1.- Producción de Sulfidoleucotrienos por leucocitos. 2.- Cuantificación de la Proteína Catiónica de Eosinófilo (ECP) 3. Cuantificación de Triptasa

Tamaño: px

Comenzar la demostración a partir de la página:

Download "1.- Producción de Sulfidoleucotrienos por leucocitos. 2.- Cuantificación de la Proteína Catiónica de Eosinófilo (ECP) 3. Cuantificación de Triptasa"

Arturo Páez Bustos
hace 6 años
Vistas:

1 TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS IN VITRO (Producción de sulfidoleucotrienos (CAST), Cuantificación de ECP y de Triptasa) Isabel M. Flores Martín R3 ALERGOLOGÍA. HUVA. Murcia (España) 1.- Producción de Sulfidoleucotrienos por leucocitos 2.- Cuantificación de la Proteína Catiónica de Eosinófilo (ECP) 3. Cuantificación de Triptasa Dra.Isabel Flores 1

SULFIDOLEUCOTRIENOS: concepto Potente actividad broncoconstrictora, aumentan permeabilidad vascular aumentan la

2 SULFIDOLEUCOTRIENOS: concepto slt, LTC4 y sus metabolitos LTD4 y LTE4 son mediadores inflamatorios derivados del metabolismo oxidativo del ácido araquidónico por la vía de la 5-lipooxigenasa. SULFIDOLEUCOTRIENOS: concepto Potente actividad broncoconstrictora, aumentan permeabilidad vascular aumentan la producción de moco. El CAST mide la cantidad de slt liberados por leucocitos después de la activación con alergenos en presencia de IL-3 Dra.Isabel Flores 2

3 CAST-ELISA: Celullar Antigen Stimulation Test Se estimulan en presencia de IL-3 y tampón de estimulación ALERGENO CONTROL+ CONTROL Ac monoclonal l contra liberación espontánea R alta afinidad de IgE slit ( FCeRIa) Se recoge sobrenadante y se analiza con ELISA Se incuba 40 mins 37ºC CAST-ELISA: Celullar Antigen Stimulation Test POSITIVO: slt >200 pg/ml que control NEGATIVO Medicamentos: slt >100pg/mL Factores que afectan a los controles: POSITIVO: 5% pacientes son no respondedores NEGATIVO: Exacerbaciones agudas de DA (liberación espontánea slt) Extractos alergénicos controlados y sin conservantes (evitar contaminaciones toxinas) Dra.Isabel Flores 3

CAST-ELISA: Celullar Antigen Stimulation Test Concentración del alergeno AEROALERGENOS y ALIMENTOS- Dosis única 10-20 ng VENENOS y MEDICAMENTOS.

4 CAST-ELISA: Celullar Antigen Stimulation Test Concentración del alergeno AEROALERGENOS y ALIMENTOS- Dosis única ng VENENOS y MEDICAMENTOS.- Dos concentraciones (1:5 ó 1:10) Fármacos que afectan al test: Glucocorticoides orales (suspender 8 días), Antihistamínicos (3 días), Antagonistas de LEUCOTRIENOS Tratamiento anti-ige CAST-ELISA: INDICACIONES De Weck AL, Sanz ML. Cellular Allergen Stimulation Test (CAST) 2003, a review. J Invest Allergol Immunol 2004; 14: Enfermedades en las que otros ensayos in vivo e in vitro no son fiables; alergia alimentaria, a medicamentos y reacciones hipers no IgE mediada. Alergia alimentaria: S70-81%; E88-100% Alergia látex: combinación CAST ytab S93% ye 100% Medicamentos: a. Betalactámicos: S47.7% E83.3% b. Metamizol: TAB y CAST S76% E76.9% Dra.Isabel Flores 4

CONCLUSIONES CAST-ELISA PROTEÍNA CATIÓNICA DEL EOSINÓFILO 16-22 kda. Actividad biológica más relevante: Potencia citotóxica Producida y almacenada en Eo.

5 CONCLUSIONES CAST-ELISA PROTEÍNA CATIÓNICA DEL EOSINÓFILO kda. Actividad biológica más relevante: Potencia citotóxica Producida y almacenada en Eo. Se libera tras estimulación con secretagogos como las Igs o los componentes del complemento Medible en la mayoría de fluidos biológicos. MARCADOR DE ACTIVIDAD Y RECAMBIO DEL EOSINÓFILO. Dra.Isabel Flores 5

ECP SÉRICA Refleja la degranulación de los eosinófilos circulantes durante la retracción del

Es un proceso activo dependiente de tiempo y temperatura Supone una medida indirecta de la

pueden alterar los resultados. Estricto protocolo.

6 ECP SÉRICA Refleja la degranulación de los eosinófilos circulantes durante la retracción del coágulo tras la extracción sanguínea. Es un proceso activo dependiente de tiempo y temperatura Supone una medida indirecta de la activación de los Eo circulantes, por lo que las condiciones de extracción y procesamiento pueden alterar los resultados. Estricto protocolo. ECP SÉRICA: metodología Cuantificación: radioinmunoanálisis (Pharmacia ECP RIA) enzimoinmunoanálisis i i (PCE IMMULITE y UNICAP ECP) Los valores normales ECP 7.1 microg/ml Dra.Isabel Flores 6

ECP SÉRICA: aplicaciones Puede ser útil en el DIAGNÓSTICO DEL ASMA, algunos estudios encuentran correlación con la gravedad clínica y funcional. Niimi A, Amitani R, Suziki et al.

Clin Exp Allergy 1998; 28:233-240240 Monitorizar el efecto de diferentes tratamientos para el asma Se han documentado incrementos en relación con otras condiciones i que cursan con eosinofilia, como

7 ECP SÉRICA: aplicaciones Puede ser útil en el DIAGNÓSTICO DEL ASMA, algunos estudios encuentran correlación con la gravedad clínica y funcional. Niimi A, Amitani R, Suziki et al. Serum eosinophilic cationic protein as a marker of eosinophilic inflammation in asthma. Clin Exp Allergy 1998; 28: Monitorizar el efecto de diferentes tratamientos para el asma Se han documentado incrementos en relación con otras condiciones i que cursan con eosinofilia, como la rinitis, dermatitis atópica o parasitosis Debe usarse como complemento en la valoración de gravedad de la enfermedad. ECP SÉRICA: aplicaciones Algunos estudios han demostrado la utilidad de la ECP sérica para monitorizar la respuesta al tratamiento en la Dermatitis Atópica. Sin buena correlación niveles ECP y actividad de la enfermedad. Ammon Uet al. Comparison of severity scoring of atopic dermatitis values and serum levels of eosinophil cationic protein and mast cell tryptase for routin evaluation of atopic dermatitis. Acta Derm Venereol 2000;80 80:284-6 Dra.Isabel Flores 7

ECP ESPUTO: metodología La muestra de esputo se mezcla con ditiotreitol a dilución 1/1010 y se mantiene 10 minutos en un agitador espiral a temperatura ambiente yse filtra.

8 ECP ESPUTO: metodología La muestra de esputo se mezcla con ditiotreitol a dilución 1/1010 y se mantiene 10 minutos en un agitador espiral a temperatura ambiente yse filtra. Se centrifuga 10 minutos a 1200rpm y se recoge el sobrenadante. Conservación: 2-8ºC hasta 7 días o congelado a-20ºc parar procesado posterior. ECP en ESPUTO: aplicaciones El tratamiento con corticoides en asmáticos descompensados reduce los niveles de ECP y tiene una mejor correlación con la obstrucción al flujo respiratorio que la ECP sérica. Los niveles de ECP de esputo se corresponden NO con la gravedad del asma, sino con el MAL CONTROL de la enfermedad. Se ha observado aumento en EPOC y en la FIBROSIS QUÍSTICA, pero sin utilidad como método diagnóstico. Dra.Isabel Flores 8

9 ECP en otros fluidos. LAVADO NASAL: útil para monitorizar y valorar inflamación nasal en pacientes con rinitis alérgica. Aumenta con la exposición alergénica estacional Disminuye tras tratamiento corticoideo eite LÁGRIMAS: aumentado en la queratoconjuntivitis vernal, queratoconjuntivitis atópica, conjuntivitis alérgica estacional y conjuntivitis papilar gigante. YEYUNO: aumentado en EIIC. SINOVIAL: aumentado en Artritis reumatoide. EPX/EDN en orina La proteína Xdel eosinófilo o neurotoxina derivada del eosinófilo (EXP/EDN) es una proteína granular del eosinófilo que se libera cuando éste se activa. Candidato para monitorizar la inflamación eosinofílica de forma no invasiava, especialmente en niños. Se ha constatado aumento en dermatitis atópica y asma Disminución tras tratamiento con corticoides en asma Parecen ayudar a predecir el desarrollo de asma en niños con sibilantes. Omar k. High levels of urinary eosinophil protein Xin young asthmatic children predict persistent atopic asthma. Pediatr Allergy Immunol 2001; 12: Dra.Isabel Flores 9

TRIPTASA: concepto Proteasa neutra contenida en los gránulos secretores de los mastocitos. Se almacena como complejo macromolecular con la heparina.

mastocitaria masiva. TRIPTASA: metodología Realizable en cualquier fluido biológico, en el sobrenadante de células activadas y en células lisadas.

Se incuba el ImmunoCAP con la muestra. La triptasa reacciona con las anticuerpos anti- triptasa.

10 TRIPTASA: concepto Proteasa neutra contenida en los gránulos secretores de los mastocitos. Se almacena como complejo macromolecular con la heparina. Marcador sensible y específico mastocitaria in situ Tipos: alfa triptasa (I y II) beta-triptasatriptasa (I, II y III) de la degranulación Alfa triptasa: normal ng/ml. Forma predominante detectada en suero en individuos sanos o con mastocitosis Beta triptasa se eleva en situaciones clínicas asociadas a degranulación mastocitaria masiva. TRIPTASA: metodología Realizable en cualquier fluido biológico, en el sobrenadante de células activadas y en células lisadas. Un polímero derivado de la celulosa y activado con bromuro de cianógeno es el portador de las proteínas en fase sólida. Se incuba el ImmunoCAP con la muestra. La triptasa reacciona con las anticuerpos anti- triptasa. Se lava y se añade un segundo anticuerpo monoclonal de ratón conjugado con beta-galactosidasa. Se incuba. Lavados para eliminar el complejo enzima-anti-triptasatriptasa no unido. Se añade sustrato 4-metilumbeliferil N-acetil-beta-D- galactosaminida. La reacción se detiene alos 10 minutos para leer la fluoresceína emitida por el eluido Dra.Isabel Flores 10

TRIPTASA: interpretación resultados Individuos sanos: 1-10 ng/ml Sospecha mastocitosis sistémica > 20 ng/ml Los niveles normales de betatriptasa son < 1ng/mL; niveles superiores indican activación

11 TRIPTASA: interpretación resultados Individuos sanos: 1-10 ng/ml Sospecha mastocitosis sistémica > 20 ng/ml Los niveles normales de betatriptasa son < 1ng/mL; niveles superiores indican activación mastocitaria En caso de anafilaxia i el mejor momento para obtener una muestra es entre 1-2 horas y no más tarde de 6 horas iniciada la clínica. TRIPTASA: utilidad clínica La determinación de TRIPTASA TOTAL ofrece información sobre 1.- Activación mastocitaria (beta-triptasa madura) 2.- Carga mastocitaria corporal (alfatriptasa) Utilidad clínica ca en: ANAFILAXIA MASTOCITOSIS Ciertas HEMOPATÍAS MIELOIDES Dra.Isabel Flores 11

TRIPTASA: utilidad clínica ANAFILAXIA: Se produce aumento de beta triptasa en suero. Se detecta entre 15-30 minutos del inicioi i de síntomas y máximo nivel 60-100 minutos.

12 TRIPTASA: utilidad clínica ANAFILAXIA: Se produce aumento de beta triptasa en suero. Se detecta entre minutos del inicioi i de síntomas y máximo nivel minutos. Desciende a niveles basales a las horas. Consensos y protocolos de anafilaxia incluyen la determinación de la triptasa sérica total en las primeras horas de incio síntomas Himenópteros: pacientes con triptasa basal elevada tienen riesgo significativamente mayor de sufrir reacciones anafilácticas graves En pacientes con triptasa basal elevada: descartar mastocitosis TRIPTASA: utilidad clínica MATOCITOSIS y otras enfermedades HEMATOLÓGICAS: Triptasa sérica >20 ng/ml de forma persistente sin hemopatía asociada es un criterio diagnóstico menor de mastocitosis. Triptasa sérica >20 ng/ml en 30% de pacientes con Leucemia Aguda Mieloblástica y un % similar en síndromes mielodisplásicos. También elevación en un grupo de síndromes hipereosinofílicos idiopáticos de comportamiento clínico agresivo. Dra.Isabel Flores 12

13 TRIPTASA Y ALERGIA Estudios: Elevación Urticaria crónica Hidvegi B et al. Correlation between T-cell and mast cell activity in patients with chronic urticaria. Int Arch Allergy Immunol 2003; 132: Respuesta al tratamiento en rinitis alérgica Bruno G et al. Serum tryptase in allergic rhinitis: effect of ceterizina and fluticasona propionato treatmente. Clin Ter 2001; 152: o dermatitis atópica Imaizumi A et col. Effective treatmente of pruritus in atopic dermatitis using H1 anthistamines: changes in blood histamine and tryptase levels. J Dermatol Sci 2003; 33: 23-9 Valorar respuesta a tratamiento con esteroides Kraft M et al. Airway tissue mast cells in persistent asthma: predictor of treatmente failure when patients discontiue inhaled corticosteroids. Chest 2003; 124: Dra.Isabel Flores 13

Documentos relacionados

Actualización de temas GINA Dra. Patricia Arizmendi Agosto 2014

Actualización de temas GINA Dra. Patricia Arizmendi Agosto 2014 Actualización de temas GINA 2014 Dra. Patricia Arizmendi Agosto 2014 Definición Enfermedad caracterizada por la inflamación crónica de la vía aérea. Definida por la presencia de síntomas de la esfera respiratoria