RESISTENCIA EN HIV. Bioq. María Eugenia Ochiuzzi Bioq. Ariel Gianecini Htal. Francisco J. Muñiz
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- Valentín Córdoba Villanueva
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1 RESISTENCIA EN HIV Bioq. María Eugenia Ochiuzzi Bioq. Ariel Gianecini Htal. Francisco J. Muñiz
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3 . Linfocitos T. Células Dendríticas. Linfocitos B. Stem Cells. Macrófagos. Células NK
4
5 CCR5 CXCR 4 VIRUS R5 Infecta Macrófagos Expresión en etapas tempranas VIRUS X4 Infecta Linfocitos Expresión en etapas tardías
6 C5/X4
7 Virus/día 6 10 Mutaciones/día Cuasiespecies Fitness Viral
8 Viral Sex
9 Cuasiespecies Viral Sex SUBTIPOS VIRALES Formas Recombinantes Circulantes
10 B/F
11 ANTIRETROVIRALES INHIBIDORES DE INTEGRASA INHIBIDORES DE TR INHIBIDORES DE P INHIBIDORES DE FUSIÓN/ENTRADA
12 NRTI (Inhibidores nucleosídicos/ nucleotídicos de TR) Nucleosídicos dicos: -Análogos de timidina: Zidovudina (AZT ) Stavudina (D4T) -No análogos de timidina: Lamivudina (3TC) Didanosina (DDI) Zalcitabina (DDC) Abacavir (ABC) Emtricitabina (FTC) Nucleotídicos dicos: Tenofovir (TFV)
13 NNRTI (Inhibidores no nucleosídicos de TR) Nevirapina Efavirenz Delavirdina Etravirina (NVP) (EFV) (DLV ) (TMC( 125)
14 INHIBIDORES DE PROTEASA Saquinavir (SQV) Ritonavir (RTV) Indinavir (IDV) Nelfinavir (NFV) Amprenavir (APV) Fosamprenavir (APV) Lopinavir (LPV) Atazanavir (ATV) Tipranavir (TPV) Darunavir (TMC 114)
15 INHIBIDORES DE ENTRADA -Inhibidores de attachment -Antagonistas de los co-receptores -Inhibidores de fusión
16 Inhibidores de fusión Enfuvirtide (T-20) A membrana viral gp41 gp120 Inhibidores de attachment BMS-488,043, TNX-355
17 Inhibidores de CCR5/CXCR4 Inhibidores de CXCR4: AMD Inhibidores de CCR5: AK602, PRO 140, SCH-C, C, SCH-D, TAK-652, UK
18 INHIBIDORES DE LA INTEGRASA INHIBIDORES DE MADURACIÓN
19 Terapia ARV: - cl clínica del paciente - CD4 -carga viral * Indicado : CD4 300 cél/ c l/µl l y/o paciente sintomático tico
20 HAART: : TERAPIA COMBINADA ALTAMENTE ACTIVA NRTIs NNRTI/IP TDF + 3TC lovinapir/ ritonavir TDF + FTC fosamprenavir/ ritonavir ABC + 3TC efavirenz nevirapine AZT + 3TC saquinavir/ ritonavir AZT + FTC
21 Efectos adversos:.toxicidad mitocondrial.alteraciones GI.pancreatitis.toxicidad medular.alteraciones renales.hepatotoxicidad..alteraciones del SNC.polineuropat. polineuropatía periférica rica.alteraciones neurológicas.acidosis láctica l.alteraciones hematológicas.reacciones de alergia.necrosis avascular.osteopenia,, osteoporosis.dislipemia.hiperglucemia.lipodistrofia
22 Efectos adversos:.toxicidad mitocondrial.alteraciones GI.pancreatitis.toxicidad medular.alteraciones renales.hepatotoxicidad.alteraciones del SNC.polineuropat. polineuropatía periférica rica.alteraciones neurológicas.acidosis láctica l.alteraciones hematológicas.reacciones de alergia.necrosis avascular.osteopenia,, osteoporosis.dislipemia.hiperglucemia.lipodistrofia
23 Efectos adversos:.toxicidad mitocondrial.alteraciones GI.pancreatitis.toxicidad medular.alteraciones renales.hepatotoxicidad.alteraciones del SNC.polineuropat. polineuropatía periférica rica.alteraciones neurológicas.acidosis láctical.alteraciones hematológicas.reacciones de alergia.necrosis avascular.osteopenia,, osteoporosis.dislipemia.hiperglucemia.lipodistrofia
24 Efectos adversos:.toxicidad mitocondrial.alteraciones GI.pancreatitis.toxicidad medular.alteraciones renales.hepatotoxicidad..alteraciones del SNC.polineuropat. polineuropatía periférica rica.alteraciones neurológicas.acidosis láctica l.alteraciones hematológicas.reacciones de alergia.necrosis avascular.osteopenia,, osteoporosis.dislipemia.hiperglucemia.lipodistrofia
25 Fracaso terapéutico Variantes Resistentes
26 cuasiespecies virales originales cuasiespecies virales nuevas niveles de RNA viral clon resistente presión de selección ejercida por drogas clones resistentes tiempo
27 RESISTENCIA PRIMARIA *10-20%: Europa y USA * : 2004: NRTI: 7.1% NNRTI: 9.1% IP: 3.2% *7.7% :Argentina
28 Infección Inicio de tto tiempo Resistente Resistente Replicación continua Mutaciones primarias Mutaciones secundarias Sensible
29 Resistencia a NRTI
30 Resistencia a NRTI
31 Mutaciones - NRTI
32 Resistencia a NNRTI
33 Mutaciones - NNRTI
34 Resistencia a IP
35 Resistencia a Inhibidores de Entrada
36 Fenómenos asociados a Resistencia: -R R cruzada -Reversión n de la R -R R múltiple: m MDR
37 Fenómenos asociados a Resistencia: -R R cruzada -Reversión n de la R -R R múltiple: m MDR
38 Fenómenos asociados a Resistencia: -R R cruzada -Reversión n de la R -R R múltiple: m MDR
39 Fenómenos asociados a la Resistencia: -R R cruzada -Reversión n de la R -R R múltiple: m MDR
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41 ENSAYOS DE RESISTENCIA ->10% de R primaria: realizar estudio de Resistencia -pacientes que no responden al tratamiento. tiempo posible desde diagnóstico de HIV. > 1000 copias/ml.no detectan especies minoritarias o presentes en SNC, tracto genital.no interrumpir el tratamiento ENSAYOS GENOTÍPICOS Y FENOTÍPICOS
42 GENOTIPO -Secuenciación n directa: - Método de Sanger (ddntp) - Gene Chip -Mutaciones puntuales: - PCR alelo específica -LIPA
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44 Análisis de secuencias -HIV Genotyping System (Applied Biosystem) -TrueGene (Visible Genetics)
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47 Gene Chip -HIV PRT Gene Chip Assay (Affymetrix)
48 * PCR alelo específico *LIPA
49 INCONVENIENTES -diversidad genética del HIV1 -Interpretación n del genotipo
50 Métodos Fenotípicos IC 50 IC 90
51 Métodos Fenotípicos - Ensayos Convencionales. Ensayo de Reducción de Placa o Foco Sincicial. Inhibición de la Producción de Antígeno p24 - Ensayos Virus Recombinantes
52 Ensayo Convencional CMSP pac CMSP. Requieren CMSP donantes sanos. Seleccionan subpoblaciones virales. Muy laboriosos y de alto riesgo Stock Viral Cultivo Celular Células Mononucleares Sangre Periférica P24/TR
53 RT-PCR Plasma/Suero CMSP TR PR Línea Celular Vector Viral
54 Cut-Off Cut-Off Cut-Off FC = Cut- Off Respuesta Máxima FC > Cut- Off Respuesta Mínima
55 Fenotipo Virtual Secuencia de nucleótidos de la muestra (ensayo genotípico de resistencia) BASE DE DATOS - Virco Genotipo Fenotipo RLM cada droga ARV RWFs Factor Ponderado de Resistencia FC MARs Mutaciones Asociadas a Resistencia
56 Propiedades Determinación de sensibilidad Interpretación de Resultados Detección precoz de resist. Información genética complementaria Efecto de combinación de diferentes mutaciones Sensibilidad para combianciones de drogas Detección de cuasiespecies Complejidad M. Genotípicos M. Fenotípicos Indirecta Directa Compleja Sencilla SI NO SI NO NO SI NO SI No variantes < 20% No variantes < 20% Sencillas Compleja
57 Utilidad Genotipo y Fenotipo Información Fenotípica Fracaso Terapéutico Información Genotípica Complejidad Mutacional / Experiencia Tratamiento
58 Conclusiones Mejorar la potencia y farmacocinética de las drogas Esquemas de dosificación mas simples Desarrollo de nuevas drogas de mayor potencia y menor toxicidad Nuevas técnicas de menor complejidad y mayor facilidad de interpretación Detección precoz de mutantes resistentes emergentes
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