Actividad anti-vih-1 de factores solubles: su papel protector en esta infección. Maria Teresa Rugeles

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1 Actividad anti-vih-1 de factores solubles: su papel protector en esta infección. Maria Teresa Rugeles Grupo Inmunovirología Universidad de Antioquia

2 Infección No infección Progresor rápido Progresor típico Progresor lento Expuestos seronegativos Mecanismos de resistencia Genéticos Inmunológicos

3 Inmunidad Celular y Humoral Factores solubles Interferones, Citoquinas Th1, quimoquinas, SLPI, Defensinas, RNasas, entre otros

4 Factores solubles anti-vih RANTES, MIP- 1α, MIP-1 y SDF-1, HAD y HBD HBD, SLPI, RNasas α-defensinas

5 Defensinas Péptidos de aminoácidos, catiónicos y microbicidas que se producen de forma constitutiva y/o en respuesta a productos microbianos o citocinas proinflamatorias

6 Defensinas Alfa: seis en humanos Beta: seis en humanos Teta: una en primates

7 Evidencia antiviral in vitro de HAD Chang TL, et al., J Clin Invest Mar; 115(3):765-73

8 Quiñones et al. AIDS, 2003 Sun et al. Journal of virology, 2005

9 Klotman et al., Nat Rev Immunol. 2006

10 Enzimas reguladoras que participan en varios procesos fisiológicos, que van desde el procesamiento alternativo del RNA hasta la muerte celular.

11 Superfamilia A: 13 RNasas humanas Familia T1 Familia T2 Defensa contra distintos patógenos Actividad antitumoral

12 Evidencia antiviral in vitro de RNasas Bedoya et al, AIDS Research and Human Retroviruses: 22(9), 2006, pp

13 EMBARAZO Alo-reconocimiento maternofetal EDN, SDF-1, LIF y hcg Aumenta el desarrollo fetal y/o proteje contra la transmisión vertical de patógenos

14 Determinar la participación en la resistencia natural a la infección por el VIH-1 de los siguientes factores solubles: Defensinas: HAD y HBD-2 y 3 RNasas: EDN, RNasa 1 y angiogenina

15 ESN: 60 CS: 60 SP: 60 Citometría LT-CD4 Mucosas: Oral, vaginal y, endocervical Plasma Extracción de RNA (TRIZOL) Carga viral SP PCR en tiempo real CK19, HAD-1, HBD-2 y 3, y RNasas

16 Table 1 Demographic profile *No data Población de Estudio Characteristics HC (n=60) HESN (n=61) SP (n=60) Age Median (Range) 28 (19-54) 34 (17-61) 34 (17-51) Gender n (%) Male 33 (55%) 35 (57%) 27 (46%) Female 27 (45%) 26 (43%) 33 (54%) Viral Load Median (Range) ND* ND 2569 copies/ml ( ) T CD4+Lymphocytes Median (Range) ND ND 361 cells/ml (17-909)

17 Producción aumentada de defensinas en mucosa oral de HESN

18 Relative units of EDN mrna Producción similar de RNasas en mucosa oral Oral mucosa HC HESN SP Angiogenina se detectó en 5 HC, 1 HESN y 3 SP RNase 1 se detectó en 6 HC, 7 HESN y 5 SP

19 Producción aumentada de RNasas en mucosa genital de HESN

20 Relative units of HBD-3 mrna Relative units of HBD-3 mrna Relative units of HBD-2 mrna Relative units of HBD-2 mrna Producción similar de defensinas en mucosa genital Vaginal mucosa Endocervical mucosa HC ESN Vaginal mucosa SP 0 10 HC ESN SP Endocervical mucosa HC ESN SP 0 HC ESN SP

21 Relative units of HAD-1 mrna Relative units of HAD-1 mrna HAD en mucosa genital Vaginal mucosa Endocervical mucosa HC ESN SP 0.0 HC ESN SP

22 Análisis de mecanismos de acción anti-vih-1 con proteínas recombinantes Tamizaje de concentración viral Inhibición de la replicación viral Inhibición de la Transcripción reversa Inhibición de la entrada del virus HIV-GFP (R5-X4) Infección con HIV-GFP Cuantificación de GFP y p24 (48h PI) PCR en tiempo real para productos tempranos, tardíos y círculos de 2-LTR Infección con HIV-GFP Cuantificación de GFP y p24 (48h PI)

23 Producción de virus recombinantes HIV-GFP Genes de VIH-1 sin env Env R5 (HxB2) Env X4 (YU2) Env VSV-G Transfección células 293T HIV-1 HxB2 HIV-1 YU2 HIV-1 VSV-G Pos control HIV-1 no Env Neg control

24 Producción de virus infecciosos a partir de clones moleculares Clones de VIH Calcio fosfatos Transfección Células 293T 2 días Colectar y filtrar el sobrenadante ELISA de p24 Precipitación con PEG concentración del virus 3 días PEG + VIH p24: pg/ml

25

26 HBD y RNasas Infección de líneas celulares con virus de una sola ronda de replicación HIV-1-GFP+HxB2 Líneas celulares U373-MAGI HIV-1-GFP+YU2 HIV-1-GFP+VSV-G Pos control Infección: 100 pg/ml p24 polybrene 8ug/ml 96 pozos/2h Incubación por 3 días U3T3-CD4-CCR5-MAGI CCR5 CD4 U3T3-CD4-CXCR4-MAGI HIV-1-GFP no Env Neg control CXCR4 CD4

27 Actividad antiviral de defensinas recombinantes

28 Actividad antiviral de RNasas recombinantes

29 Modelo de expresión de factores solubles en mucosa genital

30 Modelo de inhibición de la replicación del VIH-1 por hbds y RNasas

31 Ventajas para el desarrollo de agentes tópicos Amplio espectro antirretroviral contra cepas X4 y R5 Mayor biodisponibilidad al no ser susceptible a peptidasas hepáticas y renales Bajos costos de producción Capacidad antibacteriana

32

33 AGRADECIMIENTOS Wildeman Zapata Wbeimar Aguilar Pacientes Individuos HESN

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