleados. 56

57 Información obtenida del análisis del frotis Tinción May-Giemsa Tinción May-Giemsa Esta es una muestra de un niño en la que no se observó anormalidad, excepto que hay eritroblastos en la sangre periférica. (x 1000) (x 1000) 57

58 Casos de células de apariencia específica Linfoma blástico NK Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 * WBC [10 9 /L] RBC 3.82 [10 12 /L] HGB 112 [g/l] HCT 33.7 [%] MCV 88.2 [fl] MCH 29.3 [pg] MCHC 332 [g/l] PLT 129 [10 9 /L] RDW-SD 46.7 [fl] RDW-CV 15.6 [%] PDW 11.8 [fl] MPV 11.1 [fl] P-LCR 30.7 [%] PCT [%] NEUT & 41.3 [10 9 /L] 31.8 [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 1.20 *[10 9 /L] 9.2 * [%] BASO 0.08 *[10 9 /L] 0.6 * [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 1.94 [%] 74.1 [10 9 /L] IRF 24.1 [%] LFR 75.9 [%] MFR 18.3 [%] HFR 5.8 [%] Diferencial manual Banda 12.0 [%] Segmentados 21.5 [%] Linfocitos 19.5 [%] Monocitos 1.5 [%] Eosinófilos 13.0 [%] Basófilos 1.0 [%] Mielocitos 2.5 [%] Metamielocitos 0.5 [%] Linfocitos atípicos 28.5 [%] * Parámetros de investigación IG 0.28 [10 9 /L] 2.2 [%] WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Eosinophilia Immature Gran? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. En el dispersograma DIFF, hay puntos que se extienden incluso por encima del área de neutrófilos (indicado por ). Esto sugiere la presencia de granulocitos inmaduros. Los datos obtenidos según el método de conteo manual (2.5% de mielocitos + 0.5% de metamielocitos) son similares a los datos de 2.2% de granulocitos inmaduros obtenidos en la pantalla de investigación del XE Linfocitos atípicos (28.5% según el método de conteo manual) se ubican entre las áreas de linfocitos y monocitos (indicado por ). Por lo tanto, estos dos tipos de células no pueden ser clasificadas. En el dispersograma IMI aparecen puntos rojos (indicado por ). Esto indica la presencia de mielocitos y metamielocitos (observados en el método manual) en esta área. 58

59 Hallazgos clínicos Un paciente visitó el Departamento de Dermatología de nuestro hospital a causa de un tumor sistémico múltiple (diámetro de 1-5 cm) en abril de A este paciente se le diagnosticó un linfoma maligno mediante una biopsia del tumor. Los resultados del examen realizado el 10 de junio revelaron leucocitos 11.2 x 10 9 /L (linfoma atípico 23%), LDH 691 IU/L y sil 2R U/L. El análisis del frotis de sangre periférica mostró que este caso era un linfoma blástico de linfocitos tipo NK. Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/Monocitos Células NK CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD (11.3) HLA-DR 69.4 CD CD Otros CD CD Los números en paréntesis muestran un porcentaje positivo con sensibilidad de fluorescencia normal. Se observan dos picos para CD4. Por la información del marcador de datos de superficie, se considera que un 30% de linfocitos normales están incluidos en los portales. Se observa la presencia de linfocitos en los cuales se expresan marcadores de superficie anormal: CD2+, scd3-, CD4+dull (es imposible la contaminación de monocitos porque CD14 es negativo), CD5-, CD7-, CD8-, CD16-, CD19-, CD20-, CD25-, CD56+ y HLA-DR+. Información obtenida del análisis del frotis Tinción May-Giemsa (x 1000) Tinción May-Giemsa Se observan linfocitos atípicos grandes cuya estructura nuclear es áspera. También se observan células (con baja lobulización nuclear) que son clasificadas como linfocitos anormales. (x 1000) 59