RTICCC: Programa 6. Aplicación de Tecnología Molecular y Celular en Diagnóstico e Investigación en Cáncer

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1 RTICCC: Programa 6 Aplicación de Tecnología Molecular y Celular en Diagnóstico e Investigación en Cáncer Coordinador: Rafael Rosell Valencia 19 Noviembre 2004

2 Centros Participantes: Programa 6 Hospital Univ. Virgen de las Nieves Hospital Virgen del Rocío Instituto Univ. Oncología Principado Asturias Instituto Canario de Investigación en Cáncer Hosp. Marqués de Valdecilla Centro de Investigación del Cáncer (CIC) ICO-Bellvitge Parc Recerca PRBB HUGTiP Hospital Santa Creu i Sant Pau Hospital Vall d Hebrón Facultad Medicina Hosp. Clínico Santiago C DIO CNB CSIC-UAM Hospital San Carlos Clínica Universitaria de Navarra Hospital de Cruces (CVIC) Instituto Valenciano de Oncología Hospital Miquel Servet Hospital Virgen de Arritxaca CNIO Hospital Doce de Octubre Miguel López Francisco Panadero M.A. Comendador J. C. Díaz Chico J.L. Fdez-Luna Rogelio González Gabriel Capellà Francisco Real Rafael Rosell Josep Nomdedeu Simó Schwartz Fernando Domínguez Antonio Serrano Amparo Cano Trinidad Caldés Laura Guembe G. López-Vivanco J.A. López Mª Teresa Calvo Francisco Cañizares Javier Benítez M. Martín

3 Objetivos Programa 6 Implementar y consolidar el diagnóstico molecular en cáncer Favorecer la coordinación entre laboratorios de diagnóstico molecular Identificar marcadores de susceptibilidad a desarrollar cáncer Identificar marcadores moleculares con utilidad pronóstica dirigidos a la individualización del tratamiento de los pacientes Desarrollar técnicas no invasivas para estadificación, seguimiento y tratamiento de los pacientes Establecer un marco de colaboración y aplicación de nuevas tecnologías Favorecer la coordinación entre las unidades de consejo genético y los programas de detección

4 Técnicas / Instrumental Disponibles: Programa 6 Q-RT PCR / PCR cualitativa/ PCR genómica (LD-PCR) Southern, Northern, Western blot Secuenciación ADN automática Multicapilar SSCP, DGGE, heterodúplex Análisis de fragmentos (GenScan LOH-AI) Citogenética Convencional, CGH, CGH-array, FISH, FISH multicolor, Pintado Cromosómico SKY (Spectral Karyotyping) Highthroughput genotyping Citometría de Flujo (FacScan) Microarray expresión Geles 2D y Espectrometro de Masas (Maldi-Tof) Microdisección Láser Equipos robóticos de apoyo

5 Ejemplo análisis en hemopatías malignas (LAM / LAL) Diagnóstico y seguimiento Tránscritos de fusión: BCR/ABL: t(9;22)(q34;q11). AML1/ETO: t(8;21)(q22;q22). CBF -MYH11: inv(16)(p13;q22). PML-RARA: t(15;17)(q22;q21). FLT3

6 Pruebas diagnósticas (I) : Programa 6 - Inestabilidad de microsatélites y mutaciones en genes relacionados en cáncer de endometrio - Análisis de genes de susceptibilidad al cáncer de mama y ovario BRACA1 y BRACA2 - Diagnóstico molecular en cáncer de colon hereditario - Análisis mutacional del gen EGFR para sensibilidad a gefitinib y erlotinib en cáncer de pulmón no microcítico - Análisis células tumorales circulantes a partir muestras de sangre periférica y médula ósea procedentes de pacientes con sarcoma de Ewing. -Diagnóstico y seguimiento (enfermedad mínima residual) en hemopatías malignas -Diagnóstico Molecular en Tumores Infantiles (Diagnóstico en Sarcomas de Ewing y rabdomiosrcomas y amplificación de N-myc en neuroblastomas) - Estudio de enfermedad mínima residual en pacientes con sarcoma de Ewing

7 Pruebas diagnósticas (II): Programa 6 - Análisis mutacional del Retinoblastoma - Técnicas de ganglio centinela en cáncer de mama y cáncer de pulmón - Detección de células metastásicas en sangre y médula ósea cáncer de mama - Análisis de los genes APC, hmsh6, hmlh1, hmlh2 en cáncer colorrectal - Análisis Men2, Men1, RET y VHL en neoplasias endocrina múltiple - Análisis inmunofenotipo multiparamétrico para detección de línea / estirpe tumoral - Estudio reordenamientos cromosómicos en linfomas B y T - Diagnóstico molecular del síndrome de Gorlin (genes Patched y Smo) -Genotipado de los tractos polimórficos CAG y GGN del receptor de andrógeno en Cáncer de Endometrio NUEVAS PRUEBAS Y TESTS

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12 Investigación Aplicada: Programa 6 Ejemplos -Desarrollo de sistemas celulares para el estudio de tumores Ewing -Estudio SNPs en genes candidatos asociados a cáncer de mama esporádico identificar alelos y haplotipos asociados a cáncer de mama (Proyecto Piloto Cegen; Santiago Compostela) -Genes de susceptibilidad en neoplasias SNC y cáncer medular de tiroides esporádico - Papel de MI en cáncer gástrico - Detección precoz cáncer de colon y pulmón mediante expresión en microarrays -Variantes sin clasificar en BRCA1 y BRCA2 -Análisis expresión génica en identificacion de marcadores de respuesta a quimioterapia -Análisis SNPs en identificacion de marcadores de respuesta a quimioterapia -Análisis en EGFR (NSCLC para tratmiento con inhibidores de EGFR)

13 In-frame deletion adjacent to K745 (ELREA) in EGFR

14 Adjusted odds ratios for the joint effect on response of different covariates OR adjusted by Covariates OR (95% CI) p EGFR mutations 2.8 ( ) 0.05 EGFR mutations by Sex (female) 3.4 ( ) 0.04 EGFR mutations by Smoking Status (non - smoker) 3.1 ( ) 0.07 EGFR mutations by No. Prior Chemotherapy Regimens 10.2 ( ) EGFR mutations by Ethnicity 4.8 ( ) EGFR mutations by Age 12.1 ( ) OR crude Sex (female) 1.3 ( ) 0.9 Smoking Status (smoker) 0.3 ( ) No. of Prior Chemotherapy Regimens 0.6 ( ) Ethnicity (Asian) 2.8 ( ) Age 0.9 ( ) 0.008

15 Bockade of apoptosis by EGFR/HER2-mediated expression of Bcl-2 is disrupted by a small-molecule inhibitor of Bcl-2 in breast cancer cells EGF EGF EGFR/HER2 Cytoplasm Jak 2 Stat3 EGFR/HER2 Cytoplasm Jak 2 Bcl-2 Bax/Bak Stat3 Stat3 Small-molecule Bcl-2 inhibitor Bcl-2 Bax/Bak Stat3 Nucleus bcl-2 Inhibition of Apoptosis Nucleus bcl-2 Apoptosis Real PJ, Cao Y, Wang R, Nikolovska Z, Sanz J, Wang S, Fernandez-Luna JL. Breast cancer cells can evade apoptosis-mediated selective killing by a novel small molecule inhibitor of Bcl-2. Cancer Res 2004 (in press).

16 Objetivos 2005 Programa 6: CONSOLIDACIÓN Plataforma de Diagnóstico Molecular en Cáncer Estandarizar protocolos y resultados Ofertar un Catálogo de pruebas de Diagnóstico en Cáncer Potenciar la implementación de nuevos tests genéticos Análisis de marcadores genéticos dirigidos a la individualización de los tratamientos Potenciar las Unidades de Consejo Genético Desarrollar técnicas moleculares no invasivas para estadificación, seguimiento y tratamiento de los pacientes

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